大肠菌群平板计数法电子教案
大肠菌群计数平板法检验原始记录
样品名称
样品编号
检验项目
大肠菌群平板计数法
检验日期
检验地点
□BSL-2实验室
□洁实验净室
检验依据
判定依据
检验仪器
□生化培养箱□均质器□菌落计数仪
□生物安全柜□超净台□电子天平
□恒温振荡器□冰 箱□冰 箱
检验试剂
VRBA琼脂、BGLB肉汤、磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水等。
h
稀释度
空白
2
25g(mL)样品+225mL稀释液均质（或原液直接检验）；
平板A1
平板A2
3
10倍系列稀释；
结果
平板B1
4
选2-3个适宜稀释度样品匀液；每梯度接种VRBA平板2个；
平板B2
结果
5
36±1℃，18-24h培养，计数典型和可疑菌落；
平板C1
平板C2
6
挑10个可疑菌落接种于BGLB肉汤管36±1℃，24-48h；
结果
平板D1
7
若BGLB肉汤管产气则阳性；
平板D2
结果
8
按比例记录结果，报告。
平板E1
平板E2
温度（℃）
相对湿度（％RH）
结果
证实实验比例
结果
报告
检验员： 审Βιβλιοθήκη 员：样品制备□固体和半固体样品：无菌称取25g，置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌灭菌袋内，进行均质处理。
□液体样品：吸取25mL于样品于225mL磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水中，混匀。
检验程序
大肠菌群计数[ CFU/g (mL ) ]
1
实验采集抽样方案来自GB4789.1；
大肠菌群平板计数法实验报告
大肠菌群平板计数法实验报告
一、实验目的
本实验旨在通过大肠菌群平板计数法，检测两种不同类型的样品，分
别研究其大肠菌群的数量。
二、实验原理
大肠菌群平板计数法是一种测定复合微生物群落中不同细菌种群数量
的方法，通过在培养基上培养细菌分离特定细菌和其他微生物，然后在培
养基表面形成菌落，把形成的菌落数目统计出来就可以测定某一种细菌的
数量。
三、实验材料
1.无菌培养环：用于现场取样，主要成分是聚丙烯，尺寸为20
cm×40 cm；
2.筛选液：用于本实验的筛选液是根据微生物学原理，采用等量的乳
酸盐，氯化钠和磷酸盐等有机物质制备而成的液体，用于筛选出大肠菌群；
3.抗生素优势培养基：用于本实验，培养基由甘露醇、尿素、抗生素
等制备而成，用于培养出大肠菌群；
4.保存液：用于本实验的液体是根据微生物学原理，采用等量的乳酸盐、氯化钠和磷酸盐等有机物质制备而成，用于保存细菌；
5.透明细菌示踪液：用于本实验，示踪液由甘露醇、尿素、抗生素等
有机物质制备而成，用于追踪细菌的繁殖情况。
四、实验步骤
1.采样：用无菌环把样品和筛选液放在瓶中，搅拌均匀，然后加入适量。
大肠菌群检测中平板计数法主要操作要领
大肠菌裙检测是一项非常重要的微生物检测工作，它可以帮助我们了解环境和食品中是否存在大肠菌裙，从而保证人们的健康安全。
在大肠菌裙检测中，平板计数法是一种常用的检测方法。
下面将介绍大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领。
1.准备工作在进行大肠菌裙检测之前，需要准备相应的实验器材和培养基。
实验器材包括平板计数仪、移液器、无菌培养皿等。
培养基一般选择大肠埃希氏菌（EC）培养基。
2.样品处理将待测样品取适量放入无菌容器中，进行适当的稀释。
这一步要确保样品的稀释倍数适中，以保证后续的计数结果准确。
3.接种和培养取一定量的处理过的样品，在无菌工作台上均匀涂抹于含有适量培养基的培养皿上，然后进行培养。
培养条件一般为37摄氏度，培养时间为24小时。
培养后会形成菌落，这些菌落代表了原始样品中的细菌数量。
4.计数和记录在培养后，利用平板计数仪对菌落进行计数。
计数的时候需要注意避免重复计数同一菌落，保证计数准确。
需要记录计数结果，包括菌落数量和相应的单位。
5.结果分析根据计数结果，可以对原始样品中的大肠菌裙数量进行估算。
可以通过对对照组和样品组的比较来判断样品中大肠菌裙的数量是否合格。
大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领就是以上几点。
通过严格按照这些要领进行操作，可以确保检测结果的准确性和可靠性。
在进行操作过程中，还需要遵守无菌操作规范，确保实验过程中不受外界污染。
希望大家在进行大肠菌裙检测时能够严格按照操作要领进行，保证测试结果的准确性，从而更好地保障人们的健康安全。
大肠菌裙检测中的平板计数法是一种经典的微生物计数方法，它主要用于测定食品、饮用水、环境等样品中大肠菌裙的数量。
在这个过程中，我们需要注意几个关键的环节，来保证实验的准确性和结果的可靠性。
在准备工作环节，我们需要保证实验器材和培养基的质量。
实验器材一定要经过严格的消毒和清洁，以免外来细菌的污染影响实验结果。
培养基的选用也尤为重要，要选择与待测细菌的生长要求相适应的培养基，以保证细菌在培养基上的正常生长。
计量大肠菌群数量的计数方法
计量大肠菌群数量的计数方法大肠菌群是指在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
直接或间接来自人与温血动物的肠道：包括肠杆菌科的大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属和克雷伯菌属，其中大肠埃希氏菌属为最典型大肠埃希氏菌。
一、卫生学意义人与温血动物粪便污染的指示菌：•大肠埃希氏菌——粪便近期污染；•其他菌属——粪便陈旧污染。
肠道致病菌污染食品的指示菌：•与肠道致病菌（如沙门氏菌、志贺氏菌）来源相同；在外界生存的时间与主要肠道致病菌一致。
二、修订的主要内容本标准与GB4789.2-2010相比，主要修改如下：1、删除了标准的英文名称2、修改了发布单位名称2010版本“中华人民共和国卫生部”2016版本“中华人民共和国国家卫生盒计划生育委员会”和“国家食品药品监督管理总局”3、前言：本标准代替GB4789.3—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》、GB/T4789.32—2002《食品卫生微生物学检验大肠菌群的快速检测》和SN/T0169—2010《进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》大肠菌群计数部分。
本标准与GB4789.3—2010相比,主要变化如下:———增加了检验原理;———修改了适用范围;———修改了典型菌落的形态描述;———修改了第二法平板菌落数的选择;———修改了第二法证实试验;———修改了第二法平板计数的报告。
三、大肠菌群计数的两种方法第一法MPN法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数。
检验原理：MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。
待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度,应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。
第二法平板计数法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。
检验原理：大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸,在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色,带有或不带有沉淀环的菌落。
饮料—大肠菌群的测定—平板计数法
3.3 乳糖发酵管 3.3.1 成分
蛋白胨
20g
乳糖
10g
0.04％溴甲酚紫水溶液
25mL
蒸馏水 3.3.2 制法
1000mL
将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正 pH7.4,加入指示剂,分装 3mL,并放入一个小倒管,115℃高
压灭菌 15min。
3.4 EC 肉汤
3.4.1 成分
1
胰蛋白胨
20g
3 号胆盐(或混合胆盐)
匀稀释液。
5.2.2 用 1 mL 灭菌吸管吸取 1：10 稀释液 1 mL，注入含有 9 mL 灭菌生理盐水或其他稀释
液的试管内，振摇试管混匀，做成 1：100 的稀释液。
5.1.3 另取 1 mL 灭菌吸管，按上条操作依次做 10 倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用 1
支 1 mL 灭菌吸管。
5.1.4 根据饮料卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种 3 管。
FSPYL026 饮料 大肠菌群的测定 平板计数法
F_SP＿ YL＿026
饮料—大肠菌群的测定—平板计数法
1 范围 本方法采用平板计数法测定饮料中的大肠菌群。
本方法适用于饮料中大肠菌群的测定，饮料中大肠菌群数系以 １００ ｍＬ（ｇ）检样内大肠
菌群最可能数（ＭＰＮ）表示。
2 原理
饮料检样经处理，在需氧及兼性厌氧、37℃条件下培养，通过计数报告检样中大肠菌群 最可能数。大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
3.2.1 成分
蛋白胨
10g
乳糖
10g
磷酸氢二钾
2g
琼脂
17g
2%伊红 Y 溶液
20mL
大肠杆菌平板计数法检验程序
大肠杆菌平板计数法检验程序《大肠杆菌平板计数法检验程序》大肠杆菌平板计数法，这就像是一场在微观世界里数小虫子的有趣活动。
咱们先来说说样品的采集。
这就好比去菜市场挑菜，得挑那些有代表性的。
如果是检测食品中的大肠杆菌，那就要从不同部位取样，可不能只取看着好的那一块儿。
要是检测水样，得用专门的采样器具，就像钓鱼要有合适的鱼竿一样，准确地采集到想要检测的水。
这采集过程可得小心，要是不小心把外面的细菌带进去了，那就像是炒菜的时候不小心把沙子混进米里，全乱套了。
采完样之后就是样品的处理啦。
对于固体样品，要把它变成液体，这有点像把一块硬邦邦的石头慢慢磨成粉末再加水变成浆糊的感觉。
要通过合适的稀释液来稀释，这稀释可是有讲究的，就像冲咖啡，水太多了没味道，水太少了又太浓。
稀释的倍数得根据预估的大肠杆菌数量来确定，要是预估不准，就像猜灯谜猜得太离谱，最后结果肯定不对。
接下来就是接种这个关键步骤了。
把稀释好的样品接种到平板培养基上，这就像把种子种到地里一样。
不过这个“种子”是咱们看不见的细菌。
用特定的工具，轻轻地把样品均匀地涂抹在培养基上，动作要轻，就像给小婴儿擦脸一样温柔。
如果涂得不均匀，那长出来的菌落就会有的地方密有的地方稀，就像头发掉得一块一块的斑秃，很难准确计数。
然后就是培养啦。
把接种好的平板放到合适的温度和环境下，就像把小宠物放到温暖舒适的小窝里。
大肠杆菌喜欢在特定的温度下生长，这个温度就像是它的“最舒服的被窝温度”。
在培养的过程中，要像照顾生病的朋友一样，时不时去看看，但是又不能老是打扰它。
如果环境不对，比如说温度忽高忽低，那大肠杆菌可能就不好好生长，就像人在冷热交替的环境里容易生病一样。
等培养到一定时间，就可以看到平板上长出一个个的菌落啦。
这些菌落就像小蘑菇一样冒出来。
这时候就要开始计数。
计数的时候可得仔细，就像数钱一样，一个都不能错。
有时候菌落会长得比较密集，这时候就需要借助一些工具，比如放大镜，把那些小菌落看得更清楚。
大肠菌群计数课件(1)
1
28
3.0
0.15 11
2
2
2
35
6.1
1.2
18
2
3
0
29
6.2
1.2
18
2
3
1
36
9.4
3.6
38
3
0
0
23
3.6
0.17 18
3
0
1
38
7.2
1.3
18
3
0
2
64
11
3.6
38
3
1
0
43
7.4
1.3
20
3
1
1
75
11
3.6
38
3
1
2
120
11
3.6
42
3
1
3
160
15
4.5
42
3
2
0
93
16
6.1.2 液体食品：以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐 水的无菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠)中,以30cm幅度、于 7s内振摇25次(或以机械振荡器振摇),制成1:10的样品匀液。
6.1.3 样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1 mol/L NaOH或1 mol/L HCl予以调节。
37
420
40
420
18
420
37
420
40
430
90
1,000
42
1,000
90
2,000
180
4,100
420
--
现国标的MPN表与原国标的MPN表的不同点：
平板菌落计数法操作步骤(精)教学文稿
平板菌落计数法操作步骤(精)教学文稿平板菌落计数法操作步骤（精）平板菌落计数法一、目的要求学习平板菌落计数的基本原理和方法。
二、基本原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2~3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
现在常使用菌落形成单位。
该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测。
三、器材大肠杆菌悬液，LB琼脂培养基，1mL 5mL无菌吸管，无菌平皿，无菌水，无菌试管，试管架和记号笔等。
四、操作步骤1、编号取无菌平皿9套，分别标明为10-4、10-5、10-6各三套，另取6支无菌试管分别标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2、稀释用1mL无菌吸管吸取1mL已充分混匀的大肠杆菌菌悬液，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释，将多余的菌液放回原菌液中。
将10-1试管充分振荡、混匀。
另取一支1ml吸管插入10-1试管中来回吹吸菌液三次，进一步将菌体分散、混匀。
动作不要太猛太快，吸时插入，吹时提出，再用此吸管吸取10-1菌液1mL精确地放0.5mL至10-2试管中，此即为100倍稀释，依次类推，3、取样用三支1ml无菌吸定分别吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌悬液各1mL对号放入编好号的无菌平皿中，每个平皿放0.2mL4、倒平板尽快向上述盛有不同稀释菌液的平皿中倒入融化后冷却至45度的LB培养基约15-20ml，置水平位置迅速旋动平皿，使培养基与菌液混合均匀。
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精品文档
精品文档大肠菌群平板计数法
一、操作步骤
1.样品的稀释
2.选取2个～3个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。
同时取1mL 生理盐水加入无菌平皿作空白对照。
3.及时将15 mL～20 mL冷至46 ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。
小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA覆盖平板表层。
翻转平板，置于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
4.平板菌落数的选择
选取菌落数在15 CFU～150 CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。
典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大。
5.证实试验
从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36 ℃±1 ℃培养24 h～48 h，观察产气情况。
凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
6.大肠菌群平板计数的报告
经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8.3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。
例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：
100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL）。