大肠菌群计数重点
大肠菌群计数检验重点
第一法 大 肠菌群 MPN 计 数法
第二法 大 肠菌群平 板计数法
一．3、5、7小组： 使用第一法（附带做第二法中，两个平板接 种），以自来水为样品。
二．4、6小组： 使用第二法（附带做第一法中，3个试管初发酵 试验），以污水为样品。
第一法：检样稀释与初发酵试验
1
MPN：表示食品 中大肠菌群数是以 每100ML或克检 样内大肠菌群最大 可能数。一般采用 9管法.
3. 证实试验
○ 从VRBA 平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于 BGLB 肉汤管内，36 ℃±1 ℃培养24 h～48 h，观察产气情况。凡 BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
原理
溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变 （呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说 明可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群。
第一法 复发酵试验
用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中， 36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。
1. 第二法 平板菌落数的选择与证实试验
2. 平板菌落数的选择
○ 选取菌落数在15CFU～150CFU 之间的平板，分别计数平板上出现 的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色 的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm 或更大。
第二法：检样稀释与平板计数
检样稀释：同ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。 平板计数：
1. 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL稀释样品，另外一个平皿加1mL生理盐水作空白对照。 2. 及时将15—20mLVRBA（结晶紫中性红胆盐琼脂）倾注每个平皿中。 3. 待琼脂凝固后，再加3—4mLVRBA覆盖表层。翻转平板培养。
大肠菌群平板计数法的注意事项
大肠菌群是经常用来衡量食品卫生情况的重要指标，绝大部分食品都会要求检测的项目。
在食品微生物实验室里，大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是最高的，但检测过程中总会有一些小问题困扰着大家，以下来讲解一下大肠菌群平板计数法的注意事项。
方法选择相比于MPN计数法，平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。
但大肠菌群多少算是含量较高呢国标里没有明确规定，但通常认为，产品大肠菌群以100CFU/g（mL）为界，超过这个含量一般认为是含量较高。
但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测，大部分情况还是要看你的产品执行的标准。
假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g（mL），那必须选用平板计数法。
若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法具体选用哪版国标此处不再赘述。
因此，根据自己产品的情况选择适当的检测方法。
培养基的要求平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基，简称VRBA。
无论是国标，还是培养基的使用说明中都明确表示，VRBA是不需要进行灭菌的，煮沸2min即可使用。
特地点出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培养基不信任，害怕出现检测异常，那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。
大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因此大肠菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培养基带入污染的可能性是没有的。
当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的，以免容器引入污染。
另外，VRBA是一种选择性的培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证，因此VRBA培养基就不需要进行灭菌了。
但值得注意的是，VRBA需要现配现用，配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。
稀释度的确定国标中要求选择2-3个适宜的连续稀释度。
大肠菌群检测中平板计数法主要操作要领
大肠菌裙检测是一项非常重要的微生物检测工作，它可以帮助我们了解环境和食品中是否存在大肠菌裙，从而保证人们的健康安全。
在大肠菌裙检测中，平板计数法是一种常用的检测方法。
下面将介绍大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领。
1.准备工作在进行大肠菌裙检测之前，需要准备相应的实验器材和培养基。
实验器材包括平板计数仪、移液器、无菌培养皿等。
培养基一般选择大肠埃希氏菌（EC）培养基。
2.样品处理将待测样品取适量放入无菌容器中，进行适当的稀释。
这一步要确保样品的稀释倍数适中，以保证后续的计数结果准确。
3.接种和培养取一定量的处理过的样品，在无菌工作台上均匀涂抹于含有适量培养基的培养皿上，然后进行培养。
培养条件一般为37摄氏度，培养时间为24小时。
培养后会形成菌落，这些菌落代表了原始样品中的细菌数量。
4.计数和记录在培养后，利用平板计数仪对菌落进行计数。
计数的时候需要注意避免重复计数同一菌落，保证计数准确。
需要记录计数结果，包括菌落数量和相应的单位。
5.结果分析根据计数结果，可以对原始样品中的大肠菌裙数量进行估算。
可以通过对对照组和样品组的比较来判断样品中大肠菌裙的数量是否合格。
大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领就是以上几点。
通过严格按照这些要领进行操作，可以确保检测结果的准确性和可靠性。
在进行操作过程中，还需要遵守无菌操作规范，确保实验过程中不受外界污染。
希望大家在进行大肠菌裙检测时能够严格按照操作要领进行，保证测试结果的准确性，从而更好地保障人们的健康安全。
大肠菌裙检测中的平板计数法是一种经典的微生物计数方法，它主要用于测定食品、饮用水、环境等样品中大肠菌裙的数量。
在这个过程中，我们需要注意几个关键的环节，来保证实验的准确性和结果的可靠性。
在准备工作环节，我们需要保证实验器材和培养基的质量。
实验器材一定要经过严格的消毒和清洁，以免外来细菌的污染影响实验结果。
培养基的选用也尤为重要，要选择与待测细菌的生长要求相适应的培养基，以保证细菌在培养基上的正常生长。
大肠菌群计数实验报告
大肠菌群计数实验报告一、实验目的大肠菌群是一群在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
本实验旨在通过特定的检测方法对样品中的大肠菌群进行计数，以评估样品的卫生质量和安全性。
二、实验原理大肠菌群在特定的培养基和培养条件下会生长并表现出特定的生化特征。
通常使用乳糖胆盐发酵管进行初发酵，若产酸产气，则表明可能存在大肠菌群。
随后将初发酵阳性的样品转接至伊红美蓝琼脂平板进行分离培养，典型的大肠菌群菌落具有特定的形态特征。
最后通过革兰氏染色和证实试验，确认大肠菌群的存在，并根据阳性管数采用相应的计数方法得出样品中的大肠菌群数量。
三、实验材料与设备1、样品：＿____2、培养基和试剂乳糖胆盐发酵管伊红美蓝琼脂平板革兰氏染色液（结晶紫染液、碘液、95%乙醇、沙黄染液）生理盐水3、仪器设备恒温培养箱无菌移液管（1ml、10ml）无菌培养皿显微镜四、实验步骤1、样品处理称取或吸取一定量的样品，加入适量的生理盐水，制成 1:10 的均匀稀释液。
根据样品的污染程度，进行适当的梯度稀释。
2、初发酵试验用无菌移液管吸取 1ml 稀释液，分别注入到 3 支乳糖胆盐发酵管中。
置于 36℃±1℃恒温培养箱中培养 24h±2h，观察产酸产气情况。
3、分离培养对初发酵阳性的发酵管，用接种环挑取培养物，在伊红美蓝琼脂平板上进行划线分离。
置于 36℃±1℃恒温培养箱中培养 18h～24h。
4、复发酵试验挑取伊红美蓝琼脂平板上可疑的大肠菌群菌落，进行革兰氏染色和证实试验。
革兰氏染色：将菌落涂片、固定，经过结晶紫染色、碘液媒染、乙醇脱色、沙黄复染后，在显微镜下观察细菌的形态和革兰氏染色反应。
证实试验：将可疑菌落接种到乳糖发酵管中，置于 36℃±1℃恒温培养箱中培养 24h±2h，观察产酸产气情况。
5、结果计算根据初发酵阳性管数和复发酵证实的阳性管数，查阅相应的大肠菌群最可能数（MPN）检索表，得出样品中大肠菌群的 MPN 值。
最新大肠菌群平板计数法
大肠菌群平板计数法一、操作步骤1.样品的稀释2.选取2个～3个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。
同时取1mL 生理盐水加入无菌平皿作空白对照。
3.及时将15 mL～20 mL冷至46 ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。
小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA覆盖平板表层。
翻转平板，置于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
4.平板菌落数的选择选取菌落数在15 CFU～150 CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。
典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大。
5.证实试验从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36 ℃±1 ℃培养24 h～48 h，观察产气情况。
凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
6.大肠菌群平板计数的报告经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8.3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。
例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL） 2020年普通高等学校招生全国统一考试（山东模拟卷）语文一、现代文阅读（35分）（一）现代文阅读I（本题共5小题，19分）阅读下面的文字，完成1～5题。
材料一：《流浪地球》的票房奇迹，加上此前《三体》的热销，刘慈欣的作品影响巨大，但社会各界的评价却颇有两极分化之势。
刘慈欣的大多数作品都没有精巧的剧情或百转千回的人物感情，更多是直接甩出一个个宏大震撼的设定，靠设定本身为读者带来审美快感。
在他笔下，主人公与他人的情感联结不过是宇宙规律中很小的部分，和人类命运、宇宙洪荒相比，根本不值一提。
综训-大肠菌群计数
大肠菌群MPN计数【实验目的】通过本实验学习和掌握食品中大肠菌群计数的方法。
【实验原理】大肠菌群，即在一定培养条件下（37℃、24h之内）能发酵乳酸，产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
主要包括大肠埃希杆菌、产气肠杆菌、枸橼酸盐杆菌和副大肠杆菌。
水中的病原微生物主要来自人和温血动物的分辨，但是水中的病原微生物分析难度大，对分析者也有危害，大肠菌群在水中生存时间与病原菌基本相同，而且在粪便中数量最多，检出技术上也较为方便，最适合充当水污染的卫生指标。
目前检测大肠菌群的标准分析方法是多管发酵法，以最可能数（most probable number，MPN）来表示检测结果。
MPN是基于泊松分布的一种间接计数法。
我国《生活饮用水卫生标准》规定：生活饮用水中大肠菌群数1L不能超过3个。
【设备和材料】除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36℃±1℃冰箱：2℃～5℃天平：感量0.1g无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头菌锥形瓶：容量500mLpH计或pH比色管或精密pH试纸菌落计数器【培养基和试剂】月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：见附录A 中A.1煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤：见附录A 中A.2 无菌生理盐水：见附录A 中A.3无菌1 mol/L NaOH：见附录A 中A.4无菌1 mol/L HCl：见附录A 中A.5【检验程序】【操作步骤】1 样品的稀释1.1 以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
1.2 样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调节。
大肠菌群计数
选择2~3个适宜稀释度的样液，接种VRBA平板
36℃±1℃
18~24h
计数典型和可疑菌落
注：VRBA(结晶紫中性 红胆盐琼脂)又称为： VRB或VRBL
BGLB肉汤证实试验
36℃±1℃
18~24h
报告结果
大肠菌群计数
操作要点
样品稀释同第一法。 选取适宜的2~3个连续稀释度, 每个稀释度
接种两个灭菌平皿, 每皿1mL。另取1mL生 理盐水做个空白对照。将冷至46℃的结晶 紫中性红胆盐琼脂(VRBA)约15mL倾注于每 个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样 液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL~4 mLVRBA覆盖平板表层。
100×6/10×10-4/g(mL)=6.0×105cfu/g(mL)
大肠菌群计数
什么样的菌落必须要做证实试验?
一是非典型菌落，如在颜色、直径与典型 菌落不符合的菌落。
另一种情况是被检样品中含有乳糖以外的 其他糖类，如牛奶、饮料等样品。本来大 肠菌群的定义是发酵乳糖，但由于样品含 有的其他糖类混入了培养基，使得不能分 解乳糖但能分解其他糖类的细菌也能够长 出红色菌落，所以需要进行证实实验。
95%置信区间
阳性管数
低
高 0.10 0.01 0.001
--
9.5
2
2
0
0.15 9.6
2
2
1
0.15 11
2
2
2
1.2
18
2
3
0
1.2
18
2
3
1
3.6
38
3
0
0
0.17 18
3
0
1
1.3
18
大肠菌群检测(三)重点
基中。
5〕吸取1mL1：100样品溶液，参加到装有9mL无菌试管中摇 匀，制备成1：1000样品溶液。
6〕换1只支吸量管各取1mL1：1000溶液，参加到3只LST肉汤 培养基中。
7〕36度±1度，48小时±2小时培养后观察
3、2种培养基，LST肉汤培养基和BGLB肉汤培养基。 LST肉汤培养基：胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g氯化钠 5.0 g 乳糖 5.0 g 磷酸氢二钾〔K2HPO4〕 2.75 g 磷酸二氢钾〔KH2PO4〕 2.75 g 月桂基硫酸钠 0.1 g 蒸馏水 1 000 mL pH 6.8±0.2 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH。分装到有玻璃 小倒管的试管中，每管10 mL。121 ℃高压灭菌15 min。
思考题：
1、大肠菌群检测流程 2、回忆初发酵试验步骤 3、大肠菌群检测涉及到几种培养基？LST肉汤培养基的
制备步骤、配方是什么？
2、初发酵实验步骤 1〕称取25g固体样品，参加225mL无菌水中，均质制备成1：
10 样品溶液。 2〕用1只1mL无菌吸量管吸取1：10样品溶液，用无菌方法各
取1mL，分别参加到3只LST肉汤培养基中。 3〕吸取1mL1：10样品溶液，参加到装有9mL无菌试管中摇匀，
牛乳大肠菌群复发酵实验 BGLB液体接种操作
实训目的
进一步理解大肠菌群检测的操作流程 了解大肠菌群液体接种方法 ·进一步熟悉无菌操作要点
实训仪器与设备
酒精灯、接种针、火柴、75%酒精棉、LST肉汤培养物、 BGLB肉汤培养基
实训步骤
1、LST肉汤培养基的产气检查 观察培养完毕的LST肉汤培养液，观察小倒管中是否有 气体产生。假设有气体产生，则疑似大肠菌群，需要 进行BGLB肉汤培养基接种。
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0.001
0 1 2 0 1 0 1
MPN 21 28 35 29 36 23 38
95%置信区间
低
4.5 8.7 8.7 8.7 8.7 4.6 8.7
高
42 94 94 94 94 94 110
1
1 1 1 1 1 1 2
0
0 1 1 2 2 3 0
1
2 0 1 0 1 0 0
计数典型和可疑菌落 BGLB肉汤证实试验 36℃±1℃ 18~24h
报告结果
操作要点
样品稀释同第一法。 选取适宜的2~3个连续稀释度, 每个稀释度 接种两个灭菌平皿, 每皿1mL。另取1mL生 理盐水做个空白对照。将冷至46℃的结晶 紫中性红胆盐琼脂(VRBA)约15mL倾注于每 个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样 液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL~4 mLVRBA覆盖平板表层。
平板菌落数的选择
选择菌落数在30~150之间的平板，分别计 数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。 典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形 成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。
证实试验
从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和 可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，进 行证实试验。 BGLB肉汤管产气者，所对应的菌落即为大 肠菌群阳性菌落。
第二法
平板计数法
适用范围与培养基
平板计数法相对于MPN法来说，检验结果更 精确。 适合用于污染比较严重的样品，但对于污 染菌量太少的样品，还是MPN法更有优势。 所用培养基：VRBA琼脂、BGLB培养基。
平板计数法的检验程序
检样25g(ml)+225ml稀释液，均质
10倍系列稀释 选择2~3个适宜稀释度的样液，接种VRBA平板 36℃±1℃ 18~24h 注：VRBA(结晶紫中性 红胆盐琼脂)又称为： VRB或VRBL
发酵试验判定原则：产气为阳性。 检测步骤减少（不必分离培养），检测时 间缩短24h。 注：如接种量超过1mL，则应用双料LST肉 汤
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）
胆盐可抑制革兰氏阳性菌。 煌绿是抑菌抗腐剂，可增强对革兰氏阳性菌的 抑制作用。 乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大 肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠 道致病菌。 发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里 有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解乳糖所产生的 酸形成胆酸沉淀，培养基可由原来的绿色变为 黄色，同时可看到管底通常有沉淀。
7.2
11 7.4 11 11 15 16 9.2
1.3
3.6 1.3 3.6 3.6 4.5 4.5 1.4
18
38 20 38 42 42 42 38
3
3 3 3 3 3 3 3
0
1 1 1 1 2 2 2
2
0 1 2 3 0 1 2
64
43 75 120 160 93 150 210
17
9 17 37 40 18 37 40
TM 大肠菌群Petrifilm
测试片法原理
PetrifilmTM大肠菌群测试片是一种预先 制备好的培养基系统，含有VRB 培养基， 冷水可溶性凝胶和TTC指示剂，可增强 菌落计数效果。表面覆盖的胶膜，可截 留发酵乳糖的大肠菌群产生的气体。培 养结束后计数红点周围有气泡的菌落为 大肠菌群数。
大肠菌群PetrifilmTM 测试片检验程序
主要修改内容
将原标准拆分为大肠菌群、粪大肠菌群和大 肠杆菌计数三个独立的标准方法，标准名称 变化。
大肠菌群的 MPN 法中乳糖胆盐等培养基改为 月桂基硫酸盐胰蛋白眎(LST)肉汤为主的培养 基； 增加了对样品匀液的pH范围要求； MPN法的结果报告由原“每100g（mL）大肠 菌群的 MPN 值”，修改为“每 1 g （ mL ）大 肠菌群的MPN值”；
分布： • 广泛分布于自然环境。 • 来源于人和温血动物的粪便。 卫生学意义 • 大肠菌群作为粪便污染的指标菌评价样 品中是否受到粪便的污染。 • 大肠菌群计数的高低，直接反映了样品 受粪便污染的程度。 • 表示对人体健康是否具有潜在的危险性。
大肠菌群是理想的粪便污染的指标菌 • 是人类和温血动物肠道菌群，在数量上 占优势。 • 随粪便排出体外后，在外界环境影响下， 其存活时间应与肠道致病菌大致相似或 稍长。 • 检验方法简便，易于检出与计数。 • 对消毒剂的抵抗力应不低于肠道致病菌。
第二法： 结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA) 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）
操作步骤的改变
原标准 初发酵 EMB分离培养 染色，复发酵 报 告 报 告 现标准 LST初发酵 BGLB验证
大肠菌群检验程图(新国标MPN法)
检样 稀释 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）36±１℃，24~48±2h
不产气
根据对样品污染情况的估计,按上述操作， 依次制成系列十倍系列样品匀液。每递增 稀释1次，换用1支1mL无菌吸管。从制备样 品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过 15min。 样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时 要进行调节，如有些果汁pH值很低，如果 不进行调节，检验结果的误差可能就会比 较大。
记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未 产气者为大肠菌群阴性；对产气者，则进 行复发酵试验。 注意：以48h±2h为最终观察结果时限。结 果也以此时为最终结果。
第二步：复发酵
用接种环从所有48h±2h内发酵产气的LST 肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳 糖胆盐(BGLB)肉汤管中，置36℃±1℃温箱 内，培养48h±2h，观察产气情况。产气者， 计为大肠菌群阳性管。
4,100
--
使用MPN检索表的注意点
这个MPN检索表是ISO、FDA、AOAC、 USDA/FSIS、北欧等标准通用的。 表里的数字是有小数点的。 报告单位不同。现报告单位为g/ml，而原报告 单位是100g/ml。 原标准MPN表有64个组合，而现标准MPN表 只有40个组合。
当实验结果在MPN表中无法查找到MPN值 时，如：阳性管数为122，123，232，233 等时，建议增加稀释度(可做4~5个稀释度)， 使样品的最高稀释度能达到获得阴性终点， 然后再遵循相关的规则进行查找，最终确 定MPN值。
第一步：初发酵
选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液，液 体样品可以包括未经稀释的原液，每个稀释 度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST） 肉汤，每管接种1mL（如接种量需要超过 1mL，则用双料LST肉汤）。 36℃±1℃培养24h±2h，检查倒管内是否有 气泡产生或轻摇试管时是否有密集连续的细 小气泡从管底逸出，如未产气则继续培养至 48h±2h。
结果报告
根据大肠菌群阳性管数, 查MPN检索表，报 告每 g (mL)样品中大肠菌群的MPN值。
MPN检索表的应用
MPN（最可能数）是表示样品中活菌密度的 估测。因此MPN值只是活菌密度的估算值， 并不是样品中活菌数的真值。
1g(mL)检样中最大可能数（MPN）表
阳性管数
0.10
0 0 0 0 0 0 1
结果报告
经最后证实为大肠菌群阳性的BGLB管的百 分比乘以计数的平板菌落数，再乘以稀释 倍数，即为每g (mL)样品中大肠菌群数 。 例：10-4样品稀释液1ml在VRBA平板上有 100个典型和可疑菌落，挑取10个接种 BGLB肉汤，证实6个为阳性。则样品大肠 菌群数为： 100×6/10×10-4/g(mL)=6.0×105cfu/g(mL)
结果报告
选取菌落数在15~150之间的测试片作为计数标准。 选择菌落数在15~150之间的稀释度，平均菌落数乘以稀释 倍数报告之。 如果所有稀释度测试片上的菌落数都小于15, 则计数稀释度 最低的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 如果所有稀释度的测试片上均无菌落生长，则以(<)1乘以最 低稀释倍数报告之。 如果最高稀释度的菌落数大于150个时，计数最高稀释度的 测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 计数菌落数大于150个的测试片时，可计数一个或两个具有 代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后 乘以20即为测试片上估算的菌落数 (圆形生长面积为20 cm2)。 最终结果以“cfu/g (mL)”表示。
什么样的菌落必须要做证实试验?
一是非典型菌落，如在颜色、直径与典型 菌落不符合的菌落。 另一种情况是被检样品中含有乳糖以外的 其他糖类，如牛奶、饮料等样品。本来大 肠菌群的定义是发酵乳糖，但由于样品含 有的其他糖类混入了培养基，使得不能分 解乳糖但能分解其他糖类的细菌也能够长 出红色菌落，所以需要进行证实实验。
避免人为产生的气泡
1. 测试片上层膜缓慢落下；
2. 吸取样品时避免泡沫吸入；
3. 测试片未凝固时勿挪动；
4. 如果产生人为气泡，要作好标记，这 样才能在判读时和菌落产生气泡区分 开。另外人为气泡一般为不规则状。
结果判读
大肠菌群为红点带气泡的菌落； 圆形边缘上及边缘外的菌落不计数； 注意菌落浓度高的几种情况。
180
180 200 420 420 420 420 430
2
2 2
0
0 1
1
2 0
14
20 15
3.6
4.5 3.7
42
42 42
3
3 3
2
3 3
3
0 1
290
240 460
90