人外周血单核细胞来源的DC体外分化成熟影响因素的研究
外周血树突状细胞的诱导及其对T细胞的激发效应
外周血树突状细胞的诱导及其对T细胞的激发效应邱悦;邱玉华;蔡杰;邢卫星;何炎;季剑【期刊名称】《苏州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2001(021)003【摘要】目的建立外周血树突状细胞(Dendritic Cell,DC)的分离和培养方法,研究DC对T细胞的刺激效应.方法首先从外周血分离出非T细胞,再经贴壁和Metrizamide分离纯化去除巨嗜细胞、单核细胞及B细胞等,加入GM-CSF、TNF-α和IL-4培养.收获DC与异体T细胞混合培养.用MTT法检测T细胞的增殖,ELISA法测定培养上清中IL-2、IL-6及IFN-γ的分泌量.结果来源于外周血的DC前体细胞经细胞因子诱导培养后,其总量可扩增18.34±6.26倍,可促进异体T 细胞的增殖及细胞因子分泌.结论来源于外周血的DC,其数量和浓度均较高,而且是一种功能性DC.【总页数】3页(P263-265)【作者】邱悦;邱玉华;蔡杰;邢卫星;何炎;季剑【作者单位】苏州大学医学院解剖学教研室暨神经细胞生物学研究室;苏州大学生命科学院免疫学研究室,;苏州大学医学院解剖学教研室暨神经细胞生物学研究室;苏州大学医学院解剖学教研室暨神经细胞生物学研究室;苏州大学医学院解剖学教研室暨神经细胞生物学研究室;苏州大学医学院解剖学教研室暨神经细胞生物学研究室【正文语种】中文【中图分类】R392.11【相关文献】1.黏蛋白1基因磁转染树突状细胞诱导细胞毒性T细胞抗膀胱肿瘤免疫效应的研究[J], 孙璇;夏昕晖;廖育芬;张东方;王固新;罗刚2.树突状细胞与肿瘤细胞融合后诱导T细胞介导的抗肿瘤效应 [J], 李坚;藏磊;许化溪;马斌;邵起祥3.树突状细胞与细胞融合后诱导T细胞介导的抗肿瘤效应 [J], 王全楚;申德林;许丽芝;冯志华;周永兴4.人外周血单核细胞来源树突状细胞转染重组腺相关病毒诱导特异性T细胞的效应[J], 吴自勍;黄浩;尤长宣;罗荣城;Yong Liu;Paul L．Hermonat5.zVAD-fmk对未成熟树突状细胞诱导初始性CD4^+T细胞分化为调节性T细胞影响的体外研究 [J], 骆志清;王毅;钱坤;罗志刚;郭军华;屈小勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
DC细胞的体外诱导培养方法与前体细胞的选择
DC在机体免疫监视机制中起着哨兵作用，它能对肿瘤抗原进行识别、处理和提呈，从而启动机体对肿瘤的特异性免疫应答。
目前制备的以DC为基础的肿瘤疫苗就是利用DC这一特性，因此有效地在体外扩增培养DC是制备DC肿瘤疫苗的重要前提。
以下我们将就DC前体细胞选择以及DC培养所需细胞因子进行介绍。
一、DC前体细胞的选择1.直接分离骨髓、脐带血或外周血中DC：DC在组织中含量甚微，在血液中仅占单个核细胞总数的0.5％～1.0％，难以分离、纯化，且呈高度分化状，体外不易长期培养，更难建系。
因此该分离方法目前仅用于DC免疫活性，表面标志及DC亚型功能差异的研究；2.从人骨髓或脐带血的CD34+造血干细胞诱导DC：我们通常所指的DC均为髓系DC，其来源于人CD34+造血干细胞。
CD34+造血干细胞是具有多向分化潜能和大量增生能力的细胞，其可从人骨髓或脐带血中分离，在体外通过联合GM—CSF、SCF、IL—6、IL—3等多种细胞因子培养，诱导扩增生成大量的DC，但其缺点在于取材不方便，不利于广泛使用；3.分离外周血中CDl4+单核细胞：此方法为目前最常选用的分离获取DC前体细胞的途径。
通过淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，利用免疫磁珠分选出CDl4+单核细胞，采用GM—CSF与IL—4(或IL—13，其与IL—4具有相似性质)联合培养体系，经7～10天即可诱导出大量的典型的DC；4.由高度纯化的中性粒细胞前体细胞诱导DC：利用高度纯化乳铁蛋白阳性的中性粒细胞前体细胞，在培养体系中加入6MCSF，IL—4和TNF—d，可得到DC样形态及具有DC相关表面分子的细胞。
从功能上比较，这些中性粒细胞诱生的DC特征与经典DC的群体相似；5.从人外周血或脐血CD34+前体细胞诱导DC：由于CD34+造血干细胞含量非常少，因此应用受到限制。
为克服这一难点，有人即采取分离外周血或脐血中含量较高的CD34+前体细胞联合细胞因子大量培养扩增，诱导生成DC；6.由白血病细胞诱导分化生成DC：目前的研究发现，可将白血病细胞诱导分化为功能成熟的DC，且这些白血病细胞来源的DC可提供大量的白血病相关抗原并进行肿瘤抗原呈递，而无需体外预激过程，从而减少了污染的机会，这种体外扩增的方法在临床治疗应用上极具吸引力。
DC细胞的体外诱导培养方法与前体细胞的选择
DC在机体免疫监视机制中起着哨兵作用，它能对肿瘤抗原进行识别、处理和提呈，从而启动机体对肿瘤的特异性免疫应答。
目前制备的以DC为基础的肿瘤疫苗就是利用DC这一特性，因此有效地在体外扩增培养DC是制备DC肿瘤疫苗的重要前提。
以下我们将就DC前体细胞选择以及DC培养所需细胞因子进行介绍。
一、DC前体细胞的选择1.直接分离骨髓、脐带血或外周血中DC：DC在组织中含量甚微，在血液中仅占单个核细胞总数的0.5％～1.0％，难以分离、纯化，且呈高度分化状，体外不易长期培养，更难建系。
因此该分离方法目前仅用于DC免疫活性，表面标志及DC亚型功能差异的研究；2.从人骨髓或脐带血的CD34+造血干细胞诱导DC：我们通常所指的DC均为髓系DC，其来源于人CD34+造血干细胞。
CD34+造血干细胞是具有多向分化潜能和大量增生能力的细胞，其可从人骨髓或脐带血中分离，在体外通过联合GM—CSF、SCF、IL—6、IL—3等多种细胞因子培养，诱导扩增生成大量的DC，但其缺点在于取材不方便，不利于广泛使用；3.分离外周血中CDl4+单核细胞：此方法为目前最常选用的分离获取DC前体细胞的途径。
通过淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，利用免疫磁珠分选出CDl4+单核细胞，采用GM—CSF与IL—4(或IL—13，其与IL—4具有相似性质)联合培养体系，经7～10天即可诱导出大量的典型的DC；4.由高度纯化的中性粒细胞前体细胞诱导DC：利用高度纯化乳铁蛋白阳性的中性粒细胞前体细胞，在培养体系中加入6MCSF，IL—4和TNF—d，可得到DC样形态及具有DC相关表面分子的细胞。
从功能上比较，这些中性粒细胞诱生的DC特征与经典DC的群体相似；5.从人外周血或脐血CD34+前体细胞诱导DC：由于CD34+造血干细胞含量非常少，因此应用受到限制。
为克服这一难点，有人即采取分离外周血或脐血中含量较高的CD34+前体细胞联合细胞因子大量培养扩增，诱导生成DC；6.由白血病细胞诱导分化生成DC：目前的研究发现，可将白血病细胞诱导分化为功能成熟的DC，且这些白血病细胞来源的DC可提供大量的白血病相关抗原并进行肿瘤抗原呈递，而无需体外预激过程，从而减少了污染的机会，这种体外扩增的方法在临床治疗应用上极具吸引力。
雷帕霉素对人单核细胞来源的树突状细胞免疫功能的影响
雷帕霉素对人单核细胞来源的树突状细胞免疫功能的影响骆高江;方明;姜昌浩【摘要】目的：研究雷帕霉素对人树突状细胞(DC)免疫功能的影响。
方法分离外周血单个核细胞,在含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM- CSF）、IL-4、胎牛血清及有或无雷帕霉素的培养条件下制备DC。
用流式细胞仪检测DC表型（CD1a、CD83、CD86、HLA- DR）；混合淋巴细胞反应（MLR）检测DC对同种异体T淋巴细胞的刺激能力；流式细胞仪检测DC吞噬功能和凋亡细胞数；ELISA法测定MLR上清液中的细胞因子。
结果与对照组比较,经雷帕霉素处理的DC表面CD1a、CD83、CD86、HLA- DR的表达明显降低（均P＜0.01）；对T 淋巴细胞刺激的能力下降（P＜0.01）；细胞吞噬能力下降（P＜0.01）；凋亡细胞数增加（P＜0.01），MLR中细胞因子（TNF-α、IL-10、IL-12）浓度降低（均P＜0.01）。
结论雷帕霉素对人树突状细胞免疫功能有明显的抑制作用,可能是其防止冠状动脉支架术后再狭窄的机制之一。
%Objective To investigate the effects of rapamycin on immune function of human monocyte- derived dendritic cel s (DC). Methods Human monocytes were isolated and cultured with fetal bovine serum, granulocyte- macrophage colony- stimulating factor (rhGM- CSF) and interleukin- 4 (rhIL- 4) with or without rapamycin. Al ogeneic T cel activation by DCs was tested by mixed lymphocyte reaction (MLR). ELISA was used to detect the expression of IL- 10, IL- 12 and TNF- α. The im-munophenotype, cel apoptosis and endocytic activity of DCs were measured by flow cytometry. Results The level of CD1a, CD83, CD86 and HLA- DR in rapamycin treatment group was lower than those in control group(P<0.01). Rapamycin inhibited the endocytic and T- cel stimulatingactivity of DCs (P<0.01), induced DC apoptosis, and decreased the secretion of IL- 10, IL- 12 and TNF- a(P<0.01). Conclusion Rapamycin can inhibit the immune function of human monocyte- derived dendritic cel s, which may be one of the mechanisms for prevention of in- stent restenosis.【期刊名称】《浙江医学》【年(卷),期】2014(000)021【总页数】4页(P1771-1774)【关键词】雷帕霉素;树突状细胞;免疫功能【作者】骆高江;方明;姜昌浩【作者单位】322000 义乌市中心医院心内科;322000 义乌市中心医院心内科;322000 义乌市中心医院心内科【正文语种】中文动脉粥样硬化（AS）是一种慢性炎症和自身免疫性疾病，炎症和免疫是致AS发病的中心环节。
人外周血树突状细胞培养和地塞米松对其分化的影响作用
ｏ ｄ ｈ ａ ｔｒｓｉ ｄ ｎ ｒｔ ｒ ｈ ｌｇ ，ｈ ｗ ｖ ｒ ａｃ ａ ｃｅ ｔ ｅ ｄ ｉ ｍｏ ｏ ｏ ｒ ｉ ｃ ｉ ｃ ｐ ｙ ｏ ｅ ｅ ，Ｄｅ — ｘ ｒ ｓ ｅ ｉｈ ｒ ｅ ｅ ｏ Ｄ１ ｎ ｗ ｒ ｅ ｅ ｆＣ ３ ｔ ａ ｈ ｎ ｒ ａ— ｘ ＤＣ ｅ ｐ ｅ ｓ ｄ ｈｇ ｅ ｖ ｌ ｆＣ ４ ａ ｄ ｌ ｅ ｖ ｌｏ Ｄ８ ｈ ｎ ｔ ｅ ｕ ｔ ｔ ｌ ｏ ｌ ｅ
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Ｒ ９ ．２ ３２ １ 文献标识码 Ａ 文 章编 号 １０ －８ Ｘ（０７）４０ ６ ０ ０４ ４ ２ ０ ０ － ０ ３
dc细胞成熟条件
dc细胞成熟条件
DC（树突状细胞）是一类重要的抗原呈递细胞，能够激活和调节免疫应答。
成熟的DC具有更好的抗原呈递和刺激T细胞的能力。
为了培养出成熟的DC，可采用以下条件：
1.因源：DC通常是从外周血、骨髓、脾脏等组织中分离得到的。
常用的因源包括单个细胞悬浮液、组织片段和骨髓细胞。
2.生长因子：DC的培养需要添加一定的生长因子。
常用的包括GM-CSF（粒细胞巨噬细胞集落刺激因子）和IL-4（白细胞介素4），它们可以促进单核-巨噬细胞系列的细胞分化为DC。
3.培养基：一般采用含有适当量的生长因子的培养基，如RPMI-1640（一种常用的细胞培养基）。
4.刺激剂：为了促进DC成熟，需要给细胞添加刺激剂。
常用的刺激剂包括脂多糖、CpG寡核苷酸（一种大肠杆菌的细胞壁成分）和细胞因子如TNF-α（肿瘤坏死因子-α）等。
5.培养条件：通常将DC在体外培养数天，温度维持在37摄氏度，5%CO2含量的培养箱中。
培养期间需要保持适宜的pH 值、氧气和养分供应。
需要注意的是，以上条件是一般的培养条件，对于不同种类的DC和研究目的可能存在一些差异。
因此，具体的培养条件还需要根据实验需求和文献资料进行调整。
不同诱导方法对人外周血树突状细胞体外成熟的影响
【 ｂｔ ｃ】 Ｏ ｊｃｖ Ｔ ｖｓｇｔ ｔ ｍ ｎｙｅｅ ｆ ｉｅ ｎ ｃｔ ｉ ｎｉｍ ｔ ｅ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｂｅｔｅ ｏｉ ｅｉ ｅ ｈ ｉ ｕｉ ｆｃ ｏ ｄｆｅｔ ｙ ｋ ｅｏ ａ ｒ ｉ ｎ ｔａ ｅ ｍ ｔ ｆｔ ｆｒ ｏ ｎ ｍ ｕ
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・
不 同诱 导方法对人外 周血树 突状 细胞体 外 成 熟 的影 响
刘璐 李琳 伍 衡 闵军 王 捷 曾 育杰 褚 忠华
探讨 不 同诱 导方式对 于体外 培养 的树突状 细胞 （ｅｄｔ ｌ ，Ｃ 免疫刺 激 ｄｎｒｉｃ ｌ Ｄ ） ｉ ｅｓ ｃ
通过 ｒＧ Ｃ Ｆ和 Ｉ一 ｈ Ｍ． Ｓ Ｌ４体外诱 导 的人外周 血单核细胞来 源 的 Ｄ 分别用肿 瘤 Ｃ，
标 记 小 鼠 抗 人 Ｃ ８ 与 ＨＬ ． Ｄ３ ＡＤＲ、 异 硫 氰 酸 （ｕｒｃｉｉ ｔｉｃａａｅＦＴ ） ｌ ｆ ｏｅｅｎｓ ｈｏｙｎｔ，ＩＣ 标记 小 鼠抗 人 Ｃ ８ 、 ｏ Ｄ ６
乙型肝炎及其慢性化机制研究进展
•综述. doi:10.3969/j.issn.1005-0264.2021.06.025乙型肝炎及其慢性化机制研究进展*张莹1聂红明"汪蓉3姜煜资1俞嫣青1王灵台$1.上海中医药大学附属曙光医院（上海，201203）2.上海中医药大学3.上海市浦东新区中医医院关键词慢性乙型病毒性肝炎;慢性化机制中图分类号R575.1文献标志码A我国是乙型肝炎病毒（HBV）感染的高发地区，世界卫生组织曾提出“至2030年消除病毒性肝炎重大公共卫生威胁”的终极目标。
全球约20亿人曾感染HBV,其中2.4亿人为慢性HBV感染者，每年约有65万人死于HBV感染所致的肝功能衰竭、肝硬化和肝细胞癌（HCC）。
2006年全国乙型肝炎血清流行病学调查表明，我国1~59岁人群乙肝表面抗原（HBsAg）携带率为7.18%m，据此推算，我国慢性HBV感染者约有9300万人，其中慢性乙型病毒性肝炎（CHB）患者约2000万例。
我国每年有超过100万人死于本病所致的肝硬化、肝癌及肝衰竭。
虽然近年来已加大乙型肝炎免疫疫苗的接种和普及，但HBV感染在我国仍是一种严重危害人民健康的传染病。
CHB发病率高，且易发展为肝硬化、原发性肝癌及肝衰竭，最终导致死亡。
目前HBV感染后的慢性化机制尚未明确，本文综合最新国内外进展对HBV感染后慢性化的发生机制行综述。
1宿主因素HBV侵入机体后，形成慢性感染与宿主抗病毒免疫应答密切相关。
机体免疫系统发育成熟程度是HBV持续性感染的重要因素。
胎儿及新生儿免疫系统尚未成熟，此时容易发生免疫耐受。
研究表明，乙肝携带者主要与母婴传播方式有关⑵。
成人感染HBV后,病毒侵入肝细胞形成cccDNA不断进行复制,激发人体的非特应性与特异性免疫应答,进一步对肝脏造成损伤。
同时乙型肝炎慢性化还与宿主的HLA基因型差异有关，使得HBV肝外不断复制得以免疫逃逸而致慢性化。
1.1免疫应答1.1.1非特异性免疫非特异性免疫系统主要包括:组织屏障、固有免疫细胞（吞噬细胞、杀伤细胞、树突状细胞等）和固有免疫分子（补体、细胞因子、酶类物质等）。