ABO正反定型、RH血型鉴定及ABO血清效价滴定和亲和力试验

合集下载

实验一ABO正反定型及Rh定型、唾液血型物质检测

实验一ABO正反定型及Rh定型、唾液血型物质检测

14
唾液中HAB血型物质测定
【目的】
了解唾液HAB血型物质测定的原理、方法。
【原理】
HAB血型物质也存在于某些人的分泌液中。唾液中 HAB血型物质为半抗原,能特异性地与相应抗体结 合,从而抑制抗体与相应红细胞发生凝集。所以利
用凝集抑制试验,可测定唾液中HAB血型物质,它 有助于ABO亚型的分类及其特殊情况下血型的鉴定
(3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板) ,使血清与细胞充
分混匀连续约2min,肉眼观察凝集(溶血)反应。玻片
试验时可用低倍镜观察结果。
医学ppt
6
表l ABO血型正反定型结果
试剂血清+受检红细胞 (正定型)
-A -B 受检血型
受检血清+试剂红细胞 (反定型)
Ac Bc Oc
+-
A
-+
B
--
O
++
AB
医学ppt
15
【器材】 小试管、滴管、试管架、记号笔、离心机
【试剂】 1. 5%A、B和O型红细胞盐水悬液。 2. 最适稀释度抗血清的制备(标化血清)
【标本】受检者唾液
医学ppt
16
1.被检者漱口后留取自然流出的唾液2ml,将留取 的唾液1000g离心,取上清液置于大试管中,煮 沸10min,再离心10min,留取上清液备用。
-+ - +- - ++ - ---
医学ppt
7
医学ppt
8
注意事项 1.试剂 2.悬红 3.蛋白 4.溶血 5.冷抗体 6.老年、儿童 7.污染
作业 简述ABO血型鉴定正反不一致的原因
医学ppt
9
红细胞凝集强度判断标准 4+ 红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。 3+ 红细胞凝集成大小块,血清清晰。 2+ 红细胞凝块分散成许多小块,血清清晰。 l+ 肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。 ± 镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离

ABO 血型鉴定操作规程

ABO 血型鉴定操作规程

1.0 原理ABO 血型鉴定操作规程2.03.04.05.0 5.1 5.26.0 6.16.2 6.36.4 6.5 6.66.77.0 7.1 根据红细胞上和血清(或血浆)中有无 A 抗原和(或)B 抗原及其抗体,将血型分为A 型、B 型、AB 型及 O 型。

可利用红细胞凝集试验,通过正、反定型鉴定 ABO 血型。

正定型正定是指用已知抗-A、抗-B 血清来检测受检红细胞上有无相应的 A 抗原和(或)B 抗原;反定型反定是指用已知 A1型、B 型红细胞来检测受检血清(或血浆)中有无相应的抗-A 和(或)抗-B。

原始样品要求5 mL 静脉全血。

样品容器和添加剂真空试管,EDTA.K2抗凝/普通试管,不抗凝。

检测环境要求温度:18℃~27℃,湿度:30%~70%。

所需材料和设备设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。

材料抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水(NS)、干净空试管。

检测操作过程将受检标本以 1000g 离心 5min,使标本血浆/血清与红细胞分离,吸取红细胞,用 NS洗涤三次后,配成 3%~5%红细胞悬液。

取 6 支小试管,分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。

在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各 50 L ,其余管加入受检血浆/血清各100 L 。

在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者 3%~5%红细胞悬液各 50 L ,摇匀。

在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入 A1、B、O 红细胞试剂各 50 L ,摇匀。

1000g 离心 15sec,轻轻悬浮红细胞,观察结果并记录。

根据实验需要,除室温下观察结果外,另可增加在 4℃、37℃下观察结果。

结果判断凝集强度判断标准见表 1。

表1 凝集强度判断标准表凝集强度4+3+2+1+±-或θMFpHH判断标准红细胞凝集成一大块,液体背景透明,无游离红细胞数个大凝集块,液体背景透明,无游离红细胞有很多小凝集块,液体背景透明,无游离红细胞有许多很小的凝集块,肉眼可见,液体背景不透明,有游离红细胞微小的凝集块,肉眼很难看清,需要用显微镜观察无凝集,无溶血,全是游离红细胞混合凝集外观,镜下可见少数红细胞凝集,而大部分是游离红细胞部分溶血完全溶血7.2 ABO 血型结果判断见表2:正定型抗-A 血清血抗-B 血清血Ac表 2 2 血型结果判断表反定型定Bc Oc自身对照血型+――+―+―+―++―+―+―――――――――ABOAB7.37.48.09.010.0注:“+”表示凝集或溶血;“―”表示不凝集。

S007红细胞ABO血型(正反定型)、RhD鉴定标准化操作规程

S007红细胞ABO血型(正反定型)、RhD鉴定标准化操作规程

红细胞ABO血型(正反定型)、RhD鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型与RhD血型在临床上同型输注,确保临床输血安全、有效,根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。

二、方法采用微柱凝胶凝集试验检测红细胞ABO血型(正反定型)与RhD 血型。

三、原理将人红细胞血型抗原与相应的抗体发生的凝集反应在微柱检测系统中进行。

微柱检测系统的上端为反应室,将葡萄聚糖凝胶作为凝集反应的介质装入检测卡微柱凝集检测管中,卡片上从左向右顺序第一支至第三支微管凝胶中均分别充以抗A、抗B、抗D单克隆抗体IgM 试剂,检测人红细胞ABO、RhD抗原。

第四支至第六支微管中只有凝胶,第四支微管作阴性对照管,第五支和第六支微管作为ABO血型反定型管。

微柱凝集检测管中的凝胶的间隙起分子筛作用。

凝集反应阳性的红细胞凝决留在微柱凝集检测管的上面或中间,反应阴性未凝集的红细胞将通过凝胶的间隙,沉积在微柱凝集检测管的底部。

四、适用范围适用于输血前患者红细胞ABO血型(正反定型)确认与RhD血型复查。

五、仪器设备普通离心机;血型血清学多用离心机;37℃免疫微柱孵育器;六、试剂1、试剂名称:ABO、RhD血型试剂卡(单克隆抗体);试剂生产厂家:长春博迅生物技术有限责任公司;批准文号:国药准字S2*******;包装规格:聚丙烯卡12检测人份/盒;贮藏条件;18-25℃避光保存;有效期:自检定合格之日起12个月;试剂单克隆抗体效价:抗A效价≥128;抗B效价≥128;抗D效价≥32;特异性试验合格。

2、试剂名称:人ABO血型反定型用红细胞试剂盒;试剂生产厂家:上海血液生物医药有限公司;批准文号:国药准字S2*******;包装规格:A1、B、O试剂各1支, 10ml /支;贮藏条件;2-8℃保存,不能冰冻;有效期:自检定合格之日起2个月;试剂性能:外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。

七、检测样本要求1、标本类型:静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。

ABO血型鉴定操作规程

ABO血型鉴定操作规程

ABO血型定型编号:□□□□/J 04-2016操作规程版号;2016-A版第0次修改1.目的;为确保实验结果的准确,特别订本规程。

2.范围;适合进行ABO血型鉴定相关科室的全体工作人员。

3.职责;3.1科主任负责本规程的培训,考核及督促实施。

3.2科室工作人员按文件进行操作并建立相关记录,为实验结果的准确性负责。

3.3全科人员熟练掌握原理及操作。

4.原理根据红细胞表面有无A抗原和B抗原,将血分为A型、B型、O 型和AB型四种。

可利用红细胞凝集试验、通过正、反定型准确鉴定ABO血型。

正定型是用已知抗A和B分型血清来测定红细胞表面有无相应的A抗原或B抗原;反定型是用已知的A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A或抗B。

反定型中使用O细胞是为了检测抗A、抗B以外的不规则抗体。

5,试剂5.1抗-A、抗B分型血清。

5.2~5%、B、O、试剂红细胞。

6试剂的质量控制;6.1每个工作日在实验开始前,对试剂进行外观检查,包括;有效期、有无渗漏等,试剂红细胞无明显溶血。

6.2每个工作日在实验开始前,对所有的抗-A、抗-B、试剂红细胞按《血型试剂确认操作规程》进行特异性验证。

6.3将试剂的厂家、批号及检测结果记录到《血型试剂质量控制记录»中。

7.工作程序:7.1正定型:取洁净小试管2支,分别标记“抗A”、“抗B”,分别滴加抗A、抗B试剂1滴于试管底部,再分别加入受检者2%~5%红细胞1滴,混合。

7.2反定型:另取洁净小试管3支,分别标记“A C”、“B C”、“O C”,各加入受检者血清2滴于试管底部,再分别加入A、B和O型2%~5%试剂红细胞1滴,混合。

7.3以3400转/15秒(或1000转/1分钟)离心将试管轻轻摇动,仔细观察细胞扣有无凝集或溶血现象。

观察结果时既要看有无凝集,也要注意凝集强度,这将有助于亚型等的发现。

8.结果判定:凝集强度的判断依据《红细胞凝集强度判读标准》进行。

血型正定型反定型抗A 抗B A C B C O CA + - - + -B - + + - - O - - + + - AB + + - - -9正反定型不一致的原因;有技术问题或红细胞和血清本身问题,常见者有以下情况;分型血清效价太低,亲和力不强。

卡式ABO正反定型和RhD操作规程

卡式ABO正反定型和RhD操作规程

1.方法原理:根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原,将血型分为A型、B型、AB 型及O 型4种。

可利用红细胞凝集试验,通过正、反定型准确鉴定ABO血型。

所谓正定型,是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原;所谓反定型,是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。

DiaMed系统采用微柱凝集技术,在微柱中加入凝胶,凝胶的间隙起到了分子筛的作用,通过离心来分离凝集和非凝集的红细胞,从而达到检测目的。

2.仪器:达亚美离心机3.试剂及配套品: ABO正反定/Rh定型卡,达亚美2号稀释液(ID-Diluent2),标准红细胞A1和B。

4.样本要求:4.1血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。

若需要用血清替代血浆进行检测时,应在用前离心,1500g×10min,以免纤维蛋白残余干扰反应结果。

4.2 样本准备:5%样本红细胞制备:压积红细胞25 μl或全血50 μl悬浮于0.5 ml达亚美2号稀释液中。

5.操作程序 :5.1 取50μl A1,B 标准细胞(0.8%)分别加入A1,B管中。

5.2 取50μl 血清或血浆加入A1,B管中。

5.3 取10μl 5% 样本红细胞加入A, B, D, Ctl管中。

5.4离心10 分钟。

判读结果。

记录。

5.5 阳性(+):细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中。

阴性(-):细胞沉积在管底。

双相(d.p.):既有阳性结果,同时也有阴性结果。

溶血(Hemo):红细胞溶解,作为阳性结果对待。

5.6 ABO血型判断6.临床意义6.1临床输血:当循环血量不足或大失血或贫血需进行输血治疗,医学教.育网搜集整理在输血前必须先选择血型相同的供血者,再进行交叉配血,完全相同后才能输血。

6.2在皮肤、肾移植等器官移植的时候选择ABO血型相符的供体。

6.3不孕症和新生儿溶血症病因的分析。

6.4亲子鉴定等。

7.支持性文件:7.1中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程.第二版,东南大学出版社,19977.2 邱艳主编.全血成分血质量要求与血液标准化.中国标准出版社,2003 7.3 刘达庄主编.免疫血液学.上海科学技术出版社,2002.7:128-1377.4王培华主编.输血技术学.人民卫生出版社,第二版,20037.5李勇杨贵贞主编.人类红细胞血型学实用理论与实验技术.第一版,中国科学技术出版社,1999。

ABO系统血型鉴定(正定型)

ABO系统血型鉴定(正定型)

ABO系统血型鉴定(正定型)
试验原理:用已知抗体血型试剂,检查红细胞上的未知抗原。

1、20%—30%悬浮红细胞的配制:
取压积红细胞4滴,加1ml生理盐水。

2、正定型—玻片法:
①在正定型玻片两端分别加入待测者的20%—30%悬浮红
细胞各1滴,再加入已知相应抗体血型试剂各2滴。

②摇动玻片数次,5分钟后观察结果。

③如有怀疑者,须做试管法对照和显微镜观察。

3、正定型——试管法:
①取2支小试管分别注明:抗A、抗B。

②分别加入相应血型试剂一滴,再加待检者2~4%红细胞悬
液一滴。

③离心3000rpm/15秒或1000rpm/分钟。

④取出轻轻摇动,肉眼观察有无凝集。

⑤报告方式:待检者XXX红细胞鉴定血型为X型。

ABO、Rh-血型鉴定

ABO、Rh-血型鉴定

2021/4/27
16
盐水法操作程序: 1、取小试管2支,标明主、次侧。主侧:受血者血清2滴
加供血者3~5%生理盐水红细胞悬液1滴;次侧:供血 者血清2滴加受血者3~5%生理盐水红细胞悬液1滴。 2、混匀,以1000r/min,离心1min,取出,先目测上层液 体是否溶血,再轻轻摇动试管,检查红细胞是否凝集。
2021/4/27
3
Rh(D)血型定型
目的:鉴定红细胞表面是否含有D抗原。 适用范围:受血者、献血者Rh(D)血型鉴定 使用器材和材料:Rh抗(-D)标准血清、吸管、玻片等
2021/4/27
4
方法:玻片法
原理:根据抗D抗体与对应红细胞抗原的凝集 反应,区分Rh(D)阳性和Rh(D)阴性。
2021/4/27
结果判断:与盐水法相同。
2021/4/27
19
注意事项:
1、用EDTA抗凝血浆代替血清配血,但不能用肝 素抗凝血配血,因为肝素对聚凝胺有中和作用。
2、病人使用肝素后要加双倍量聚凝胺。 3、聚凝胺试剂使用前应恢复至室温。 4、和试剂比例要恰当,增加血清(浆)和红细胞
量时,LISS及聚凝胺、重悬液的量也要增加,否 则,灵敏度会降低4~8倍。
2021/4/27
8
血型凝集示意图
抗-
抗-A
抗(-D)
B
抗-
抗-A
抗(-D)
B
抗-
抗-A
抗(-D)
B
2021/4/27抗-
抗-A
抗(-D)
血型:AB型 Rh(D):阳性
血型:B型 Rh(D):阴性
血型:A型 Rh(D):阳性
血型:O型 Rh(D):阳性
9
反定法(试管法)

实验十五 ABO血型鉴定

实验十五 ABO血型鉴定

实验十五 ABO血型鉴定一、正定型法【目的】掌握用盐水介质法进行ABO血型系统(ABO group)正定型(direct typing)的原理、操作方法和结果判断。

【原理】用已知的IgM类特异抗体(标准血清)与被检红细胞在室温条件下、盐水介质中反应,根据红细胞是否出现凝集现象来测定被检红细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原,从而判断和鉴定被检者的血型。

【器材】1. 1.小试管、记号笔、蜡笔、试管架。

2. 2.尖滴管、胶吸头。

3. 3.吸管、吸耳球。

4. 4.载玻片或有凹槽的玻璃板或白瓷板。

5. 5.离心机。

6. 6.显微镜。

【试剂】1.标准抗A、抗B血清(商品)分为人血清ABO血型抗体和人ABO血型单克隆抗体,要求如下:(1)人血清ABO血型抗体:①特异性高。

②凝集效价:抗A不低于1∶128 ,抗B不低于1∶64。

③亲和力:反应开始15s内即出现凝集,3min时明显凝集,血凝块大于1mm2。

④稳定性高。

⑤已灭活补体。

(2)人ABO血型单克隆抗体:①特异性:抗A抗体特异凝集具有A型红细胞抗原的A1、A2、A1B、A2B;抗B抗体只凝集含B抗原的B和AB型红细胞。

②亲和力:以开始反应到出现凝集的时间表示抗血清的亲和力,国家标准是抗A对A1、A2、A2B分别为15s、30s、45s;抗B对B型红细胞为15s。

③凝集效价:国家标准是抗A1、抗B均大于1∶128。

④稳定性:较人血清抗体的稳定性低。

2.生理盐水。

【标本】抗凝静脉血或末梢血。

【操作】制备被检者5%红细胞生理盐水悬液:抗凝血离心或红细胞自然沉降后取试管下层的红细胞2滴于小试管中,加入生理盐水2ml,用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀。

2 500r/min离心3 min 后弃去上清液,重复洗涤3次。

自管底吸取1滴压积红细胞加入19滴生理盐水中混匀,此即为5%的红细胞生理盐水悬液。

操作示意见图4-1。

图4-15%红细胞生理盐水悬液制备操作示意图1.玻片法(1)标记玻片或白瓷板:取洁净的载玻片或白瓷板1块,用蜡笔画出小格,标明抗A、抗B。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

性仅次于ABO血型系统。
D抗原是Rh抗原中免疫性最强的抗原,通过输血和妊娠,50%~ 75%的Rh阴性的个体,可因D抗原阳性红细胞免疫而产生抗D,并 可导致严重的溶血反应。 受血者或孕妇血浆中如含有Rh抗体,在输入含相应抗原的血液后, 将引起严重的溶血性输血反应或新生儿溶血病,以抗D与D红细胞尤 为显著。IgG类的Rh抗体,由于能通过胎盘,从而破坏胎儿有相应 抗原的红细胞,引起新生儿溶血病。
Company Logo
注意事项
1.严格标记 摇动玻片动作要轻 2.所有器材干燥清洁、防止溶血,避免交叉污染 3.血型试剂平衡至室温再使用,用后尽快放回冰箱
4.玻片法注意防止干涸,以免误判为凝集
5.试管法 若溶血表明有补体激活(应区别标本采样等其它
因素引起的溶血),视为凝集
6.防止冷凝集素干扰,室温(20-24℃)下试验
LOGO
血型输血实验一
ABO正反定型 ABO血清效价滴定和亲和力试验 Rh血型鉴定
Company Logo
实验目的
重点掌握ABO血型正反定型的原理、方法、 临床意义 熟悉效价滴定和亲和力实验 熟悉Rh血型鉴定的原理、方法、临床意义
Company Logo
ABO血型正反定型 原理
用已知特异性的抗体检测试剂检查红细胞的抗原 (forward typing,正向定型或红细胞定型) 用已知血型的试剂红细胞检查血清中的抗体 (reverse typing, 反向定型或血清定型), 结合正反定型来判断红细胞的ABO血型
5.观察结果 观察上层有无溶血 管底有无凝集 再用低倍镜观察
reverse typing(serum typing) AC BC + — + — + + — —
Testing result
O A B AB
Company Logo
ABO blood group
blood group A B O AB antigen in red blood cell A B — A、B antibody in serum anti-B anti-A anti-A,anti-B —

+ — +

— + +
O
A B AB
Company Logo
反向定型
试管法
1.制备2%标准红细胞生理盐水悬液 1d已知血型RBC+49d生理盐水 混匀 2.分离血浆 2500r/min 3min 3.取两支试管分别标记A1、B,加入待检血浆各2d
4.将A1、B型标准红细胞生理盐水悬液1d加入相应标记的试管 混 匀 1000r/min 30sec
的效价,也就是血清中所含抗体的浓度
亲和力试验是指该血清中抗体与相应红细胞发生
凝集的强度与速度
Company Logo
效价滴定
试管号 生理盐水(ml) 抗A血清(ml)
1
2
3
4
5
6
7
8
9(空白)
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 弃去
2%A红细胞(ml) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 最后稀释度 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512
混匀 1000r/min 2min 观察结果 ++++ 凝集成大块,几乎无游离红细胞 +++ 凝集块稍小,有少量游离红细胞 ++ 凝块更小,游离红细胞占1/2 + 细小凝块,游离更多
Company Logo
注意事项 1. Rh血型系统的抗体多由后天免疫刺激(主要 是输血或妊娠)而产生,故不需做反定型 2.若为阴性反应,应进一步做Rh阴性确认试验。 用抗D、E、C、c、e(IgG+IgM)混合型血 清定型试剂鉴定待测红细胞上的全部Rh抗原
Company Logo
临床意义
Rh血型系统是当前发现的红细胞血型系统中最复杂的一个,其重要
凝集程度++时对应稀释度的倒数为该抗体的效价
Company Logo
亲和力试验 已知抗体待测血清1d于玻片上,10%相应红细 胞生理盐水悬液2d加于血清液滴旁(不相接触) 玻棒混合两者,同时开动秒表,轻转玻片,混匀 记录出现凝集时间和3min时凝块大小 (要求15s内开始凝集,3min时凝块>1mm2)
Company Logo
Rh血型鉴定
原理
单克隆混合试剂检测法 用Rh各抗血清(IgM+IgG型)试剂通过凝集 反应对红细胞上Rh抗原进行鉴定。
Company Logo
试管法
1.试管内加1dRh抗血清试剂 2.加1d待测血 3.轻轻混合,离心。
4.观察试管底并轻摇重悬,观察有无凝集
Com片法 1.标记玻片 将玻片分为两区分别标记抗A、抗B 2.在相应区域滴加抗A/抗B试剂1d 3.滴加血液各1d,不断轻摇玻片,充分混匀,2min内判 断结果
forward typing(cell typing) anti-A anti-B Testing result
Company Logo
临床意义 ABO血型系统,是迄今为止发现的最具临床价值 的一个血型系统,它将人的红细胞分成A、B、O 和AB四种血型,是输血医学和器官移植中最重要 的血型系统之一。
Company Logo
ABO血清效价滴定和亲和力试验 原理
将标准血清用生理盐水经最大倍数稀释与相应的
红细胞抗原发生一定强度以上的凝集即为该血清
相关文档
最新文档