RH血型鉴定

实践操作



用PH6.8-7.2的生理盐水配制2-3%的红细胞悬液，洗 涤1次 加入抗D抗体与红细胞悬液各一滴于玻璃试管中 混合并在室温下（18—25℃）15分钟. 离心15秒钟,观察结果. 出现凝集为阳性 不出现凝集为阴性,对于阴性结果应再做的DⅥ和弱D型 的测试 注：该抗D抗体为 IgG/IgM单克隆鉴定抗体混合型，其 中IgMAnti-D可直接凝结D阳性红细胞，除了D4型和弱 D(亚D)的一部分。IgGAnti-D通过间接的抗蛋白测试方 法凝结D4和低浓度的弱D(亚D).
项目二 血型与输血
任务二 Rh血型鉴定
第四节 Rh血型
概念



一、Rh血型抗原 抗原性强弱次序为D>E>C>c>e Rh阳性：含D抗原 Rh阴性：不含D抗原 亚型中，以Du最有临床意义，易被误定为 Rh阴性。

二、Rh血型抗体 免疫性抗体：IgG、免疫产生、小、可通过胎盘，
温性抗体、需要抗人球蛋白等介质才 能与相应红细胞凝集

五、Rh血型的临床意义 （一）Rh血型与输血 （二）Rh血型与新生儿溶血病
Rh阴性 抗D 第二次 Rh+ 抗D
复习思考题

1、Rh血型中抗原性最强、临床意义又最大的抗原 是： 2、因为Rh抗体多为 抗体，所以常采 用 、 、 等方法。 3、Rh血型不合引起的新生儿溶血病的原因：Rh 的母亲孕育了Rh 胎儿后，胎儿红细胞可通过 胎盘屏障进入母体的血循环中，刺激母体产 生 ，该抗体 进入胎儿体内而发生 新生儿溶血病。由于第一胎产生的抗体效价较低， 一般对胎儿无明显影响。但第二胎时抗体效价增高， 易引起新生儿溶血病。





三、标准血清要求 1、特异性 2、效价 3、亲和力 4、不含冷凝集素 5、不含补体，无任何污染 四、标准红细胞悬液的制备


五、ABO血型鉴定方法 正定型： 用已知抗A、抗B和抗A＋B分型血清来测定
红细胞上有无相应的A、B抗原

反定型： 用已知A抗原和B抗原红细胞来测定
血清中有无相应的抗A、抗B抗体。
实验操作
4、Rh血型鉴定:
Rh阳性 37℃水浴30分钟
1滴抗D----
----1滴红细胞悬液
Rh阴性
结果报告

ABO血型的报告方式： ABO血型 型

Rh血型的报告方式： Rh血型：阴性 Rh血型：阳性
注意事项

要有及高的责任心，避免发生血型鉴定错 误 对于工作人员1%的错误，病人就是

100%的误诊！！

抗D抗体最强，其次是抗c和抗E。
三、Rh血型的遗传和命名
四、Rh血型鉴定
是否含有D抗原 因Rh抗体多为不完全抗体，所以多采用酶介 质、抗人球蛋白等试验方法。





（一）聚凝胺法 【原理】 聚凝胺：产生很多阳离子 低离子强度溶液：降低红细胞的Zate电位 红细胞表面含D抗原，与抗D抗体凝集 柠檬酸盐解聚液：消除聚凝胺的正电荷，使 正常红细胞的非特异性凝集解散，而抗原抗 体引起的凝集仍然存在
聚凝胺 低离子强度溶液
柠檬酸盐解聚液


（二）酶介质法 【原理】 酶（木瓜酶、菠萝酶等）可破坏红细胞表 面带负电荷的唾液酸，降低红细胞表面负 电荷，使红细胞之间排斥力减小，红细胞 间距缩小，在不完全抗体的作用下发生凝 集。



（三）抗人球蛋白法 【原理】： 不完全IgG类抗D抗体,使红细胞致敏,加入 经一定稀释的抗人球蛋白血清后,将致敏红 细胞连接，发生肉眼可见的凝集。


（一）试管法： ： （二）玻片法；


（三）注意事项 1、严格查对 2、操作方法应按规定先加血清，再加红细胞 悬液， 3、试验用器材应清洁干燥 4、玻片法勿将干涸的红细胞聚集误认为凝集 5、反定型一般不宜采用玻片法 6、试管法离心后应先观察上清有无溶血
对于工作人员1%的错误，病人就是 100%的误诊！！
实验操作
ABO血型鉴定—正定型 试管法：
标记号 1滴抗A 1滴RBC 悬液
A
标记号 1滴抗B 1滴RBC 悬液
B
1000转/min离心1分钟，观察凝集结果
ABO血型正反定型结果判定


标准血清＋ 被检者红细胞 抗A 抗B 抗A＋B 细胞 ＋ － － － ＋ － － － ＋ － ＋ － 温度 对血型物质的作用 能否通过胎盘 与红C反应的介质
天然抗体（ IgM ）
无察觉 大 4-25℃ 易被血型物质中和 不能 盐水介质
免疫抗体（
IgG ）
有抗原刺激（妊娠、输血） 小 37℃ 大多不能被血型物质中和 能 酶、抗人球蛋白等
四、ABO血型的亚型 亚型：属同一血型抗原，但抗原结构和性能或 抗原位点数不尽相同的情况 A型 ： A1 A1和A抗原，血清中含有抗B抗体 A2 只有A抗原，血清中含抗B和抗A1抗体
前身物质(oh) 经H基因作用
A抗原 H抗原
B抗原




（一）试管法 1、正定型 取10mm×60mm试管3支，分别标 明抗A、抗B、抗A＋B，用滴管加入相应的抗A、抗 B、抗A＋B标准血清各1滴，再加入被检者5％红细 胞盐水悬液1滴，轻轻混匀。 2、反定型 取同样试管3支，分别标明A、B、O 红细胞，用滴管各加入被检者血清1滴，再分别加入 A、B、O型5％标准红细胞悬液1滴，轻轻混匀。 3、立即以RCF177g（1000r/min）离心1分钟。 4、取出试管，先观察有无溶血，再轻弹试管， 观察有无红细胞凝集，如肉眼不见凝集，应将反应 物倾倒于玻片上，在显微镜下用低倍镜观察。结果 判断可见表7－5。

五、ABO血型的遗传 A和B为显性基因，O为隐性基因 举例： A B AO BO

AB
AO
BO
OO
任务一（第三节）ABO血型鉴定
一、标本的采集 柠檬酸钠抗凝剂 二、红细胞悬液的配制 1、洗涤： 2、配制2％～5％的红细胞悬液 5％红细胞悬液＝比容红细胞1滴＋生理盐水1ml 2％红细胞悬液＝比容红细胞1滴＋生理盐水2ml
＋ ＋ － ＋
A型 B型
－ ＋
标准红细胞＋ 被检者血清 A细胞 B细胞 O － ＋ ＋ O型 ＋ AB型




（二）玻片法 1、正定型 取清洁玻片或白瓷板，用蜡笔画出方 格或圆圈，依次标明抗A、抗B、 抗A＋B，按标记用滴管加入相应的标准血清各1滴， 再加入被检者5％红细胞悬液1滴，转动玻片混匀。 2、反定型 另取清洁玻片或白瓷板，用蜡笔画出 方格或圆圈，依次标明A细胞、B细胞、O细胞，用 滴管加入被检者血清各1滴，再按标记加入5％标准 A、B、O红细胞悬液1滴。转动玻片混匀。 3、不断转动玻片或白瓷板，使血清与细胞充分 混合，室温下（20℃～24℃）10～15分钟，观察 有无凝集和溶血。如用玻片试验，必要时可用显微 镜在低倍镜下观察。红细胞凝集判断标准图7－2。
A 抗B 抗A B
转动玻片，15分 钟后观察结果
各加一滴红细胞
实验操作
ABO血型鉴定—正定型 玻片法：
A 抗B 抗A
B
转动玻片，15分 钟后观察结果
各加一滴红细胞
实验操作
3、ABO血型鉴定—正定型 试管法：
标记号 A 1滴抗B 1滴RBC B
标记号 1滴抗A 1滴RBC 悬液
悬液
1000转/min离心1分钟，观察凝集结果
复习思考题


4、木瓜酶可破坏红细胞表面带负电荷 的 ，降低红细胞表面负电荷，使红 细胞之间排斥力减低，红细胞间距 ， 在不完全抗体的作用下发生凝集。 5、抗人球蛋白可与红细胞上结合的 结合，将致敏红细胞连接，发生 的凝集。
三、ABO血型抗体 （一）天然抗体 （二）免疫抗体

IgM
IgG
天然抗体与免疫抗体的鉴别
实验操作
ABO血型鉴定—正定型 玻片法：
A 抗B 抗A
B
转动玻片，15分 钟后观察结果
各加一滴红细胞
实验十六 ABO血型鉴定 RH血型鉴定
实验目的

1、熟练掌握ABO血型鉴定方法。 2、熟悉RH血型鉴定的方法及结果判定。
实验器材、试剂
［器材］毛细血管采血用具、离心机、试管、 玻片 ［试剂］ 1、生理盐水 2、标准血清 3、抗D抗体
实验安排
两人一组互取标本，配制5%红细胞悬液 1、单号：ABO血型鉴定正定型：玻片法 2、双号：ABO血型鉴定正定型：试管法 3、每人进行Rh血型鉴定
提问

玻片法血型测定的方法及结果判读
实验操作
两人一组毛细血管采血 1、配制5%红细胞悬液： 末梢采血1滴+10滴生理盐水 2、ABO血型鉴定—正定型 玻片法：
作业
完成实验报告 P248 实验准备与安排 P252 实验准备与安排 报告今日血型测定结果
格式如下 ： 姓名：
一：1、2、3 一：1、2、3
ABO血型：
Rh血型：
检验者签字： 日期：
预习

交叉配血的操作方法 同型配血的结果判断 异型配血的结果判断