慢病毒包装
慢病毒包装原理
慢病毒包装原理
慢病毒包装是利用细胞中自身的基因表达机制，将外源基因引入细胞中，使其成为一种慢性感染病毒，它能在基因组中数月甚至多年连续作用，从而带来相应的治疗效果。
慢病毒包装主要是将需要表达的基因和病毒质粒结合，这种具有可复制性的结构，携带着外源基因，并利用病毒的自复制性能力将基因投射到感染细胞内，这种基因的稳定表达能够产生慢性的治疗效果。
慢病毒包装有助于保持病毒的稳定性，防止出现突变情况，而且能够更加精准地靶向特定的病灶。
此外，经过慢病毒包装之后，所生成的新型病毒可以有效防止外源基因的过早衰竭和可能造成的其他副作用，从而为基因治疗的药物的应用带来很大的便利。
慢病毒(过表达)包装步骤
慢病毒（过表达）包装步骤秦超1.转染复苏293T细胞,传2-3代进行转染，转染推荐使用合元公司的慢病毒转染试剂。
转染步骤：（以10cm培养皿为例）⑴最好在铺细胞后20h左右进行转染，控制转染前细胞密度70%—90%，保证细胞处于良好的状态,转染前一小时把一半培养基（约5ml）换成新的（含血清，因为此转染试剂不需换液）。
⑵加psin 10ug，pspax2 10ug，pmd2.g 5ug于800ul opti—mem，混匀⑶加40ul慢病毒转染试剂于800ul opti—mem，混匀，室温静置5min⑷将⑶所得的转染试剂稀释液滴加到⑵所得到的质粒稀释液中，边加边轻轻混匀，室温放置20min⑸取出细胞培养皿，将⑷得到的质粒转染试剂复合体加入到细胞培养基中，前后轻轻推摇使混合均匀，放回培养箱。
2.收毒(36—48h)收毒前如果质粒带有荧光标签可先看一下转染效率，一般达到60%即可.⑴将培养皿中的病毒上清液吸出到15cm离心管中，然后2000rpm离心10min,以沉淀细胞碎片。
⑵取上清用0.22um滤清过滤到浓缩管(用蛋白质浓缩管即可）中。
4000rpm离心至所需体积。
⑶浓缩完毕后，吸出浓缩后的病毒液,按每次的接毒量分装，-80℃冻存。
由于反复冻融会降低慢病毒滴度，因此避免反复冻融。
3.接毒接毒前12-20h铺细胞，使接毒时细胞密度约为40％—50%，务必使用生长状态良好的细胞。
将分装好的慢病毒滴加到细胞中，加polybrene使其终浓度为8ug/ml细胞密度60%—70%时可以再接毒一次。
4.检测及培养细胞系（48h)如果带有荧光标签可直接显微镜看一下感染效率，如需用药杀用puromycin杀三天（对照组完全杀死），剩下的即为基因整合进去的细胞。
如需培养成细胞系,可继续培养。
如果剩下的细胞较少可用高浓度血清，待细胞聚团时用胰酶消化一下，使细胞铺匀。
慢病毒包装经验
慢病毒包装经验在做慢病毒包装实验中，有科研工作者常遇到：用同样的病毒载体系统进行病毒包装实验，为什么有人做的很好，次次成功，有人却是时常做不出来，稳定性很差，不是滴度低就是根本不出毒?首先我们来简要介绍下慢病毒包装的流程：影响病毒包装是否成功的因素有很多，例如：细胞因素、载体系统、质粒抽提纯化情况、包装转染控制、目的基因对病毒包装影响等。
今天汉恒就把10年的病毒包装经验总结给大家。
1、实验材料的选择我们进行慢病毒包装实验时要重视包装材料——建议使用商品化的成熟毒载体系统，汉恒生物慢病毒包装体系为三质粒系统：组成为psPAX2, pMD2.G, pHBLV TM系列质粒。
包装细胞293T细胞培养时要让它培养时让它“白白胖胖、活力充沛“。
并且要定期纯化包装细胞、测序验证表达质粒。
2、目的基因对慢病毒包装的影响目的基因的大小、序列情况、该目的蛋白的功能毒性等都有可能导致无法包装成功。
一般慢病毒包装的目的片段大小在2.5k以内较为合适，大于2.5k会降低病毒包装滴度或超过载体容量无法包装。
并且，可能存在一些基因表达翻译后对包装细胞产生毒性，导致细胞状态异常，无法完成病毒包装，这种情况我们可以尝试更换病毒包装系统，例如选择包装腺病毒。
3、载体构建和抽提纯化环节我们要注意是否构建时导致质粒载体重组或某个部件缺失，或污染别的质粒、杂物?中抽纯化是否污染?要养成同时做阴性对照的习惯：建议目的基因载体和阴性对照GFP 载体是同一批，且建议每次包装都如此操作，要保证目的基因的表达载体构建纯化良好，质粒间比例得当。
建议三质粒包装系统质粒转染时的摩尔比为1：1：1。
4、细胞转染及病毒搜集阶段细胞产毒出毒期间过程中的细胞活力是包装成功及病毒滴度高低的一个重要环节，包装或转染感染前一定要重视细胞干净细微污染与否、饱满立体感是否好、铺板均匀，细胞密度在50-60%时进行包装比较合适。
在24、48 小时的要观察细胞及荧光状态，判断是否正常，转染后48h和72h分别两次收集病毒上清(48h收集后置换新鲜培液)。
慢病毒包装
慢病毒包装慢病毒是逆转录病毒的一种，它需要相对较长的孵育时间，所以称之为“慢”病毒，Lenti在拉丁文中就是慢的意思。
它包括人免疫缺陷病毒、猫免疫缺陷病毒、猿免疫缺陷病毒、牛免疫缺陷病毒等。
其中研究最多的是HIV-1慢病毒。
慢病毒载体是以慢病毒基因组为基础，所需的目的基因取代部分基因构建而成。
目前使用的慢病毒载体多采用HIV-1基因组改造而来。
与一般的逆转录病毒载体相比，慢病毒载体对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力而具有更广的宿主范围。
慢病毒载体还可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而实现持久表达。
在感染能力方面可以有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，又很少引发机体免疫反应，能达到良好的基因治疗效果，具有广阔的应用前景。
随着人们对慢病毒载体的深入研究，为了提高慢病毒在临床上使用的安全性，慢病毒载体的优化也在不断的探讨中。
慢病毒载体的发展经历了三个阶段，第一代慢病毒载体系统是以三质粒系统为代表，在构建时把HIV-1基因组中进行包装、逆转录和整合所需的顺式作用原件与编码反式作用蛋白的序列分离，分别构建在三个质粒表达系统上，即包装质粒、包膜质粒和载体质粒。
包装质粒在巨细胞病毒启动子的作用下，控制除env以外所有病毒结构基因的表达；包膜质粒编码水泡口炎病毒G糖蛋白；载体质粒中含有目的基因。
用这三种质粒共转染包装细胞如人胚胎肾293T细胞，在细胞上清中即可收获只有一次感染能力、而无复制能力的慢病毒颗粒。
第一代慢病毒载体系统的特点是在构建三种包装质粒时，为了降低产生有复制能力的病毒的可能性，尽可能减少三种质粒之间的同源序列，但包装质粒中仍然保留HIV的附属基因。
第二代慢病毒载体系统是在第一代的基础上进行改进，在包装质粒中删除了HIV的所有附属基因。
这些附属基因的去除并不影响病毒的滴度和感染能力，同时增加了载体的安全性。
第三代慢病毒载体系统又增加了两个安全特性：一是构建自身失活的慢病毒载体，即删除了U3区的3′LTR, 使载体失去HIV-1增强子及启动子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出RNA；二是去除了tat基因，用异源启动子序列代替，这样原始的HIV基因组中的9个慢病毒载体中只保留了3个。
慢病毒包装的原理
慢病毒包装的原理
慢病毒（lentivirus）是一类RNA病毒，通常被用于基因转染和基因治疗。
慢
病毒包装是指将需要传递的外源基因包装到慢病毒颗粒中，以便将其传递到目标细胞中。
慢病毒包装的原理涉及到病毒颗粒的组装、包装信使RNA（mRNA）和包
装蛋白等多个步骤。
首先，慢病毒包装的原理涉及到病毒颗粒的组装。
慢病毒的组装是一个复杂的
过程，它涉及到病毒基因组的复制、转录和翻译等多个步骤。
在这个过程中，病毒基因组的RNA被转录成mRNA，然后被翻译成包装蛋白和其他病毒结构蛋白。
这
些蛋白质随后会组装成完整的病毒颗粒。
其次，慢病毒包装的原理还涉及到包装mRNA的过程。
在病毒颗粒组装的过
程中，包装蛋白会识别并结合到病毒基因组的特定序列上，然后将mRNA包装到
病毒颗粒中。
这个过程是高度特异性的，只有符合特定序列的mRNA才能被包装
到病毒颗粒中。
最后，慢病毒包装的原理还涉及到包装蛋白的作用。
包装蛋白在病毒颗粒组装
的过程中起着关键的作用，它能够识别特定的RNA序列，并将其包装到病毒颗粒中。
此外，包装蛋白还能够保护包装的mRNA免受降解的影响，从而确保外源基
因的稳定传递。
综上所述，慢病毒包装的原理涉及到病毒颗粒的组装、包装mRNA和包装蛋
白等多个步骤。
这些步骤是高度协调和特异性的，能够确保外源基因的稳定传递到目标细胞中。
因此，对慢病毒包装原理的深入研究不仅有助于我们更好地理解病毒传播和基因转染的机制，还有助于开发更高效、更安全的基因治疗和基因转染技术。
关于慢病毒包装的简介
关于慢病毒包装的简介1、技术原理：慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础，使用疱疹病毒VSVG 外壳蛋白发展起来的工具载体。
其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。
慢病毒具有感染谱广泛特点，并且可以有效感染分裂和非分裂细胞。
慢病毒可以把外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达；因此成为导入外源基因的有力工具。
现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因敲除/敲入、基因过表达、RNA干扰、microRNA 研究以及活体动物实验中。
2、技术优势：慢病毒与其他病毒比较，具有以下优势：① 表达时间长：慢病毒通过将外源基因整合到宿主细胞基因组上，可实现目的基因长时间稳定的表达，不随着细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的首选；② 免疫原性低：直接注射活体组织不易造成免疫反应，适用于动物实验；③ 安全性高：未发现致病性，已被用于CAR-T 治疗作用于人体。
3、质量控制：① 基因序列测序② 载体酶切鉴定③ 慢病毒通过qPCR对病毒基因拷贝进行测定④ 一般情况下，慢病毒的滴度在108~109TU/ml4、应用：细胞感染：慢病毒可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，为神经领域、心血管领域、肝脏、肌肉、眼、肺、肿瘤及其他领域的科研工作者们提供更强有力的基因研究工具。
体内注射：神经系统病毒图片来源百度※独有的病毒分级纯化工艺，满足您从永生化细胞到原代细胞和干细胞，到动物体内水平等不同实验需求。
①基因过表达慢病毒服务②基因干扰慢病毒服务③ MicroRNA研究慢病毒服务④ CRISPR/Case9慢病毒服务。
慢病毒包装总结
慢病毒包装总结慢病毒的成分现在的慢病毒包装系统通常包括几个质粒，这几个质粒上分别含有慢病毒复制的成分，这样做的目的就是为了增加安全性，毕竟如果只用一个成分的话，危险系数很高，人一旦接触这种病毒就有可能遇到危险。
而把这几个成分分散在几个质粒中，很难在体外形成危险的病毒颗粒。
第二代慢病毒包装系统含有3个质粒，第3代慢病毒包装系统含有4个质粒。
这两代病毒包装系统都含有以下相同的成分：第一，编码目的蛋白或转录目的基因的转移质粒。
其实就是你自己的目的质粒，也就是通常需要自己做载体的质粒。
目的基因的两侧都含有长末端重复序列（LTR，long terminal repeat），LTR的作用就是辅助目的基因插入到宿主细胞的基因组。
许多慢病毒质粒都是基于HIV-1病毒改造的。
为了安全目的，这些目的质粒的复能能力并不完全，它们的3'LTR有所删减，这样病毒插入到基因组后会自我失活（self-inactivating）（SIN）。
第二，包装质粒，毒包装的结构蛋白编码质粒。
第三，包膜质粒，编码蛋白质外壳。
第二代慢病毒利用病毒的LTR启动子用于基因的表达，第三代慢病毒利用一个杂合的LTR启动子进行基因表达。
第二代慢病毒下图是第二代慢病毒系统：这个系统含有3个质粒，第1个质粒：包装质粒，它编码Gag，PoI，Rev与Tat基因。
第2个质粒：包膜质粒，含有VSV-G，编码蛋白Env。
第3个质粒：目的质粒，含有病毒的LTRs和psi包装信号（图片未画出），除非有内部启动子，否则这个目的质粒的目的基因是由5'LTR驱动的，它是一个弱启动子，需要Tat元件的来激活它。
所有的第2代慢病毒目的质粒必须要用第2代慢病毒包装系统，因此它的LTR是Tat依赖性的。
第三代慢病毒第3代慢病毒如下所示：设计第3代病毒的目的主要还是提高安全性。
在第3代病毒中，将第2代病毒的包装质粒分成了2个质粒，一个编码Rev，另外一个编码Gag和PoI。
慢病毒包装操作方案
慢病毒包装操作流程一、材料1 细胞培养试剂试剂名称终浓度试剂品牌DMEM/High glucose基础培养基90%Invitrogen胎牛血清10%Invitrogen/Gibco丙酮酸钠1mM Invitrogen2 慢病毒包装试剂试剂名称浓度试剂品牌Lipofectamine 2000InvitrogenPEG6000溶液50%WakoHBSS溶液Invitrogen3 耗材50 mL离心管15 mL离心管10 cm细胞培养皿μm过滤器2 mL EP管二、操作流程1细胞培养1.1293T/293FT细胞的复苏1)将完全培养液从4°C中取出放置到室温预热30 min左右。
在超净台内，用吸管吸取6~7mL完全培养液至15 mL离心管中；2)快速将冻存的细胞从液氮中取出，并迅速用镊子夹住盖子放入37°C 水浴中快速晃动（水不要没到盖子），使其在1~2分钟内完全融化；3)在超净台内，用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，用吸管吸取所有融化的细胞悬液至装准备好的完全培养液中，轻轻吹打混匀，使冻存液分散开（目的是让DMSO分散，降低恢复室温的DMSO对细胞造成的毒性作用）。
4)在室温条件下，250 g离心4分钟。
5)离心后，在超净台内小心倒去上清，用吸管吸取2 mL新鲜完全培养液重悬细胞至单细胞悬液，再转移已经加好培养基的培养瓶/培养皿中，写上细胞名称、日期，放置37°C、5% CO2饱和湿度培养箱内培养。
（首次复苏细胞时，离心重悬后需取样计数，根据细胞数选择面积合适的培养容器。
）6)复苏翌日，给复苏的293T细胞更换新鲜的完全培养基。
1.2293T/293FT细胞传代1)待细胞长至60%-70%融合度即可传代。
将培养瓶里的所有培养液全部移去，用1×PBS洗涤细胞两次（洗涤速度要快，避免细胞干涸时间过长），以去除残余的培养液和血清（血清含有胰酶的抑制因子）；2)加入适当的胰酶溶液，能使其完全浸过细胞即可，室温孵育1-2分钟。
慢病毒包装步骤及经验总结
慢病毒包装步骤及经验总结慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种，它能够将靶基因导入到一些较难转染的细胞，如原代细胞等，并且将靶基因随机整合到宿主的基因组中，从而大大增加了转染效率，并且能够在细胞系中稳定表达若干代，可以进行稳转细胞株的筛选。
因为是随机整合，也有不确定因素，有些公司还能提供定点整合技术，将靶基因定点整合到基因组特定的部位，从而保证其高效表达并且对细胞不产生随机整合可能产生的伤害。
慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。
慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。
为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染。
慢病毒载体基因组是正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的逆转录酶逆转录为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。
整合后的DNA转录mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白或产生RNAi干扰。
慢病毒包装系统由一个包装质粒混合物（Mix）和一个慢病毒载体质粒（LentiviralVector）组成，如下图（图片来自MIT）：载体中含有HIV的基本元件5’LTR和3’LTR以及其他辅助元件等。
不同系统包装质粒混合物也不一样，以本实验室的三质粒系统为例，包装质粒混合物中含pMDL，VSVG，pRSV-Rev，比例为5:3:2；其中pMDL含有编码HIV病毒主要结构蛋白的gag基因和编码病毒特异性酶的pol基因，pRSV-Rev含编码调节gag和pol基因表达的调节因子rev基因，VSVG含有提供病毒包装所需要的单纯疱疹病毒来源的VSVG基因。
以下介绍用293T细胞在六孔板（35mm）中包装病毒，其他孔板相应增加或减少体积。
准备试剂篇核心质粒；指数生长的293T细胞；? 病毒包装质粒Mix:1 μg/μl （Mix=pMDL: VSV-G : REV=5:3:2），不同载体系统所用的包装病毒质粒也不一样，此系统可用于包装PBOBi，PLKO， Plv等载体质粒。
慢病毒包装步骤
慢病毒包装步骤慢病毒包装步骤慢病毒包装简要步骤：以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293T细胞。
1、取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清培养基。
轻柔混匀，室温孵育5min。
3、将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。
室温孵育20min4、用胰酶消化并记数293T细胞。
用含血清的培养基重悬细胞。
5、在六孔板中每孔，加入1ml含血清的生长培养基，再加入DNA-脂质体复合物。
6、将1ml重悬的293T细胞（1×106个细胞/ml）加入到平板中。
37℃CO2孵箱中孵育过夜。
7、转染后48-72h收获含病毒的上清。
3000 rpm 离心20min，去除沉淀。
8、病毒上清-80°C贮存。
包装出来的慢病毒对NIH/3T3细胞达90%以上感染效率。
注意事项1.在慢病毒感染细胞前，为检测病毒上清培养液内病毒的活性，并确定病毒与转染细胞之间的比率，需要确定病毒2. 在慢病毒转染细胞的过程中最重要的一步是融合，只有一些较小的慢病毒载体才能转导进细胞，因此，病毒颗粒的吸附是慢病毒转染的限速步骤。
质粒转染的步骤1、DNA的量：Lipofectamine 2000=1：2~32、细胞密度大约占培养板的80%左右，转染。
3、转染期间不要加抗生素，否则会导致细胞死亡。
步骤如下：以24孔培养板为例1、转染前一天细胞换新的培养基2、制备DNA-Lipofectamine 2000复合物，如下:a、用50ul无血清培养基稀释DNA（0.8g），轻轻混匀；b、Lipofectamine 2000使用前，轻轻混匀，用48ul无血清培养基稀释2ul Lipofectamine 2000，轻轻混匀，室温孵育5分钟；c、将a+b的液体加在一起，轻轻混匀，室温孵育20分钟，使DNA-Lipofectamine 2000复合物形成；3、将100ul DNA-Lipofectamine 2000复合物加入培养板中，轻轻前后摇匀；4、放入37度孵箱中培养24~48h后，1：10传代，加入G418筛选。
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慢病毒包装
一、慢病毒服务简介
慢病毒（Lentivirus）载体是以人类免疫缺陷I型病毒(HIV-1)为基础发展起来的基因载体。
它是一种逆转录病毒，能使外源基因整合入宿主的基因组稳定、长期表达，但却比一般的逆转录病毒具有更高的滴度和更广的宿主范围。
携带外源基因的慢病毒载体与包装载体(表达病毒包装所需辅助蛋白)一同转染包装细胞，即可进行病毒的包装；经收集和浓缩的慢病毒液可以直接用于感染宿主细胞或活体动物模型。
辉骏生物使用的慢病毒包装系统是4质粒包装系统，包括1个慢病毒表达载体和3个慢病毒包装载体(分别表达病毒包装必需的蛋白Gag/Pol、Rev和VSV-G)，包装细胞为293T细胞。
辉骏生物提供包含多种荧光基因(如GFP或RFP等)、多种抗性筛选标签和多种启动子的慢病毒载体，可充分满足客户不同实验设计的要求。
二、慢病毒表达系统的特点
1> 能将外源基因有效地整合入宿主染色体上，介导目的基因稳定、长期的表达；
2> 慢病毒有更广泛的宿主范围，能够有效地感染分裂细胞、非分裂细胞，特别适合于一些难转染的细胞（如原代细胞、干细胞、不分化的细胞）和对腺病毒感染具有较强免疫反应的细胞（如树突状细胞、单核细胞和间充质干细胞）等；
3> 适用范围更广，不仅能用于体外实验，还能用于活体动物模型。
4> 不需要转染试剂，转导效率高，目的基因整合到宿主细胞基因组的概率大大增加；
5> 可用于研究基因的过表达、microRNA过表达和RNAi等。
6> 利用慢病毒建立稳转细胞株的时间较常规真核表达载体更短，能大大缩短实验周期、提高实验效率。
三、慢病毒技术整体流程
A. 慢病毒载体的构建：根据客户的不同需要，将目的基因片段连接至慢病毒载体；
B. 慢病毒包装：重组病毒质粒与包装质粒一起转染293T细胞进行包装；收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，浓缩后进行滴度测试，得到滴度≥1×108 TU/mL的慢病毒液；
C. 稳转细胞株的建立：分别使用实验组和对照组慢病毒感染细胞，利用抗生素初步筛选稳转细胞株，细胞分选得到单克隆细胞株，建立实验组和对照组的稳转细胞株。
图1 慢病毒技术服务整体流程
四、慢病毒表达载体元件
在慢病毒的包装系统中，慢病毒表达载体携带病毒包装和复制所需的顺式作用元件和外源基因表达盒，3个包装质粒反式提供病毒包装必需的蛋白。
辉骏生物提供多种慢病毒表达载体，具体元件如下图所示，除此之外，客户还可以根据需要更换启动子、荧光基因或抗性基因。
图 2 慢病毒载体元件示意图
五、慢病毒技术服务项目
表1 慢病毒服务项目及内容
分类服务编号项目名称客户提供服务描述
RNAi慢病毒服务
FG101RNAi慢病毒载体构建
目标基因登录号
或序列
(1)设计并合成1条干扰序列
(2)构建载体
FG102A RNAi慢病毒包装套餐A
目标基因登录号
或序列
(1)设计并合成3条干扰序列(保
证至少有1个靶序列的干扰效率
大于70%)
(2)分别构建3条载体
(3)分别进行3次慢病毒包装FG102B RNAi慢病毒包装套餐B
设计好的有效靶
点序列
(1)构建载体
(2)慢病毒包装
注: 可提供多条干扰序列
FG103A RNAi稳转细胞株构建套餐A目标基因的序列
(1)设计并合成3条干扰序列
(2)分别构建3条载体
(3)分别进行3次慢病毒包装
(4)建立稳转细胞株(得到至少1个有效干扰的细胞株)
FG103B RNAi稳转细胞株构建套餐B 设计好的有效靶
点序列
(1)构建载体
(2)慢病毒包装
(3)建立稳转细胞株
基因过表达慢病毒服务FG111基因过表达慢病毒载体构建目标基因的模板构建载体
FG112基因过表达慢病毒包装套餐目标基因的模板
(1)构建载体
(2)慢病毒包装FG113过表达稳转细胞株构建套餐目标基因的模板
(1)构建载体
(2)慢病毒包装
(3)建立稳转细胞株
microRNA 慢病毒服务FG121microRNA过表达载体构建
microRNA前体
或初始产物模板
构建载体
FG122
microRNA过表达
慢病毒包装套餐
microRNA前体
或初始产物模板
(1)构建载体
(2)慢病毒包装FG123
microRNA过表达
稳转细胞株构建
microRNA前体
或初始产物模板
(1)构建载体
(2)慢病毒包装
(3)建立稳转细胞株
特别提醒：
（1）基因过表达慢病毒服务适用于目标基因长度为2000bp以下的片段，2000bp以上的请具体咨询；（2）我公司亦可进行基因钓取和WB检测服务，但费用不包含在总套餐之内，需根据实际情况收费；（3）客户如对所需病毒量（TU）及病毒液滴度范围有特殊要求需提前告知，我公司一般提供的病毒滴度在1×108~1×109 TU/mL之间，规格为1mL；
（4）若实验材料为原代细胞和需要特殊培养的细胞，请具体咨询；
（5）客户亦可根据特殊要求进行慢病毒产品定制服务。
六、实验结果提交
实验结束后，我公司会提交完整的实验结果，包括：
1. 客户定制的相应载体、病毒液或稳转细胞株；
2. 慢病毒液滴度测定报告单；
3. 慢病毒载体的测序结果和峰图、引物序列、载体图谱；
4. 全部实验图片；
5. 详细实验报告。