抗体的制备
抗体制备方法
第1章 抗体制备技术抗体（antibody，Ab）是机体B淋巴细胞受到抗原刺激后所产生的特异性球蛋白，故亦称为免疫球蛋白。
机体初次接触抗原后，激发机体产生的特异性抗体亲和力低、持续时间短；而当同一抗原再次刺激机体后，则能产生高亲和力、高效价、持续时间长的抗体。
由于抗体能与相应的抗原发生特异性结合反应，因此特异性抗体是免疫学实验中常用的试剂，不仅对于抗原的分析鉴定和定量检测极为重要，而且广泛应用于临床疾病的诊断、治疗和预防中。
在免疫学检测中应用的主要抗体是多克隆抗体和单克隆抗体，多克隆抗体常用免疫动物的方法获得，而单克隆抗体则采用杂交瘤技术制备。
本章主要介绍这两种抗体的制备方法。
实验一 多克隆抗体的制备多克隆抗体（polyclonal antibody）是机体针对抗原的不同表位所产生的抗体混合物。
是用制备的纯化免疫原按照一定的免疫程序接种给所选择的动物，在含有多种抗原表位的抗原刺激下，该动物体内多个B细胞克隆被激活并产生针对这种抗原多种不同表位的抗体混合物。
含有这些特异性抗体的动物血清称为免疫血清或抗血清，而从免疫血清中纯化的免疫球蛋白则称为抗体。
一、抗体制备的流程优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和免疫原性，动物的应答能力以及免疫程序（如免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因素）。
因此制备高质量的抗体必须具备理想的免疫原、适宜的动物和切实可行的免疫方案。
（一）免疫动物的选择免疫用的动物主要为哺乳动物和禽类，常选择家兔、绵羊、豚鼠及小鼠等。
选择动物要依据抗体制备的条件而定。
1．抗原与动物的种系 抗原的来源与免疫动物之间种系关系越远，其抗原免疫原性越强，越易产生免疫应答；反之，种系关系越近，则抗原免疫原性越弱。
如用鸡球蛋白免疫亲缘关系较近的鸭或鹅，则免疫原性较差。
2．动物的个体状况 动物的年龄与健康状况可影响产生抗体的效价，年龄太小者易产生免疫耐受，而年老体衰者免疫应答能力低下，不易产生高效价的抗体。
抗体的制备
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C、凝胶层析法：利用凝胶的多孔网状结构， 大分子在凝胶颗粒间很快通过，小分子 进入网孔，难于洗脱，将抗原分为大、 中、小三种。属区带分离法。
D、离子交换层析：利用带离子基团的纤 维或凝胶，吸附带相反电荷的抗原。
凝胶过滤层析( 分子筛)的作用机理
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E、亲和层析：利用生物学分子间所具有的 专一亲和性而设计的层析方法。Ag-Ab, 激素-受体，酶-酶配体，酶蛋白-辅酶。
但完全福氏佐剂局部注射因易形成肉 芽肿和持久溃疡而不用于人体免疫。
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(四)免疫动物
+ 为获取高质量(特异性强和效价高)的 抗体，除了需制备质量好纯度高的抗 原外，还需选择适宜的动物和设计有 效可行的免疫方案，如抗原的剂量、 剂型、注射途径、注射次数、注射间 隔和接种动物的年龄均与免疫效果密 切的关系。
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B、冷热交替法：将材料投入沸水中，90 ℃左右维持数分钟，立即置于冰浴中。 在细菌或病毒中提取蛋白质及核酸可用 此法。
C、超声波破碎法：是利用超声波的机械振 动而使细胞破碎的方法。微生物和组织 细胞破碎多用此法，但真菌厚膜孢子则 较难打破。
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D、酶处理法：酶在一定的条件下能消化 细菌和细胞。例如在碱性(pH8.0)下，溶 菌酶可专一破坏G+菌细胞壁。此法适用 于多种微生物。
C、新鲜血去除纤维蛋白原后按B处理。
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(2)细菌抗原的制备：取标准菌株，接种。 H抗原：取有动力的菌株液，用 0.3~0.5%甲醛处理。 O抗原：菌液于100℃2.5h。 Vi抗原：杀菌后，加入1%的氯化钙溶 液。
(3)虫卵也可作为抗原，例如日本血吸虫 卵悬液。
基因工程制备抗体方案有哪些
基因工程制备抗体方案有哪些引言抗体是一种可以识别并结合特定抗原的蛋白质，具有重要的生物学功能和临床应用价值。
传统制备抗体的方法主要是从动物（如小鼠、兔子等）中提取抗体，但该方法存在一些缺点，如周期长、成本高、质量不稳定等。
因此，基因工程技术的发展使得制备抗体的方法得到了革命性的改变，可以通过基因工程技术在体外合成抗体，提高了抗体的质量和稳定性。
本文将介绍基因工程制备抗体的方法和流程，包括抗体的选择和克隆、表达、纯化和鉴定等环节。
通过基因工程方法获得的抗体，可以应用于药物研发、医学诊断、生物学研究等领域，具有广阔的应用前景。
1. 抗体的选择和克隆（1）抗原的选择制备抗体的第一步是选择合适的抗原。
抗原是引发免疫反应的物质，可以是蛋白质、多肽、多糖、药物等。
根据需要制备的抗体类型，可以选择相应的抗原。
例如，如果需要制备单克隆抗体，可选择单个抗原蛋白作为抗原进行制备。
（2）抗体基因的克隆在选择了合适的抗原后，下一步是将抗体基因克隆到表达载体中。
通常可以利用PCR方法从免疫细胞中扩增出抗体基因，并将其插入表达载体中。
选择合适的表达载体是非常重要的，通常选择在哺乳动物细胞或大肠杆菌中表达。
2. 抗体的表达（1）表达载体的构建在决定抗体表达载体后，接下来是进行表达载体的构建。
通常表达载体包括启动子、终止子、选择标记基因等，通过合成或限制性内切酶切割等方法将抗体基因插入表达载体中。
（2）转染和筛选将构建好的表达载体导入宿主细胞中，可以通过转染等方法实现。
转染后，需要进行筛选，筛选出表达抗体的稳定细胞株。
通常可以利用克隆技术选取高表达的细胞株。
3. 抗体的纯化（1）细胞培养和收获经过筛选的稳定细胞株可以进行大规模培养，收获细胞培养上清液。
（2）亲和层析纯化常用的抗体纯化方法包括亲和层析纯化。
可以利用蛋白A/G或其他具有特异性结合抗体的配体进行纯化。
通过这种方法可以高效地将目标抗体从细胞培养上清液中纯化出来。
4. 抗体的鉴定（1）免疫印迹（Western blot）通过Western blot方法，可以验证纯化得到的抗体是否具有结构完整，是否与目标抗原结合。
抗体的制备方法与原理
抗体的制备方法与原理抗体是一种能够识别和结合特定抗原的蛋白质，广泛应用于医学诊断、治疗和研究领域。
抗体的制备方法包括动物免疫和体外选择性放大两种主要途径。
以下将详细介绍这两种方法及其原理。
一、动物免疫法制备抗体动物免疫法是制备多种特异性抗体的主要方法，常用的动物包括小鼠、兔子、大鼠等。
制备抗体的主要步骤如下：1.抗原选择：首先需要选择目标抗原，可以是蛋白质、多肽、糖蛋白、核酸等。
抗原应具有免疫原性，能在动物体内引起免疫反应。
2.免疫原免疫：将抗原与适当的佐剂混合后注射到动物体内，佐剂可以增强抗原的免疫原性，如完全弗氏佐剂、佐科克佐剂等。
注射的剂量和时间间隔需根据具体实验目的和动物种类进行优化。
3.收集血清和分离抗体：免疫一定时间后，收集动物的全血或血清，离心分离血清，其中包含了目标抗体。
4.抗体纯化：通常使用亲和层析、凝胶过滤层析等方法将血清或血浆中的抗体纯化出来。
亲和层析是最常用的抗体纯化方法，利用特定配体或抗原结合柱将目标抗体捕获，再洗脱得到纯抗体。
二、体外选择性放大法制备抗体体外选择性放大法是指通过技术手段进行人工放大和筛选特定抗体，主要包括以下步骤：1.生成抗体文库：将来自多个个体免疫系统的B细胞或血浆细胞收集起来，提取RNA或DNA，然后利用逆转录酶合成cDNA或文库，得到抗体基因的cDNA文库。
2.构建抗体显示系统：将抗体基因文库插入适当的表达载体中，如噬菌体、酵母、哺乳动物细胞表达系统等。
3.筛选特异性抗体：利用高通量筛选技术，如细胞表面展示、比对深度测序等，可通过抗原结合的特异性来筛选出具有高亲和力的抗原结合片段或全长抗体。
4.抗体表达和纯化：通过选择后的抗体基因进行表达，再经过蛋白纯化和检验等步骤，最终得到目标抗体。
抗体制备的原理主要是基于免疫系统的免疫应答机制。
当机体受到抗原的刺激后，机体会产生一系列免疫应答，其中包括B细胞的活化和分化。
经过抗原的结合和识别，B细胞会分泌具有高亲和力的抗体。
抗体制备原理
抗体制备原理抗体是一种特异性蛋白质，能够识别并结合到其特定的抗原上。
抗体的制备原理是通过免疫原性物质刺激机体产生特异性抗体，或者通过体外培养细胞（如淋巴细胞、骨髓细胞等）制备。
抗体制备的过程中，需要经历抗原的选择、免疫原的制备、动物免疫、抗体的纯化等步骤。
首先，抗体的制备需要选择合适的抗原。
抗原是能够诱导机体产生抗体的物质，可以是蛋白质、多肽、糖类、核酸等。
在选择抗原时，需要考虑其免疫原性、稳定性和纯度等因素。
通常情况下，选择具有较强免疫原性的抗原能够更好地诱导机体产生高效的抗体。
其次，制备抗体需要进行免疫原的制备。
免疫原的制备是将选择好的抗原溶解在适当的缓冲液中，使其保持稳定性，并且能够有效地诱导机体产生抗体。
制备好的免疫原需要进行一系列的检测，确保其纯度和活性符合要求。
接着，进行动物免疫。
通常情况下，选择小鼠、大鼠、兔子等动物进行免疫。
在免疫前，需要对动物进行适当的准备工作，如体重测量、免疫程序的安排等。
在免疫过程中，需要根据抗原的特性和动物的生理状态，合理地确定免疫剂量和免疫方案，以确保免疫效果的最大化。
随后，进行抗体的纯化。
在动物免疫一定周期后，可以从动物体内获取免疫血清，其中含有特异性抗体。
但免疫血清中还会含有大量的非特异性蛋白质和其他成分，需要进行纯化。
常用的纯化方法包括盐析、凝胶过滤、离子交换、亲和层析等。
通过这些方法，可以将目标抗体从杂质中分离出来，得到纯净的抗体制剂。
最后，对制备好的抗体进行鉴定和检测。
鉴定抗体的纯度、活性、特异性等指标，确保其符合质量标准。
同时，也需要对抗体进行存储和保存，以确保其长期的稳定性和活性。
抗体制备原理是一个复杂而精细的过程，需要在每一个环节都严格控制，才能获得高质量的抗体制剂。
通过对抗体制备原理的深入了解，可以更好地指导抗体制备工作的实施，为科研和临床应用提供优质的抗体产品。
抗体的制备实验报告
抗体的制备实验报告抗体的制备实验报告引言：抗体是生物学研究中不可或缺的工具，它能够识别和结合特定的抗原分子，从而发挥免疫应答的作用。
本实验旨在通过制备抗体的过程，了解抗体的结构和功能，并探讨其在生物医学领域中的应用。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 抗原：选择合适的抗原，如蛋白质或多肽。
- 动物模型：选择适合的动物模型，如小鼠或兔子。
- 细胞培养基：提供细胞生长所需的营养物质和环境。
- 抗体检测试剂盒：用于检测抗体的产生和效力。
2. 实验方法：- 抗原注射：将抗原注射到动物体内，刺激其免疫系统产生抗体。
- 血清采集：采集动物的血清样本，含有抗体。
- 抗体纯化：利用蛋白质纯化技术，从血清中分离和纯化抗体。
- 抗体检测：使用抗体检测试剂盒，检测抗体的产生和效力。
结果与讨论：通过实验，我们成功制备了抗体，并进行了相关的检测。
在实验过程中，我们发现以下几个关键点：1. 抗原的选择：在制备抗体的过程中，选择合适的抗原至关重要。
抗原应具有较高的免疫原性，能够有效刺激免疫系统产生抗体。
同时，抗原的纯度和稳定性也需要考虑，以确保抗体的质量和效力。
2. 动物模型的选择：不同的动物模型对抗原的免疫反应有差异。
在实验中，我们选择了小鼠作为动物模型，因其免疫系统对抗原的应答较为敏感。
然而，不同的研究目的可能需要选择不同的动物模型，以获得更准确的实验结果。
3. 抗体的纯化：通过蛋白质纯化技术，我们成功地从血清中分离和纯化了抗体。
抗体的纯化可以去除其他血清成分的干扰，提高抗体的纯度和效力。
纯化后的抗体可用于进一步的实验研究或生物医学应用。
4. 抗体的检测：我们使用抗体检测试剂盒对制备的抗体进行了检测。
抗体检测可以评估抗体的产生和效力，并验证其对特定抗原的结合能力。
合格的抗体应具有较高的结合亲和力和特异性，以确保其在实验和临床应用中的可靠性。
结论：通过本实验，我们成功制备了抗体，并验证了其在生物医学研究中的重要性和应用潜力。
单克隆抗体的制备流程
单克隆抗体的制备流程
一、抗体cDNA克隆
2、结合分离：抗体和抗原之间采用免疫学方法，进行亲和结合分离，在病理学中，可以采用细胞亲和免疫电泳或者细胞色素紧缩技术来进行识
别性结合分离抗体。
3、mRNA提取：使用RNAsy Plus Kit根据操作说明提取亲和结合分
离后的抗体的mRNA，用于cDNA合成。
4、cDNA合成：使用双链cDNA合成试剂盒，根据说明书操作，将mRNA合成双链cDNA。
5、克隆：将双链cDNA进行克隆，经过构建的一系列步骤，最终将cDNA克隆到载体上，构建出抗体cDNA克隆库。
二、抗体cDNA克隆抗体制备
1、选择克隆体：选择抗体cDNA克隆库中的抗体表达克隆，采用PCR
技术进行选择，并检测克隆体具有良好的免疫特性，可以快速确定最佳克
隆体。
2、表达载体构建：将最佳克隆体插入到表达载体中，构建出属于克
隆体的表达载体，以此保证克隆体的正确表达。
3、表达系统筛选：利用多种表达系统，筛选出最佳的表达系统，以
此来达到最佳的表达效果。
4、表达调控：对于最佳的表达系统，根据cDNA克隆体的特性，进行
最佳的表达调控，以此达到最佳的抗体表达效果。
抗体制备
二、免疫动物
为获取高质量的抗体，除了需制备高纯度 的抗原外，还需选择适宜的动物和设计有 效可行的免疫方案，如抗原的剂量、剂型、 注射途径、注射次数、注射间隔和接种动 物的年龄均与免疫效果密切的关系。
1.免疫动物的选择
选择动物时应考虑以下因素： ①抗原来源与动物种属的关系。抗原的来源与免疫动物 种属差异越远，其免疫源性越强，免疫效果越好，而 同种系或亲缘关系越近，免疫效果越差。 ②动物个体的选择。适龄、健康、体重符合要求的正常 动物（以雄性为佳）；抗体需要量少时，选用家兔、 豚鼠和鸡等小动物；抗体需要量大时，可选用绵羊、 山羊、马、驴等大动物。 ③抗原性质与动物种类。
第十一章 抗体制备
抗体的制备技术经历了三代： 第一代抗体是传统的抗体制备方法即利用抗原免 疫动物后获得抗体，称为多克隆抗体（polyclonal antibody）； 第二代抗体是通过杂交瘤技术制备出针对抗原中 某一抗原决定簇的抗体称为单克隆抗体 (monoclonal antibody, McAb)； 第三代抗体是利用基因工程技术制备而来，称为 基因工程抗体(genetic engineering antibody)。本 章主要介绍三种类型抗体的制备方法。
一、杂交瘤技术的基本原理
一、杂交瘤技术的原理及流程
二、单克隆抗体制备技术
1. 主要材料
2. 细胞融合前准备
3. 细胞融合
4. 抗体的初筛和克隆化
5. 杂交瘤细胞冻存与复苏
6. 单克隆抗体的批量生产
7. 单克隆抗体的纯化与鉴定
（一）主要材料：
RPMI1640培养液 FCS 10% 谷氨酰胺 2mmol/L 青霉素 100IU/ml 链霉素 100Ug/ml
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Ag
2 3
抗原(antigen，Ag)
3.单克隆抗体 (Monoclonal Antibody, McAb)
由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生 的同源抗体。
4.多克隆抗体 (Polyclonal Antibody，pAb)
用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动 物，可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多 种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清 实际上是含有多种抗体的混合物。
比单抗更容易捕捉抗原。 因为含有抗不同表位的抗体，多种抗 体都可与抗原结合。 抗体的纯化、标记比单抗难 因为含有各种不同类型、亚类的抗体， 提纯、标记的方法有所差别。同时，血 清中含有的杂蛋白比较多。
购买抗体时要注意厂商的标注
适合于做什么实验，使用浓度多少
• • • • • • WB（Western blotting ，免疫印迹) IHC (Immunohistochemistry, 免疫组织化学) ICC (Immunocytochemistry, 免疫细胞化学) IEM (Immunelectron microscopy,免疫电镜) FCM (Flow Cytometry,流式细胞仪) ELISA(enzyme linked immunosorbent assey, 酶联免疫吸附实验，酶联免疫分析)
C、凝胶层析法：利用凝胶的多孔网状结 构，大分子在凝胶颗粒间很快通过，小 分子进入网孔，难于洗脱，将抗原分为 大、中、小三种。属区带分离法。 D、离子交换层析：利用带离子基团的纤 维或凝胶，吸附带相反电荷的抗原。
凝胶过滤层析( 分子筛)的作用机理
E、亲和层析：利用生物学分子间所具有 的专一亲和性而设计的层析方法。AgAb, 激素-受体，酶-酶配体，酶蛋白-辅 酶。
A、碳化二亚胺法 B、戊二醛法 C、氯甲酸异丁酯法 D、琥珀酸酐法 E、0-羧甲基羟胺法 F、一氯醋酸钠法 G、重氮化的对氨基苯甲酸法
(三)佐剂：与抗原同时或预先注射于 机体，能增强机体免疫应答或改变 免疫应答类型的物质，称为佐剂。 1、佐剂的条件： A、增加抗原的表面积，并改变抗原 的活性基团构型，从而增加抗原的 免疫原性。
二、多克隆抗体制备
(一)免疫原的制备 免疫原(immunogen)指能刺激机体免疫系统 产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原 最重要的性质是免疫原性（immunogenicity） 免疫原—天然抗原、人工合成抗原； 蛋白质、多糖、脂类、核酸抗原
1. 颗粒性抗原的制备 (1)红细胞抗原的制备： A、新鲜血经无菌NS洗涤3次，取压积红细 胞并配制成2~5%，直接进行注射免疫。 B、新鲜血+抗凝剂— 4℃保存4W，免疫前 取适量抗凝绵羊血，按A处理。 C、新鲜血去除纤维蛋白原后按B处理。
1 Ag
B1
4
3
B2 B3 B4
2
多克隆抗体
B3 B3
B3
B3
单克隆抗体
单克隆抗体的特点
• 抗体的性质相同，容易纯化、标记。 • 特异性强，具有抗原结合位点的专一 性。(不是抗原的专一性！) • 因结合位点的单一性，有时不易捕捉 抗原，一株单克隆抗体与抗原不易产 生凝集反应或沉淀反应。
但单克隆抗体有交叉反应
2. 可溶性抗原的制备 可溶性抗原可分为：细胞膜蛋白抗原、 细胞浆抗原、细胞核及核膜抗原。 (1)细胞破碎：有如下方法： A、反复冻融法：置-15~-20 ℃冻结，然后 缓慢融化，反复2次，大部分细胞因胞内 冰晶的形成和溶剂浓度的突然改变而被 融破。此法适用于组织细胞，对微生物 的细胞作用较差。
B、冷热交替法：将材料投入沸水中，90 ℃左右维持数分钟，立即置于冰浴中。 在细菌或病毒中提取蛋白质及核酸可用 此法。 C、超声波破碎法：是利用超声波的机械 振动而使细胞破碎的方法。微生物和组 织细胞破碎多用此法，但真菌厚膜孢子 则较难打破。
B、与抗原结合能延长抗原在局部组 织中的存留时间，达到持续刺激基 团产生高效价的抗体。 C、 可以激活免疫活性细胞，增强体 液免疫、细胞免疫和非特异免疫功 能。 D、 无毒、无副作用。
2、常用佐剂的种类和制备： A、铝乳：5%硫酸铝+5%NaOH，反 应后NS洗涤沉淀2次以上。1:1与抗 原混合。 B、明矾：硫酸钾铝在一定pH下产生 氢氧化铝胶体。制备方法是： Ag+NS，搅拌下缓慢滴入10%的硫 酸铝钾溶液，以NaOH校正pH至6.5， 离心、NS洗涤。
c、有机溶剂沉淀法：有机溶剂能降低溶液的 介电常数，从而增加蛋白质分子上不同电 荷的引力，导致溶解度降低而沉淀，有些 有机溶剂能破坏蛋白质的水化膜而使蛋白 质沉淀，例Cohn地温酒精可将血浆蛋白分 为五组。IgG属CohnⅢ。 d、其它沉淀剂：常用聚乙二醇(PEG)和硫酸 葡聚糖。PEG浓度3~4%可沉淀IC，6~7% 沉淀IgM，8~12%沉淀IgG，12~15%沉淀 其它球蛋白，25%则沉淀白蛋白。
3、取血测效价：加强免疫两次或三次 以后的第7天取血。制备血清，检测 抗体效价。如未达到预期效价，需再 进行加强免疫，直到满意时为止。当 抗体效价达到预期水平时，即可放血 制备抗血清。
C、福氏佐剂：分为不完全佐剂(石蜡 油+羊毛脂)和完全佐剂(石蜡油+羊 毛脂+卡介苗)。1:1与抗原混合研磨 均匀即可。但完全福氏佐剂局部注 射因易形成肉芽肿和持久溃疡而不 用于人体免疫。
(四)免疫动物
• 为获取高质量(特异性强和效价高)的 抗体，除了需制备质量好纯度高的抗 原外，还需选择适宜的动物和设计有 效可行的免疫方案，如抗原的剂量、 剂型、注射途径、注射次数、注射间 隔和接种动物的年龄均与免疫效果密 切的关系。
(二)半抗原免疫原的制备：利用某些功能 团将半抗原连接到载体上。 1、载体的选择： A、蛋白质：人/牛/兔白蛋白、牛甲状腺球蛋 白和血蓝蛋白等。最常用牛白蛋白。 B、多肽聚合物：多为人工合成(多聚赖氨酸)。 C、大分子聚合物和某些颗粒：聚乙烯吡咯 烷酮(PVP)，羧甲基纤维素，活性碳，乳酸 等
2. 连接方法：半抗原与载体的连接有物 理法和化学法。 • 物理法：用吸附法将载体与半抗原连接， 其原理是通过电荷和微孔来吸半抗原， 吸附载体主要有PVP和CMC等； • 化学法：利用某些功能基团把半抗原连 接到白质类或多肽类聚合物载体上。不 同的半抗原应选用不同的方法进行连接。
亲和层析的作用机理
(3)核酸抗原的制备：细胞破碎液去除蛋 白质(常用酚和氯仿抽提)后，用沉淀 剂(常用乙醇)沉淀核酸。 (4)脂多糖抗原的制备：苯酚提取法。 (5)Ig片段的制备：酶裂解法—Fc、Fab 氧化/还原法：轻、重链。
(6)纯化抗原的鉴定： 鉴定蛋白的含量、相对分子的质量、 纯度以及免疫学活性。 • 蛋白的含量—定氮（紫外光280nm等） • 分子的质量—电泳、质谱 • 蛋白的纯度—电泳等 • 免疫学活性—免疫双扩散、免疫印迹
2. 免疫途径
• 免疫途径有多种多样，如静脉内、腹腔 内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注 射等，一般常用皮下或背部多点皮内注 射，每点注射0.1ml左右。途径的选择决 定于抗原的生物学特性和理化特性，如 激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一 般不宜采用静脉注射。
（三）免疫的基本步骤
1、基础免疫：首次抗原剂量大， 300～ 500μg，用福氏完全佐剂。 2、加强免疫：第2次以后，抗原量为首次 剂量的1/4～1/2，用福氏不完全佐剂， 每2～4周加强免疫一次，多次。
抗体的制备
李成仁 组织学与胚胎学教研室
一、一些基本概念
1. 克隆(clone)
是指无性繁殖细胞系，是由单一个祖先细胞 分裂繁殖而形成的一簇细胞纯系。在这个家 族的所有成员中，如无突变发生，其基因是 完全相同的。 细胞克隆：由一个细胞增殖而成的细胞集团
2. 抗原决定簇
是指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学 基团，又称表位(epitope)，抗原结合位点
• 1. 用于免疫的动物：主要根据抗原的生 物学特性和所要获得抗体数量来选择。 ①抗原来源与动物种属的关系。抗原的来 源与免疫动物种属差异越远，其免疫源 性越强，免疫效果越好，而同种系或亲 缘关系越近，免疫效果越差。 ②动物个体的选择。适龄、健康、体重符 合要求的正常动物（以雄性为佳）；抗 体需要量少时，选用家兔、豚鼠和鸡等 小动物；抗体需要量大时，可选用绵羊、 山羊、马、驴等大动物。 ③抗原性质与动物种类。
D、酶处理法：酶在一定的条件下能消化 细菌和细胞。例如在碱性(pH8.0)下，溶 菌酶可专一破坏G+菌细胞壁。此法适用 于多种微生物。 E、表面活性剂处理：在一定的条件下， 表面活性剂能与细胞膜脂蛋白形成微泡， 使膜的通透性发生改变而使细胞破碎。 提取核酸时常用此法。 F、自溶法：利用组织和微生物的自身酶 系，在一定条件下使细胞溶解。
抗体的制备技术经历了三代： • 第一代抗体是传统的抗体制备方法即利用 抗原免疫动物后获得抗体，称为多克隆抗 体（polyclonal antibody）； • 第二代抗体是通过杂交瘤技术制备出针对 抗原中某一抗原决定簇的抗体称为单克隆 抗体(monoclonal antibody, McAb)； • 第三代抗体是利用基因工程技术制备而来， 称为基因工程抗体(genetic engineering antibody)。
是由于不同的抗原上有完全相同的 表位(100%的交叉反应)，或有相似 的表位(不同程度的交叉反应)。
多克隆抗体的特点
• 多抗是单抗的混合物，因此多抗的性 质是一个群体综合的性质。 • 特异性一般比单抗差 因为由不同性质的抗体组成，只要其 中含交叉反应的抗体，多抗就有交叉 反应，所以多抗更容易有交叉反应。
粉碎方法有两种，一是高速组织捣碎机法： 注意要高速(1万rmp)，间断(每次30秒 ~1min)进行，时间过长会导致产热，破 坏抗原。另一种是研磨法(有时加入洗过 的海沙使研磨更有效)。 匀浆液经离心，沉淀中含大量的组织细胞 和碎片，上清液可提取可溶性抗原。 消化是用胃蛋白酶或胰酶，通过酶解将细 胞间质消化，获得游离单个细胞。