Rh血型鉴定试验方法
《Rh血型鉴定试验》课件
通过Rh血型鉴定，可以进一步辅助确定亲子关系。
研究领域
Rh血型鉴定可用于人类遗传学研究和种群遗传学分析等领域。
结论和总结
Rh血型鉴定试验是一项重要的实验操作，对于临床和研究领域具有重要意义，能够为各种血液相关操 作提供有力支持。
鉴定试验的目的
Rh血型鉴定试验用于确定个体血液中是否具有Rh抗原，以便预测是否会出现 Rh血型不相容的血型抗体反应。
鉴定试验的步骤
1
试剂准备
2
准备所需的试剂和材料，确保操作环
境无菌。
3
结果记录
4
根据凝集程度或试管内溶血情况判断 Rh血型，并记录结果。
取样
从被鉴定者的血液中获取足够的血样。
试验操作
按照特定步骤进行试验操作，包括试 管法和凝集反应法。
鉴定试验的原理
Rh血型鉴定试验基于血清中的特定抗体与红细胞上的特定抗原之间的反应， 通过观察凝集程度或溶血情况判断Rh血型。
结果解读
凝集程度较大，无溶血现象表示Rh阳性；凝集程度较小，有明显溶血则为Rh阴性。
应用领域
临床血型鉴定
Rh血型鉴定可用于输血配型、妊娠管理和器官移植等临床血液相关操作。
《Rh血型鉴定试有重要的医学意义和临床应用。本课件将 介绍Rh血型的背景知识、鉴定试验的目的、步骤、原理、结果解读以及应用 领域。
背景知识
Rh血型是由Rhesus猴子的一种抗原决定系统决定的，具有Rh抗原的人被称 为Rh阳性，无Rh抗原的人被称为Rh阴性。
试管法RH血型鉴定
试管法RH血型鉴定1．目的规范RhD血型鉴定实验，确保RhD血型鉴定结果的准确。
2．职责此规程用于试管法RhD血型鉴定试验，血库工作人员应严格按照本操作规程进行检测。
3．适用范围本规程适用于本院紧急输血患者的红细胞RhD血型鉴定检测操作。
4．操作规程4.1器材和试剂4.1.1 器材：离心机、试管、滴管、生理盐水、记号笔，显微镜（OLYMPUS）,载玻片,移液器，一次性吸头。
4.1.2 试剂：RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体），生理盐水；4.1.3原理：利用红细胞凝集实验可鉴定是否存在相应的抗原。
Rh 血型系统常见的临床意义较大的C, c，E, e，D五种抗原中D抗原的临床意义最大，抗原性最强且出现频率高，故一般只进行RhD抗原的鉴定。
D抗原阳性者被称为Rh阳性，反之为Rh阴性。
4.2标本采集4.2.1 标本要求：抽取EDTA抗凝血2ml，3400转/分离心5分钟分离血浆，抗凝标本应无溶血，标签齐全。
4.2.2标本运输：室温运输。
4.2.3标本拒收标准：细菌污染，溶血标本，标签不齐全不能作测定。
4.3操作步骤4.3.1实验前准备：压积红细胞制备：供血者及受血者血标本离心后，取洁净试管加500ul生理盐水，加入25ul压积红细胞，混匀约为5％的红细胞悬液。
1）取洁净试管1支，标明RhD,用加样器加入50ul（或用试剂瓶吸管各加入1滴）RhD（IgM）分型试剂；2）加入50ul（或用一次性吸管加入1滴）5％被检者红细胞悬液；3）轻轻混匀，500g，离心1min（或1000g，离心15sec）；4）观察上清液是否存在溶血现象。
5）轻轻摇动试管，将试管底部的红细胞扣重新悬浮于上清液中。
6）以肉眼观察、分析并记录结果。
应观察是否有凝集或溶血现象；如有凝集，应描述凝集强度；如无凝集，应在低倍显微镜下观察；7）实验结果无凝集或弱凝集。
（应根据实验室现有试剂条件加做抗人球蛋白实验以确认是否为弱D表型，或外送检测确认）5.注意事项5.1常见导致假阳性的原因1）受检细胞被免疫球蛋白致敏2）高蛋白介质可能导致的缗钱状形成3）标本抗凝不当，纤维蛋白凝块的干扰4）存在意外抗体5）红细胞多凝集现象6）实验器材不洁净5. 2常见导致假阴性的原因1）红细胞与抗血清比例失调2）漏加或错加试剂血清3）试剂效价降低4）离心后摇动试管时用力过度。
Rh(抗D)血型鉴定标准操作程序文件
Rh（抗D）血型鉴定标准操作程序文件1.【原理】Rh血型系统通过输血或妊娠可产生免疫性抗体，当遇有相应抗原，可致溶血反应或新生儿溶血病。
若误诊误治，可导致患者残废或死亡。
有条件者应作此检查。
目前，一般应用5种分型血清来检查红细胞抗原。
临床上，凡带有D抗原者，称为Rh阳性，不带D抗原者，称为Rh阴性。
2、【使用的标本种类和收集方法】2.1、受检者2-3％红细胞悬液红细胞悬液制备：采取受检者的红细胞，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水32滴（1.6ml）配成2-3％的红细胞悬液。
2.2、标本接收2.2.1、血型鉴定不接收临床送检标本（除外2.3.2规定内容）。
2.2.2、特殊急诊检验人员无法采血时，接收临床送检标本需登记采血护士姓名及送检护士姓名、并查对标本标签和检验单内容是否相符，如有不符可以拒收标本。
2.3、标本容器要求：洁净一次性塑料试管3. 【仪器和试剂】3.1、仪器型号：TL80-1型医用离心机3.2、仪器厂家：中国江苏姜岩是田里医疗器械有限公司3.3、许可证号：苏药管械（试）字2001第2030436号3.4、仪器使用具体要求见离心机使用维护程序3.5、Rh抗血清本科使用珠海贝索生物技术有限公司生产的Rh抗血清试剂产品注册号:国食药监械(准)字2004第3400398号4. 【操作】4.1 取小试管2支,用蜡笔标记，分别加上述Rh抗血清1滴,再加2-3%受检者红细胞盐水悬液2滴,混匀。
离心：3200-3400转/min,15--30秒4.2结果判断:轻摇试管，观察结果：如受检管凝集,即表示阳性；受检管不凝集,即表示阴性。
5、【注意事项】5.1、Rh抗血清质量应符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。
如出现混浊或变色则不能使用。
5.2、。
试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
5.3、操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
5.4、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
Rh血型分型试管法试验标准操作规程
Rh血型分型试管法试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面Rh血型系统C、c、D、E、e抗原表达情况，为输血相容性检测、Rh系统新生儿溶血病的诊断与预防等提供参考依据。
(二)检验原理Rh血型系统单克隆IgM类血型抗体可以使具有相应抗原的红细胞在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，利用单克隆IgM血型抗体可以鉴定出红细胞表面的Rh抗原。
(三)适用范围适用于受检者(受者、供者)红细胞表面C、c、D、E、e 抗原鉴定试验。
(四)设备性能参数参见血清学专用离心机使用说明书。
(五)器材与试剂1.器材离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂生理盐水、市售单克隆IgM抗C、抗c、抗D、抗E、抗e及IgM+IgG抗D标准血清。
IgM抗D用于临床样本(受者)RhD血型的常规检测，不能与DIV细胞反应，不能检测出弱D。
IgM+IgG用于供者样本RhD血型的常规检测及确证试验，能与DIV细胞反应，检测出弱D抗原。
10系或16系谱细胞用于阴阳性对照。
(六)样本要求1.患者样本EDTA-K2；或EDTA-K3抗凝全血≥3ml，经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。
2.供者标本枸橼酸盐抗凝，全血量≥3ml，经B600-A 型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。
(七)校准步骤参照KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机使用说明书中的校准要求执行。
(八)操作程序1.悬浮红细胞的配制取受检者适量红细胞，经生理盐水洗涤3次，取压积红细胞配成3％～5％的红细胞盐水悬液。
2.加样取4支洁净硬质试管，分别标记为受检者、阴性对照、阳性对照、自身对照，前3支试管内分别加入抗C(或抗c、或抗D、或抗E、或抗e)各1滴，第4支加自身血清(或血浆)2滴，在每支试管中再加配制好待用的3％～5％受检者红细胞悬液1滴，混匀。
Rh血型定型操作规程
Rh血型定型操作规程1.原理1.1单克隆混合试剂测定法：根据凝集反应原理，当被检测行红细胞上有D抗原存在时，可与抗D混合型血型定型试剂产生特异性的抗原反应，出现红细胞凝集现象。
1.2酶介质测定法：当IgG类小分子特异性血型抗体与具有相应抗原的红细胞相遇时，虽能与红细胞上的特异性抗原结合，却因IgG分子间两个抗原决定簇的跨度小于红细胞间斥力而产生的距离（250nm），不能将相邻的红细胞彼此连接起来。
酶介质可破坏红细胞表面的唾液酸，降低红细胞表面负电荷，减少细胞间斥力，使红细胞间的距离缩小，有利于IgG类抗体在两个抗原位点间的连接，使抗原抗体间的反应成为肉眼可见的凝集。
2.操作步骤2.1玻片法（IgM+IgG型）2.1.1在玻片方格中加1滴抗D（IgM+IgG）混合试剂。
2.1.2再加2滴2%~5%红细胞生理盐水悬液于抗D混合试剂中。
2.1.3用干净的玻棒完全搅拌上述红细胞与抗D混合液。
2.1.4前后左右倾斜玻片且同时观察凝集现象。
2.1.5如出现凝集，则判断为Rh（D）阳性，反之为Rh（D）阴性。
2.2试管法（IgM+IgG型）2.2.1在试管中加1滴抗D混合试剂。
2.2.2再加1滴2%~5%红细胞生理盐水悬液于上述试管中，混匀。
2.2.3以3200~3400r/min离心15~30秒。
2.2.4轻轻振摇试管使红细胞重悬，肉眼或显微镜观察有无凝集现象。
2.2.5记录结果，凝集者为阳性反应，反之为阴性反应。
2.3微柱凝胶法：按ABO血型鉴定中微柱凝胶法进行检测，结果判断见ABO血型鉴定操作规程图3-1。
3.注意事项3.1 Rh血型系统的抗体多由免疫产生，血清中有很多天然抗体存在，故不需作反定型试验。
3.2阳性对照，取3人O型红细胞混合配血。
阴性对照不易得到，一般配置方法为正常人AB型血清1滴，5%RhD阳性红细胞悬液1滴和菠萝蛋白酶试剂1滴混匀，与受检管一同置于37℃水浴1小时。
3.3 Rh血型鉴定要严格控制温度与时间。
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。
(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。
(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。
血型鉴定与血液配型实验方法介绍
血型鉴定与血液配型实验方法介绍在医学领域中，血型鉴定与血液配型是非常重要的实验方法，它们对于输血、器官移植以及疾病诊断等方面至关重要。
本文将介绍血型鉴定与血液配型的实验方法。
一、血型鉴定实验方法血型鉴定是指通过实验手段来确定一个人的血型类型，主要包括ABO血型和Rh血型。
1. ABO血型的鉴定方法ABO血型包括A型、B型、AB型和O型。
下面介绍几种常用的鉴定方法：(1) 滴定法：该方法主要利用抗血清对相应抗原进行滴定。
将被测血清稀释后与抗A、抗B、抗AB和抗O血清滴定反应，根据凝集程度来鉴定血型。
(2) 纸片凝集法：该方法是将试纸片吸附抗体，然后滴加被鉴定血液，根据试纸片上是否出现凝集来鉴定血型。
(3) 红细胞溶血法：该方法是将鉴定者的红细胞与ABO抗血清混合，根据红细胞的溶血情况判断血型。
2. Rh血型的鉴定方法Rh血型包括Rh阳性和Rh阴性。
下面介绍几种常用的鉴定方法：(1) 抗人球蛋白试验法：将被测血液与抗人球蛋白血清相混合，根据悬浮液的凝集程度鉴定Rh血型。
(2) 免疫胶体凝集法：本方法是将被测血液与含有相应抗原的胶体颗粒混合，当出现凝集时，可判定为Rh阳性。
以上是血型鉴定的常用实验方法，可以根据实际需要选择合适的方法进行鉴定。
二、血液配型实验方法血液配型是指将供者和受者的血液样本进行相互匹配，以确保输血或器官移植等过程的安全性和有效性。
目前常见的血液配型方法包括ABO血型配型和Rh血型配型。
1. ABO血型配型方法ABO血型配型是最基本的血液配型方法，其原理是将供者和受者的血清与相应的抗原进行反应，根据凝集的反应程度来确定合适的血液配型。
根据实际情况，可以选择滴定法、纸片凝集法等方法进行配型。
2. Rh血型配型方法Rh血型配型是根据供者和受者的Rh抗原是否相匹配来确定合适的血液配型。
可以通过抗人球蛋白试验法、免疫胶体凝集法等方法进行配型。
血液配型方法的选择取决于具体需求，各种方法各有优劣，医务人员在实际操作中应根据需要进行选择。
SOP018Rh血型鉴定
Rh血型测定一、检验目的：鉴定红细胞膜上Rh血型系统D抗原，为输血及输注血液成份、骨髓移植及器官移植配型作准备。
二、原理：根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能够出现凝集反应的原理，用已知类型特异性抗血清(抗D)与被检红细胞在盐水介质中反应（室温），若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有与血型抗体相对应的抗原(D抗原)，从而判断和鉴定被检者的Rh血型。
三、标本的采集：1.标本类型：静脉血或末梢血2.标本采集：见标本采集手册3.标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4.标本拒收状态：细菌污染，严重溶血标本不能作测定。
四、试剂1.试剂名称：RhD（IgM）血型定型试剂盒（单克隆抗体）。
2.试剂生产厂家：上海血液生物医药有限责任公司，批准文号：国药准字S2*******3.包装规格：10支/盒；10ml/支4.试剂盒组成：抗D标准血清1支5．效价：≥1：64（ccDeeO型）6．贮存：2-8℃保存，不可反复冻融。
五、仪器设备普通光学显微镜。
六、操作步骤1．标记试管：取小试管1支，标记为抗D。
2．加标准抗D血清：分加入抗D标准血清1滴于相应标记试管中。
3．加入红细胞悬液：加入被检者5%红细胞生理盐水悬液2滴于试管中混匀，以1000r/min离心1min。
4．观察结果：先观察上层液体有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻弹动，使管底的红细胞慢慢浮起，肉眼观察有无凝集，如轻微凝集应将反应物倒于玻片上再以显微镜低倍镜下观察。
5．判断结果：（1）凝集判断标准●凝集：上清液体清亮，底部有红细胞凝块，轻弹试管凝块不散开。
●不凝集：上清液清亮，血细胞均匀沉于管底，边缘整齐，手轻弹试管，红细胞象一缕烟似的上长升，随即成为均匀的悬液。
（2）血型结果判断标准6．阴性结果需在37孵育15-30分钟，然后再离心观察结果，若仍呈阴性需进一步确认是否是弱D。
七、质量控制1、阴性对照显示为阴性；阳性对照显示为阳性。
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Rh血型鉴定试验方法
一、原理
盐水介质RhD抗血清为LgG变形或LgM抗体，此抗体为完全抗体性质的单克隆试剂和单克隆/多克隆混合的低蛋白试验，在盐水中即与红细胞上D抗原结合发生凝集反应。
二试剂
0.9%生理盐水抗-D试剂
三、操作
（1）取管一支加抗-D试剂1滴，同时滴加2%—5%，用生理盐水稀释的被检红细胞一滴。
（2）2000转/分离心一分钟观察。
四、结果
（1）凝集者为阳性
( 2) 不凝集者用三批不同批号的抗D血清确证是否为阴性（注意温育）。
五、注意事项
（1）试剂应随时储存于冰箱中，随用随取。
（2）更换试剂需要作阴性阳性对照。
（3）呈不凝者应用三批不同批号的抗D血清抗人球实验确证是否阴性，一批或二批出现凝集可能为Dn.
输血科质量管理方案
医疗质量管理医院管理工作的核心，管理工作中一切计划，措施、制度、职责、标准、要求等无不以医疗质量为中心，以提高医疗质量为目的，为实现质量管理目标，特制订质量管理方案。
一质量管理成员：郑立君刘友斌
二质量管理标准：
1 血液使用合格率100%，成分输血率75%以上。
2 三级考核合格率100%
3 各项登记准确，完整。
三质量控制和考核
严格按操作规称操作，定期开展质量教育。
提高全员质量意识，树立质量重于泰山的的思想，并把质量教育内容落实到实际工作中，提高业务水平。
四质量保证措施
1 按《临床输血技术规范》的要求严格执行。
2 对入库的血液逐项检查，验收，登记，核对无误方可放入冰箱储存。
3 要定时检查冰箱温度，严格控制在2-8度左右，血液轻拿轻放，防止认为血袋破损和溶血，血液存放期间要精心观察，如有异常情况必须及时报告进行处理。
4 发血时要两人核对，签字后才能发出。
5 保持冰箱的干燥，清洁，整齐，严禁在储血冰箱中存放其他物品，以防止污染和影响保存。
6 血液及血浆的报废，报损应按规定进行处理。