HCG金标免疫试验方法及注意事项
人绒毛膜促性腺激素(hCG)测定(免疫金标法)
人绒毛膜促性腺激素(hCG)测定(免疫金标法)
人绒毛膜促性腺激素(hCG)是一种生长激素，由合体细胞胚胎鞘和绒毛膜细胞产生。
在妊娠早期，合体细胞胚胎鞘所分泌的hCG是感受器妊娠(妊娠试验)的生物标志物。
人绒毛膜促性腺激素(hCG)测定(免疫金标法)是一种常规的检查方法，用于确定是否怀孕。
这种检查方法可以通过尿液和血液中检测hCG的存在来确定是否怀孕。
人绒毛膜促性腺激素(hCG)测定(免疫金标法)通常采用酶联免疫吸附检测法(ELISA)、放射免疫分析(RIA)和荧光免疫分析法(FIA)等技术。
这些方法的核心都是利用hCG与抗体的免疫反应，将其检测出来。
这种检测方法准确、简单、快速，可以在24小时内得到结果。
它广泛应用于临床检查，尤其是在妊娠检查中是非常常见的方法之一。
早早孕说明书
使用前请仔细阅读说明书早早孕(hcg)检测试纸(胶体金法)使用说明【产品名称】通用名称：早早孕(hcg)检测试纸(胶体金法) 商品名称：早早孕(hcg)检测试纸英文名称：david pregnancy test 【包装规格】1人份/铝箔袋【预期用途】人绒毛膜促性腺激素(hcg)是妇女妊娠期由胎盘产生的一种糖蛋白激素，hcg可在受孕后的孕妇尿液中检验到。
在妇女受孕后一周左右hcg能增加到5至50毫国际单位/毫升(miu/ml)，10周就会增加到100,000至200,000毫国际单位(miu/ml)的高点，12周后迅速下降，维持在5,000-20,000毫国际单位/毫升(miu/ml)。
hcg的出现是在怀孕后的孕期随着胚胎的生长而变化的，这种现象是早期检测怀孕的最好标志。
早早孕检测试条是利用胶体金标记免疫层析一步法原理，可以快速、准确、简便地检测育龄妇女尿液中hcg的含量和变化，用于确定早期妇女妊娠（妇女怀孕后3-7天），从而达到优孕或早期药物终止妊娠的目的。
【检验原理】本品系用人绒毛膜促性腺激素(hcg)抗体和抗鼠igg分别固相硝酸纤维膜和胶体金标记的抗hcg单克隆抗体及其它试剂依次粘帖制成，应用免疫层析双抗体夹心法的原理。
测试时，尿液标本滴入试纸条加样处上，在毛细管效应下向上层析。
如是阳性，标本中的hcg 在层析过程中先与胶体金hcg 抗体结合，然后继续往上层析，随后结合物会被固定在膜上的hcg 抗体结合，在测试区（t）内会出现一条紫红色条带。
这条带是hcg抗体金标粒子的复合物与膜上hcg 抗体结合形成的。
如是阴性，则检测线区（t）内将没有紫红色条带。
无论hcg是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在对照线区（c）内。
对照线区（c）内所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
【主要组成成分】1早早孕(hcg)检测试纸(胶体金法) 1人份2干燥剂 1包3使用说明书4滴管(如果适用) 1个【储存条件及有效期】本试剂于密封的铝箔袋中4－30℃保存，不得冷冻。
万孚胶体金法试纸说明书
万孚胶体金法试纸说明书
一、试纸简介
万孚胶体金法试纸是一种快速、简便的体外检测试剂，用于定性检测人尿液中的HCG（人绒毛膜促性腺激素）。
该试纸采用胶体金免疫层析技术，能够在短时间内提供准确的检测结果。
二、适用范围本试纸适用于早早孕检测，适用于家庭、医院、诊所等多种场合。
三、使用方法
1.收集尿液，尽量取晨尿中段；
2.撕开包装袋，取出试纸；
3.将试纸标有箭头的一端插入尿液中，不可过线；
4.约30秒后取出试纸，平放；
5.5分钟后观察结果。
四、注意事项
1.试纸应在保质期内使用；
2.勿使用过期的试纸；
3.勿将试纸浸入尿液以外的地方；
4.严格按照说明书操作，避免影响检测结果。
五、储存条件
试纸应储存在干燥、避光的地方，避免高温和潮湿。
储存温度为4-30℃，避免阳光直射。
六、有效期及包装
本试纸有效期为24个月，包装为每盒10片。
每片试纸独立包装，卫生安全。
七、性能指标
本试纸的灵敏度为98%，特异性为99%，准确度为97%。
如对结果有疑问，建议重新测试或咨询专业医生。
八、生产批号及联系方式
本试纸的生产批号为XXXX，如有质量问题或需要了解更多信息，请联系万孚生物科技有限公司，电话：XXX-XXXX-XXXX，邮箱：*****************。
九、免责条款本说明书仅供参考，不构成任何医疗建议。
如有身体不适或需要确认诊断，请及时咨询专业医生。
总β人绒毛膜促性腺激素标准操作规程
总0人绒毛膜促性腺激素标准操作规程1.【实验目的】为了保证总o人绒毛膜促性腺激素可测定结果的准确性，以及可靠性。
2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP,室负责人监督落实。
2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【样品类型及实验前准备】3.1样本准备：人血清（包括采集于血清分离管的血清）或采集于肝素锂，肝素钠或EDTA钾抗凝管的血浆可以用于ARCHITECTTotal [3-hCG项目。
3.2患者准备：实验前正常饮食，晨起空腹，安静状态下抽取静脉血，条件特殊情况下可空腹抽血检测。
3.3容器，添加剂类型：血清（包括在血清分离器管中采集的血清），血浆（EDTA三钾、肝素锂、肝素钠），使用玻璃管或塑料管分离样本。
3.4仪器设备：雅培ARCHITECT ilOOOSR,低速离心机3.5实验试剂：3.5.1 ARCHITECT Total |3-hCG 试剂盒（7K78）微粒子：1或4瓶（6.6 mL/27.0 mL）抗|3-hCG （小鼠，单克隆）包被微粒，储存于含有蛋白（牛）稳定剂的TRIS缓冲液中。
防腐剂：抗菌剂。
结合物：1或4瓶（2.1mL/7.4mL ）抗|3 -hCG （小鼠，单克隆）吖啶酯标记结合物，储存于含有蛋白(牛)稳定剂的MES缓冲液中。
最低浓度：2.9 g/mL。
防腐剂：抗菌剂。
其他试剂ARCHITECT i预激发液预激发液：预激发液，含1.32% (w/v)过氧化氢。
ARCHITECT i 激发液激发液：激发液，含0.35N氢氧化钠。
ARCHITECT i清洗缓冲液4.【实验原理】ARCHITECTTotal |3-hCG项目采用两步法免疫检测，用于测定人血清和血浆中的。
人绒毛膜促性腺激素，检测使用的方法是Chemiflex,即化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)与灵活的检测模式的结合。
第一步，样本和抗|3-hCG抗体包被顺磁微粒相混合。
尿HCG
妊娠试验又名尿绒毛膜促性腺激素试验（urine hCG test）。
人绒毛膜促性腺激素（hCG）是由胎盘绒毛膜滋养层细胞所合成，具有促进性腺发育的糖蛋白激素，分子量约在37000D左右，由237个氨基酸残基和糖组成，有两个非共价键结合糖蛋白亚单位，称之为α和β亚单位。
α亚单位的氨基酸排列顺序和黄体生成素（LH）、促卵泡成熟激素（FSH）、促甲状腺激素（TSH）的α亚单位大体相同，故相互之间可发生交叉反应。
而β亚单位则不同，结构特意，不存在于其他糖蛋白激素中。
根据这一特点可制取β-hCG单克隆抗体，从而将上述激素之间的交叉反应降低到最低值，提高了试验的特异性及灵敏度，能更精确的反应hCG 在尿液中的浓度。
金标抗体测定与酶标抗体测定在原理上基本相似，只是金标抗体反应后直接呈现（金的）红色，适用于床旁或即时检验。
【原理】金标抗体检测法：两个抗人β-hCG单克隆抗体，一个抗体吸附于硝酸纤维素薄膜（NC）膜上，另一个抗体结合于金溶胶颗粒表面（即金标抗体）。
尿液中hCG先与NC膜上的抗体结合，然后再与金标单抗溶液反应，最终形成“抗体-hCG-金标抗体”夹心式复合物，显红色金斑点。
【操作】1.见试剂盒说明书。
2.结果判断（1）阳性反应：质控点（线）和测定点（线）均呈红色。
（2）阴性反应：仅质控点（线）呈红色。
（3）无效反应：质控点（线）和测定点（线）均不显色。
【注意事项】1.质控点（线）和测定点（线）均不呈红色，表示试剂失效。
2.金标早早孕检测试剂盒有薄膜渗滤法（呈现两个红色斑点）和试带法（呈现两条红杠）。
因操作简便，可作家庭监测受孕应用。
3.本法灵敏度0.8～2.0ng/L。
4.在滴加金标抗体溶液前，应上下颠倒试剂瓶混匀溶液。
【临床意义】1.早起妊娠诊断：受孕2～6天即呈现阳性。
2.妊娠与相关疾病和肿瘤：诊断及鉴别诊断。
3.过期流产或不完全流产：本试验呈阳性，提示子宫内仍有活胎盘组织。
4.人工流产后：本试验仍呈阳性，提示宫内尚有残存胚胎组织。
实验五尿HCG检测(金标法)及家兔心脏采血(精)
第6号染色体短臂
B
DP
A
B
DQ
A
B
B
DR
A
B C4
A
Bf
C2
B
C
A
HLAⅡ类基因区
HLAⅢ类基因区
HLAⅠ类基因区
HLAⅠ类分子 肽结合区
HLAⅡ类分子
免疫球蛋白样区
跨膜区
胞浆区
抗体 稀释
抗原稀释
不稀释 1:2 4＋
4＋ ＋
1:4 4＋
4＋ ＋
1:8 3＋
3＋ 3＋ ＋
1:16 3＋
3＋ 3＋ ＋
Part2
家、剪刀、碘酒、酒精、注射器 （20mL）、大试管4支（清洁、干燥，自己准 备）
实验对象 已免疫伤寒杆菌“O”抗原的家兔【每班12只】
家兔心脏采血步骤
1、固定家兔并定位心脏位置 剑突上两横指偏左，心脏搏动最强处。 2、去毛消毒 分别用碘酒和酒精消毒。 3、检查注射器（20ml） 4、抽血 将稍微后拉的注射器针头由剑状软骨左侧呈 30-45°刺入心脏，当家兔略有颤动时，表明针头 已刺入心脏，然后轻轻的抽取，如有回血，即可抽 血，若无回血，可将针头退回一些，重新插入心腔 内，见回血即可抽血。
1、待测样品、检测试纸平衡至室温。 2、将测试纸有箭头的一端插入尿液标本中 （不可超过MAX标志线），5秒后取出平放，5分 钟内观察显示结果。
（四） 结果报告
姓名 ；尿HCG 。
前带
游离抗体 游离抗原 免疫复合物沉淀
等价带
后带
+ -
+ -
+ -
+ -
+ -
-
-
+
免疫金标法问题回答
免疫金标法免疫金标法是一种常用的生物学测试方法，用于检测特定蛋白或其他分子物质的存在和数量。
该方法是通过特异性抗体对待测物质的识别和结合来实现的。
下面将详细介绍免疫金标法的原理、步骤和应用。
原理：免疫金标法基于特异性抗体与待测物质的互相作用。
抗体作为一种高度特异性的蛋白质，可以通过识别结构上的特殊区域与其它分子物质结合。
当一个抗体与特定连剂结合时，对应的抗体成为单克隆抗体。
金标记物的反应会使被检测物质的信号被放大，并且可以通过检测金标记物来确定参加反应的物质。
整个过程中，抗体、被测物质和金标记物相互作用，最终产生信号的放大和分析。
步骤：免疫金标法包括以下步骤：（1）样品准备。
这一步是制备待测物质样品，如蛋白、细胞、组织培养物等。
（2）涂层。
涂层是用来覆盖所检测物质的表面，使得待测物能够更好地与抗体结合。
在涂层步骤中，首先需要将抗体附着到印迹膜、微孔板等固定载体上，然后将待测物质加入微孔板中。
（3）结合。
在抗体涂层的载体上添加待测物样品，并与抗体结合。
待测物质通过结合在载体上已经固定的抗体来检测被检测物质的数量。
（4）Wash。
将载体洗涤以去除未结合的待测物和抗体，并增加测量的灵敏度和特异性。
（5）检测。
通过加入金标记物，在基于颜色变化的化学反应中完成反应，并测量光密度或荧光强度以测定底物的存在并计算数量。
应用：免疫金标法在医学、生物科学、食品安全等领域都有广泛的应用。
例如，可以用于检测血清中的抗体水平，以诊断疾病或监测治疗效果；可以用于检测病毒或细胞表面蛋白特定的抗体，从而识别病原体；可以用于检测食品中的残留物和有害化学物质，保证食品安全。
总之，免疫金标法是一种简单、快速、高灵敏度的生物学测试方法，可以用于检测各种分子物质在样品中的存在和数量，具有广泛的应用前景。
免疫金标记法
免疫金标记法
免疫金标记法（Immunogold labeling）是一种常用的细胞或组
织中检测特定分子的方法。
它利用金标记物，通常是金颗粒，结合到特定抗体上，然后通过这种标记物的信号来检测目标分子的存在和定位。
免疫金标记法的步骤包括：
1. 选择适当的抗体：选择能够与目标分子结合的特异性抗体。
2. 制备标本：对细胞或组织进行适当的固定处理和切片，以便进行免疫染色。
3. 孵育标本：将选择的抗体添加到标本中，使其与目标分子结合。
4. 添加金标记物：将金标记物添加到抗体上，使其结合成复合物。
5. 观察和分析：使用适当的显微镜观察标本，并分析金颗粒的位置和分布，以确定目标分子的存在和定位。
免疫金标记法具有高灵敏度和高特异性的优点，可以用于检测多种细胞和组织中的特定蛋白质、抗原或其他分子。
它在生物医学研究中被广泛应用于细胞生物学、免疫学、病理学等领域，为研究人员提供了了解细胞和组织中蛋白质表达和定位的重要工具。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
HCG金标免疫试验方法及注意事项
1．金标免疫试验的原理将氯金酸(HAuCl4)用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒(胶体金)标记抗体，(或金黄色葡萄球菌A蛋白SPA)。
金标为一种催化剂，经还原剂(如对苯二酸)处理，将显影剂中的银离子还原成不溶性金属银，沉淀在每个金颗粒的
周围，银沉淀在光镜下可清楚地显示。
滴金免疫实验原理同一般免疫斑点实验，也是用已知抗原或抗体包被硝酸纤维素膜，再用金标记抗体或抗原进行快速测定。
临床应用的有两种方法：金标一步法(层析法)和金标二步法(斑点渗漏法)。
具体讲即用两个人HCG—β单克隆抗体，一个抗体吸附于硝酸纤维素薄膜(NC膜)上，另一抗
体结合于金溶胶颗粒表面。
尿中HCG先与NC膜上的抗体-结合，然后再与金标单抗溶液反应，形成抗体一HCG一金标抗体的加心式复合物．红色的金斑点．
胶体金溶液的制备是依所需胶体金颗粒的直径配制A液及B 液，见表4—7。
预热至6 0℃并保持此温度，磁力棒搅拌混合A液及B液，加热至沸，溶液由蓝紫变成橙红色，表明胶体金颗粒形成。
冷后补加重蒸馏水至100ml。
免疫金银染色法用5mm直径胶体金，滴金免疫技术用15mm胶体金。
2．金标免疫试验的方法
(1)金标二步法(斑点渗漏法)：中心圆点为一株单抗(金一Ab—Abl一薄膜的红色斑点)，边上小点为抗鼠二抗(金一Ab—Ab2一薄膜的质控点)。
试剂盒包括：渗滤盒和金标记抗HCG一β亚单位单抗体。
渗滤盒为30mm长，6mm厚的正方形塑料盒，中央有8mm直径的圆孔。
盒内紧塞多层吸水填料，填料上为孔径0．45nm的硝酸纤维素薄膜，膜上包被有抗HCG的抗体。
操作方法为先用小吸管向检测盒圆孔中央滴3滴待检尿液。
待渗入；然后加金标记
抗HCG—β亚单位单抗液(A试剂)两滴，待渗入后取出滤器；最后加B试剂(PBS)两滴，待干。
结果判断：阳性为小孔中央出现红色斑点，质控点呈蓝色，提示含有HCG。
阴性为
小孔中央无红色斑点，仅质控点呈蓝色，提示不含HCG。
如失败则小孔中央及质控
点均不呈显颜色，提示试剂失效，或操作失当。
注意事项：①血清标本应尽可能新鲜，溶血，反复冻融，高血脂等均可影响结果。
②胶体金颗粒>10mm的金粒子不易穿透组，作细胞内抗原定位时，应配制直径5mm的金溶胶。
③硝酸银、对阿苯二酚对光敏感，溶液应避光保存，或现配现用。
④NC膜孔以0.45mm为宜。
(2)早早孕胶体金标试条：金标试条下端为吸附有金标单抗的玻璃纤维，中段为醋
酸纤维薄膜，上方还有抗鼠二抗。
试条下端浸入尿液时金标单抗即被溶解，并随尿液上行，若有HCG抗原，即形成Ag—Ab一金复合物；再上行至中段醋酸纤维膜，即
与其下面-的另一单抗结合，并被固定下来，显示阳性结果。
其上方还印有一条抗
鼠二抗，待游离的红色金标单抗上行到抗鼠二抗处被固定下来，做为金标质控的提示。
方法是将试条有标志线的下端浸入尿液标本中，深度不可超过标志线，约3秒后取出，平放，5分钟内观察结果：两条红线为(+)，提示尿中含HCG。
一条红线为(一)，表示不含HCG。
(3)金标一步渗滤法：试剂盒组成：测定小盒20只，试剂A及试剂B各1瓶，塑料滴管20根。
测定步骤：①从冰箱取出的试剂盒须在室温下放1～2小时预温，将试剂A颠倒混匀；
②加新鲜尿液6滴于测定盒小孔中，待尿液完全渗入膜下；③去除小孔上面的蓝色
过滤器；④加试剂A2滴于小孔内，待红色溶液完全渗入膜下，即可观察结果：阳性为小孔的膜上呈红色圆点，色泽随尿中HCG浓度增加而加深，HCG含量为50IU／ml-1 00mIU／ml时呈淡红色斑点。
阴性则无斑点出现。
注意事项：试剂盒保存温度不宜>20℃，A液应放在4～10℃冰箱内保存，有效期12
个月。
此外，每次吸取尿液必须用新的滴管。