动物源性食品中克莱沙快速检测胶体金免疫层析法
附件6动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法1 范围本方法规定了动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于猪肉、牛肉等动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测。
2 原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
待测样中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线（T线）上抗原结合，从而导致检测线颜色深浅变化。
通过检测线与质控线（C线）颜色深浅比较，对待测样中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进行定性判定。
3 试剂与材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水应符合GB/T 6682二级水规定。
3.1 试剂3.1.1甲醇：色谱纯。
3.1.2 氢氧化钠。
3.1.3 磷酸二氢钾。
3.1.4 磷酸氢二钠。
3.1.5 盐酸。
3.1.6 氯化钠。
3.1.7 氯化钾。
3.1.8 三氮化钠。
3.1.9 乙二胺四乙酸二钠。
3.1.10 三羟甲基氨基甲烷，即Tris。
3.1.11 乙酸乙酯。
3.1.12 磷酸二氢钠。
3.1.13 氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.2）4g，用水溶解并稀释至100mL。
3.1.14 缓冲液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）0.3g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.5g，溶于约800mL水中，充分混匀后用盐酸（3.1.5）或氢氧化钠溶液（3.1.13）调节pH至7.4，用水稀释至1000mL，混匀。
4℃保存，有效期三个月。
3.1.15 展开液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）2g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.44g，氯化钠（3.1.6）8g，氯化钾（3.1.7）0.2g，三氮化钠（3.1.8）0.5g，乙二胺四乙酸二钠（3.1.9）1.0g溶于约500mL水中，充分混匀后用水稀释至1000mL。
室温保存，有效期一年。
3.1.16 Tris缓冲液（pH9.0，1mol/L）：称取121.14g Tris（3.1.10），溶于约700mL水中，充分混匀后加入盐酸（3.1.5）调试pH至9.0 后用水定容至1000mL。
3.1.17 Tris缓冲液（pH9.0，10mmol/L）：精密量取1mL 1mol/L Tris缓冲液（3.1.16），用水稀释定容至100mL。
3.1.18 磷酸二氢钠溶液（0.2mol/L）：称取磷酸二氢钠（3.1.12）24.0g，用水溶解并稀释至1000mL。
3.1.19 磷酸氢二钠溶液（0.2mol/L）：称取磷酸氢二钠（3.1.4）28.4g，用水溶解并稀释至1000mL。
3.1.20 磷酸盐缓冲液（pH7.4，0.2mol/L）：吸取19mL磷酸二氢钠溶液（3.1.18）加入81mL 磷酸氢二钠溶液（3.1.19），混匀。
3.1.21 磷酸盐缓冲液（pH7.4，10mmol/L）：精密量取50mL 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（3.1.20），用水稀释至1000mL。
3.1.22 固相萃取柱：丙烯酸系弱酸性阳离子交换柱。
3.2 参考物质克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥97%。
表1 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量注：或等同可溯源物质。
—2—3.3 标准溶液配制3.3.1 标准储备液：精密称取适量克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质（3.2），分别置于100mL 容量瓶中，用甲醇（3.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成浓度为100μg/mL的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准储备液，-18℃保存，有效期一年。
3.3.2 克伦特罗标准中间液（1μg/mL）：精密量取克伦特罗标准储备液（100μg/mL）（3.3.1）1mL 置于100 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的克伦特罗标准中间液，临用新制。
3.3.3克伦特罗标准工作液（20ng/mL）：精密量取克伦特罗标准中间液（1μg/mL）（3.3.2）1mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为20ng/mL的克伦特罗标准工作液。
临用新制。
3.3.4 莱克多巴胺标准中间液（1μg/mL）：精密量取莱克多巴胺标准储备液（100μg/mL）（3.3.1）1mL置于100 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的莱克多巴胺标准中间液，临用新制。
3.3.5莱克多巴胺标准工作液（20ng/mL）：精密量取莱克多巴胺标准中间液（1μg/mL）（3.3.4）1mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为20ng/mL的莱克多巴胺标准工作液。
临用新制。
3.3.6 沙丁胺醇胺标准中间液（1μg/mL）：精密量取沙丁胺醇标准储备液（100μg/mL）（3.3.1）1mL 置于100 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的沙丁胺醇标准中间液，临用新制。
3.3.7沙丁胺醇标准工作液（20ng/mL）：精密量取沙丁胺醇标准中间液（1μg/mL）（3.3.6）1mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为20ng/mL的沙丁胺醇标准工作液。
临用新制。
3.4 材料3.4.1 克伦特罗试剂盒/检测卡（条）：含胶体金试纸条及配套的试剂。
3.4.2 莱克多巴胺试剂盒/检测卡（条）：含胶体金试纸条及配套的试剂。
3.4.3 沙丁胺醇试剂盒/检测卡（条）：含胶体金试纸条及配套的试剂。
4 仪器和设备4.1 电子天平（d = 0.1 g～0.0001 g）。
—3—4.2 组织粉碎机。
4.3 水浴箱。
4.4 离心机。
4.5 移液枪：10µL，100µL，1mL，5mL。
4.6 读数仪：产品配套可使用的检测仪器（可选）。
4.7 固相萃取装置（可选）。
4.8 其他产品说明书操作中需用的仪器。
4.9 环境条件：温度10-40℃，湿度≤80%。
5 分析步骤5.1 试样制备称取适量具有代表性样品的可食部分，用于后续实验。
5.2 样品前处理称取适量、粉碎、均匀的样品（按照试剂盒说明书要求，精确至0.01g）于50mL离心管。
按照试剂盒提取步骤分别对空白试样、加标质控样品、待测样进行处理。
5.2.1 方法一（隔水煮法）：称取粉碎混匀的样品5.0±0.05g（精确至0.01g）于50mL离心管，置90℃水浴中加热20min 至离心管中可清晰看见有组织液渗透，4000r/min离心10min，将上清液转至另一离心管，重复离心操作一次。
准确移取上清液900μL，加入100μL缓冲液（3.1.14）混匀，作为待测液。
本方法推荐水浴加热，也可按照试剂盒说明书进行操作。
5.2.2 方法二（固相萃取法）：称取粉碎混匀的样品5.0±0.05g（精确至0.01g）于50mL离心管，加入5mL 10mmol/L Tris缓冲液（3.1.17），剧烈震摇5min，放置20min，加入10mL乙酸乙酯（3.1.11），剧烈震摇1min。
以4000r/min离心2min，上清液待净化。
连接好固相萃取装置（4.7），并在固相萃取柱（3.1.22）上方连接30mL注射器针筒，将上述上清液全部倒入30mL针筒中，用手缓慢推压注射器活塞，控制液体流速约1滴/秒，使注射器中液体全部流过固相萃取柱，尽可能将固相萃取柱中溶液去除干净。
将固相萃取柱下方的接液管更换为洁净的离心管，向固相萃取柱中加入0.5mL 10mmol/L磷酸盐缓冲液（3.1.21）。
用手缓慢推压注射器活塞，控制液体流速约1滴/秒，使固相萃取柱中的液体全部流至离心管中，即得待测液。
—4—注：试样制备过程可按照试剂盒说明书进行操作，不做限定。
5.3 测定步骤5.3.1 检测卡与金标微孔测定步骤测试前，将未开封的检测卡恢复至室温。
吸取100μL上述待测液于金标微孔中，上下抽吸5-10次直至微孔试剂混合均匀。
室温温育5min，将反应液全部加入到检测卡的加样孔中，1min后加入1滴展开液（3.1.15）。
检测卡加入样本后10min进行结果判定。
5.3.2 无金标微孔时，检测卡测定步骤测试前，将未开封的检测卡恢复至室温。
吸取100μL上述待测液直接加入到检测卡加样孔中，1min后加入1滴展开液（3.1.15）。
检测卡加入样本后10min后进行结果判定。
5.3.3 试纸条与金标微孔测定步骤测试前，将未开封的试纸条恢复至室温。
吸取100μL上述待测液于金标微孔中，上下抽吸5-10次直至微孔试剂混合均匀。
室温温育1min，将试纸条样品垫插入到金标微孔中。
室温温育4min，从微孔中取出试纸条，去掉试纸条下端样品垫，进行结果判定。
注：1. 测定步骤建议按照试剂盒说明书进行操作。
2. 结果判定建议使用读数仪，读数仪的具体使用参照仪器使用说明书。
5.4 质控实验每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。
5.4.1 空白试验称取空白试样，按照5.2步骤与样品同法操作。
5.4.2 加标质控试验准确称取空白试样5g或适量（精确至0.01g）置于50mL离心管中，加入适量克伦特罗标准工作液（20ng/ml）（3.3.3），使克伦特罗浓度为0.5μg/kg，按照5.2步骤与样品同法操作。
准确称取空白试样5g或适量（精确至0.01g）置于50mL离心管中，加入适量莱克多巴胺标准工作液（20ng/ml）（3.3.3），使莱克多巴胺浓度为0.5μg/kg，按照5.2步骤与样品同法操作。
准确称取空白试样5g或适量（精确至0.01g）置于50mL离心管中，加入适量沙丁胺醇标准工作液（20ng/ml）（3.3.3），使沙丁胺醇浓度为0.5μg/kg，按照5.2步骤与样品同法操作。
6 结果判定要求6.1 读数仪测定结果—5—通过仪器对结果进行判读。
6.1.1 无效当质控线（C线）不显色时，无论检测线（T线）是否显色，均表示实验结果无效。
6.1.2 阳性结果若检测结果显示“+”（阳性），表示试样中含有待测组分且其含量大于等于方法检出限。
6.1.3 阴性结果若检测结果显示“-”（阴性），表示试样中不含待测组分或其含量低于方法检出限。
6.2 目视判定通过对比质控线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。
6.2.1 无效当质控线（C线）不显色时，无论检测线（T线）是否显色，均表示实验结果无效。
6.2.2 阳性结果质控线（C线）显色，若检测线（T线）不出现或出现但颜色浅于质控线（C线），表示试样中含有待测组分且其含量高于方法检出限，判为阳性。
应用胶体金免疫层析技术 更好地进行食品快速检测
食品检测FOOD INSPECTION食品安全问题一直是国家和社会关注的重点问题，因此，相关部门一定要高度重视食品安全检测，并注重新技术的引入，比如胶体金免疫层析技术。
胶体金免疫层析技术可以有效发挥食品检测的作用，更好地保障食品安全，提高人们的生活质量，促进社会的稳定发展。
一、胶体金及免疫层析技术的含义1.胶体金技术。
胶体金技术是指氯金酸在某种环境下的一种变化反应而形成的胶体溶液。
其反应过程首先要用的是还原剂，通常有白磷和柠檬酸钠等，在其作用下将氯金酸按相关要求聚合成固定大小的金颗粒，然后再由静电作用将其凝聚成稳定的胶体溶液。
胶体状态下的金颗粒具有高电子密度的特性，其密度一般能达到107个/mm2，呈圆形的斑点，颜色一般为粉红色，其大小肉眼刚好可见，在检测中常用作一种标记物，对实验结果的影响十分重大。
2.免疫层析技术。
免疫层析技术是一种免疫分析技术，主要是根据抗原和抗体的反应来进行检测。
通常包括两大类，一类是非竞争性免疫层析，一类是竞争性免疫层析。
非竞争性免疫层析技术主要针对一些大分子蛋白质的检测。
首先，将采用胶体金标记后的样品与等待检测抗原中的特异性抗体进行结合，这两类物质结合后会出现沉淀现象，此时需要注意将其沉积物放到结合区域中。
其次，将待检测的样品材料放到样品区位置，再利用毛细管将样品与结合区进行完全融合，其中，带有胶体金标记的样品材料会由于受到张力的作用而不断地向前移动。
此时，样品中已经存在的抗原物质便会自动与带有胶体金标记的样品相互结合，形成一种结合体物质。
紧接着，样品溶液会进行固相化，并在通过固相化后的第一层防线时将含有结合体物质抗体材料进行捕获，然后形成新的结合体复合物材料。
那些没有结合体材料的物质不会被捕获，它们会继续向前移动，然后那些结合体在通过下一道防线时会与另一种抗体结合，形成第三种结合体复合材料。
竞争性免疫层析技术主要针对一些单一抗原的小分子抗原适用，比如兽药残留的检测等。
胶体金免疫层析法快速检测食品中呋喃妥因及其代谢物残留
科Hale Waihona Puke 视界胶体金免疫层析法快速检测食品中 呋喃妥因及其代谢物残留
张亚琴 陈月琴 渊 江 苏 省 无 锡 市 无 锡 卫 生 高 等 职 业 技 术 学 校 袁 江 苏 无 锡 214028 冤
揖摘 要铱本文采用胶体金免疫层析技术测定测定食品中的呋喃妥因及其代谢物残留袁结果显示胶体金免 疫 层 析 法 的 检 测 限 为 0 . 5滋g / kg 袁 假 阳 率 不 大 于 5 % 袁 假 阴 率 为 0 袁 研 究 表 明 胶 体 金 试 纸 条 法 操 作 简 便 尧 快 速 尧 成 本低袁是食品中呋喃妥因代谢物的残留检测提供了快速筛选方法遥
Rapid detection of nitrofurantoin and its metabolite residues in food by colloidal gold immunochromatography ZHANG Ya - qin CHEN Yue - qin
( Wuxi Higher Health Vocational Technology School , Wuxi Jiangsu 214028 , China ) 揖Abstract铱In this paper , the determination of nitrofurantoin and its metabolite residues in food was determined by colloidal gold immunochromatography . The results showed that the detection limit of colloidal gold immunochromatography was 0 . 5滋g / kg , the false positive rate was not more than 5 % , and the false negative rate was 0 . Studies have shown that the colloidal gold test strip method is simple , rapid , and low - cost , and provides a rapid screening method for residue detection of nitrofurantoin metabolites in aquatic products . 揖Key words铱Food safety ; Nitrofurantoin metabolites ; Pretreatment methods ; Results interpretation
胶体金免疫层析技术在动物源性食品中的应用
胶体金免疫层析技术在动物源性食品中的应用收稿日期：2009-05-19基金项目：国家“十一五”科技支撑计划（2006BAD06A11）作者简介：祁光宇（1978-），男，研究实习员，硕士研究生，研究方向为动物源性食品卫生研究与免疫学。
E-mail:qiguangyu0931@ *通讯作者：蒋韬，副研究员，博士生导师，研究方向为分子病毒学与免疫学。
E-mail:pcrjiang@祁光宇1,2，智晓莹1,2，任维维1,2，黄银军1，牟克斌1，刘学荣1，王宇1，蒋韬2*（1.中农威特生物科技股份有限公司，兰州730046；2.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州730046）摘要：胶体金标记免疫层析技术作为一种新型的免疫学快速诊断和检测技术，不仅具有敏感、特异、便捷、快速等特点，而且适合基层和现场使用。
目前，该技术已应用在动物源性食品安全与质量控制方面。
文章综述了该技术的基本原理，并且着重介绍了免疫胶体金技术在动物源性食品的应用现状和遇到的问题及发展前景。
关键词：胶体金免疫层析技术；动物源性食品；应用进展中图分类号：R392文献标志码：A文章编号：1005-9369（2010）04－0156－05Application progress of colloidal gold immunochromatographic assay(GICA)in animal-derived food/QI Guangyu 1,2,ZHI Xiaoying 1,2,REN Weiwei 1,2,HUANGYinjun 1,MU Kebin 1,LIU Xuerong 1,WANG Yu 1,JIANG Tao 2(1.China Agricultural Veterinary Biological Sciences and Technology Co.,Ltd,Lanzhou 730046,China;2.Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture/State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China)Abstract:Colloidal Gold Immunochromatographic Assay (GICA)is a new rapid diagnostic andtesting technology in immunology,which is not only sensitive,specific,convenient,fast,etc.,but also suitable for grass-roots and on-site use.At present,the technology has been used in animal-derived food safety and quality control.This article reviewed the basic principle of the technology,focusing on the application statu and the encountered problems and the prospects for development developing prospects of GICA on animal-derived food.Key words:colloidal gold immunochromatographic assay;animal-derived food;application progress 免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。
胶体金免疫层析法快速检测猪肉及牛奶中磺胺二甲嘧啶残留_张佳宜
2010 年第 1 期
金溶液中逐滴加入 0.24 mg 亲和层析纯化后的抗 体，10 min 后逐滴加入 10%牛血清白蛋白（BSA）， 使溶液中 BSA 的终含量达 1%。 以稳定胶体金作 标记物，搅拌 30 min 后 4 ℃过夜。 10 000 r/min 离 心 30 min，弃上清液。 用储存液溶解胶体金至体积 1 mL，重复离心步骤，弃上清，胶体金用储存液重 悬为原体积的 1/10，4 ℃保存备用。 1.4 试纸条的制备及组装
结合释放垫、PVC 背板（上海金标）、硝酸纤维 素膜、吸收垫、样品垫（Millipore）。
切条机；划膜仪；CARY 50 Bio 紫外/可见分 光光度计，美国，Varian；Milli-Q 纯水仪；高效液相 系统，日本岛津。 1.2 抗体的纯化
采用蛋白 A-明胶琼脂糖凝胶 4B（Protein ASepharose 4B）免疫亲和层析法进行抗体纯化。 1.3 金标抗体的制备
采用 HPLC 方法验证试纸条检测方法的有效 性。 在试纸条检测中，以不含磺胺二甲嘧啶的空白
溶液作为参照点， 向阴性样品中添加系列浓度的 磺胺二甲嘧啶后， 按照本文 1.7.1 节方法处理，然 后进行竞争反应。 若试纸条颜色比参照点浅，则磺 胺二甲嘧啶质量浓度大于等于 1 μg/L，为阳性；若 试纸条颜色与参照点颜色相同， 则磺胺二甲嘧啶 质 量 浓 度 小 于 1 μg/L，为 阴 性 ；若 颜 色 相 近 ，通 过 目视较难区分，则为不确定。 对猪肉和牛奶样品按 照表 1 做添加试验，每个浓度做 3 个平行，同时进 行 HPLC 和 GICA 试纸条的检测，比较结果见表1。
检 测 器 ：紫 外 检 测 器 ；流 动 相 的 配 制 ：〔V（甲 醇 ）∶V（水 ）＝22∶78〕（用 甲 酸 调 pH 3.2～3.3）；检 测 波长：270 nm；柱温：35 ℃；流速：1 mL/min。 1.9 稳定性试验
动物源性食品中克莱沙快速检测胶体金免疫层析法
附件6动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法1范围本方法规定了动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于猪肉、牛肉等动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测。
2原理本方法采纳竞争抑制免疫层析原理。
待测样中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线（T线）上抗原结合，从而导致检测线颜色深浅变化。
通过检测线与质控线（C线）颜色深浅比较，对待测样中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进行定性判定。
3试剂与材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水应符合GB/T6682二级水规定。
3.1试剂甲醇：色谱纯。
3.1.2氢氧化钠。
3.1.3磷酸二氢钾。
3.1.4磷酸氢二钠。
3.1.5盐酸。
3.1.6氯化钠。
3.1.7氯化钾。
3.1.8三氮化钠。
3.1.9乙二胺四乙酸二钠。
3.1.10三羟甲基氨基甲烷，即Tris。
3.1.12磷酸二氢钠。
3.1.13氢氧化钠溶液(Imol/L)：称取氢氧化钠O4g,用水溶解并稀释至IoOmL。
3.1.14缓冲液：精确称取磷酸二氢钾O0.3g,磷酸氢二钠O1.5g,溶于约80OmL水中，充分混匀后用盐酸O或氢氧化钠溶液()调整PH至7.4,用水稀释至1000mL,混匀。
4℃保存，有效期三个月。
3.1.15绽开液：精确称取璘酸二氢钾O2g,磷酸氢二钠O1.44g,氯化钠O8g,氯化钾O0.2g,三氮化钠()0.5g,乙二胺四乙酸二钠()LOg溶于约50OmL水中，充分混匀后用水稀释至100OmL o室温保存，有效期一年。
3.1.16TriS缓冲液(pH9.0,Imol/L)：称取121.14gTris(),溶于约70OmL水中，充分混匀后加入盐酸O 调试PH至9.0后用水定容至IooOmL。
3.1.17TriS缓冲液(pH9.0,10mmol∕L):精密量取ImLImol/LTris缓冲液()，用水稀释定容至100mLo 3.1.18磷酸二氢钠溶液(0.2mol∕L):称取磷酸二氢钠()24.0g,用水溶解并稀释至100OmL9磷酸氢二钠溶液(0.2mol∕L):称取磷酸氢二钠O28.4g,用水溶解并稀释至IOoOmL。
胶体金免疫层析技术在动物源性食品中的应用
Ａ ｓｒｃ ：Ｃ ｌｉ ｌ ｏｄ Ｉ ｕ ｏ ｈｏ ｔｇａ ｈ ｓ ａ ＧＩＡ ｓ ａ ｎ ｗ ｒｐ ｉ ｎ ｓｃａ ｄ ｂ ｔａ ｔ ｏｏ ａ Ｇ ｌ ｍｍ ｎ ｃ ｒｍａｏ ｒｐ ｉ Ａ ｓ ｙ（ Ｃ ）ｉ ｅ ａ ｉ ｄ ｇ ｏ ｔ ｎ ｌｄ ｃ ｄ ａ ｉ
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动物源性食品中喹诺酮类物质的快速检测 胶体金免疫层析法(征求意见稿)
附件6动物源性食品中喹诺酮类物质的快速检测胶体金免疫层析法（征求意见稿）1 范围本方法规定了动物源性食品中喹诺酮类物质的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于生乳、巴士杀菌乳、灭菌乳、猪肉、猪肝、猪肾中洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、达氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氟甲喹、恶喹酸残留的快速测定。
2 原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中的喹诺酮类物质与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化，通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中喹诺酮类物质进行定性判定。
3 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1 试剂3.1.1 乙腈。
3.1.2 甲酸。
3.1.3 分散固相萃取剂I：分别称取硫酸镁18g、醋酸钠4.5g放于研钵中研碎。
3.1.4 分散固相萃取剂II：分别称取硫酸镁27g、N-丙基乙二胺（PSA）4.5g放于研钵中研碎。
3.1.5 甲酸-乙腈溶液：98mL乙腈中加入2mL甲酸，混匀。
3.1.6 甲醇L。
3.1.7 稀释液：脱脂奶粉︰水（1︰10）。
3.2 参考物质喹诺酮类参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥99%。
注：或等同可溯源物质。
3.3 标准溶液的配制3.3.1喹诺酮类物质标准储备液（1mg/mL）：分别精密称取喹诺酮类参考物质（3.2）适量，置于50mL烧杯中，加入适量甲醇（3.1.6）超声溶解后，用甲醇转入10mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，配制成浓度为1mg/mL的喹诺酮标准储备液。
-20 ℃避光保存，有效期6个月。
3.3.2喹诺酮类物质标准中间液（1μg/mL）：分别吸取喹诺酮类标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）100μL于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.6）稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为1μg/mL的喹诺酮类标准中间液。
胶体金免疫层析法快速测定动物源食品中的呋喃唑酮代谢物残留
取 呋 喃唑 酮 半 抗 原 （ 图１ 中结 构式 ｂ ，０ ． ２ １ ４ ｇ ，１ ． ０ ｍ ｍｏ １ ）溶 于３ ０ ｍ ｌ Ｄ ＭＦ 中 ，冷 却 至 ０～４ ｏ Ｃ，搅 拌 下 加 入 Ｄ Ｐ Ｂ Ｏ（ ０ ． ３ ５ １ ｇ ，
、
０Ｈ
，
—
Ｏ ＢＳ Ａ
，
．
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Ｄ Ｐ Ｂ Ｏ ． Ｂ Ｔ Ｔ Ｕ
］
疫 分 析 法具 有 快 速 、灵 敏度 高 、高通 量 的特 点 。其 中 免疫 分 析方 法 有 酶 联免 疫 法 、胶 体 金免 疫层 析 技 术 等 。酶联 免 疫分 析 法操 作
相对繁琐 ，对操作人员的专业知识要求较高 ，相 比之下 ，胶体金 免 疫 层 析技 术 基 于 肉眼水 平 的检 测 ，不需 任 何仪 器设 备 和 试剂 ，
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胶体 金免疫层析 法快速测 定动物源食 品 中的 呋喃唑酮代谢物残 田
刀
潘嘉慧 田 峻
摘
沈 国权
赵 亮亮 朱海云
２ ８ ２ ２ ５ ） （ 佛 山市质量计量监督检测 中心 ，广东佛 山 ５
要 ：本研 究 从优 化 呋 喃 唑酮 代谢 物 免疫 抗 原 、包 被抗 原 的 结
１ 中结构 式ａ ，１ ０ ． ２ ｇ ，０ ． １ ｍ ｏ １ ）和６ 一 氧 代 己酸 （ １ ５ ． ６ ｇ ，０ ． １ ２ ｍ ｏ １ ），
构及 优 化偶 联技 术 角度 出发 ，提 高 呋喃 唑 酮 抗体 的特 异 性 、 亲和 加 热 回流３ ｈ 。停止 加 热 ， 自然冷 却 反应 液 至室 温 ，静 置过 夜 。抽 力 ， 并 通 过 优 化 样 品前 处 理 步 骤 ，最 终 得 到 呋 喃 唑酮 代 谢 物 胶 滤 ，滤饼 用 乙醇洗 涤 （ ２ ０ ． ０ ｍ ｌ ×３ ），５ ０ ％干燥 ５ ｈ 后 得 到２ ０ ． ４ ｇ 含 有
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用胶体金免疫层析技术（Colloidal gold immunochromatography assay，CGIA）是一种简便、快速、准确的检测方法，在食品安全现场快速检测中得到广泛应用。
该技术可用于检测食品中的污染物质，如农药残留、细菌、病毒、毒素等，具有检测时间短、操作简便、准确性高等优点。
胶体金免疫层析技术基于抗体与抗原之间的特异性识别原理，是一种间接固相免疫层析技术。
同时，该技术利用了胶体金颗粒的物理特性，即在特定pH值下，胶体金颗粒呈现出红色或紫色的可见光谱。
当产生特异性抗体与抗原之间的结合后，存在于测试区的胶体金颗粒会沉淀下来，使红色或紫色的可见光谱消失或变浅，从而可以获得结果。
目前，CGIA技术在食品行业中已经得到广泛应用。
例如，在动物源性食品检测中，CGIA技术可用于检测牛奶中的咖啡因和抗生素残留、肉和海鲜中的细菌、病毒、病原菌和其它污染物质等。
在植物源性食品检测中，CGIA技术可用于检测蔬菜和水果中的农药残留、食用油中的氯丹残留、谷物中的镉污染等。
此外，CGIA技术还广泛应用于饮料、水产品、奶制品、肉制品、调味品等食品中的快速检测。
CGIA技术的优点在于其操作简单、迅速、用量少、化学废物少、设备要求少、误差小、灵敏度、特异性高，可以在平板和便携式检测设备上使用。
这使得CGIA技术成为了实现食品安全快速检测的重要方法之一。
但是，也需要注意，CGIA技术的敏感度较高，但定量度不如高通量手段。
因此，在现场快速检测中，CGIA技术可以与其它技术相结合，实现对食品安全的全面检测。
通过多种技术手段的协同作用，我们可以更全面地了解食品中存在的污染物质情况，从而更好地保障公众的食品安全问题。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用随着食品工业的快速发展和全球贸易的加速，食品安全问题日益受到人们的关注。
食品安全检测是保障食品质量和保障公众健康的重要环节，快速、准确的检测技术对于食品安全已经成为不可或缺的一环。
胶体金免疫层析技术是一种迅速、敏感、特异性好，并且易于操作的检测技术。
本文将介绍胶体金免疫层析技术的原理、特点及在食品安全现场快速检测中的应用。
一、胶体金免疫层析技术原理胶体金免疫层析技术是基于抗原与抗体之间的特异性结合原理。
首先将目标分子作为抗原，与特异性的抗体反应形成抗原-抗体复合物，然后将其与胶体金颗粒结合。
当抗原-抗体复合物与胶体金颗粒结合时，会发生颗粒聚集，产生可见的颜色变化。
通过颜色的变化可以判断样品中是否存在所需检测的目标分子，从而实现快速检测。
1. 快速性：胶体金免疫层析技术无需复杂的操作步骤，通常能在几分钟内完成检测。
对于食品安全现场快速检测来说，时间就是金钱，因此快速性是其最大的优势之一。
2. 敏感性：胶体金免疫层析技术对目标分子的检测灵敏度高，可以检测到极低浓度的目标分子。
这使得其在食品安全检测中能够及时发现微量的有害物质，保障公众健康。
3. 特异性：胶体金免疫层析技术对目标分子的检测特异性好，能够区分目标分子和其他干扰物质，减少误判的可能性。
4. 易操作性：胶体金免疫层析技术不需要复杂的仪器设备，操作简单，适用于各种现场检测环境。
5. 成本低廉：胶体金免疫层析技术的试剂成本低廉，相对于传统的检测方法，可以大大降低检测成本。
1. 残留农药检测：农药残留是食品安全的一个重要问题，特别是对于农产品出口国家来说，农药残留的限量标准要求更加严格。
胶体金免疫层析技术可以快速检测食品中的农药残留情况，为食品出口提供可靠的检测数据。
2. 食品中毒素检测：食品中的毒素是一种常见的食品安全隐患，例如黄曲霉素、赭曲霉素等。
采用胶体金免疫层析技术可以对食品中的毒素进行快速检测，及时发现食品中的毒素污染问题。