尼氏染色全面
尼氏Nissl染色
尼氏(Nissl)染色液产品简介：碧云天生产的尼氏(Nissl)染色液(Nissl Staining Solution)是神经生物学家广泛使用的一种Nissl染色液，用于石蜡或冰冻切片神经元细胞浆中的尼氏小体(Nissl body)染色。
Nissl染色是以德国的精神病学家和神经病理学家Franz Nissl的名字命名的。
Nissl染色液染色后呈蓝紫色，常用于显示脑或脊髓的基本神经结构。
Nissl小体大而数量多，说明神经细胞合成蛋白质的功能较强；相反在神经细胞受到损伤时，Nissl小体的数量会减少甚至消失。
本Nissl染色液染色的有效成分是Cresyl violet。
Cresyl violet可以和RNA或DNA结合，可以染色粗面型内质网上的核糖体，也可以染色细胞核。
染色后使细胞体呈现斑驳的(mottled)蓝紫色染色。
一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。
保存条件：室温避光保存，至少一年有效。
注意事项：特别注意：Nissl染色液的染色能力很强，并且染色后很难去除，请注意勿使染色液沾染皮肤和衣物等。
需自备4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。
如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯，中性树胶或其它封片剂。
如果样品是石蜡切片，需自备90％乙醇，无水乙醇以及二甲苯。
样品数量较多时，可以使用碧云天生产的染色架和染色缸，便于操作。
第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1. 样品处理a) 对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟，共三次。
注：脱蜡不充分会导致染色不均匀。
无水乙醇5分钟。
90%乙醇2分钟。
70%乙醇2分钟。
蒸馏水2分钟。
b) 对于冰冻切片：蒸馏水2分钟。
c) 对于培养细胞：用4%多聚甲醛固定10分钟以上。
蒸馏水洗涤2分钟。
换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。
2. 尼氏(Nissl)染色对于上述处理好的样品：尼氏(Nissl)染色液染色染色3-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，染色时温度提高到37-50℃对于25-50微米等较厚的切片可以使染色更均匀）。
Nissl染色
Nissl染色
1、昆明小鼠以0.48%的戊巴比妥钠0.02ml/g腹腔注射麻醉，待其麻醉后，迅速用手术剪刀及镊子剪开肚皮使其心脏暴露，将针头从右心房插入，并用动脉夹夹住，剪破静脉窦。
2、灌流和固定：先用生理盐水灌注（约30min），待小鼠肝脏变白后，再换成4%多聚甲醛灌流，直到小鼠肝脏变硬，尾巴僵硬为止（约2h）。
3、待充分固定后，剪下小鼠头部并开颅取脑，再浸入4%多聚甲醛1d。
4、将脑组织用502胶水固定，在振荡切片机上切片，厚度为25μm。
5、将切好的脑片浸于0.5%的明胶中，用毛刷将脑片贴到预先用明胶处理的载玻片上，然后自然风干。
6、切片染色：将脑片置于0.5%甲苯胺蓝（母液：甲苯胺蓝1g，无水乙醇100ml。
使用时按1:1比例与新鲜的0.1%NaCl溶液混合成工作液）或焦油紫（焦油紫0.1g；蒸馏水99ml；1%冰醋酸1ml）中室温下染色30min；
7、切片用蒸馏水冲洗3次；
8、切片依次浸入75%、80%、95%的酒精中，每次约1min；
9、切片入特殊分色液中分色，约15s；
10、切片浸入100%酒精I，II，各1min；
11、切片浸入二甲苯I，II中透明，各5min；
12、中性树胶封片。
13、显微镜下观察照相并对尼氏染色阳性神经元进行计数。
神经通路示踪技术 尼式染色
其它固定剂： 酒精（alcohol） ： 使蛋白质脱水而致不可逆性的凝固变性。对组织有固定、硬化兼 脱水的作用 醋酸（acetic acid）： 对核蛋白有明显的沉淀作用，不能单独使用，常与酒精联合使用 苦味酸（picric acid）： 沉淀蛋白并溶解粘蛋白，使组织柔软。 铬酸（chromic acid） ： 强氧化剂，能沉淀所有蛋白。重铬酸钾是氧化剂，对蛋白和脂类 有固定作用，尤其是脂类。对核蛋白有溶解作用。 氯化汞（mercury chloride） ： 沉淀各种蛋白。但必须脱汞 锇酸（osmium tetroxide） ： 强氧化剂。蛋白的固定作用较好，不发生沉淀，组织几乎不收缩。 但渗透力弱。 丙酮（acetone）
⒊ Weigert 氏髓鞘染色法 有髓神经纤维的髓鞘主要组成成分是磷脂，如 以铬盐或铁钒媒染使之与苏木精结合，再藉分 色处理，就能着色清晰，并在中枢神经系统显 示其分布状态。髓鞘染色除可用于显示神经纤 维干、束外，更多用于中枢神经系统纤维束的 追踪。因为，尚未髓鞘完全的纤维束（如婴儿 皮质脊髓侧束），或髓化受到损害而产生溃变 的纤维束，在与正常已髓化的纤维对比之下可 以区别。用劳克坚牢蓝（Luxol fast blue）类 染料染色也可显示髓鞘，操作时也较容易。但 染色作用较慢，染色也较浅。
5．冷冻干燥切片(freezing drying sectioning)： 将新鲜组织放入经液氮预冷（-160℃）的异戊 烷中骤冷后，入真空内干燥，已干燥的组织块 进行真空包埋后切片。其特点是细胞在骤冷的 同时立即停止一切生物化学变化，可研究骤冷 时细胞内的物质变化状况。 6．超薄切片(ultrathin sectioning)：通过固定、 脱水、包埋、切片和染色等步骤。固定分预固 定和后固定。包埋剂多为环氧树脂。切片用醋 酸铀及枸橼酸铅进行电子染色，在电子显微镜 下观察。
尼氏染色方法
尼氏染色方法嘿，你有没有想过，在我们肉眼看不到的微观世界里，科学家们是怎么去研究那些小小的细胞的呢？今天啊，我就来给你讲讲一种超级有趣又特别重要的方法——尼氏染色方法。
我有个朋友叫小李，他就在实验室里捣鼓这些东西。
有一次我去他的实验室，看到那些瓶瓶罐罐，还有显微镜下奇奇怪怪的图像，我就像个丈二和尚摸不着头脑。
我就问他：“小李啊，你整天对着这些小玩意儿，到底在干啥呢？”他就兴奋地拉着我到一台显微镜前，说：“你看，这就是经过尼氏染色后的细胞，漂亮吧！”我凑近一看，妈呀，那些细胞就像被施了魔法一样，有着清晰的结构，和旁边没染色的细胞比起来，简直就是丑小鸭和白天鹅的区别啊。
那这个尼氏染色方法到底是怎么回事呢？其实啊，它是一种专门用来对神经元细胞进行染色的技术。
神经元细胞可是我们身体里非常重要的细胞呢，就像一个个小小的信息传递员，在我们的神经系统里跑来跑去传递信号。
如果把我们的身体比作一个超级大的城市，那神经元细胞就像城市里的邮递员，负责把各种信息送到各个角落。
尼氏染色所用的染色剂啊，就像是一把神奇的钥匙，能够打开细胞结构展示的大门。
它主要是和神经元细胞里的尼氏体结合。
这尼氏体呢，就像是神经元细胞的小仓库，里面储存着很多东西，像蛋白质之类的。
染色剂和尼氏体一结合，就好比是给小仓库贴上了彩色的标签，这样我们就能清楚地看到它们啦。
我又好奇地问小李：“这染色的过程是不是很复杂啊？”小李笑了笑说：“也不算太复杂啦，但是得特别细心。
”他告诉我，首先得把要染色的组织样本处理好。
这就像做饭前得把食材洗干净切好一样重要。
组织样本得固定住，就像把调皮的小动物关进笼子里一样，这样它才不会乱跑乱动，在染色的时候才能好好配合。
然后呢，要经过一系列的处理步骤，就像给这个样本做一场特殊的“SPA”。
这个过程可不能马虎，要是哪个步骤出了错，就像做菜少放了盐一样，最后的结果可就不对味喽。
在染色的时候，那更是得小心翼翼。
染色剂的浓度得调配得刚刚好，多了不行，少了也不行。
尼氏染色原理
尼氏染色原理
尼氏染色是一种常用的细胞染色方法，它可以使细胞核和染色体显色，从而方便观察和研究。
尼氏染色的原理是利用染色剂尼氏染料（Nissl stain）对细胞核和染色体的亲和力，使其显色。
尼氏染料是一种碱性染料，它的分子结构中含有苯胺基和吡啶基。
在细胞中，尼氏染料会与细胞核和染色体中的核蛋白质结合，形成紫色的染色体。
同时，尼氏染料还可以染色细胞质中的核糖体和内质网等细胞器。
尼氏染色的具体操作步骤包括：将待染细胞固定在载玻片上，用尼氏染料染色，洗去多余染料，脱水、透明化和封片。
在染色过程中，尼氏染料的浓度、染色时间和洗涤次数等因素都会影响染色效果。
尼氏染色广泛应用于神经科学、组织学、病理学等领域。
在神经科学中，尼氏染色可以用于观察神经元的形态和分布情况，研究神经元的功能和病理变化。
在组织学和病理学中，尼氏染色可以用于诊断和鉴别组织病变，如神经元退行性变、肿瘤等。
总之，尼氏染色是一种简单、快速、经济的细胞染色方法，具有广泛的应用价值。
尼氏染色步骤
尼氏染色步骤
尼氏染色法，又称尼氏显色法或尼氏酸性显色法，是一种常用的微生物学染色方法。
它能够有效地检测出体内的细菌，以及对病原体的检测和鉴定，它的应用非常广泛，是现代细菌学中不可缺少的重要技术手段。
尼氏染色法是一种酸性染色法，它利用了细菌与细菌杆菌体内含有高浓度的酸性脂肪酸而形成的细菌染色体的特殊性，将其酸性染料与细菌染色体结合起来，使细菌染色体呈色，从而使细菌染色体可见，进而诊断出病原体。
一般情况下，尼氏染色步骤如下：
1.准备标本
通常情况下，从被检样品中提取的细菌，用培养基悬浮液作为染色标本，然后将其涂在载玻片上，形成薄膜，即可进行尼氏染色。
2.加入染料
将尼氏染料溶于0.8%的盐酸中，然后将其滴加在载玻片上，盖上盖玻片，放置20分钟左右，使染料与细菌染色体结合起来，使细菌染色体变色，从而可见细菌染色体。
3.洗涤
将染色好的载玻片放入10%的盐酸中洗涤，洗涤时间约为15-30分钟，使多余的染料从细菌染色体中除去，以便观察细菌染色体。
4.染色结果观察
观察染色结果，细菌染色体可见，呈蓝色或蓝绿色，从而实现病原体的检测和鉴定。
尼氏染色法是一种快速、准确、经济的检测病原体的方法，由于它简单易行，因此深受细菌学家和微生物医学家的青睐。
近年来，随着各种新型抗菌药物的开发，尼氏染色法也受到了更多的关注，它不仅能够检测出体内的细菌，而且还可以检测出病原体的抗药性，为新型抗菌药物的开发奠定了基础。
尼氏染色原理
尼氏染色原理
尼氏染色原理是指利用生物体细胞核中染色体的染色现象，对染色体进行分类和研究的原理。
这一原理是20世纪初德国生物学家尼氏首先提出的，被广泛应用于生物学、医学、遗传学等领域。
尼氏染色原理的核心是：染色体在细胞分裂过程中，会出现一系列特征性的染色带，这些染色带的大小、位置、形状等特征是每个染色体都具有独特的标识。
通过对这些特征进行观察和比较，可以对染色体进行分类和研究。
尼氏染色原理的应用非常广泛。
例如，在医学领域中，利用尼氏染色原理可以对人类染色体进行研究，对染色体异常、突变等问题进行诊断和治疗。
在遗传学领域中，尼氏染色原理也被用于对物种间的基因差异进行研究和分析。
尼氏染色原理的研究对于人类的认识和探索生命起着重要的作用。
通过对染色体的分类和研究，可以揭示细胞遗传物质的结构和功能，并为疾病的治疗和预防提供科学依据。
尼氏染色原理是对生物体内染色体的分类和研究的基础原理，它在生物学、医学、遗传学等领域中有着广泛的应用，对于人类认识和探索生命起着重要的作用。
尼氏染色法的原理和应用
尼氏染色法的原理和应用1. 原理尼氏染色法是一种常用的细胞染色技术，用来染色显示细胞核。
它是以尼氏酸为染色剂，可以与细胞核内的核蛋白质结合，使细胞核显色，从而方便观察细胞核形态和核染色质的结构。
尼氏染色法的原理主要包括以下几个步骤：1.细胞固定：首先，需要将待染细胞固定在载玻片上，一般使用甲醛等化学物质进行固定。
固定后的细胞可以保持形态和结构的完整性。
2.脱水：固定后的细胞需要经过脱水处理，即将细胞质内的水分逐渐脱除，以便后续的染色和显微观察。
一般用乙醇进行脱水处理。
3.染色：在脱水后的细胞上滴加尼氏酸染色剂，尼氏酸可以与细胞核内的核蛋白质结合，从而显色细胞核。
一般情况下，染色时间为几分钟至数十分钟。
4.水洗：尼氏染色完成后，需要用水充分洗去多余的染色剂，以防止染色过深。
5.固定：洗净后，可以用碘或碘酒溶液进行固定处理，同时也有助于增强染色效果。
2. 应用尼氏染色法在生物学和医学领域有广泛的应用，主要用于以下方面：2.1 细胞学研究尼氏染色法可以染色显示细胞核的形态和结构，对于研究细胞学过程以及细胞功能起着重要的作用。
通过尼氏染色，可以观察到细胞核的大小、形态以及染色质的状态，进而对细胞的生理状态和变化进行分析和研究。
2.2 病理学诊断在病理学中，尼氏染色法可用于诊断各种组织细胞核变化引起的疾病。
例如，在肿瘤病理学中，可以通过尼氏染色观察肿瘤细胞核的异常形态和结构，以便进行病理诊断和鉴定。
2.3 医学教学尼氏染色法是一种简单、易于操作的细胞染色技术，因此在医学教学中非常常用。
通过尼氏染色，可以展示细胞核的结构和变化，帮助学生更好地理解和掌握细胞学的基本知识和技术。
2.4 生物科研在生物科研中，尼氏染色法也是一种重要的实验手段。
通过染色显示细胞核的形态和结构，可以对细胞内基因组的组织和分布进行观察和研究，从而揭示细胞核的功能和调控机制。
3. 优点和注意事项尼氏染色法具有以下优点：•显色清晰：尼氏酸染色剂与核蛋白质结合后，显色效果清晰，细胞核易于观察和分析。
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三、注意事项
Nissl染色液的染色能力很强，并且染色 后很难去除，请注意勿使染色液沾染皮肤和衣 物等。
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四、思考题
除了尼氏染色法以外，你知道还有哪些方 法可以对神经元进行特殊的染色，并详述其原 理和步骤。
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感谢您的欣赏！
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尼氏染色法的优势何在？
以往显示神经元中尼氏体多采用苏木精-伊红染色方法,此 法虽然也能观察到胞质中嗜碱性颗粒,但结构不甚清晰,胞 核、核仁、尼氏体颗粒模糊,分界不清,轴突、树突难以辨 认。
在尼氏染色中尼氏体清晰可辨,核、核仁也非常清晰,而且 很容易区分轴突和树突,收到了既可辨认器官又可同时观 察细胞质特殊结构的效果。
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7、切片用蒸馏水冲洗3次； 8、切片依次浸入75%、80%、95%的酒精中，每次约1min； 9、切片入特殊分色液中分色，约15s； 10、切片浸入100%酒精I，II，各1min； 11、切片浸入二甲苯I，II中透明，各5min； 12、中性树胶封片。 13、显微镜下观察照相并对尼氏染色阳性神经元进行计数。
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二、实验步骤
1、昆明小鼠以0.48%的戊巴比妥钠0.02ml/g腹腔注射麻醉， 待其麻醉后，迅速用手术剪刀及镊子剪开肚皮使其心脏 暴露，将针头从右心房插入，并用动脉夹夹住，剪破静 脉窦。
2、灌流和固定：先用生理盐水灌注（约30min），待小鼠 肝脏变白后，再换成4%多聚甲醛灌流，直到小鼠肝脏变 硬，尾巴僵硬为止（约2h）。
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尼氏染色中尼氏体受染后呈块状(形如虎斑) 或颗粒状,核周围尼氏体颗粒较大,近边缘 处较小而细长。在电镜下观察，尼氏体主 要由平行排列的粗面内质网和核糖体组成。
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尼氏体的功能是什么？
尼氏体的主要功能是合成蛋白质， 作为神经活动时所需，如细胞中 的某些成分的更新以及产生神经 递质有关的蛋白质和酶类。轴突 端的蛋白质大都来自胞体的尼氏 体。神经元在兴奋传导过程中， 不断消耗某些蛋白质物质，尼氏 体可合成新的蛋白质以补充这种 消耗。
3、待充分固定后，剪下小鼠头部并开颅取脑，再浸入4% 多聚甲醛1d。
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4、将脑组织用502胶水固定，在振荡切片机上切片， 厚度为25μm。
5、将切好的脑片浸于0.5%的明胶中，用毛刷将脑片贴 到预先用明胶处理的载玻片上，然后自然风干。
6、切片染色：将脑片置于0.5%甲苯胺蓝（母液：甲苯 胺蓝1g，无水乙醇100ml。使用时按1:1比例与新 鲜的0.1%NaCl溶液混合成工作液）或焦油紫（焦 油紫0.1g；蒸馏水99ml；1%冰醋酸1ml）中室温下 染色30min；
在生理情况下, Nissl小体大而数 量多，说明神经细胞合成蛋白质 的功能较强；相反在神经细胞受 到损伤时，Nissl小体的数量会减 少甚至消失。
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用于尼氏染色的常用染料有：焦油紫（cresyl violet）、硫堇（thionine）和甲苯胺蓝 (toluidine blue)。