非蛋白氮的快速测定
饲料中非蛋白氮的测定方法
饲料中非蛋白氮的测定方法非蛋白氮（NPN）是指饲料中除蛋白质以外的氮物质，包括游离氨、尿素、硝酸盐、亚硝酸盐等。
在动物营养学中，非蛋白氮对动物生长发育具有一定的作用，但过多的非蛋白氮会对动物健康产生负面影响。
因此，准确测定饲料中的非蛋白氮含量是非常重要的。
常用的饲料中非蛋白氮测定方法主要有以下几种：1. 氨基酸分析法氨基酸分析法是一种常用的饲料中非蛋白氮测定方法。
该方法通过酸水解或酶解饲料中的蛋白质，将其分解成氨基酸，再利用氨基酸分析仪测定样品中氨基酸的含量，从而计算出非蛋白氮的含量。
该方法具有准确性高、精度好、操作简单等优点，但需要使用昂贵的氨基酸分析仪，且需要对样品进行酸水解或酶解处理，操作比较繁琐。
2. 尿素测定法尿素测定法是一种常用的饲料中非蛋白氮测定方法。
该方法通过将饲料样品与一定量的氢氧化钠和氯仿反应，将样品中的尿素转化为氨。
再通过滴定方法测定样品中的氨的含量，从而计算出样品中尿素的含量。
该方法具有操作简单、费用低廉等优点，但是不适用于含有硝酸盐或亚硝酸盐的样品。
3. 氨测定法氨测定法是一种常用的饲料中非蛋白氮测定方法。
该方法通过将饲料样品与一定量的氢氧化钠反应，将样品中的非蛋白氮转化为氨。
再通过滴定方法测定样品中的氨的含量，从而计算出非蛋白氮的含量。
该方法具有操作简单、费用低廉等优点，但是不适用于含有亚硝酸盐或硝酸盐的样品。
4. 高温燃烧法高温燃烧法是一种常用的饲料中非蛋白氮测定方法。
该方法通过将饲料样品在高温下燃烧，将样品中的非蛋白氮转化为氮气。
再通过气相色谱法或原子吸收光谱法测定氮气的含量，从而计算出样品中非蛋白氮的含量。
该方法具有准确性高、精度好等优点，但需要使用昂贵的仪器，操作比较繁琐。
不同的饲料中非蛋白氮测定方法各有优缺点，选择合适的测定方法需要根据具体的情况来确定。
在测定过程中，应注意操作规范，避免误差的产生，保证测定结果的准确性。
血液非蛋白氮的测定
制作人：王瑞刚
内蒙古农业大学 生物化学与分子生物学实验教学中心
实验原理 实验试剂 实验步骤
实验原理
血液中除蛋白质外的含氮物质称为非蛋白氮。主要包 括尿素、尿酸、肌酸、肌酐、谷胱甘肽、氨基酸、核苷酸等 蛋白质和核酸的代谢物及代谢产物。 非蛋白氮物质不被蛋白 质沉淀剂所沉淀。因此，以蛋白沉淀剂去除蛋白质，制得的 无蛋白滤液即含有非蛋白氮物质。钨酸是主要的蛋白质沉淀 剂。将无蛋白滤液内的非蛋白氮物质,经强酸消化后转变为硫 酸铵,加入奈氏试剂呈现棕黄色,其含量与经同样加入奈氏试剂 之标准铵盐溶液比色测定之。
实验试剂
1．消化液 2．标准硫酸铵 3．奈氏试剂 4． 30%双氧水
实验步骤
1．以草酸钾抗凝全血，以钨酸法制备1：10无蛋白滤液。 2．取3支硬质大试管按表操作
混匀后，在波长420nm处进行比色，以空白管调零，读 取各管光密度。 3．计算
测定管光密度
100
× 0.015 ×
标准管光密度
0.05
= 血液非蛋白氮mg%
试管 试剂
空白管
标准管
测定管
血滤液（ml）
—
标准应用液（ml）
—
消化液（ml）
0.1
—
0.5
0.5
—
0.1
0.1
将测定管加热消化，待管中充满白烟，官底液体由黑转为透明为止 （可加双氧水1滴以加速消化）
蒸馏水（ml）
3.5
奈氏显色剂（ml）
1.5
3.0
3.0
1.5
1.5
饲料非蛋白氮与可溶性蛋白测定方法概述
基金项 目： “ 十一五”科技支撑计划 （ ０ ６ Ａ ２ ０ ２ ０ Ｂ Ｄ１ Ｂ ８）；现代农业 产业 技术体 系建设 专项 资金 资 助 。 作 者简 介 ：周 荣 （ ９ ６ １ ８ 一），女 ，江苏 人 ，硕 士研 究生 ，主 要从 事 反刍 动物 营养 研 究。 通 讯作 者 ：王 加启 （ ９ ７ １６ 一），安 徽人 ，研 究 员 ，博 士 生导 师 ，从事 反 刍动 物营 养和 牛奶 质量 改 良研 究。
ｒ ｎ ｍｏ ｈ 等 ５ ｓ ｒ 使 点是 ，把饲 料 的化 学分析 与植 物的细胞 成分 及反 刍动物 的 Ｋ ｉｈ ａ ｏ ｔｙ ［ 用三氯 乙酸 沉淀 的方法测定 非蛋 白 消化利 用结 合起来 ，使分 析结果 更有参 考价值 ，与其他体 氮 ，但是 这种 方法测定 的结 果是非 蛋 白氮 和可溶 性蛋 白含 系相 比 ，它首次打破 了瘤胃 “ 黑箱 ” ，在研 究思路 上有 明 量 相 近 。 瘤 胃细 菌 ，尤其 是纤 维 分 解菌 不 吸 收游 离氨 基
ＤＦ ＤＦ 抗 微生 物和 哺乳类酶 类 的成 分 ，在酸性 洗涤剂 中不能 被溶 荐 的Ｎ 和Ａ 测定方法上 ，将抽 滤后的滤纸消煮定氮 。 解 （ Ｉ） ＡＤＦＰ ，在瘤 胃中不能被瘤 胃细菌降解 ，在瘤胃后消化
［－ ３ ７ １］
随着ＣＮ Ｐ 体 系在 国内的推广 ，大量的试验数据丰 富 Ｃ Ｓ
收稿 日期 ：２ ｌ — ３ ２ Ｏ １ ０— １
。
但是 其 中非 蛋 白氮和 可溶性 蛋 白的测定 方法较 多且
不 同方法 的测定 结果 差异较大 ，所 以有必要 统一相 关指标 的测定 方法。
１ 非 蛋 白氮测 定
非蛋 白氮 的值 依照总粗 蛋 白含 量与沉 淀的真蛋 白含 量 的差值 计算 ，Ｈａ ｗｋ等 ¨提 出大量的蛋 白沉淀 方法 ，包括 钨 酸 、三 氯乙酸 、氢氧 化铜和 硫酸钡 等。选 用哪种沉 淀剂 取 决于试验 操作 的实际 情况和试 验 目的的需 要。钨酸 法和
非蛋白含氮化合物的测定(精)
• 2.杂菲铁法：
尿酸以三氯化铁（FeCl3）为氧化剂。 在尿酸被氧化时高价铁（Fe3+）还原成低 价（Fe2+）， Fe2+与1，10-二氮杂菲形成 复合物在505nm有最大吸收峰，颜色强度 与尿酸含量成比例，可定量测定。
• 氧化还原法的共同点是在尿酸被氧化的 同时使金属化合物中的金属离子还原为 低价。
[原理] 脲酶水解尿素生成氨，氨在碱性介质
中与苯酚及次氯酸钠反应，生成兰色的 吲哚酚阴离子，其生成量与尿素含量成 正比。此反应需亚硝基铁氰化钠催化， 生成物在630nm处有吸收峰。
• [试剂]
• 1.脲酶：
•
水解尿素生成氨。
• 2.碱性次氯酸钠：
•
提供碱性环境，并可与酚显色剂
作用生成吲哚酚。
• 3.酚显色剂：
• 该法操作简单，节省时间、试剂，干扰 少，但应避免标本溶血。
• 酶法优点：反应专一、特异性强、不受 尿素类似物的影响。
•
缺点：操作费时且受体液中氨的影
响，因 此在含铵盐较多的尿
液中测定尿素时必须先除去
多余的尿氨。
尿酸的测定
• NPN成份之一，核酸中嘌呤分解代谢的 最终产物。
• 以酮式和烯醇式二种互变平衡的形式存 在。烯醇式有酸性，具还原作用。
• 尿素的测定 二大类： 1.直接法：尿素直接与试剂作用，测定 其产物. 最常用的是二乙酰一 肟法。 2.酶法（间接法）： a.全酶法：酶偶联法 b.半酶法：纳氏法、波氏法、干片法、 离子选择性电：
H+
二乙酰一肟 + H2O
二乙酰 + 羟胺
二乙酰 + 尿素 咪唑
非蛋白含氮化合物的测定
• 血清非蛋白含氮化合物是指除蛋白质以 外的一切含氮化合物的总称。
奶粉中非蛋白氮污染物的快速检测教学提纲
重庆大学本科学生毕业设计（论文）奶粉中非蛋白氮污染物的快速检测学生：张境学号：20077109指导教师：李苹专业：生物工程重庆大学生物工程学院二O一一年六月Graduation Design(Thesis) of Chongqing UniversityNon-protein nitrogen formula for rapid detection of pollutantsUndergraduate: Zhang JingSupervisor: Prof. Li PingMajor: Biological EngineeringCollege of Biological EngineeringChongqing UniversityJune 2011摘要本文以三种不同奶粉为原料，通过向奶粉中梯度添加以三聚氰胺为代表的奶粉中非蛋白氮污染物，制成含低，中，高浓度三聚氰胺的样品；设计了一种快速且经济的检测以三聚氰胺为主的奶粉中非蛋白氮污染物的方法来检测样品中的非蛋白氮污染物。
该方法结合了凯氏定氮法和考马斯亮蓝G-250比色法，通过对实验数据的比较和处理，再结合相关文献已有的数据，得到三聚氰胺的回收率。
在奶粉中三聚氰胺含量检测结果比较成功的基础上，对三聚氰酸及其他非蛋白氮污染物的检测进行系统的分析和讨论。
本文同时还对采用凯氏定氮法和考马斯亮蓝G-250比色法测定乳制品中蛋白质含量进行了比较研究，对实验中采用的主要分析方法，凯氏定氮法的试剂加量、消化过程、消化时间等分析条件进行了优化。
实验结果表明：a奶粉中中等浓度三聚氰胺（1000mg/kg）和高浓度三聚氰胺（2500mg/kg）的回收率均为分别为89.98%和99.85%，相对平均偏差（RSD%）分别为8.51和6.36.b 奶粉中中等浓度三聚氰胺（1000mg/kg）和高浓度三聚氰胺（2500mg/kg）的回收率均为分别为90.73%和95.05%，相对平均偏差（RSD%）分别为11.70和5.51。
非蛋白氮的定量检验
非蛋白氮的定量检验在非蛋白氮定量的检测方法中，比较常用的方法是硫酸铜沉淀法和氨基酸测定法。
除此之外，本文根据非蛋白氮的组成结构的不同，采用水解蒸馏法对样品中的非蛋白氮进行检验。
一、硫酸铜沉淀法根据非蛋白氮的化学性质来看，大部分溶于水，一部分在常温下不溶水，但在沸水中溶解。
根据此种性质，可以先将样品煮沸，用硫酸铜将样品中的蛋白质沉淀下来，由于非蛋白氮已经溶于水，故可用过滤方法将其与样品中的蛋白质分离。
在过滤时，水的温度一定不能太低，否则象双缩脲一类的物质会因为不溶于常温水而不能被过滤掉。
用此种方法测定出的蛋白质含量称为样品的真蛋白质。
但实际上，此种方法有很大的局限性。
如果非蛋白氮不溶于沸水，或者将一般的非蛋白氮微囊化，此种方法测出的结果会与样品中的实际真蛋白有很大的差异。
二、氨基酸测定法为了真正能够判定样品中是否掺有非蛋白氮，需测定样品中的氨基酸含量。
无论采用经典的氨基酸自动分析仪分析（柱后衍生），还是采用比较快捷的HPLC分析（往前衍生），将所测定的氨基酸总量相加得到一个总氨基酸数值，然后将此数值乘以6.25为M，和用凯氏定氮法测定的粗蛋白质N相比较，M至少为N的85％（M可能略大于N）。
如果低于此数值，则可以判定该样品中掺有非蛋白氮。
三、水解蒸馏法1、原理：非蛋白氮主要包括五类：尿素及其衍生物类、氨态氮类、铵类、肽类及其衍生物、动物粪便及其它废弃物类。
如果在原料中掺有氨态氮类、铵类和粪便比较容易判断（可采用硫酸铜沉淀法加镜检），一般很少将肽类及其衍生物掺入其中，剩下比较难鉴别的就是尿素及其衍生物。
尿素和尿素衍生物经过强酸或强碱水解为氨盐或氨和其它的物质，在强碱的条件下可以蒸馏出氨气，原料中的蛋白质经过水解成氨基酸盐，氨基酸盐在强碱条件下稳定，从而可将非蛋白氮和真蛋白氮进行分离。
2、仪器和设备：酒精喷灯，试管和其它常用的仪器。
3、试剂与溶液：6mol/l 的盐酸溶液和其它常用的试剂。
4、测定方法：本文只列出用酸水解的方法。
鱼粉中真蛋白质
鱼粉中真蛋白质(非蛋白氮)的测定方法1、适用范围：本方法适用于饲料级鱼粉中真蛋白与粗蛋白的检验。
2、原理蛋白质在一定碱性条件下，能与重金属盐类发生盐析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于热水，而非蛋白氮则易溶于水，用热水洗沉淀，将水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀物再用凯氏定氮法测定，得出真蛋白质的含量，再用真蛋白质与粗蛋白质含量之比，可判断出鱼粉中是否掺入水溶性非蛋白含氮物质。
鱼粉真蛋白质比率与指标：鱼粉蛋白质的比率以测得的真蛋白质含量与粗蛋白质含量之比来表示，粗蛋白质含量应符合产品规定，真蛋白质比率应符合：进口鱼粉中真蛋白质比率不得小于80%，国产鱼粉中真蛋白质比率不得小于75%，鱼粉真蛋白质比率小于上述值时，则判为该鱼粉中参有水溶性非蛋白含氮物质。
3、仪器设备粉碎机、20目分样筛、分析天平（感量0.1mg）、烧杯200m l、玻璃棒、漏斗(直径10cm)、定性滤纸（中速，12.5cm，15cm)、表面皿（直径10cm）、干燥箱(可控温65--70℃)、定氮仪、容量瓶200ml、锥形瓶200或250m l、酸性滴定管25ml4、试剂98%浓硫酸、硫酸铜(分析纯)、硫酸铜水溶液(60g/L)、硫酸钾、400g/L氢氧化钠水溶液、12.5g/L 氢氧化钠水溶液、30g/L硼酸水溶液、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂(保存期不超过3个月)、0.5N盐酸溶液、50g/L氯化钡水溶液5、测定步骤5.1 试样的处理称取试样1—2g(精确到0.1mg)于250ml烧杯中，加蒸馏水100ml煮沸，加入6%的硫酸铜溶液25ml和1.25%的氢氧化钠溶液25ml，边加边搅拌，加完后继续搅拌1分钟，从电炉上取下，室温放置2h以上，沉淀物以11cm中速定性滤纸过滤，用70℃以上热水反复洗残渣，直至滤液无硫酸根离子为止(取5%氯化钡试液5滴于表面皿中，加2N盐酸1滴，滴入滤液，在黑色背景处观察应无白色沉淀)。
非蛋白氮的概述和检测方法.doc
非蛋白氮的概述和检测方法发布时间：2002-11-081 非蛋白氮的概述非蛋白氮大致可以分为以下几类，①尿素及其衍生物类，如缩二脲、羟甲基尿素等；②氨态氮类，如液氨、氨水等；③铵类，如硫酸铵、氯化铵等；④肽类及其衍生物，包括氨基酸、酰胺、胺等；⑤动物粪便及其它废弃物类。
以下是几种常见的非蛋白氮的介绍：1．l 双缩脲又称缩二脲，是一种尿素缩合产品，其含氮量在35％上，蛋白质当量为219％。
缩二脲难溶于水，一般的定量检验方法为紫红色配位化合物比色法（原理：鱼粉中的双缩脲经抽提后，在酒石酸钠的碱性溶液中与硫酸铜生成紫红色配位化合物，在550nm 波长下比色从而测出其含量）。
1．2 尿素是氮和二氧化碳在高温高压下化合而成。
纯尿素的含氮量为47％，折合蛋白当量为293．75％。
易潮解，易溶于水，一般的定量检验方法有二种：一种为二甲基氨基苯甲醛显色法；另一种为二嗪衍生物显色法。
但以上两种方法只能测定游离性尿素而不能测定其衍生物。
1．3 尿素甲醛聚合物是由尿素和甲醛聚合而成，其含氮量为38.89％，折合蛋白当量为243．06％。
该聚合物难溶于水。
1．4 硫酸铵俗称肥田粉，其含氮量为20％左右，折合蛋白当量为125％。
硫酸铵的工业品一般为白色或微带黄色的结晶，易溶于水，其分子式为（NH4）2SO4。
1．5 异亚丁基二脲又名二脲异丁烷，简称IBDU，为尿素和异丁醛在催化剂的作用下综合反应生成。
IBDU为一种子的白色粉末或颗粒，总含氮量为32．18％，折合蛋白当量为201.13％，吸湿度远低于尿素。
以上是比较常见的非蛋白氮物质。
随着科技的发展，还会有越来越多的非蛋白氮物质被合成出来，从而使反刍动物所用的非蛋白氮使用广泛，而掺假者很容易将此物质掺入饲料原料中以提高原料的粗蛋白质。
2 非蛋白氮的检验2．l 非蛋白氮的定性检验在对原料样品的检测中，一般有定性检测和定量检测。
在定性检测中，使用的比较多的为显微镜检，包括直接镜检、分层镜检（用四氯化碳或三氯甲烷分层）、反应剂镜检（用化学物质和样品中的某些物质反应而在显微下区分）、染色镜检等。
饲料中非蛋白氮的测定方法
饲料中非蛋白氮的测定方法以饲料中非蛋白氮的测定方法为题，本文将介绍饲料中非蛋白氮的定义、来源以及常用的测定方法。
一、非蛋白氮的定义和来源饲料中的非蛋白氮（Non-protein nitrogen，简称NPN）是指除了蛋白质以外的氮化合物。
饲料中的NPN主要来自于植物体内的天然氨和尿素，也有少量来自于微生物的代谢产物。
二、非蛋白氮的测定方法1. 进行Kjeldahl法测定Kjeldahl法是一种常用的测定饲料中非蛋白氮含量的方法。
该方法主要包括以下步骤：（1）样品预处理：将饲料样品粉碎并溶解于硫酸中，加热至沸腾，使饲料中的有机氮转化为无机氮。
（2）消解：加入硫酸和硫酸钾催化剂，加热消解样品中的有机物质，将其转化为氨。
（3）蒸馏：将消解液冷却后加入蒸馏液，使用蒸馏装置将氨蒸馏出来。
（4）滴定：将蒸馏液中的氨与硼酸溶液进行反应，使用酚酞指示剂进行滴定，计算出非蛋白氮的含量。
2. 使用硝酸还原法测定硝酸还原法是另一种常用的测定饲料中非蛋白氮含量的方法。
该方法主要包括以下步骤：（1）样品预处理：将饲料样品粉碎并溶解于硫酸中，加热至沸腾，使饲料中的有机氮转化为无机氮。
（2）还原：加入亚砜和硝酸钾，使硝酸盐还原为无机氮气体。
（3）收集氮气：将还原产生的氮气收集起来，通过气体收集装置进行收集。
（4）测定氮气量：使用气体分析仪器测定收集到的氮气的体积，计算出非蛋白氮的含量。
3. 使用尿素酶法测定尿素酶法是一种测定饲料中尿素含量的方法，通过间接测定尿素来计算非蛋白氮的含量。
该方法主要包括以下步骤：（1）样品处理：将饲料样品提取液与尿素酶反应，将尿素转化为氨和二氧化碳。
（2）测定氨的含量：通过比色法、电极法等测定氨的含量。
（3）计算非蛋白氮的含量：根据氨的含量计算出非蛋白氮的含量。
三、总结饲料中非蛋白氮的测定对于合理配制饲料、保证动物营养需要具有重要意义。
常用的测定方法包括Kjeldahl法、硝酸还原法和尿素酶法。
不同的测定方法适用于不同的实际需求，选择合适的方法可以提高测定的准确性和可靠性。
探究乳品中非蛋白氮检测的意义和方法
探究乳品中非蛋白氮检测的意义和方法乳与乳制品中的非蛋白氮（NPN）是指乳与乳制品中非蛋白状态的含氮元素的化合物。
正常情况下，乳品中非蛋白氮含量与蛋白质代谢物尿素氮含量呈正相关。
然而，不法商贩受经济利益的驱使，直接向原料乳中添加三聚氰胺等严令禁止添加的含氮化合物，给社会造成了重大危害，本文主要研究了乳品非蛋白氮检测的重大意义，并简要介绍乳品中非蛋白氮的检测方法。
标签：非蛋白氮;检测;意义引言近年来频繁爆发乳制品安全事故，奶粉中非蛋白氮污染物的含量成为乳制品安全的重大问题，其中尤以三聚氰胺为甚。
2008年以三聚氰胺为主要非蛋白氮污染物的的奶制品污染事件是中国大陆爆发的一起重大食品安全事件。
事件起因是很多婴儿被确诊患有肾结石，调查发现他们都食用过三鹿集团生产的婴幼儿奶粉，进一步检测确定奶粉中含有化工原料三聚氰胺。
根据官方公布的资料，截至2008年9月21，因食用三鹿婴幼儿奶粉而接受门诊治疗的婴幼儿累计39，965人，正在住院的有12，892人，已治愈出院1，579人，死亡4人。
与此同时中国国家质检总局对外公布国内的乳制品厂家生产的婴幼儿奶粉的三聚氰胺的检验报告，该事件进一步升级，包括伊利、蒙牛、光明、圣元及雅士利在内的22个厂家69批次产品中都检出三聚氰胺。
一、乳品中非蛋白氮检测的意义2008年我国发生了一起重大的食品安全事件，三鹿奶粉事件，该事件引起了国内外的巨大轰动。
厂家向奶粉中加入三聚氰胺，是为了提高产品中的蛋白质含量。
蛋白质是乳制品的主要成分，也是评判产品营养价值高低的重要指标。
乳制品中的蛋白质含量是通过测定其中的氮含量来获得的。
GB5009.5-2010《食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》是利用凯氏定氮法测定食品中的氮含量，再通过氮换算为蛋白质的系数来换算得到蛋白质的含量，乳和乳制品的蛋白质系数为6.38。
生产监管中普遍采用此方法来测定乳品中的蛋白质含量，但是这个方法的局限在于只能测得食品中氮的含量却不能区分氮的来源。
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鱼粉、大米蛋白、玉米蛋白、中非蛋白氮的快速测定方法一、适用范围
本方法适用于鱼粉、大米蛋白、玉米蛋白中非蛋白氮的测定。
二、试剂
混合试剂A液
三、测定方法
1、称取原料样品4-5克，于100ml烧杯中，加60-80ml蒸馏水，然后搅拌
放置2-3分钟，过滤备用。
2、吸取上述溶液3-5滴，放入点滴盘（或试管）中，加2-3滴混合试剂A
液。
3、如果原料样品中含有非蛋白氮溶液会出现橙色沉淀（注：2分钟后会褪
去），观察沉淀的量，来判断非蛋白氮的含量。
A液：3.5克KI+1.25克HgCl+80m水，搅拌均匀有沉淀物，橙黄色（有一点），再加12克NaOH，再搅拌，加水定容至100ml。
备注：本方法由乌鲁木齐正大畜牧有限公司提供。