尼氏Nissl染色
神经通路示踪技术 尼式染色
其它固定剂： 酒精（alcohol） ： 使蛋白质脱水而致不可逆性的凝固变性。对组织有固定、硬化兼 脱水的作用 醋酸（acetic acid）： 对核蛋白有明显的沉淀作用，不能单独使用，常与酒精联合使用 苦味酸（picric acid）： 沉淀蛋白并溶解粘蛋白，使组织柔软。 铬酸（chromic acid） ： 强氧化剂，能沉淀所有蛋白。重铬酸钾是氧化剂，对蛋白和脂类 有固定作用，尤其是脂类。对核蛋白有溶解作用。 氯化汞（mercury chloride） ： 沉淀各种蛋白。但必须脱汞 锇酸（osmium tetroxide） ： 强氧化剂。蛋白的固定作用较好，不发生沉淀，组织几乎不收缩。 但渗透力弱。 丙酮（acetone）
⒊ Weigert 氏髓鞘染色法 有髓神经纤维的髓鞘主要组成成分是磷脂，如 以铬盐或铁钒媒染使之与苏木精结合，再藉分 色处理，就能着色清晰，并在中枢神经系统显 示其分布状态。髓鞘染色除可用于显示神经纤 维干、束外，更多用于中枢神经系统纤维束的 追踪。因为，尚未髓鞘完全的纤维束（如婴儿 皮质脊髓侧束），或髓化受到损害而产生溃变 的纤维束，在与正常已髓化的纤维对比之下可 以区别。用劳克坚牢蓝（Luxol fast blue）类 染料染色也可显示髓鞘，操作时也较容易。但 染色作用较慢，染色也较浅。
5．冷冻干燥切片(freezing drying sectioning)： 将新鲜组织放入经液氮预冷（-160℃）的异戊 烷中骤冷后，入真空内干燥，已干燥的组织块 进行真空包埋后切片。其特点是细胞在骤冷的 同时立即停止一切生物化学变化，可研究骤冷 时细胞内的物质变化状况。 6．超薄切片(ultrathin sectioning)：通过固定、 脱水、包埋、切片和染色等步骤。固定分预固 定和后固定。包埋剂多为环氧树脂。切片用醋 酸铀及枸橼酸铅进行电子染色，在电子显微镜 下观察。
尼氏染色原理
尼氏染色原理
尼氏染色是一种常用的细胞染色方法，它可以使细胞核和染色体显色，从而方便观察和研究。
尼氏染色的原理是利用染色剂尼氏染料（Nissl stain）对细胞核和染色体的亲和力，使其显色。
尼氏染料是一种碱性染料，它的分子结构中含有苯胺基和吡啶基。
在细胞中，尼氏染料会与细胞核和染色体中的核蛋白质结合，形成紫色的染色体。
同时，尼氏染料还可以染色细胞质中的核糖体和内质网等细胞器。
尼氏染色的具体操作步骤包括：将待染细胞固定在载玻片上，用尼氏染料染色，洗去多余染料，脱水、透明化和封片。
在染色过程中，尼氏染料的浓度、染色时间和洗涤次数等因素都会影响染色效果。
尼氏染色广泛应用于神经科学、组织学、病理学等领域。
在神经科学中，尼氏染色可以用于观察神经元的形态和分布情况，研究神经元的功能和病理变化。
在组织学和病理学中，尼氏染色可以用于诊断和鉴别组织病变，如神经元退行性变、肿瘤等。
总之，尼氏染色是一种简单、快速、经济的细胞染色方法，具有广泛的应用价值。
尼氏染色原理
尼氏染色原理
尼氏染色原理是指利用生物体细胞核中染色体的染色现象，对染色体进行分类和研究的原理。
这一原理是20世纪初德国生物学家尼氏首先提出的，被广泛应用于生物学、医学、遗传学等领域。
尼氏染色原理的核心是：染色体在细胞分裂过程中，会出现一系列特征性的染色带，这些染色带的大小、位置、形状等特征是每个染色体都具有独特的标识。
通过对这些特征进行观察和比较，可以对染色体进行分类和研究。
尼氏染色原理的应用非常广泛。
例如，在医学领域中，利用尼氏染色原理可以对人类染色体进行研究，对染色体异常、突变等问题进行诊断和治疗。
在遗传学领域中，尼氏染色原理也被用于对物种间的基因差异进行研究和分析。
尼氏染色原理的研究对于人类的认识和探索生命起着重要的作用。
通过对染色体的分类和研究，可以揭示细胞遗传物质的结构和功能，并为疾病的治疗和预防提供科学依据。
尼氏染色原理是对生物体内染色体的分类和研究的基础原理，它在生物学、医学、遗传学等领域中有着广泛的应用，对于人类认识和探索生命起着重要的作用。
尼氏染色液(焦油紫法)
尼氏染色液(焦油紫法)产简介：Leagene 尼氏染色液(Nissl Stain ，焦油紫法)采用焦油紫(Cresyl violet)作为核心染料，焦油紫具有感光作用，能够很好地显示尼氏体的变化。
主要优点是操作简便、染色稳定、适用范围广，可以用于石蜡组织切片的尼氏物质、神经元等的染色，尼氏体的存在和消失是神经细胞是否受损的重要指标，当发生脑炎、脑缺血、轴突反应等情况时，尼氏体会发生溶解甚至消失。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 新鲜组织固定于乙醇、Carnoy 固定液或10%中性福尔马林溶液后，常规脱水包埋。
2、 切片厚6-8µm，常规脱蜡至水。
3、 切片入Cresyl violet Stain ，将染色缸置于恒温箱56℃浸染或37℃。
如果染色效果不佳，可考虑酒精灯上加温使切片冒气泡为止。
4、 冷蒸馏水冲洗。
5、 入Nissl Differentiation 分化，在显微镜下观察至背景接近于无色为止。
6、 无水乙醇迅速脱水。
二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果：尼氏体紫色 背景接近于无色或浅蓝色注意事项：1、 尼氏体离体后容易溶解，所以组织取出后应立即固定，否则难以着色。
2、 组织固定起着非常重要的作用，固定可采用乙醇、Carnoy 固定液或中性福尔马林溶液。
3、 本染色试剂盒对石蜡组织切片的尼氏染色效果较好。
4、 石蜡切片厚度6～8µm 或25µm(皮质神经元密度的评估要用25µm 厚的切片)。
编号 名称 DK0022 3×100ml Storage 试剂(A): Cresyl violet Stain 100ml RT 避光 试剂(B): Nissl Differentiation 2×100ml RT 使用说明书 1份5、染色后的标本务必避光保存，否则容易褪色。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
尼氏染色法的原理和应用
尼氏染色法的原理和应用1. 原理尼氏染色法是一种常用的细胞染色技术，用来染色显示细胞核。
它是以尼氏酸为染色剂，可以与细胞核内的核蛋白质结合，使细胞核显色，从而方便观察细胞核形态和核染色质的结构。
尼氏染色法的原理主要包括以下几个步骤：1.细胞固定：首先，需要将待染细胞固定在载玻片上，一般使用甲醛等化学物质进行固定。
固定后的细胞可以保持形态和结构的完整性。
2.脱水：固定后的细胞需要经过脱水处理，即将细胞质内的水分逐渐脱除，以便后续的染色和显微观察。
一般用乙醇进行脱水处理。
3.染色：在脱水后的细胞上滴加尼氏酸染色剂，尼氏酸可以与细胞核内的核蛋白质结合，从而显色细胞核。
一般情况下，染色时间为几分钟至数十分钟。
4.水洗：尼氏染色完成后，需要用水充分洗去多余的染色剂，以防止染色过深。
5.固定：洗净后，可以用碘或碘酒溶液进行固定处理，同时也有助于增强染色效果。
2. 应用尼氏染色法在生物学和医学领域有广泛的应用，主要用于以下方面：2.1 细胞学研究尼氏染色法可以染色显示细胞核的形态和结构，对于研究细胞学过程以及细胞功能起着重要的作用。
通过尼氏染色，可以观察到细胞核的大小、形态以及染色质的状态，进而对细胞的生理状态和变化进行分析和研究。
2.2 病理学诊断在病理学中，尼氏染色法可用于诊断各种组织细胞核变化引起的疾病。
例如，在肿瘤病理学中，可以通过尼氏染色观察肿瘤细胞核的异常形态和结构，以便进行病理诊断和鉴定。
2.3 医学教学尼氏染色法是一种简单、易于操作的细胞染色技术，因此在医学教学中非常常用。
通过尼氏染色，可以展示细胞核的结构和变化，帮助学生更好地理解和掌握细胞学的基本知识和技术。
2.4 生物科研在生物科研中，尼氏染色法也是一种重要的实验手段。
通过染色显示细胞核的形态和结构，可以对细胞内基因组的组织和分布进行观察和研究，从而揭示细胞核的功能和调控机制。
3. 优点和注意事项尼氏染色法具有以下优点：•显色清晰：尼氏酸染色剂与核蛋白质结合后，显色效果清晰，细胞核易于观察和分析。
尼氏染色-全面
4、将脑组织用502胶水固定，在振荡切片机上切片， 厚度为25μm。 5、将切好的脑片浸于0.5%的明胶中，用毛刷将脑片贴 到预先用明胶处理的载玻片上，然后自然风干。 6、切片染色：将脑片置于0.5%甲苯胺蓝（母液：甲苯 胺蓝1g，无水乙醇100ml。使用时按1:1比例与新 鲜的0.1%NaCl溶液混合成工作液）或焦油紫（焦 油紫0.1g；蒸馏水99ml；1%冰醋酸1ml）中室温下 染色30min；
尼氏染色法的优势何在？ 尼氏染色法的优势何在？
以往显示神经元中尼氏体多采用苏木精-伊红染色方法,此 法虽然也能观察到胞质中嗜碱性颗粒,但结构不甚清晰,胞 核、核仁、尼氏体颗粒模糊,分界不清,轴突、树突难以辨 认。 在尼氏染色中尼氏体清晰可辨,核、核仁也非常清晰,而且 很容易区分轴突和树突,收到了既可辨认器官又可同时观 察细胞质特殊结构的效果。
பைடு நூலகம்
7、切片用蒸馏水冲洗3次； 8、切片依次浸入75%、80%、95%的酒精中，每次约1min； 9、切片入特殊分色液中分色，约15s； 10、切片浸入100%酒精I，II，各1min； 11、切片浸入二甲苯I，II中透明，各5min； 12、中性树胶封片。 13、显微镜下观察照相并对尼氏染色阳性神经元进行计数。
三、注意事项
Nissl染色液的染色能力很强，并且染色 后很难去除，请注意勿使染色液沾染皮肤和衣 物等。
四、思考题
除了尼氏染色法以外，你知道还有哪些方 法可以对神经元进行特殊的染色，并详述其原 理和步骤。
用尼氏染色法观察小鼠海马及 皮层中神经元的分布情况
神经生物学实验室
一、实验原理
尼氏染色法（Nissl staining）是德国病理学家 F.Nissl（1860-1919）于1892年创立的，碱性染料染色 后发现了神经元胞体中的尼氏体。 神经元是神经系统的结构和功能单位,尼氏体是神经元 的特征性结构之一,尼氏体（Nissl body）又称虎斑,广 泛存在于神经元胞体和树突内,具有嗜碱性的特点。
尼氏染色全面
7、切片用蒸馏水冲洗3次； 8、切片依次浸入75%、80%、95%的酒精中，每次约1min； 9、切片入特殊分色液中分色，约15s； 10、切片浸入100%酒精I，II，各1min； 11、切片浸入二甲苯I，II中透明，各5min； 12、中性树胶封片。 13、显微镜下观察照相并对尼氏染色阳性神经元进行计数。
用尼氏染色法观察小鼠海马及 皮层中神经元的分布情况
神经生物l staining）是德国病理学家 F.Nissl（1860-1919）于1892年创立的，碱性染料染色 后发现了神经元胞体中的尼氏体。
神经元是神经系统的结构和功能单位,尼氏体是神经元 的特征性结构之一,尼氏体（Nissl body）又称虎斑,广 泛存在于神经元胞体和树突内,具有嗜碱性的特点。
在生理情况下, Nissl小体大而数 量多，说明神经细胞合成蛋白质 的功能较强；相反在神经细胞受 到损伤时，Nissl小体的数量会减 少甚至消失。
用于尼氏染色的常用染料有：焦油紫（cresyl violet）、硫堇（thionine）和甲苯胺蓝 (toluidine blue)。
二、实验步骤
3、待充分固定后，剪下小鼠头部并开颅取脑，再浸入4% 多聚甲醛1d。
4、将脑组织用502胶水固定，在振荡切片机上切片， 厚度为25μm。
5、将切好的脑片浸于0.5%的明胶中，用毛刷将脑片贴 到预先用明胶处理的载玻片上，然后自然风干。
6、切片染色：将脑片置于0.5%甲苯胺蓝（母液：甲苯 胺蓝1g，无水乙醇100ml。使用时按1:1比例与新 鲜的0.1%NaCl溶液混合成工作液）或焦油紫（焦 油紫0.1g；蒸馏水99ml；1%冰醋酸1ml）中室温下 染色30min；
1、昆明小鼠以0.48%的戊巴比妥钠0.02ml/g腹腔注射麻醉， 待其麻醉后，迅速用手术剪刀及镊子剪开肚皮使其心脏 暴露，将针头从右心房插入，并用动脉夹夹住，剪破静 脉窦。
神 经 生 物 学 常 用 形 态 学 研 究 方 法
组织材料的处理
1.固定(fixation) 目的：防止组织自溶，保护组织免受微生 物侵袭，保存组织成份不被破坏丢失， 维持组织结构使之正确的反应生活状态。 固定剂：4%多聚甲醛（常用） 方法：浸泡固定，灌注固定 2.切片(section)：石蜡切片，冰冻切片
一、一般染色方法
10×
40×
HRP labelling neurons in oculomotor nucleus of cat
HRP labelling neurons in dLGN
40×
Doublelabelling of HRP and
Glutamate in rat lateral geniculate nucleus
NOS与 NADPH-d活性的比较
• Nos活性：a.协同因子有Ca2+、CaM、 NADPH阻断任何一个协同因子结合位点都 可抑制Nos • b.底物:L-Arg • NADPH-d活性:a:不需CaM、Ca2+作为协 同因子，只需NADPH • b；底物：NBT(亚硝基四唑氮蓝）
NOS活性≠NADPH-d活性,使用NOS 抑制剂后不能用NADPH-d组化染色来 分析NOS活性。 NADPH-d组化染色阳性细胞中可含有 NOS,但不能说明有NOS 活性， NADPH-d组化染色阴性细胞中一般不 含NOS.
4,Washing:去掉非特异性结合 5, Incubate in second antibody :浓度 1/100~200,二抗必须针对一抗动物种属， 二抗上结合的物质不同，显色用不同方法： ABC，PAP，荧光显色，IGSS。ABC， PAP经典、产物稳定，荧光法不需三抗， 不需脱水透明。但荧光易淬灭。IGSS非 常敏感，不用DAB做反应，但背景难以控 制。
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尼氏(Nissl)染色液
产品简介：
碧云天生产的尼氏(Nissl)染色液(Nissl Staining Solution)是神经生物学家广泛使用的一种Nissl染色液，用于石蜡或冰冻切片神经元细胞浆中的尼氏小体(Nissl body)染色。
Nissl染色是以德国的精神病学家和神经病理学家Franz Nissl的名字命名的。
Nissl染色液染色后呈蓝紫色，常用于显示脑或脊髓的基本神经结构。
Nissl小体大而数量多，说明神经细胞合成蛋白质的功能较强；相反在神经细胞受到损伤时，Nissl小体的数量会减少甚至消失。
本Nissl染色液染色的有效成分是Cresyl violet。
Cresyl violet可以和RNA或DNA结合，可以染色粗面型内质网上的核糖体，也可以染色细胞核。
染色后使细胞体呈现斑驳的(mottled)蓝紫色染色。
一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。
保存条件：
室温避光保存，至少一年有效。
注意事项：
特别注意：Nissl染色液的染色能力很强，并且染色后很难去除，请注意勿使染色液沾染皮肤和衣物等。
需自备4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。
如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯，中性树胶或其它封片剂。
如果样品是石蜡切片，需自备90％乙醇，无水乙醇以及二甲苯。
样品数量较多时，可以使用碧云天生产的染色架和染色缸，便于操作。
第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 样品处理
a) 对于石蜡切片：
二甲苯中脱蜡5-10分钟，共三次。
注：脱蜡不充分会导致染色不均匀。
无水乙醇5分钟。
90%乙醇2分钟。
70%乙醇2分钟。
蒸馏水2分钟。
b) 对于冰冻切片：
蒸馏水2分钟。
c) 对于培养细胞：
用4%多聚甲醛固定10分钟以上。
蒸馏水洗涤2分钟。
换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。
2. 尼氏(Nissl)染色
对于上述处理好的样品：
尼氏(Nissl)染色液染色染色3-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，染色时温度提高到37-50℃对于25-50微米等较厚的切片可以使染色更均匀）。
蒸馏水洗涤2次(每次数秒钟即可)。
95%乙醇约5秒。
此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。
如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照
后续步骤进行脱水、透明和封片处理。
注：如果用于免疫组化等染色后的复染，可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行尼氏(Nissl)染色。
3. 脱水、透明、封片或进行其它染色
a) 脱水、透明、封片：
95%乙醇脱水2分钟。
换用新鲜的95%乙醇再脱水2分钟。
二甲苯透明5分钟。
换用新鲜的二甲苯，再透明5分钟。
用中性树胶或其它封片剂封片。
显微镜下观察，细胞呈现斑驳的蓝紫色染色。
b)进行其它染色：
如果进行免疫荧光染色，或进行Hoechst等荧光染料的染色，在Nissl染色液染色后：
70％乙醇洗涤2次，每次2分钟。
PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟。
然后就可以进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色了。
使用本产品的文献：
1. Liu Q, Zhang M, Qin WJ, Wang YT, Li YL, Jing L, Li JX, Lawrence AJ, Liang JH.
Septal nuclei critically mediate the development of behavioral sensitization to a single morphineinjection in rats..
Brain Res. 2012 May 15;1454:90-9..
2. Xiao Y, Guan ZZ, Wu CX, Li Y, Kuang SX, Pei JJ
Correlations between cholinesterase activity and cognitive scores in post-ischemic rats andpatients with vascular dementia.
Cell Mol Neurobiol. 2012 Apr;32(3):399-407. doi: 10.1007/s10571-011-9770-6. Epub 2011 Nov 17.
3. Wang S, Duan Y, Su D, Li W, Tan J, Yang D, Wang W, Zhao Z, Wang X
Delta opioid peptide [D-Ala2, D-Leu5] enkephalin (DADLE) triggers postconditioning againsttransient forebrain ischemia.
Eur J Pharmacol. 2011 May 11;658(2-3):140-4.。