2021年革兰氏染色实验步骤
革兰氏染色步骤6则
革兰氏染色步骤6则以下是网友分享的关于革兰氏染色步骤的资料6篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。
革兰氏染色步骤（1）革兰氏染色步骤步骤革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1、涂片固定。
2、草酸铵结晶紫染1分钟。
3、自来水冲洗。
4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5、水洗，用吸水纸吸去水分。
6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7、蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。
干燥，镜检。
染色后，革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
细菌分类：革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
革兰氏染色法的步骤（2）详细阐叙革兰氏染色法的步骤浏览次数：174次悬赏分：0 | 解决时间：2011-5-25 17:44 |提问者：肖箫2011shaw最佳答案革兰氏染色一、目的：在细胞发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测，判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。
二、原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
革兰氏染色法步骤及注意事项
1. 准备细菌涂片：将待染菌株取一小滴放在玻璃片上，用铅笔头部画成细 线，形成细菌涂片。
2. 固定：将细菌涂片在火焰上反面向上加热，使细菌附着在玻璃片上。 3. 染色： a. 涂上紫晶液：将细菌涂片浸入紫晶液中，静置 1 分钟。 b. 冲
1. 操作环境应保持干净，并采取无菌操作，以避免外界细菌污染。 2. 手套、眼镜和实验室外套是必需的个人防护装备。
3. 严格遵守安全操作规程，如避免将染料接触到皮肤或进入口鼻。
4. 使用优质的试剂和试验器材，以确保结果的准确性。
5. 注意控制染Βιβλιοθήκη 时间和冲洗时间，过长或过短都可能影响染色效果。
6. 在观察细菌涂片时，使用适当的显微镜镜头和光源，以获得清晰的图 像。
洗：用蒸馏水或脱离水轻轻冲洗玻璃片，以去除多余的紫晶液。 c. 酒 精洗涤：滴加酒精洗涤玻璃片，使其被酒精覆盖，持续洗涤 15-30 秒。 d. 再次冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃片，以去除酒精。 e. 涂上碘液： 滴加碘液覆盖细菌涂片，静置 1 分钟。 f. 冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃 片，以去除多余的碘液。 g. 酒精洗涤：滴加酒精洗涤玻璃片，使其被 酒精覆盖，持续洗涤 15-30 秒。 h. 再次冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃 片，以去除酒精。 i. 涂上脱色剂：滴加脱色剂覆盖细菌涂片，持续涂覆 15-30 秒。 j. 冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃片，以去除脱色剂。 4. 染色：将细菌涂片滴上红色染料（如苏丹三染料）覆盖细菌，静置 1 分 钟。 5. 冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃片，以去除多余的染料。 6. 干燥：将细菌涂片放在通风处晾干，或用吹风机低温吹干。 7. 观察：将干燥的细菌涂片放在显微镜下观察，细菌将呈现出紫色或蓝色 的革兰氏阳性颜色，而其他微生物将呈现出红色的革兰氏阴性颜色。 注意事项：
革兰氏染色说明
⾰兰⽒染⾊说明⾰兰⽒染⾊【操作步骤】1、操作前准备：戴⼝罩、帽⼦、⼿套，穿⼯作服，准备并清点本试验所需器材。
2、制作涂⽚：细菌涂⽚的制作包括涂⽚、⼲燥、固定3个步骤。
(1)涂⽚：取洁净载玻⽚1张，⽤铅笔标记，并在玻⽚正中间位置滴加⼀滴⽣理盐⽔。
⽤灭菌环挑取菌落少许，均匀涂布于⽣理盐⽔中，并研磨成直径1~1.5cm的菌膜。
若取菌悬液标本涂⽚，则不需加⽣理盐⽔，直接⽤灭菌的接种环取菌液1~2环，直接均匀涂抹成菌膜。
(2)⼲燥：涂⽚最好置室温下⾃然⼲燥，也可将菌膜⾯向上，在酒精灯⽕焰上⽅约10cm处的热空⽓中微微加热烘⼲。
(3)固定：⽤⼿或玻⽚夹夹住载玻⽚⼀端，⼲燥的涂⽚⾯朝上，在酒精灯⽕焰的外焰上尽快对来回通过2~3次，以玻⽚反⾯接触⽪肤热⽽不烫⼿为宜。
3.染⾊（1）初染：在制好的涂⽚上滴加结晶紫染液数滴（以刚好覆盖菌膜为宜），染⾊⼀分钟，倾斜载玻⽚，⽔洗。
甩去积⽔。
（2）媒染：滴加卢⼽碘液数滴，染⾊1分钟，倾斜载玻⽚。
⽔洗，甩去积⽔。
（3）脱⾊：滴加95％⼄醇数滴，轻轻摇动载玻⽚，使其脱⾊。
需10~30s ⾄⽆紫⾊脱出为准。
（4）复染：滴加稀释复红染液数滴，复染0.5min。
倾斜载玻⽚，⽔洗，甩去积⽔。
⽤滤纸吸⼲或者⾃然⼲燥。
4、油镜检查：待标本涂⽚⾃然⼲燥或⽤吸⽔纸吸⼲后，在菌膜上滴加⾹柏油，置油镜下检查。
表⽪葡萄球菌染成紫⾊，为⾰兰阳性菌，呈葡萄球状排列；⼤肠埃希菌染成红⾊，为⾰兰阴性菌，呈散在的杆状。
5、其他：操作后正确处理医疗垃圾，实验器材归回原位。
【注意事项】1、整个操作过程须注意⽆菌操作。
2、因不同菌龄的细菌，⾰兰染⾊的结果也有差异，故⼀般以18~24h的培养物染⾊效果最好。
3、涂⽚若太厚或太薄，固定时菌体过分受热及脱⾊时间长短，都会影响染⾊结果，要严格按要求操作。
4、涂⽚最好在室温下⾃然⼲燥，若置酒精灯上微加热烘⼲时，切勿靠⽕焰太近，以免标本烤枯变形。
5、染⾊时，染液以覆盖标本为宜，不宜过多。
微生物学实验细菌的简单染色和革兰氏染色2021推选
四、实验步骤
〔一〕简单染色的步骤 〔见P11〕
1、涂片：取干净载玻片，火焰灼烧后，横放于玻片架上； 在载玻片中央滴一小滴生理盐水， 用接种环以无菌操作取少许菌体于水滴中〔注：不要挑破培养基〕，
7、镜混检匀：先并用低涂倍成镜找薄到视膜野〔后，注再换：油涂镜观片察 不。 易过厚〕。
菌龄对革兰氏染色结果的影响：选取处于活泼生长期——指数生长期的菌体进行革兰氏染色。
〔二〕革兰氏染色 〔见P12)
1、涂片、固定 〔1〕涂片——“三区〞涂片法。在载玻片的左端先加一滴蒸馏水，用无菌接种 环挑取少量苏云金芽孢杆菌与左边水滴混合；将载玻片倾斜使少量菌液延伸至
玻片中央。在载玻片的右端加一滴蒸馏水，用无菌接种环挑取少量大肠杆菌与 右微菌生龄边物 对学革水实兰滴验氏细染混菌色的结合简果；单的染影将色响和：玻革选片兰取氏处倾染于色活斜泼使生长少期—量—菌指数液生长延期伸的菌至体进玻行片革兰中氏染央色。。 〔三区：左区——苏 云菌体金尚未芽成孢熟或杆菌体菌过区老，；可能中使央染色区结果—呈—现相两反的种结菌果。的混合区；右区——大肠杆菌区〕。 〔菌直体至2尚 流〕未下成的枯熟水燥或为菌无及体色过为固老止定，。可。能使步染骤色结同果呈简现相单反染的结色果。法。 涂烘干片菌液不〔易注：过不能厚直，接在否火焰那上么烘烤造，以成免局菌体部变形菌〕体。 脱色不完全，而使G-菌呈现革兰氏阳性结果。
2混②、匀在并 碱枯涂性燥成、薄中：膜性〔或用注弱夹：酸涂性子片溶不液夹易中住过，厚细载〕菌。菌玻体片通常一带负端电〔荷，菌而碱膜性面染料朝在电上离〕时，，其分反子复的染通色局过部火带正焰电荷高〔处酸性数染料次的，染色局部 带负烘电荷干〕，菌因液此，〔碱性注染：料很不容易能与直菌体接结合在而火是菌焰体着上色烘。 烤，以免菌体变形〕。
革兰氏染色操作方法过程
革兰氏染色操作方法过程革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，用于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
操作步骤如下：1. 取一支细菌培养液，用无菌棉签蘸取适量的细菌样品。
2. 在显微镜片上滴加一滴细菌样品。
3. 用锡夹夹住显微镜片，将显微镜片通过火焰杀菌，以消毒细菌样品。
4. 将显微镜片上的细菌样品放置于乙醇中，浸泡1-2分钟，进行固定。
5. 取出显微镜片，倾倒掉乙醇，用水冲洗显微镜片，以去除残留的乙醇。
6. 滴加革兰氏染色液（由紫色的结晶紫和碘酒混合制成），使其完全覆盖细菌样品。
7. 静置1分钟，将显微镜片冲洗至水清。
8. 将显微镜片放入去结晶紫酒的洗涤液中，浸泡20-30秒，进行除色。
9. 冲洗干净后，加入洗净的碱性碘液，浸泡20-30秒，进行碘固定。
10. 将显微镜片放入无菌水中，冲洗干净。
11. 用酒精洗液将显微镜片沥干。
12. 将显微镜片放入苏木精洗涤液中，浸泡20-30秒，进行染色。
13. 冲洗干净后，用水洗涤。
14. 用酒精洗液将显微镜片沥干。
15. 将显微镜片放入氯仿中，浸泡1-2分钟，清洗细胞。
16. 用酒精洗液将显微镜片沥干。
17. 将显微镜片放入醋酸乙酯中，浸泡1-2分钟，清洗细胞。
18. 用酒精洗液将显微镜片沥干。
19. 将显微镜片倒置在玻璃片上晾干。
20. 最后，在显微镜下观察染色结果。
革兰氏阳性菌为紫色，革兰氏阴性菌为粉红色。
注意事项：- 操作中要使用无菌试剂和器皿，以防止细菌污染。
- 染色液的配制和保存要按照说明书进行。
- 操作过程中要注意不要受伤，避免染色液和化学物品溅到皮肤或眼睛上。
- 染色后，显微镜片要彻底干燥，以便观察。
革兰氏染色方法
实验方法步骤革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）自来水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。
干燥，镜检。
G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。
呈紫色。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。
革兰氏染色法的主要步骤是先用结晶紫进行初染，再加媒染剂—碘液，以增加染料与细胞间的亲和力，使结晶紫与碘形成分子量较大的复合物，然后用脱色剂（乙醇或丙酮）脱色，最后用番红复染。
凡细胞不被脱色而保留初染剂的颜色（紫色）者为革兰氏阳性菌，如被脱色后有染上复染剂的颜色（红色）者为革兰氏阴性菌。
一般乙醇脱色的时间为30s,如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可能被脱去颜色而被误认为是革兰氏阴性菌；相反，如果时间不够，革兰氏阴性菌未被完全脱色而被认为是革兰氏阳性菌。
染色时间一般控制在1min。
革兰氏染色液的配制：第1液：结晶紫溶液结晶紫乙醇饱和溶液100 mlA液：结晶紫 2.5 g95%乙醇25.0 mlB液：1%草酸铵溶液将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成液；将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
第2液：路（卢）戈碘液碘化钾 2 g碘 1 g蒸馏水300 ml先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶解时可稍加热，最后补充蒸馏水量。
第3液：脱色剂（1）95%乙醇或丙酮乙醇溶液100 ml95%乙醇70 ml丙酮30 ml第4液：番红花红染色液2.5%番红0 （Safranin 0）95%酒精溶液10 ml蒸馏水90 ml。
简述革兰染色法的操作步骤
简述革兰染色法的操作步骤革兰氏染色法：也称革兰氏阴性染色法。
属于活细胞染色法，也是初中阶段接触的细菌学基本技术之一。
此法特别适合观察病毒的形态，故常作为临床微生物实验中重要的染色方法。
简述革兰氏染色法的操作步骤一般方法如下：(1)检查试管，将所需的培养基配制好并检查是否均匀。
(2)液体试剂的制备：取无菌的结晶紫注射液0。
5ml，精氨酸0。
5ml， 0。
01%升汞液2。
5ml，蒸馏水150ml混匀后再加蒸馏水至1000ml。
(3)固体试剂的制备：取无菌的结晶紫指示液0。
5ml，精氨酸0。
5ml，蒸馏水50ml混匀后再加蒸馏水至1000ml。
(4)稀释：在试管内分别加入精氨酸0。
5ml，无菌水20ml，再加蒸馏水至9ml，摇匀，用结晶紫指示液染色20分钟，并随时注意结晶紫是否变蓝，必要时可轻轻摇动或加热。
(5)加生理盐水到标线内，使高度恰好达到培养基中最低部位。
(6)加培养液：吸取配制好的液体培养基分别滴到三个试管中，每个试管各加入100μl的纯化蛋白胨培养基，即为含无菌牛血清的生理盐水，分别置于37 ℃温箱中保存备用。
(1)检查试管，吸出液体试剂，吸干，检查。
(2)准确量取需用量(或先倒在烧杯中，再用量筒量)，检查药液浓度。
(3)用酒精灯火焰点燃试管内的培养基，分别在每管中加入1。
0ml培养基，将试管放回37 ℃温箱中培养。
(4)观察并记录细菌生长情况。
第一，培养时间应足够，以获得足够的细菌数量；第二，以提高对细菌生长曲线的观察能力；第三，缩短细菌培养时间有利于分离、纯化细菌。
(5)取出试管，观察染色的结果。
如果菌落周围染色较浅，表明染料被细菌分泌物包绕，菌体呈现模糊状态；反之，菌落周围染色较深，则表明细菌染色质集中，结构明显。
①加生理盐水到标线内，使高度恰好达到培养基中最低部位。
②加培养液：吸取配制好的液体培养基分别滴到三个试管中，每个试管各加入100μl的纯化蛋白胨培养基，即为含无菌牛血清的生理盐水，分别置于37 ℃温箱中保存备用。
革兰染色实验八步操作流程
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革兰氏染色
欧阳光明（2021.03.07）
一．实验流程：
1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。
涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。
2、涂片：
液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。
3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。
4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。
5、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。
6、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。
简单染色结束可观察细胞形态。
7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。
8、脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液
无紫色，立即水洗。
9、复染：滴加蕃红复染3-5min，水洗。
至此，革兰氏染色结束。
二．染色结果：革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
备注：
1.革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌。
2.革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。