新城疫病毒的分离鉴定
新城疫病毒山东强毒株的分离鉴定
Ｉｏａｉｎ ａ ｄ Ｉ ｅ ｔ ｉ ｔ ｎ ｏ ｓ ｌｔ ｎ ｄ ｎ ｉｃ ｉ ｆ珈 曲 Ｖｉｕｅ ｔＮ ｗｃ ｓ ｅＤ ｓａ ｅ Ｖｒ ｓｉ ｈ ｎ ｏ ｇ Ｐ ｏ ｉ ｃ ｏ ｆａ ｏ ｒ ｌ ｅ ａ ｔ ｉ ｓ ｉｕ Ｓ ａ ｄ ｎ ｒ ｖｎ ｅ ｎ ｌ ｅ ｎ
ｔ ｌｅ ｒｉ ｄ ａｚ
ｓ ｒ ｅａ 出ｅ ｅｅｓ ｌ ｋｌｃ ｉｋ ｎｅ ￣ｏ ．ｈ ｓ ｏａｍ ｅｅ ｍ ｎｄ ｔ ｂ ｅ ｓｅｄｓａｅｖｒ ａｅ ｎ５ ％ ａｅａｔｓｒ ， ｖｗ ｒ ｔｌ ｂｅｔ ｉ ｈｃｅ ｍｂ ｓ Ｔ ｅｅｉ ｌｔ ｗ ｒ ｃ ￣ｎ ｅ ｅ１ ｗ ａｄ ｌｅｓ ｉ ｓｂｓ ｄｏ ０ ｉ ｆ ｌ ｉａ ｏ ｌ ｓ ． ｏ ％ ｕ
Ｋｅ ｏ ｄ ：ｈ ＇ ａｆ ｉ ａ ｅｖ ａ ； Ｈｉ ｖｒｌｎ ｔ ｉ； Ｉ ｌ ｉｎａｄ ｉｅａｆ ａ ｏ ｙ ｗ ｒｓ ｅ， ｓ ｅｄｓ ｓ ｉ ｓ ， ｌ ， ， ｅ ｅ ｒ ｉ ｅｔ ｒ ｎ ｕ ｓａ ｓ ａ ｏ ｎ ｔｉｃ ｔ ｎ ｏｔ ｄ ｉ ｉ ．
自 １９ ９ ７年 冬 季 来 在 全 国部 分省 市 的鸡 群 中 流行 一种 以呼 吸道 、 化道 牯 膜 出血 为 典型 症 状 的 消
株 ）淄博 （ 株） 、 ７号 等地的发病鸡 群 的肝脏 、 脏及肺 脾
脏 其 中 ， 滨州 （ 号株 ） Ｂ照株（ １ 和 ３号株 ） 的病料 采 自大批 发 病死 亡 的 成年 鸡 群 ， 淄博 株 （ 株 ） 自 ７号 采
Ａｂ ａ ：７ｉ ｌｔｓｏ ｒｓｓｗ ｒ ｌｅ ｒｆ ７ｃ ｉｋ ｎｆ ｅｓｗｉ ￣ｇ ｅｂｄ￣ ａ ｄｍ ｒ ｌｙｅ ｔ ｉｕ ｉ ａｅ． ｈｓ ０ａ ａｅ ｓｒｄ ｓ ａｅ ｆ ｔｅ ｅｅｉ 越 ｄｆ ｉ ｈｃ ｅ ｏｋ 出 ｔ ｈｒ ｒｉ ｏ ｔ 舯 ｏｔ ｌ ｉ ｎ ｉ ｎ ｏｔ ｉ ｏａ ｏｓｄｓ ｓ Ｔ ｅｅｉ ｌｂ 工 ａｔ ｇ ｅ ｓ
新城疫病毒广东基因Ⅶ型分离株的分离鉴定及F基因克隆与序列分析
１ ． ２ ． １ Ｆ基 因 引物 设 计 与合 成 根 据 Ｇｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ中 的鸡 源 ＮＤ Ｖ Ｆ基 因核 苷酸 序 列 ， 设 计 特 异性 引物 ，
刘佳佳 ，严专强 ，刘 迪 ，李欣莲 ，覃健萍 ， 谢 青梅 ，毕英佐 ，薛春 宜 ， 陈 峰¨
（ １ ． 华南农业大学动物科学学院 ， 广东广州 ５ １ ０ ６ ４ ２ ； ２ ． 广 东 温 氏食 品 集 团 股 份有 限公 司 ， 广东云浮 ５ ２ ７ ４ ３ ９ ； ３ ． 中 山 大 学 生 命科 学 学 院 ， 广东广州 ５ １ ０ ０ ０ ６）
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 材 料
世界公认 的两大最 重要 的禽 类传 染 病 之一［ １ ］ 。其 病
原 ＮＤ Ｖ属 Ｒ ＮＡ 病毒 中的单股 负链 病 毒 目， 副黏 病 毒科 ， 禽腮 腺炎病 毒属 ， 又名 禽副 黏病 毒 Ｉ型 （ Ａｖ ｉ ａ ｎ
ｐ ａ ｒ ａ ｍｙ ｘ ｏ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ １ ， ＡＰＭ Ｖ一 １ ） Ｅ 引。
Ｍａ ｒ ｋ ｅ ｒ ＤＬ ２ ０ ０ ０宝生物 工程 （ 大连 ） 有 限公 司 。
１ ． ２ 方 法
近年 来 ， 新 城疫 在我 国部分 省市 鸡 群频 频暴 发 ， 给 养禽业 造 成 了严 重 的经 济 损 失 。ＮＤ Ｖ 基 因 型众 多， 病毒毒 力不 断增 强 ， 造 成该 病 防控 难度 较 大 。本
ｍＬ ／ Ｌ鸡红 细胞 和灭 菌生理 盐 水 由本 实 验 室按 照 常
Ｎ ＤＶ包 括 ６个 基 因 片段 ， 编 码 至 少 ７个 蛋 白。
Ｆ蛋 白是 主要 的宿 主保 护性 抗 原 ， 可诱 导 机 体 产 生 中和抗 体 ， Ｆ蛋 白裂 解 位 点 的 差 异 与病 毒 的毒 力 直 接相 关 ， 根 据 Ｆ基 因序列 分析 ， 所有 强毒株 裂解 位点
一株新城疫病毒的分离鉴定及其F基因的克隆与序列分析
特 性 和 致 病 性 进 行 了 分 析 ， 并 对 Ｆ 因进 行 了研 究 ， 旨从 基 分 子 水 平 阐 明 各 毒 株 问 的 异 同 ，为 该 病 的 防 控 及 分 子 流 行 病 学研 究奠 定 基 础 。
参 考文献
９１，１ 样 品呈 假 阳 性 ； 其 余 样 品 均 为 阳 性 。 ，Ｏｌ号
２１ ０ １年第 ４期 （ 总第 １ １期） ７
试验研 究
一
株新城疫病毒 的分离鉴定及其Ｆ 因的克隆与序列分析 基
苏文 政 ① ② 牛 钟 相 ① 张 琳 ② 朱 荣 生② 韩 红②
泰安 ２ １ １ ② 山东省 农 业科 学院 畜牧兽 医研 究所 ７ ０８ 济南 ）
（ 山东农业 大学动 物科技 学院 ①
据 。根 据 上述 方 法 计 算 可 以得 到 １ 号 样 品 为 阴 性 ； ２
免疫力外 ，猪场 中 的技 术人 员还应 定期做一 些血清 学检 测 ，随 时 了解猪 体 内的各种抗 体含量 ，这对 以后制定 一
项 适 合 本 猪 场 的 免 疫 程 序 会 有 很 大 的 帮助 。
中图分类号 ：￥ ５ ． ８ ２６ ９ ５
新 城 疫Ｄ） 由 新 城 疫 病 毒 ｌ ｅ 是
（ ｅ ｃ ｓｅＤ ｓａｅＶｒｓ Ｎ ｗ ａｔ ｉ ｓ ｉ ，ＮＤ ￣ 起 的 禽 类 一 种 急性 、 败 ｌ ｅ ｕ Ｖ） ｆ 血 性 传 染 病 ，世 界动 物 卫 生 组 织 （ Ｉ） 其 列 为 对 畜 禽 危 ＯＥ将 害 最 大 的 Ａ类 传 染 病 之 一 【，其 病 原—－ Ｖ属 于 副 粘 病 毒 “ ＮＤ 科禽 腮腺炎 病毒属 ，为有 囊膜的 负链Ｒ ＮＡ病 毒 口。ＮＤＶ 】 基 因 组 为 单 股 不 分 节Ｒ Ａ，编 码 ６ 结 构 蛋 白 ，其 中融 合 Ｎ 种
一株鸽新城疫病毒的分离鉴定
粒抽提试剂盒 、Ｄ Ａ Ｎ 凝胶 纯化试剂盒ＩＴ Ｐ Ｇ、Ｘ ｇｌ Ｎ — ａ、Ｒ Ａ酶 抑 ２ ３ 病毒毒力测定 结果 ． 制剂 、Ｅｏ Ｎ ａ ｅ Ｄ ２０ 、 ｃＲＩ 和Ｄ ＡＭ ｒ ｒ Ｌ ００ 氨苄青霉素和Ｄ Ｐ 均购 ２ ３ １ Ｍ Ｔ ４ 结 果 取 １ 一一１ － 释度分 离 、纯化 的病 ｋ ＥＣ ． ． Ｄ ＇ 定 ￣ ０ ０９ 稀 白上海生工生物工程技术服务有限公司。 １ ２ 方 法 ． １２１ 病毒分 离、噬斑纯化 参照文１ ４ ．． ￣１ Ｊ 方法进行 。 １２２ 血清学鉴定 用 Ｂ一 数微量法测定尿囊液 Ｈ 效价 ， ．． 半 Ａ
用Ｎ Ｖ、Ｈ 、Ｈ 、Ｅ Ｓ ７ 标准 阳性血清进行ＨＩ 。 Ｄ ５ ９ Ｄ 一６ 试验
毒 ，每个稀释度 接种５ ０ 龄Ｓ Ｆ 只１ 只 Ｐ 鸡胚 ，０ ｌ ，照蛋３ ．ｍ／ １ 只 次／
ｄ ，间隔８ｈ ，共观察７ｄ ，记 录鸡 胚死亡时间 ，结果详见表 １ 。 结果 表明 ，引起鸡胚死亡 的最高稀释 度（ Ｄ 在 ｌ ～，计 算得 ＭＬ ） ０
Ｍ Ｔ １９６ 。 Ｄ 为 ２ ．ｈ
２ ３ ２ ＩＰ 测定结果 ． ． Ｃ Ｉ
取１ 日龄雏鸡 １ 只 ，各脑 内注射 １ 。 Ｏ ０。 稀
１２ ３ 病毒毒 力测定 ． Ｄ 和ＩＰ测定 ： 照 《 ．． Ｍ Ｔ ＣＩ 参 中华人 民共 释度 的纯 化尿囊液００ ｌ ． ｍ 。另取２ 以同样方法 注射稀释病毒 ５ 只 和国出入境检验检疫行业 标准 》（ ／１１２０ ２ 规定 的标 准 用 的生理盐水 各００ ｌ Ｓ Ｔ １０ ２０） Ｎ ．５ｍ 。接 种后 ，每天在相应接 种 的时间观 方法进行 。 察 ，记录雏 鸡 的情 况 ，分 正常 （ 动灵 活 ，行动无 共济失 调 活 １ ２ ４ 引物设计 、合 成 和基 因测序 根 据Ｇｅ Ｂ ｎ 上 已发 现象 ）、发 病 （ 括麻痹 、卧地不起 ，但 不包括 只表现迟 钝 ． ． ｎ ａｋ 包 表 的Ｎ Ｖ Ｆ Ｄ 基闪全基 闪序 列 ，利用ｐｉ ｅ ５ 软件 自行设计 了 ｒ ｒ． ｍ ０ 的鸡 ） 和死亡 。观察８ｄ（ 结果见表２），计算正常 、发病 、死 引 物 ，由上 海生 工 生物 工 程技 术 服务 有 限公 司合 成 ，序 列 鸡 的总数 ，根据 不同的权值 （ 常为０ 正 、发病 为 １ ，死 为 ２ ），累计 总分数 ， 计算得ＩＰ为０ ８。 Ｃ Ｉ ． ７ ２
肉鸽新城疫病毒山东分离株的分离鉴定及其F基因的分子特性分析
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ａ Ｎｅ ａ ｔ ｓ ａ ｅ Ｖｉ ｓ ｉｏａ ｅ ｎ ｍｅ Ｎ ８ ｗａ ｏｌ ｃｅ ｏ ｐ ｇ ｏ ｎ Ｓ ａ ｄ ｎ ．Ｆ ｇ ｎ ｆｔ ｅ ｓｒ ｃ ： ｗｃ ｓ ｅ Ｄｉ ｓ ｒ ｓ ｌｔ ａ ｄ Ｊ ０ ｓ ｃ ｌ ｔ ｄ ｆ ｍ ｉｅ ｎ ｉ ｈ ｎ ｏ ｇ ｅ ｅ ｏ ｈ ｌ ｅ ｕ ｅ ｒ ｉｏａｅ ｗａ ｌ ｎ ｄ ａ ｄ ｓ ｑ ｅ ｃ ｄ ｔ ｔ ｄ ｔ ｌ ｃ ｌｒ ｃ ａ ａ ｔｒ ａ ｏ ｎ ｅｅ ｉ ｒ ａ ｉｔ ｎ Ｊ ８ ｐ ｒ ｅ ｙ ｓ ｌ ｔ ｓｃ ｏ ｅ ｎ ｅ ｕ ｎ ｅ ｏ ｓｕ ｙ ｉ ｍｏ ｅ ｕａ ｈ ｃｅ ｉ ｔ ｎ ａ ｄ ｈ ｒｄ ｔ ｙ ｖ ｒ ｉ ． Ｎ０ ｕ ｆ ｄ ｂ ｓ ｒ ｚｉ ａ ａｏ ｉ ｉ
离较 远 。
关键词： ； 城疫病毒； 鸽 新 Ｆ基 因 ； 子 特性 分
中图 分类 号 ： ８ ８３ ￥ ５ ．９ 文 献 标识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ４ ５ ４（ ０ ０） — ０ ０ ０ １ ０ —１ ２ ２ １ ０１ ０ ２ — ５
Ｉ ｏ ａ ｉ ｎ，ｄｅ ｔｆｃ ｔｏ ａ ｄ ｏ ｅ ｕ ａ ｈ ｒ ｃ ｅ ｉ ａ ｉ ｎ ｆ ｒＦ ｅ ｆａ Ｎｅ ａｓ ｓ ｌ ｔｏ ｉ ｎ ｉ ａ ｉ ｎ ｎ ｍ ｌｃ ｌ ｒ ｃ ａ ａ ｔ ｒ ｚ ｔｏ ｏ ｇ ｎｅ ｏ ｗｃ － ｉ ｔｅ Ｄｉｅ ｓ ｒ ｓ ｉｏ ａ ｅ ｆ ｏ ｐｉ ｅ ｎ ｎ Ｓｈ ｎ ｎ ｉ ｓ ａ ｅ Ｖｉｕ ｓ ｌ ｔ ｄ ｒ ｍ ｇ ｏ ｉ ａ ｄｏ ｇ
一株新城疫病毒的分离和鉴定
１ ． ９ 特 异 性 试 验
取 湖 南 省 永 州 市 某 发 病 鸡 场 送 检 的 组 织 病 料 加 入 约 ５倍
公式 Ｉ Ｃ Ｐ Ｉ ＝ ８ ｄ累 计 发 病 数 ｘ ｌ ＋ ８ ｄ累计 死 亡 数 ｘ ２ ／ ８ ｄ ｘ 试验鸡数 ． 计算该毒株 的 Ｉ Ｃ Ｐ Ｉ 。 １ ． ８ 病毒含量一 鸡胚 半数 致 死 量 （ Ｅ Ｌ Ｄ ） 的 测 定 取 含毒鸡胚 尿囊液 用灭菌 生理盐水 １ ０倍 系 列 稀 释 ．取
传 ３代 分 离到 该 毒 株 ，命 名 为 ＮＤＶ Ｙ Ｚ 株 ，对 病 毒 进行 一 系
列 的 鉴 定 ，结 果 证 明该 毒 株 为 新城 疫 强毒 株 。
关键 词 ：新 城 疫 病 毒 ；分 离 ；鉴 定
取 含 毒 鸡 胚 尿囊 液用 灭 菌 生理 盐 水 １ ０倍 系列 稀 释 （ １ ０ 。 ～ 鸡 新城 疫毒 （ Ｎ ｅ ｗ ｃ ａ ｓ ｌ ｔ ｅ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ，Ｎ Ｄ） 是 由鸡 新 城 疫 病 毒 （ Ｎ ｅ ｗ ｃ ａ ｓ ｔ ｌ ｅ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ，Ｎ Ｄ） 引 起 ，是 危 害 养 禽 业 最 重
疫 病 防治
湖 南省 宁远 县 畜牧 水产局 ４ ２ ５ ６ ０ ０ ）
Ｉ ． ５ ＲＴ—Ｐ ＣＲ 鉴 定
摘 要 ：临 床 送检 的 鸡 场 发 病 鸡 病 料 ．根 据 临 床 症 状 和 实 验 室 ＲＴ－ Ｐ ＣＲ 检 测 为 新 城 疫病 毒 感 染 ．用 １ ０ 日龄 Ｓ Ｐ Ｆ鸡 胚 连 续
白鹭源新城疫病毒的分离与鉴定
基 金 项 目 ： 西特 聘 专 家专 项 经 费（ ０ １ ００ ； 家百 千 万人 才 工程 入 选 专项 资金 （４ ２ ０ ０ ） 桂 科 攻 １２ ０ ７４ 同 广 ２１Ｂ ２） 国 ９ ５０ ６ ３ 和 １ ３ ０—共 资 助 作者简介 ： 陈安 莉 （９ ４ ） ， 西 玉林 人 ， 士 研 究 生 ， 要 从 事禽 病 防 治 与病 原 分 子 生 物 学研 究 。 ＊通 讯 作 者 １８ 一 女 广 硕 主
１２６ Ｒ —Ｃ ． ． Ｔ Ｐ Ｒ检 测 取 第 ３代 Ｓ Ｆ鸡 胚 尿 囊 液 Ｐ
行 病毒 ＲＮ 抽 提 ， 反 转 录成 ｃ ＮＡ， 别 用 能 扩 Ａ 然 Ｄ 分 增 出所 有 １ ６种 Ｈ 亚 型 的 Ａ 型 禽流 感 通 用 引物 ［ 、 ５ ］ 新 城疫 强毒 和弱 毒 通 用 引物 、 城 疫 强 毒 特 异 性 引 新
１０ ２
动 物 医学 进 展
２１ ０ ２年
第３ ３卷
第 ７ （ 第 ２９ ） 期 总 ２期
胞凝 集试 验 ， 现 凝 集 者 判 为 阳 Ｄｏ ｅｃ Ｉ ５。
病料 进 行研 磨 ， 再将 研 磨 液过 滤 除菌 后接 种 Ｓ Ｆ鸡 Ｐ 胚， 增殖病 毒 ， 然后用 新城 疫病 毒 阳性 血清 和 多种 禽 流感 Ｈ 亚 型 阳性 血 清分别进 行 ＨＩ 测 。 检
国兽 医药 品监 督所 ；Ｐ Ｓ Ｆ鸡胚 购 自北京 梅 里亚 公 司 ； ＴＲ ｚｌ ＳＲｅｇ ｎ 购 自 Ｉｖｔ ｇ ｎ公 司 ； Ｉｏ ａ ｅ ｔ Ｌ ｎ ｉｏ ｅ ｒ ＡＭＶ 反 转 录 酶 、 ｉｏ ｕ ｌ ｓ ｎ ｉｉ ｒ ｄ Ｒ ｂ ｎ ｃｅ ｅＩ ｈｂｔ 、 ＮＴＰ购 自 Ｔａ — ａ ｏ Ｋａ
为 １ ０ ／ ． Ｏ １ｍＬ。
一例新城疫的实验室诊治报告
汇报人： 日期:
目 录
• 病例介绍 • 实验室检测 • 诊断结果 • 治疗方案 • 预防措施 • 结论与建议
01
病例介绍
病例来源
01
患者：雄性，2岁6个月，体重约20公斤。
02 发病时间：2022年11月10日
03 发病地点：某养殖场
病例症状
初期症状
发热，精神萎靡，食欲减退
环境样本
采集鸡舍、饲料和水源等环境样本。
样本处理
血液样本
将血液样本离心分离血清，用于抗体 检测和病毒分离。
拭子样本
将拭子样本放入病毒保存液中，进行 病毒分离和鉴定。
检测方法
抗体检测
采用ELISA或HI等方法检测血清中 的新城疫抗体，以评估鸡群的免 疫水平。
病毒分离
将拭子样本接种到鸡胚或细胞培养 ，观察病毒的增殖和病变情况。
检测了病鸡血清中的新城疫抗体，发现抗体水平低或阴性。
免疫状态
根据血清中抗体水平，评估鸡群的免疫状态，发现部分鸡只未免疫或免疫不足。
分子生物学结果
基因序列分析
对新城疫病毒的基因序列进行分析，发 现病毒与国内其他新城疫病毒株的基因 序列存在差异。
VS
耐药性分析
检测了病毒对常用抗病毒药物的耐药性， 发现病毒对某些药物表现出耐药性。
病毒分离与鉴定
从病鸡体内分离出新城疫病毒，并进行基因测序 和抗原性分析，确认病毒的毒株和来源。
传染源和传播途径
调查发现，病毒可能通过空气、飞沫、接触等途 径传播，但具体传染源还需进一步调查。
建议的后续研究方向和临床应用价值
深入研究病毒的变异情况
01
进一步研究病毒的基因组变异情况，以及与不同毒株之间的差
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青岛农业大学
兽医微生物学课程论文
题目：新城疫病毒的分离家鉴定
姓名：王梅州
学院：动物科技学院
班级：马业科学1201班
学号： 20121658 任课教师：温建新
二0一四年四月十五日
新城疫病毒的分离鉴定
马业科学1201 王梅州
任课教师温建新
摘要：病毒的分离鉴定在兽医研究中长用于禽源病毒的分类、培养、生物学特性鉴定、疫苗制备和药物筛选等工作。
是防疫、确诊病毒类疾病的重要手段。
关键词：新城疫病毒接种鸡胚
引言：鸡胚的优点是，来源充足价格低廉，操作简单，无需特殊设备和条件，乙肝病毒谱较广，对接种病毒不产生抗体等。
新城疫是禽类的一种急性、高度接触性传染病，由一种侵害呼吸道、肠道以及中枢神经系统的新城疫病毒引起。
NDV属于副黏病毒科的腮腺炎病毒属成员，有囊膜，表面有纤突，内含血凝素神经氨酸酶和融合蛋白。
NDV有血凝特性，能凝集禽类、两栖动物、爬行动物等多种动物的红细胞以及人的O型红细胞。
目录
摘要.................................................. 错误！未定义书签。
关键词................................................ 错误！未定义书签。
引言.................................................. 错误！未定义书签。
1 材料 (1)
1.1 鸡胚 (1)
1.2 病毒 (1)
1.3 实验试剂 (1)
1.4 实验器材 (1)
2 实验方法 (1)
2.1鸡胚的选择和孵育 (1)
2.2 鸡胚接种前的准备 (1)
2.2.1照蛋 (1)
2.2.2 消毒 (1)
2.3 鸡胚接种 (1)
2.4 接种后的观察 (1)
2.5 微量α法血凝抑制试验 (2)
3 结果观察 (2)
4 结论 (3)
参考文献 (3)
1 材料
1.1鸡胚
9-11日龄SPF或非免疫ND疫苗种鸡所产的白壳鸡蛋
1.2 病毒
待捡病毒液
1.3 实验药剂
NDV阳性血清、1％鸡红细胞悬液、生理盐水
1.4 实验器材
微量移液器及吸头、石蜡、照蛋器、打孔器、注射器、孵化箱、蛋架、镊子、酒精灯、96孔“V”形微量反应板
2 实验方法
2.1 鸡胚的选择和孵育
选取9-11日龄的正常鸡胚
2.2 鸡胚接种前的准备
2.2.1 照蛋
用照蛋器照蛋，根据鸡胚的纹理用铅笔标出气室位置及气室打孔部位，并在气室底边胚胎附近无大血管除标出接种部位。
2.2.2消毒
先后用碘酒和75％的酒精棉球消毒准备接种部位的蛋壳表面。
2.3 鸡胚接种
选用9-11日龄发育良好的鸡胚，其气室向上置于蛋架上，在所标记接种部位用经火焰的钢锥钻一个小孔，注意要恰好使蛋壳打通而又不伤及壳膜。
再在非气室部位的蛋壳上无血管的标记处用经火焰的钢锥钻一个小孔，以打开蛋壳而又不伤及壳膜为宜，然后用1ml 注射器抽取接种物，与蛋壳成30°角斜刺入小孔3-5mm，注入接种物。
一般接种量为
0.1-0.2ml。
注射后用融化的石蜡或消毒胶布封闭注射小孔。
气室朝上置于37℃温箱中孵育。
2.4 接种后的检查
接种后每天检查3-4次。
接种后24h内死亡的鸡胚多数是由于鸡胚受损或污染细菌引起的，一般弃去。
但有些病原微生物（如高致病力禽流感病毒）也可能会在短时间内引起
鸡胚死亡，只是应对可疑尿囊液做进一步鉴定。
2.5 微量α法血凝抑制试验
取洁净的96孔V形微量滴定板用微量移液器从滴1孔至第12孔各加生理盐水50µL。
用微量移液器吸取尿囊液50µL，加入第1孔并吸吹3-5次，使其与生理盐水充分混匀后依次倍比稀释至第11孔，弃去50µL，第12孔不加病毒液作为对照，做相同的2排。
后用液器向第一排的1-12孔各加50µL的生理盐水。
第二排没空各加一定稀释度的新城疫阳性血清50µL，后在第一排和第二排每孔各加１％的鸡红细胞悬液50µL，将滴定板放在微量震荡混匀器上（或用手工旋转）混匀，于20-30℃或室温静置15-20min，待对照孔完全沉淀后判定并记录结果。
结果判定：血凝实验结果以++++（#）、+++、++、+和—表示。
++++（#）：红细胞均匀平铺与V型孔底。
+++：红细胞平铺孔底，但孔中心稍有红细胞聚集。
++：孔周围有凝集，孔中央有红细胞聚集。
+：孔中央有红细胞聚集形成小团，但边缘不光滑，四周有小凝块。
—：孔中央有红细胞聚集，边缘光滑。
血凝实验第一排和α法血凝抑制试验（第2排）两排孔的血凝价相差2个滴度以上判为阳性，即判定待检病毒为新城疫病毒；如两排孔的血凝价相等或差异小于2个滴度者为非特异性凝集，或为其他病毒引起，应判为阴性。
3 结果观察
将反应板倾斜成45℃角，沉于管底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。
能将4单位病毒物质凝集红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清
的红细
胞凝集
抑制效
价，用
被检血
清的稀
释倍数
或以2为底的对数(log2)表示。
如上例，该血清的红细胞凝集抑制效价为1：64或HI效价为
6(log2)。
第十一孔仅含稀释液和红细胞为不凝集对照孔，第十二孔含稀释液，病毒液和红细胞为凝集对照孔。
3.2
3.3
3.4
3.5
4结论
待捡病毒液为鸡的新城疫病毒。
参考文献：
[1]李一经，兽医微生物学，2011年1月第一版。
[2]陆承平，兽医微生物学第四版。
[3]兽医微生物学(原书第2版）。