胶体金检测试纸生产工艺
胶体金检测试纸生产工艺
本项目主要从事犬、猫传染病抗体胶体金检测试纸的生产，以微孔滤膜为固相载体，膜上包被已知抗体，待加入检测样本后，经毛细管虹吸作用或微孔滤膜的渗滤作用，使标本中的抗体与膜上包被的抗体或抗原结合，再通过胶体金标记物与复合物反应，可形成肉眼可见的红色产物。
目前应用最为广泛的胶体金免疫技术有侧向横流模式，又称金标免疫层析法（ImmUnOgoIdChrOmatograPhyASsay,GICA ）O
金标免疫层析法试纸条主要是通过毛细管虹吸作用反应,它由以下几部分组成:样品垫、胶体金垫、NC 膜（硝酸纤维素膜）、吸水滤纸、以及PVC 底板，NC 膜（硝酸纤维素膜）上包括一条检测线（T 线）和一条质控线（C 线）一次层叠起来，如下图所示：
图3 金标免疫层析法示意图
在吸水材料的牵引下，待测抗原在试条上向上走，首先与金标抗体结合成抗原抗体复合物，抗原抗体复合物上行到检测线时，被测抗原的另一结合位点与包被在此处的单抗结合，形成两个抗体结合一个抗原（双抗体夹心）的金标复合物，因有金颗粒在此沉积，故T 线显红色。
未结合抗原的金标抗体上行到C 线时，与“抗金标抗体”结合，所以C 线也显红色。
检测结果判定：T 线与C 线均显线，表明检测结果为阳性；C 线显线，T 线不显，表明结果为阴性。
若C 线不显线，则检测结果无效。
工艺流程如下所示：
NC«（跚咬纤假素膜）
PVC 底
板 测试线（TtK 1）
M 析方向
样品稀释液噪声：N ；
一般固体废物：不合格品(S1)；废防粘纸(S2)；边角料(S3)；废包装物(S4)；危险废物：废一次性滴管(S5)玻璃器具清洗废水(S6)；玻璃器具淋洗废水(S7)；超声波清洗废水(S8)、超声波冲洗废水(S9)o
图4
胶体金检测试纸生产过程示意图
工艺流程简述： (1)检测：外购硝酸纤维素膜、金结合垫、吸水垫、样品垫均人工目视进行检验。
①硝酸纤维素膜：人工目视干燥后的包被膜表面应洁净、无污染、破损等，如有，需用笔标出。
膜的开始端与末端喷线不好的部位需用铅笔标出。
包被膜使用电热鼓风干燥箱干燥37℃后，在C 、T 线处均没有明显的痕迹。
②金结合垫：人工目视金结合垫颜色应为均一的暗红-暗紫色，无蓝变等异常。
金结合垫未涂有胶体金复合物的位置应为玻纤的白色，无异色；宽度均一，无破损。
③样品垫、吸水垫：外观无破损，尺寸、厚度均符合要求表面不能有污迹，使用一次性滴管将样品稀释液滴加上去，流速稳定速率不低于IOmnVmin,结构、颜色均匀。
该过程产生的不合格品(Sl)作为一般固体废物暂存于一般固废暂存间，定期交由厂家回收处理；废一次性滴管(S5)暂存于危险废物暂存间，定期交由资质单位处置。
（2）组装大卡：先使用切条机将各组成材料切成所需规格，即“金标垫：6mm×310mr∏Λ样品垫：15mm×310mm>吸收垫：20mmX310mm 、不干胶纸：13mm×310mm w ,然后再将硝酸纤维素膜贴在带有背胶的塑料大卡上，人工将切好的材
料按照以下顺序摆放好，使用压壳机进行层压：
ID 一
C 线
SI 、S5 S2 S3
外购己处理的
胶金垫、包被
膜、样品垫、
吸收垫
__________ _________ T线
13）J I：）
1 （4）I
6 ）
1）不干胶纸
2）样品垫
3）金结合物垫
4）硝酸纤维素膜
5）吸收垫
6）塑料大卡
根据上述进行层压：金结合垫2片，第一片搭上硝酸纤维素膜2mm,第二片搭第一片3mm：样品垫15mm,搭上金标垫2mm；吸收垫20mm,搭上硝酸纤维素膜2mm,不干胶13mm,搭上露出的硝酸纤维素膜2mm,层压后形成一整张大的试纸。
该过程产生的废防粘纸（S2）暂存于一般固废暂存间，定期交由物资回收部门处理。
（3）切条：将组装好的整张大试纸使用切条机按宽度为2.5mm±0.1mm规格切成试纸条，每张大试纸可以切成60条试纸条。
切条过程中应于前、后及过程中每30分钟对切条的宽度检查一次。
该过程产生边角料（S3）统一收集后交暂存于一般固废暂存间，定期交由物资回收部门处理；使用切条机的过程还会产生噪声（N）o
（4）检测卡装配：将切好的小条装配于完好的PVC卡中，再用压壳机进行压卡，装条时应注意检查条有无划痕污渍，宽度是否符合要求；PVC卡外观应清洁,平整，无变形，底面配套性好，压卡应注意调节松紧度，避免将卡压破或变形。
该过程产生噪声(N)。
(5)内包：取单支装配好的检测卡和干燥剂一起放入铝箔袋中，卡印字方向应朝向铝箔袋开口方向，确保无漏装。
在密封前应先检查密封的效果及铝箔袋上的效期印字是否正确，使用封口机进行封口。
将密封好的试纸卡与一管缓冲液和一个无菌棉签装入一个自封铝箔袋中，使用封口机进行封口。
该过程产生的废包装物(S4)作为一般固体废物暂存于一般固废暂存间，定期交由物资
回收部门处理。
(6)半成品检测：产品生产过程中，为了对产品进行相应的功能性调试和质量保证，对组装内包好的半成品进行质量检测，取分装的样品稀释液经传递箱进入无菌室，用一次性滴管，滴加到试纸卡样品孔。
使用微孔板分光光度仪看质控线浓度是否正常。
此过程在无菌室内的生物安全柜内进行，主要是为了防止检测过程中产品不被外界尘埃或细菌污染，使其达到无菌环境；检测过程产生的废一次性滴管(S5)暂存于危险废物暂存间定期交由资质单位处理；产生的不合格品(Sl)暂存于一般固废暂存间，定期交由物资回收部门处理。
(7)分装：人工在称量间内的通风橱中使用天平称量外购配制好的样品稀释液，经传递箱进入样品分装间倒入小烧杯中，按0.2-ImL进行分装装入样品管。
如若样品稀释液溶液不均匀，需使用固定式旋转混匀仪或标准磁力搅拌器进行搅拌均匀后在进行分装。
该工序会使用分装的小烧杯，小烧杯用后先使用自来水清洗，再使用纯净水淋洗，最后使用超声波清洗机清洗，该过程产生的玻璃器具清洗废水(S6)、玻璃器具淋洗废水(S7)、超声波清洗废水(S8)、超声波冲洗废水(S9)均由废液桶收集，暂存于危险废物暂存间，定期交由资质单位处理。
(8)外包：按包装盒标准折叠方法折好包装盒，根据成品组分名称、规格及数量，分别装入检测卡铝箔袋或试纸筒、样品稀释液、说明书。
包装组组长每盒清点查看，合格后用封口机进行外包装封口。
再使用激光打码机在外包装上进行打码
入库存储。
该过程产生的废包装物(S4)暂存于一般固废暂存间，定期交由物资回收部门处理。
(9)入库：包装好于库房内储存。
综上所述，本项目产污环节一览表如下图所示。
PCT胶体金试纸制备及其原理
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5、PCT胶体金试纸样品垫和金标垫处理
样品垫和金标垫的处理方式一样，都是将切割好的样品垫（玻纤膜-有些脆， 需小心）和金标垫（聚酯膜）浸泡在处理液中1小时，使其彻底湿润。（半小时 需用镊子翻一次面）
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3、常用的免疫胶体金检测技术
（1）免疫胶体金光镜染色法 （2）斑点免疫金渗滤法 （3）胶体金免疫层析法
将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗 体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前 移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区 域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上， 可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。
PCT胶体金试纸制备及其原理
2016年6月3号
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胶体金（colloidal gold）也称金溶胶（gold solution）： 是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液。胶体金颗 粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层 构成，紧连在金核表面的是内层负离子（AuC12－）， 外层双层正离子层H+则分散在胶体间溶液中，以维持胶 体金游离于溶胶间的悬液状态。
胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用 下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体 金。
胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由
胶体金法生产工艺规程
胶体金法生产工艺规程1.适用范围：本文适用于乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒（胶体金法）的生产和质量控制。
2.职责：研发部制定本规程，生产管理部执行本规程，质量管理部按本规程执行并监督执行情况。
3.内容：3.1.依据：依据《乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）》产品标准。
3.2.产品名称、剂型、规格：3.2.1.名称：1) 商品名：乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）。
2) 英文名：___)。
3) 汉语拼音名：___ ___ (jiaotijin Fa)。
3.2.2.类型：三类6840体外诊断试剂。
3.2.3.规格：100T/盒(25T/筒*4筒)（无卡）；25袋/盒（1支/袋）、50袋/盒（1支/袋）。
3.3.产品概述：乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析原理、双抗原夹心法，在玻璃纤维纸上预包埋金标记重组乙型肝炎病毒表面抗原，在硝酸纤维素膜上检测线（T）和质控线（C）分别包被重组的乙型肝炎病毒表面抗原和羊抗兔IgG。
当检测样本为阳性时，样本中的乙肝病毒表面抗体与胶体金标记的重组乙肝病毒表面抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线（T）时与预包被的重组乙肝表面抗原反应，形成免疫复合物而显现红色条带，游离金标记的兔IgG则在质控线（C）与羊抗兔IgG结合显现红色条带。
阴性样本则仅在质控线（C）显色。
3.4.试剂盒组成、储存、有效期：3.4.1.试剂盒组成：100T/盒组件装量数量25袋/盒（1支/袋）50袋/盒（1支/袋）装量数量装量数量试纸条25条/筒4筒无无无无试纸卡无无1支/袋25袋1支/袋50袋样品稀释液2ml4瓶2ml1瓶2ml2瓶说明书1份1份1份1份1份1份3.4.2.储存条件：2-30℃保存。
3.4.3.有效期：24个月。
3.5.生产工艺流程图：见文件末（23页）。
3.6.生产工艺过程及工艺条件：3.6.1 配液：根据各配方，按相关试剂配制作业指导书进行配制。
胶体金生产工艺配方原则(行业相关)
典型结合物释放垫材料的构意图
玻纤
高分子PVA外壳
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Made by：QS HLJ
侧向层析中结合物释放垫的原理
❖做什么用 (理论上)？
▪ 让结合物完好无损的干燥 ▪ 加样后让结合物快速释放
❖实际应用中
▪ 侧向层析中结合物释放垫可能遇到的问题比其 它任何组分都多
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标准结合物释放垫的性能
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结合物释放常见问题
❖释放不充分 ❖释放慢 ❖释放垫再次湿润困难
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释放不充分
❖结合物绑定到释放垫上了
▪ 用聚合物和表面活性剂封闭释放垫
❖在储存过程中，结合物发生聚集
▪ 控制封闭剂的用量 ▪ 控制溶液的离子强度
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孔径对侧向层析速度的影响
标称孔径 (m)
3 5 8 12
层析 4.5 cm 的时间 (sec)
245 185 140 100
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不同种类膜的 IgG结合能力
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不同种类膜的 BSA结合能力
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Cluster free, high quality gold reagent
Clustered, poor quality gold reagent Made by：QS HLJ
胶体金的生产
❖胶体金的形成是还原HAuCl4.
❖HAuCL4 + e-
Au0
胶体金法生产工艺规程
1. 适用范围适用于乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒（胶体金法）的生产和质量控制。
2. 职责研发部：制定本规程。
生产管理部：执行本规程质量管理部：按本规程执行，监督本规程的执行情况。
3. 内容3.1.依据《乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）》产品标准3.2.产品名称、剂型、规格3.2.1名称：(1) 商品名：乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）（2）英文名：Diagnostic Kit for Antibody to Hepatitis B Surface Antigen(Colloidal Gold Immunochromatagraphic Assay)（3）汉语拼音名：Yixing Ganyan Bingdu Biaomian Kangti Jiance Shiji（jiaotijin Fa）3.2.2.类型：三类6840体外诊断试剂。
3.2.3.规格：100T/盒(25T/筒*4筒)（无卡）；25袋/盒（1支/袋）、50袋/盒（1支/袋）3.3.产品概述乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析原理、双抗原夹心法，在玻璃纤维纸上预包埋金标记重组乙型肝炎病毒表面抗原，在硝酸纤维素膜上检测线（T）和质控线（C）分别包被重组的乙型肝炎病毒表面抗原和羊抗兔IgG。
当检测样本为阳性时，样本中的乙肝病毒表面抗体与胶体金标记的重组乙肝病毒表面抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线（T）时与预包被的重组乙肝表面抗原反应，形成免疫复合物而显现红色条带，游离金标记的兔IgG则在质控线（C）与羊抗兔IgG结合显现红色条带。
阴性样本则仅在质控线（C）显色。
3.4.试剂盒组成、储存、有效期3.4.1.试剂盒组成：3.4.2储存条件：2-30℃保存。
3.4.3.有效期：24个月。
3.5.生产工艺流程图文件末（23页）。
3.6.生产工艺过程及工艺条件根据以下各配方，按各相关试剂配制作业指导书进行配制。
胶体金试纸条的制备
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胶体金免疫层析法试剂的组成
样品垫(Sample pad)：
玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材 质，多种规格，批间稳定。
样品垫的作用：
减缓样品渗透速度，有利于样品在结合垫上均匀分布； 去除样品中杂质颗粒； 调节样品液pH值或粘度等。
样品垫可使用化学物质进行浸渍处理，从而减少样本差 异，提高试验的灵敏度。通常可以将洗涤剂、粘性增强剂、 阻滞剂及盐渗入样本垫然后加以干燥，该工艺可避免使用 复杂辨识剂/追迹缓冲液的麻烦，使检测一步完成。
胶体金免疫层析试纸模式
• 双抗体夹心模式 疫病抗原检测
• 竞争模式 小分子物质检测
• SPA/蛋白G模式 疫病抗体检测
双抗体夹心模式
判定 阳性 阴性
检测线 质控线 显色 显色
不显色 显色
竞争模式
判定 阳性 阴性
检测线 质控线 不显色 显色
显色 显色
SPA/G蛋白模式
判定 阳性 阴性
检测线 质控线 显色 显色
胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一 般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢 固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至 待标记蛋白质的等电点略偏碱。
需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需要 降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH可 能损害pH测定计的探头，因此，一般用精密的pH试纸测
定其pH即可.
常 见 蛋 白 标 记 条 件
最小蛋白用量的确定
（1）光电比色法：制备一系列不
同浓度的等体积蛋白质溶液（1ml）， 分别加入5ml胶体金中，迅速混匀， 然后，各加入1ml 10% NaCl溶液， 摇匀，静置5min后测各管。根据胶 体 金 颗 粒 的 大 小 ， OD 在 520 ～ 580nm之间测定，以OD值为纵坐标， 蛋白质用量为横坐标作一曲线，取 曲线最先与横轴相接近的那一点处 的蛋白质用量为最适稳定量。图中 10nm的胶体金溶液中蛋白质的最适 稳定量为45μg/ml。
胶体金试纸条的制备_图文
最终结合（McAb）
• 取100ml金溶液，调整pH值至8.2 • 调整滤过和离心的抗体溶液（0.1μg/μl）至
pH8.2 • 当金溶液在快速搅拌时要逐滴加入定量的
抗体（蛋白最小浓度量加10%即蛋白稳定 量），大约5分钟加完 • 在金标溶液中加入10ml滤过的10％BSA至 终浓度为1%，并轻轻搅拌10分钟。
• 在兽医疫病检测中的应用
Bhakar等应用相应的单抗标金，建立了阿米巴虫抗原检测方法。Kameyama 等以牛病腹泻病毒的 NS3 蛋白制备单克隆抗体，并用胶体金标记单抗制备胶 体金试纸，用于牛病毒性腹泻抗原的检测。Kang等以同样方式建立了猪轮状 病毒胶体金抗原检测方法，并用于腹泻仔猪轮状病毒的鉴别诊断。Li等应用 实验室制备的两种 PRRSV 单抗，以双单抗夹心的模式，组装成 PRRSV 抗 原检测试纸，作为 PRRSV 感染的诊断工具。
135s一般用在双抗体夹心法，180s一般用在竞争法.
吸收垫(Absorbent Pad)：
提供高吸收率、高容量以及相对稳定吸收率的吸 收纸；
吸收纸的作用： 主要表现在控制样品的流速，促进虹吸作用以及 使试剂跨过膜而不仅仅移到膜上。
片材：
不干胶塑料衬底，片材的质量很大程度上影响了 产品的货架期。
• ⑤乙醇—超声波还原法(1980年)可合成6～10nm大小的金 颗粒；
• ⑥硼氢化钠还原法(1982年)可合成3—17nm大小的金颗粒 ；
• ⑦单宁酸—柠檬酸三钠还原法(1985年)可合成3～17nm大 小的金颗粒。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。
胶体金试纸条的制备
Immune colloidal gold technique 2015-1-27
汇报人姓名
汇报日期
胶体金的合成
胶体金的标记与纯化
胶体金免疫层析法试剂的组成
胶体金免疫层析试纸的应用
胶体金技术的发展
胶体金免疫层析试纸的检测模式
目录
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胶体金颗粒/nm
pH
标记蛋白质
离心力/g
时件/min
5
9.0
羊抗人IgG
45000
45
10
8.2
McAb
45000
30
15
6.5
链霉亲和素
120000
45
20
6.0
SPA
120000
30
10
9.0
羊抗兔IgG
120000
60
几种免疫金探针离心纯化条件
纯化
胶体金免疫层析法试剂的组成
01
样品垫(Sample pad)： 玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。 样品垫的作用： 减缓样品渗透速度，有利于样品在结合垫上均匀分布； 去除样品中杂质颗粒； 调节样品液pH值或粘度等。
01
蛋白通常带有多种电荷，当蛋白带正电时，能与胶体金所带的负电荷相互作用；而蛋白中的疏水氨基酸能通过疏水作用将蛋白结合至金颗粒表面；有些蛋白则可通过半胱氨酸的巯基与金颗粒共轭连接。
01
将胶体金调整至正确的pH值 确定最小蛋白含量 最终结合（标记） 纯化
金标样本程序
胶体金调整正确的pH值
胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至待标记蛋白质的等电点略偏碱。 需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需要降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH可能损害pH测定计的探头，因此，一般用精密的pH试纸测定其pH即可.
胶体金试纸条原理
胶体金试纸条原理胶体金试纸条（Colloidal Gold Test Strip）是一种简单、快速、准确的免疫学检测方法，广泛应用于生物医学研究、医学诊断、环境监测、食品安全等领域。
本文主要介绍胶体金试纸条的原理、制备及应用。
一、原理胶体金试纸条原理是基于金纳米颗粒与抗原或抗体的特异性结合作用。
金纳米颗粒在特定条件下呈现紫红色，具有很强的表面等离子体共振吸收波长。
当金纳米颗粒与特异抗原或抗体结合时，其颜色由紫红色变为红色或蓝色，颜色的变化与特异性结合反应形成的复合物的形态、数量有关，可以通过肉眼直接观察到。
二、制备制备胶体金试纸条需要先制备金纳米颗粒溶液，然后将其涂在滤纸或其他纸张上，并固定相应的抗原或抗体作为检测指针。
具体步骤如下：1. 制备金纳米颗粒溶液制备金纳米颗粒溶液的方法有多种，其中较为简单的方法是还原法。
将1 mL的氯金酸钠（10 mM）加入50 mL的去离子水中，搅拌均匀。
将10 mL的氢氟酸（1 mM）加入到氯金酸钠溶液中，并在室温下搅拌1分钟。
加入150 µL的氢氨水（10 mM），搅拌后黄色溶液转变为红紫色，表示金纳米颗粒合成成功。
2. 准备检测纸条将金纳米颗粒溶液用滴管或其他方法均匀地涂在滤纸或其他纸张上，并干燥20分钟。
随后，用荧光素偶联抗体或其他特异性指示剂涂抹到纸条上作为检测指针。
三、应用胶体金试纸条可以用于检测各种生物分子，例如细菌、病毒、抗体、癌细胞、DNA、RNA等，以及药物和毒性物质。
其应用领域包括：1. 生物医学研究胶体金试纸条可以用于研究基因检测、蛋白质检测、药物筛选等领域。
2. 医学诊断胶体金试纸条可以用于一些快速筛查、诊断疾病的场合，比如检测患者的生物样本中是否有某种病原菌，或者病人是否感染某种病毒等。
3. 环境监测胶体金试纸条可以用于监测环境中的各种有害物质，如重金属、农药、酸雨等。
4. 食品安全胶体金试纸条可以检测食品中添加的国家规定禁止使用的物质，如兽药、农药等。
胶体金法生产工艺规程
1. 适用范围适用于乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒胶体金法的生产和质量控制..2. 职责研发部：制定本规程..生产管理部：执行本规程质量管理部：按本规程执行;监督本规程的执行情况..3. 内容3.1.依据乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂胶体金法产品标准3.2.产品名称、剂型、规格3.2.1名称：1 商品名：乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂胶体金法2英文名：Diagnostic Kit for Antibody to Hepatitis B Surface AntigenColloidal Gold Immunochromatagraphic Assay3汉语拼音名：Yixing Ganyan Bingdu Biaomian Kangti Jiance Shijijiaotijin Fa3.2.2.类型：三类6840体外诊断试剂..3.2.3.规格：100T/盒25T/筒4筒无卡；25袋/盒1支/袋、50袋/盒1支/袋3.3.产品概述乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂胶体金法采用胶体金免疫层析分析原理、双抗原夹心法;在玻璃纤维纸上预包埋金标记重组乙型肝炎病毒表面抗原;在硝酸纤维素膜上检测线T和质控线C分别包被重组的乙型肝炎病毒表面抗原和羊抗兔IgG..当检测样本为阳性时;样本中的乙肝病毒表面抗体与胶体金标记的重组乙肝病毒表面抗原结合形成复合物;由于层析作用复合物沿纸条向前移动;经过检测线T时与预包被的重组乙肝表面抗原反应;形成免疫复合物而显现红色条带;游离金标记的兔IgG则在质控线C与羊抗兔IgG结合显现红色条带..阴性样本则仅在质控线C显色..3.4.试剂盒组成、储存、有效期3.4.1.试剂盒组成：3.4.2储存条件：2-30℃保存..3.4.3.有效期：24个月..3.5.生产工艺流程图文件末23页.. 3.6.生产工艺过程及工艺条件根据以下各配方;按各相关试剂配制作业指导书进行配制..（1） （2） （3）按照液体分装作业指导书;根据相应规格的装量要求进行分装;分装量 ＝ 规格 + 附加量..如下表所示单位：ml/瓶：3.6.3 胶体金制备（1）量取 ml超纯水到适当大小的烧瓶中；（2）量取 ml烧金溶液A并加入烧瓶中；（3）水沸腾后;加入已经平衡的烧金溶液B ml；（4）水继续沸腾5分钟关闭加热搅拌器;并将烧瓶移至桌面;用铝箔纸盖住瓶口;让胶体金自然冷却..（5）胶体金的储存：2～8℃；有效期6个月..2CO3液;混匀后;快速搅拌中加入相应量的乙肝抗原或兔IgG乙肝抗原和兔IgG分开标记;混合均匀后;反应30分钟..℃;有效期6个月..3.6.5 铺金液配制用工作液将1/10体积的乙肝病毒表面抗原金标记物沉淀放大10倍；兔IgG金标记物沉淀按1/3乙肝病毒表面抗原沉淀的量;加至上述乙肝金标工作液中即兔IgG金标记物沉淀为乙肝的1/3按0.2mg/ml的量加入抗RBC到铺金液中；3.6.6 小样试验：在铺金和划膜之前;应首先将待铺的基因重组抗原-胶体金复合物溶液;先铺一条玻纤6mm×310mm上;用配好的质控线液、检测线液划膜一张;与其他组分组合在一起;进行检测;要求：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率-/-应为20/20..灵敏度：灵敏度参考血清;呈阳性反应..精密性：连续重复测定精密性参考品10次;反应结果应均为阳性;且显色度均一..3.6.7 铺金按每张玻纤可以铺金36ml计算金标液的体积℃干燥18～24小时;如不立即使用;加干燥剂铝箔袋封存..保存过程中严格防潮;以后打开和使用一定要在30%湿度以下..按照划膜机标准操作规程;以“252”泵速对应速度 2.7ul/cm;将质控线液和检测线液均匀地划在膜上;质控线划在距膜顶端12.1±0.1cm处;检测线划在距膜顶端12.5cm±0.1cm处;质控线与检测线相距5mm±1mm..℃干燥18～24小时;如不立即使用;加干燥剂铝箔袋封存..保存过程中严格防潮;以后打开和使用一定要在30%湿度以下..3.6.8 样品垫的准备按每张玻纤可以铺液36ml计算全血样品垫处理液的体积℃干燥18～24小时;如不立即使用;加干燥剂铝箔袋封存..保存过程中严格防潮;以后打开和使用一定要在30%湿度以下..金标垫：6mm × 310mm 样品垫：15mm ×310mm 吸水垫：20mm×310mm不干胶纸：13mm× 310mm将上述切割好的材料进行贴膜制成乙型肝炎表面抗体胶体金试纸条;各膜层叠关系如下：1）不干胶纸2）样品垫3金结合物垫4包被有检测线T线和质控线C线的硝酸纤维素膜5吸水垫6塑料衬片金标垫2片;第一片搭上NC膜2mm; 第二片搭第一片3mm ；样品垫15mm;搭上金标垫2mm；吸水垫20mm;搭上NC膜2mm;不干胶13mm;搭上露出的NC膜2mm..1组装环境条件的控制在相对湿度30%以下;并所有组件拆封后暴露于空气中时间不超过2小时..2按照切条工序作业指导书使用切条机;将组装好的乙肝病毒表面抗体检测试剂切割成宽度为2.5mm±0.1mm试条;切条过程中应于前、后及过程中每30分钟对切条的宽度检查一次..检测卡的装配按照不同规格的要求;需要进行检测卡装配的试纸条先把切好的试条装配到完好的PVC卡中;再用压卡机进行压卡;装条时应注意检查条有无划痕污渍;宽度是否符合要求；PVC卡外观应清洁;平整;无变形;底面配套性好;压卡应注意调节松紧度;避免将卡压破或变形..1装卡：单个卡和无水硅胶干燥剂一起放入铝箔袋中;卡印字方向应朝向铝箔袋开口方向;确保无漏装..2密封..密封时应检查密封的效果及铝箔袋上的效期印字是否正确;使用封口机进行封口..装筒;将无卡试纸以25支/筒的规格装入筒中;放入干燥剂;然后封筒..1不干胶标签批号、生产日期、有效期打印：以试纸条组装日期为“生产日期”;并由此推算出“有效期至”;批号按照批号管理规程的规定设置..按照批号打印机使用、清洁、维护、保养标准操作规程进行操作打印标签、包装盒上的“三期”..2贴签：在上述装好检测卡的铝箔袋及装好试纸条的筒上贴上标签..3成品组装：纸盒内组份：按包装盒标准折叠方法折好包装盒;根据成品组分名称、规格及数量;分别装入检测卡铝箔袋或试纸筒、样品稀释液、说明书..包装组组长每盒清点查看;合格后用封口签合格证封口..4储存：2～30℃;有效期24个月..抽检量为3%;最小抽检量为500人份..经质量管理部QC检测合格;QA做生产记录审核后开具成品放行审核单方可入库..3.7 质量标准3.7.1.主要原辅料质量标准及依据：1重组乙肝抗原2兔IgG抗体3羊抗兔IgG4 兔抗RBC（6）硝酸纤维素膜：Millipore Hiflow Plus 18002硝酸纤维素膜（7）玻璃纤维纸1胶体金2胶金垫3包被膜4样品稀释液3.8.质量控制3.8.1.主要质量控制点：按生产工序和工艺特点规定生产过程中的主要质量控制点;如下表所示：3.8.2.监控频次每个质量控制点均应在该工序生产操作开始前、操作过程中、操作结束后进行三次监控;对于用时较长工序需适当增加监控频次..3.8.3.监控方法(1)生产前;检查人员、设备、物料、环境是否符合工艺标准;并达到相应卫生要求;检查结束后决定是否准许开始生产..(2)检查物料名称、级别、数量、外观、状态标识、存放条件是否符合工艺要求和生产规模;原辅料、包装材料及半成品的质量是否符合要求..(3)检查设备、仪器、器具是否有状态标识;处于清洁、完好状态..(4)各相关的记录、凭证是否齐全;生产过程中的记录是否完整、规范..(5)检查生产工艺规程和岗位标准操作规程的执行情况;生产现场是否有序、规范..(6)在质量控制点工序的操作过程中实行双人核对;QA对生产全过程进行监督..3.8.4.重点工序的监控(1)定量配料、定额包装是保证产品质量的关键工序;对物料质量、投料量是否符合要求实施重点监控..(2)生产环境洁净度、温度、湿度、压差是否达标是保证生产的标准化和合格率的基本条件;实施重点监控..(3)所有半成品生产完毕后分别取样进行质量检测;对半成品质量是否符合质量标准实施重点监控..(4)对包装过程中的批号和有效期打印、包装数量、包装材料使用实施重点监控..3.9.主要生产设备一览表3.10.技术经济指标的计算根据产品特点和生产能力确定本产品的最低生产量1万条根据1万条/批的最低生产量制定物料消耗定额标准;并以该标准作为批生产物料需求统计、经济技术指标和物料平衡计算的依据..1主要原辅料的消耗定额标准：根据各种试剂批制备量的确定方法;计算主要原辅料的消耗定额标准如下表所示..3.11.物料平衡检查和收率计算1物料平衡：指产品或物料的实际产量或用量与理论产量或用量之间的百分比;可适当考虑可允许的偏差范围..2收率：指半成品、成品的实际产量或合格品产量与理论产量或投料量之间的百分比;可适当考虑可允许的偏差范围..3理论产量：指按照所用的原料、辅料、包装材料量;在生产中无任何损失或差错的情况下产出的最大数量..4实际产量：指生产过程中的实际产出量;包括产出的合格品量、检验品量..3.11.2.物料平衡和收率计算方法：1物料平衡＝实际产量用量／理论产量用量× 100% 23.12.工艺卫生按以下卫生管理规程和相关标准操作规程执行：3.13.生产安全和劳动保护按以下管理规程执行：3.14.劳动组织与生产岗位定员按组织机构管理规程、员工培训管理规程、人员健康管理规程执行..3.15.环境保护按、执行..4. 附件4.1.STP-08-3-001-R01-01批生产记录4.2.STP-08-3-001-R02-01批分装记录4.3.STP-08-3-001-R03-01批包装记录4.4. 工艺流程图。
胶体金生产工艺流程
胶体金生产工艺流程部门职责及设备配置需求本部门包括前端生产和后端生产两个部分。
一、前端生产部分：1.1 制水车间，主料库，原料库，配液/稀释/处理/黏膜/切割，标记室，喷金室，点膜室，烘房（干燥室），半成品库（光库，Buffer库，配批库，试纸条库）；1.2 后端生产部分：粘膜车间，切割车间，装配车间，成品库。
二、前端生产部分：2.1 制水车间：制备超纯水（纯化水系统）。
2.2 主料库：储存片材、玻璃纤维、聚酯膜、滤纸、NC膜等（控制湿度在30%以下）。
2.3 原料库：储存抗原、抗体等（4℃/-20℃冰箱，移液枪）。
2.4 配液/稀释/处理/黏膜/切割：1.配制/稀释缓冲液（分析天平、量筒、PH计、磁力搅拌器、移液枪、旋涡混合仪、药品柜、生物安全柜）；2.处理样本垫、金垫（自动化玻璃纤维、聚酯膜处理设备）；3.从主料库领取片材与NC膜进行黏膜（自动化黏膜机）；4.将处理好的样本垫按要求切割成需要的宽度（切割刀、直尺）。
2.5 标记室：制金、标记（灭菌器、高速离心机、温控磁力搅拌器、三角瓶量筒、移液枪、分析天平、紫外分光光度计、超声波清洗器）。
2.6 喷金室：喷金（喷金仪）。
2.7 点膜室：点膜（点膜仪）。
2.8 烘房（干燥室）：干燥喷金后的金垫，点膜后的片材（控制湿度20%以下）（干燥箱）。
2.9 半成品库：1.光库：储存烘房干燥后的金垫与片材，以及自动化处理干燥后的样本垫和金垫（控制湿度20%以下）（封口机）；2.Buffer库：储存缓冲液（4℃冰箱、量筒、移液枪）；3.配批库：组合好光库中喷金的金垫、点膜的片材、样本垫为一组配批（控制湿度20%以下）（封口机）；4.试纸条库：储存切割成单条的试纸条（控制湿度20%以下）（封口机）。
三、后端生产部分：3.1 粘膜车间：领取配批（QC检合格的半成品），根据不同产品不同要求组装成大卡（控制湿度20%以下）（封口机）。
3.2 切割车间：将组装好的大卡根据不同产品不同要求切割成试纸条（切割机、封口机）（控制湿度20%以下）。