猪卵母细胞成熟培养液
培养液添加物与去核方法对猪体细胞核移植效率的影响
筛 选 稳 定整 合 外源 基 因的 阳性 转基 因细胞 ，然 熟液 中培养２ ￣２ ，比如添ｊ ｅ Ｇ Ｈ Ｃ 来促进 ０ ２ｈ Ｊ Ｃ ￣ｈ Ｇ Ｉ Ｊ 后将 转基 因体细胞核移 植到去掉细胞核 的卵细胞 核成 熟 ；第２ 步使 卵丘 卵母细 胞在不含 有激 素 的
中生产 重构胚胎 ，经移植 到母体 中发育产 生仔 畜 成 熟 液 中培 养 １ ～ ２ ，移 除 激素 是 为 了减 慢 ８ ４ｈ
摘
要 ：综述 了在 卵母 细胞 的成 熟、去核和后期发 育过程 中添加化 学成分对体 细胞核 移植 效
率的影响 ，以期 对改进体 细胞核 移植 效率提供 参考。
关键词 ：体细胞 核移植 （ Ｃ Ｓ ＮＴ）；猪 ；培养液 ；效 率
中图分 类号 ：￥ １ ． ８４３ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１０ — ７ ９（ ０ １ ４ ０ ０ — ６ ０ ５２ ３ ２ １ ）０ — ０ １０
培 养发 育 到 相应 的时期 后 移植 到 受体 内直 至妊 幼仔 的健康 。和体 内的成 熟相 比，体外发育 的 娠 。进 行 猪 的克 隆研 究 最 重要 的意义 在 于进 行 能力还是很低 的，因此 ，提高ＳＮ 的效率必须对 ＣＴ 异种 器 官 移植 ，生产 无 免疫 排 斥 反应 的转基 因 成熟培养液进行优 化 。 猪 ，将其器 官应用于人类临床 医学的相 关研 究 ，
细 胞 的成 熟 液成 分及 培 养 时 间 ，去 核和 融 合方 卵泡 液作 为基本 的成熟 培养液 ，有４ 实验室用 个
法 ，供体细 胞的类型 、周期 ，及 供体核进入卵母 Ｎ Ｓ ３ ＋ Ｏ 猪 卵泡 液 ，５ Ｃ Ｕ ７ ｌ％ 个利用Ｔ Ｍ ９ ＋ ＯＰ Ｆ Ｃ １９ ｌ％ Ｆ ， 细胞 后 的重编 程 过程 等 。近 些 年 来许 多研 究者 有１ 个用Ｔ Ｍ ９ 添加０ ＩＰ Ａ Ｃ １９ ．％ Ｖ 。这些基础培养液还
体外受精技术
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟培养
2. 成熟培养时间 一般22h-24h，但猪40h-44h，马30h-36h，兔 仅12h-15h 3. 成熟培养的温度和气相环境 人和啮齿类动物：37℃ 牛、猪、羊和马等：38℃~39℃。 pH：7.7好于7.1，7.4，8.0 渗透压：330 Osm/kg好于300，320 气相： 5%CO2 5%CO2＋5%O2＋90%N2
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟
2. 激素 目前大多数都离不开FSH或LH或两者的混合 物，但仍有争议 GH能显著提高精子的受精率，促进卵裂及 胚泡的形成 甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrP） 胰岛素 激活素
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟
3. 生长因子 目前已经证实与卵母细胞成熟有关的生长因 子有：上皮细胞生长因子（EGF）、转化生长因 子α和β（TGF-α，β）、成纤维细胞生长因 子（FGF）、胰岛素类生长因子Ⅰ和（IGFⅡ-Ⅰ， Ⅱ） 4. 血清 胎牛血清（FBS）、发情牛血清（OCS）、发 情前期母牛血清（POS）、超排母牛血清 （SCS）、公牛血清（SS）。
卵母细胞的体外成熟
卵母细胞成熟培养液 以TCM-199较好，可使牛、羊、猪的卵 母细胞体外成熟率高达80%以上。 添加成分： • 促性腺激素：FSH、LH • FCS、BSA：有认为FCS比BSA好，而发情 牛血清或发情羊血清比FCS好。 • 抗生素
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟培养
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的采集与体外培养
1. 离体采集：30min内取卵巢，置生理盐水或PBS （25℃-35℃），3h内回收。 ⑴ 卵泡抽吸法： 针头穿刺，一次进针可抽吸卵巢 皮质的多个卵泡 优点：回收速度快，不易造成卵母细胞的污染； 缺点：容易损伤卵母细胞周围的卵丘细胞，影响 其随后的成熟。
成熟液中不同来源促性腺激素对猪卵母细胞早期孤雌发育的影响
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｔｈ ｒ ｓ ｎ ｘ ｅ ｉ ｎ ８ ａ ｔ ｍｐ ｏ ｓｕ ｙ ｔ ｅ ｅ ｅ ｔ ｆｄｉ ｅ ｅ ｔｓ ｕ 瑚 ｏ ｏ ａ ｏｒ ｐ ｎ ｗｈ ｃ ｒ ｒ ｄ ｃ ｄ ｂ ｉ ｅ ｅ ｓ ｒ ｃ ： ｅ ｐ ｅ ｅ ｔｅ ｐ ｒｍｅ ｔ Ｗ８ ｎ ａｔ ｅ ｔｔ ｔ ｄ ｈ ｆ ｃ ｓｏ ｆ ｒ ｎ ｏ ｎ ｆｇ ｎ ｄ ｔｏ ｈ ｉ ｈ ｗｅ ｅ ｐ ｏ ｕ ｅ ｙ Ｃｈ ｎ ｓ ｉ
成 熟 液 中不 同来 源 促 性 腺 激 素 对 猪 卵 母 细 胞 早 期 孤 雌 发 育 的 影 响
兰宗宝 ， 韩晓慧 ， 梁世 忠 何若钢 卢晟盛 ， ， ， 卢克焕 ，
（． １ 广西亚热带生物资源保 护利用 重点实验室 ， 广西 南 宁 摘 ５０ ０ ；． ３０ ４ ２ 广西大学动物科技学 院， 广西 南宁 ５ ００ ３０ ４）
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猪卵母细胞体外培养质量评价指标
生长因子是一类促进细胞生长和分化的蛋白质，在猪卵母细胞体外培养过程中， 如胰岛素、表皮生长因子等对卵母细胞的发育和成熟也有重要作用。
能量物质和代谢物质含量
能量物质
猪卵母细胞在体外培养过程中需要消耗大量的能量物质，如葡萄糖、氨基酸、维生素等。这些物质含量的变化会 影响卵母细胞的发育和成熟。
代谢物质
通过检测培养液中生长因子的含量，如 IGF-1、EGF等，评估卵母细胞的生长和 发育潜力。
能量物质和代谢物质检测
检测糖分
通过检测培养液中的糖分 含量，评估卵母细胞的能 量代谢状况。
检测乳酸
通过检测培养液中的乳酸 含量，评估卵母细胞的代 谢状况和细胞活性。
检测氨氮
通过检测培养液中的氨氮 含量，评估卵母细胞的蛋 白质代谢状况。
用。
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培养液中各种营养物质的含量 和比例对卵母细胞的发育和质
量有重要影响。
激素的作用
一些激素如促性腺激素等对卵 母细胞的发育和成熟具有重要
作用。
环境因素
温度、湿度、氧气浓度等环境 因素对卵母细胞的体外培养也
有重要影响。
CHAPTER 03
猪卵母细胞体外培养质量评 价指标
卵母细胞形态与成熟度
卵母细胞形态
CHAPTER 02
猪卵母细胞体外培养概述
猪卵母细胞的生物学特性
猪卵母细胞的形态
呈圆形或卵圆形，具有一个大的卵黄和透明带。
猪卵母细胞的发育阶段
猪卵母细胞在不同的发育阶段，其形态和大小也会有所不同。
猪卵母细胞体外培养技术
01
02
03
卵母细胞的采集
通常从猪卵巢中采集未成 熟的卵母细胞，然后进行 体外培养。
影响猪卵巢卵母细胞体外成熟的若干因素
步探 讨 其 对 体 外 成熟 （ 体 排 出和 细 极
胞 活 力 等 ） 体 外 受 精 影 响 ． 开 展 猪 与 为 胚 胎 发 育 生物 学 和种 质 资源 保 存 等 研
添 加 １ １一 ７３ Ｅ２ （ ｐ ／ １ ， ｍＬ） Ｐ Ｇ （０ ｇ 、 ＭＳ １
究 提 供 参 考依 据 。
１ 材 料 与 方 法
为 处 理 组 ．以 不 添加 任何 激 素 为 对 照
果。 利用 屠 宰 场 废弃 的猪 卵 巢 资 源 ． 通
组 ． 它培 养 条 件 与 １ ．相 同 ， 析 比 其 ．１ ２ 分
￣ ｑ ￣ ｍ 卵 泡卵 母 细 胞 ＩＭ效 果 ｂ ８ｍ ２ Ｖ １３ 不 同 发 育阶 段 Ｃ ． ＯＣｓ Ｃ Ｃ 培 养 在 四孑 板 上 进 行 ． 孔 Ｏ ｓ Ｌ 每
ｍＬ ＭＳ Ｉ Ｉ ／ Ｌ Ｇ、 ｐ ／ Ｌ ７ 一 Ｐ Ｇ、Ｏ Ｕ ｍ ＨＣ １ ￣ ｍ １ １ ｇ ３ Ｅ 以 及 双 抗 （ 、 霉 素 ） １ ０Ｉ 的 ２ 青 链 各 ０ Ｕ
改 良 ＣＭ１ ９ 养 液 和 改 良Ｎ Ｕ２ 培 ｒ ９培 ＣＳ ３
养 液 （其 中 以 ４ ／ Ｂ Ａ代 替 １％ ｍｇ ｍＬ Ｓ ０
Ｔ Ｍ１ ９ Ｎ Ｓ ２ 基 础 培 养 液 洗 ３ ． Ｃ ９ 和 ＣＵ ３ 遍 转 入 相 应 的 预平 衡 的成 熟 培 养 微 滴 系 统 中 （ 枚 ／ ） 在 ５ Ｏ ， 和 湿 ３ ５ 滴 ． ％Ｃ 饱 度 ．９℃条件 下培 养４ ． 计 分 析 卵 ３ ４ｈ 统 母 细胞 成 熟 培 养 效果
Ｎ Ｓ 。Ｉ Ｍ在３ ｍ培 养皿 内进 行 ． Ｃ ） Ｖ ５ｍ 每 皿 布 点 ５ ０ Ｌ 滴 ，覆 盖 矿 物 油 ， 个５ 微 Ｃ ， 养 箱 中 预 平 衡２ ｈ Ｏ培 以上 待 用 选
培养介质、卵丘细胞和卵泡直径对猪卵母细胞体外成熟的影响
胞 归 于死亡 或退 化 。
中 图分 类 号 ：８ ８ ３ Ｓ２ ．
意 大 利 科 学 家 Ｍａ ｉ （９ ９ 最 先 进 行 猪 卵 母 细 胞 的 体 外 ｔｏ １８ ） ｔｌ
培 养 研 究 Ｊ 并 且 体 外 成 熟 的 卵 母 细 胞 与 精 子 体 外 受 精 ， 得 ， 获
维普资讯
实
验
研
究
一
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、 、 帮叁知施融狮施塞强对潴 簿细 缔成熟绚影响
王 海 ， 申 明 ， 士 恩 ， 中红 ， 忠诚 曾 朱 吴 张
（ 国农 业 大 学 动 物 科 技 学 院 ， 京 １０９ ） 中 北 ００４
摘要： Ａ类 卵母细 胞在 ｍ Ｃ ．９ 、 Ｃ Ｕ ３和 Ｎ Ｓ ３ Ｔ Ｍ １９ Ｎ Ｓ ２ Ｃ Ｕ ７体 系 中培 养 ４ ５ ４ ２小 时后 ， 熟 率 分 别 为 ７ ． ％ 、８ １ 成 ６ １ ７ ． ％和 ６ ． ５
下 三种 体 系进行 成熟 培养 ： （ ）ｍ Ｃ １９： Ｏ ｓ先 在 Ｔ Ｍ１９ 含 Ｅ ｒ １ Ｔ Ｍ一９ Ｃ Ｃ Ｃ ９（ ａｌ ， ＩＣ ） ｅ盐 ＧＢ Ｏ 添 加 ０ ５９ ｇＬ葡 萄 糖 ， ．１６ ／ ．４ ６ ／ ０ ３ ８ ｇＬ乳 酸 钙 ， １０ Ｌ丙 酮 酸 钠 ， ０．０ １ ２ １６ ｇＬ山 梨 醇 ，Ｏ ｇｍ Ｅ Ｆ １Ｉ／ ｌｅ Ｇ（ｎｅｖｔ ， ＯＵ ｍ ．８ ４／ ｌｎ ／ ｌＧ ，０Ｕ ｍ Ｃ Ｉｔ ｅ） ｌ Ｉ／ ｌ ｒ ｈ Ｇ Ｉｔ ｖｔ和 １ ％猪 卵 泡 液 （ Ｆ ，／） 培 养 ２ Ｃ （ｎ ｒｅ） ０ ｅ Ｐ Ｆ ｖｖ 中 ４小 时 ， 后 然
猪卵母细胞体外成熟及电激活后发育能力的研究
１ 材 料 与 方 法
１ １ 卵母 细胞 的采 集 和体 外培 养 ．
猪 卵 巢保 存 在 含 有 青 、链 霉 素 的 生 理 盐 水 中 ， 运 输 温 度 ３ —３ ℃ ，３ｈ内 运 回 实 验 室 ． 用 加 青 、 ３ ８ 链 霉 素 的生理 盐水 冲 洗卵 巢 ３ ５次 ，然后 抽 取 ２ — —
激 素（ Ｃ ＋促 卵 泡素 （ Ｓ 组卵 母细胞 成 熟率 略高 于 Ｆ Ｈ＋促黄 体 素（ Ｈ） ，两者 卵母细 胞 成 ｈ Ｇ） Ｆ Ｈ） Ｓ Ｌ 组 熟 率极 显著 高 于尿促 性腺 激素（ ＭＧ） ｈ 组．（ ）含 胎牛 血 清（ Ｂ ） ３ Ｆ Ｓ ，猪 卵泡 液（ Ｆ ） Ｐ Ｆ ，表 皮 生长 因子 （ ＧＦ 的培 养 液较 对 照组 在 卵 母 细胞 成 熟 率上 无 显著 差 异 ，但 均 能 显著 提 高 电激 活 后 的 卵 裂 率． Ｅ ） 添加 Ｅ ＧＦ组 桑囊 率 明显高 于不 添加 组． 但 分 别 添加 Ｆ Ｓ和 Ｐ Ｆ组 较对 照组 在 桑 囊 率上 均 无 显著 Ｂ Ｆ 差异．（ ） 卵 丘细胞 扩 散 与卵母 细胞 第 一极体 排 出之 间无直 接 相关 性 ，但扩 散 程度好 能提 高 电激活 ４
后的 卵裂 率．
关键 词
猪 卵母细胞 体外成熟 电激活
相 对体 内成熟 的卵 母 细胞 来 说 ，猪 体 外 成 熟 的 卵母 细 胞来 源 丰 富 ，价 格低 廉 ，因 而 已成 为 体 外 受 精 、核 移植 研 究 的 主 流．但 目前 ，猪 卵母 细 胞 体外 成 熟 系统还 不 太 完善 ，体外 成 熟 培 养 时 间较 长 ，许 多 理 化 因 素会 直 接或 间接地 影 响 到 卵母 细胞 的体 外 成 熟 及后 来 的 发 育 能 力 ． 在 克 隆 胚 的发 育 能 力 上 ， 体 内成熟 的 卵 母 细 胞 要 好 于 体 外 成 熟 的 卵母 细 胞 ， 能提 高克 隆 猪 的成 功 率 ］ ．如 何 优 化 猪 卵 母 细 胞 体外 成熟 系 统 ，使 得 卵母 细 胞 核 、质 同步 成 熟 ，以 便 获 得 较 强 的 发 育 能 力 ，为 当 今 亟 需 解 决 的 问 题Ｌ ．至今 还很 少 见 到 有 关 猪 卵母 细 胞 体 外 成 熟 及 ４ ］ 电激 活后 发 育 能 力 系 统 比较 的研 究报 道 ．本 实 验 比 较 了不 同培养 液成 分 对猪 卵 母 细胞 体 外 成熟 及 电激 活后 发 育 能力 的影 响 ， 旨在 筛 选 出 一种 较 为 适 宜 的 猪 卵母 细胞 体外 成 熟 培 养 系统 ，为 进行 猪 体 细 胞 核
卵母细胞体外成熟培养液的改良及研究
卵母细胞体外成熟培养液的改良及研究卵母细胞体外成熟培养液是指能够模拟卵巢微环境，促进卵母细胞发育成熟的培养液。
由于其能够为体外受精提供条件，因此在体外受精辅助生殖技术中起着重要作用。
然而，传统的卵母细胞体外成熟培养液中存在一些问题，如成熟率低、不稳定性差等，因此有必要对其进行改良和研究。
首先，对于卵母细胞体外成熟培养液的改良方向，可以从以下几个方面入手。
1.组成成分的改良：可以优化培养液的蛋白质、激素和营养物质的组成，以提高卵母细胞的成熟率和质量。
例如，可以调整培养液中雌激素和孕激素的浓度和比例，以提高卵母细胞的发育和成熟。
2.pH值和温度的优化：培养液的pH值和温度对卵母细胞的成熟和发育起着至关重要的作用。
因此，可以通过优化这两个参数，提高卵母细胞的成熟率。
例如，可以将培养液的pH值调整到适合卵母细胞发育的范围内，同时将温度控制在适宜的范围内。
3.添加生长因子：生长因子在卵母细胞的成熟过程中起着重要的调控作用。
因此，可以添加适量的生长因子到培养液中，以提高卵母细胞的成熟率和质量。
4.寻找新的培养基：除了改良和优化传统的培养液外，还可以通过寻找新的培养基，进一步提高卵母细胞的成熟率和质量。
近年来，一些研究者已经发现了一些新的培养基，如基于胶原或蛋白质水凝胶的培养基，能够显著提高卵母细胞的成熟率和质量。
另外，卵母细胞体外成熟培养液的研究也是十分重要的。
通过对卵母细胞培养过程中的细胞生物学、分子生物学和遗传学等方面的研究，可以深入了解卵母细胞的成熟过程和分子机制，从而为卵母细胞的体外培养提供理论基础和指导。
总之，通过改良和研究卵母细胞体外成熟培养液，可以提高卵母细胞的成熟率和质量，促进体外受精辅助生殖技术的发展。
猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的研究
猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的研究猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的研究引言：随着现代生物科技的不断发展，人们对于动物胚胎发育过程的探索也愈发深入。
猪作为一种重要的农业畜牧业动物，其生殖发育研究对于提高繁殖效率和品种改良具有重要意义。
猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的研究被认为是改善猪生殖效率的关键技术之一，本文将就该研究进行探讨。
一、猪卵母细胞体外成熟的研究进展1.1 体外培养条件的优化猪卵母细胞的体外成熟需要适宜的培养基和环境条件的支持。
过去的研究中发现，添加荷尔蒙和营养因子可以促进卵母细胞的发育，但也有一些不良因素对其生成产生负面影响。
如今，研究人员通过改良培养基成分和添加植物激素等手段，成功地提高了卵母细胞的发育率和质量。
1.2 卵母细胞成熟标志物的鉴定卵母细胞的成熟状态可以通过某些标志物的表达情况进行鉴定。
近年来，研究人员发现，猪卵母细胞的成熟可以通过检测卵母细胞表面的特定蛋白、细胞器的形态及功能等进行判定。
这些标志物的鉴定为猪卵母细胞体外成熟的监测提供了依据。
1.3 卵母细胞体外成熟能力的提高提高猪卵母细胞的体外成熟能力对于提高繁殖效率具有重要意义。
研究人员通过调整培养条件、添加辅助因子等手段已取得了一定的突破。
例如，改善培养基中气相和营养物质的供应，可以促进细胞发育和成熟率的提高。
此外，添加某些荷尔蒙如促黄体生成素、卵泡刺激素等也能够提高卵母细胞的体外成熟能力。
二、孤雌激活的研究现状2.1 孤雌激活的意义孤雌激活是指在缺乏精子参与的情况下，卵母细胞可以自主地发育和分裂，从而获得新生命。
这种现象在动物界被广泛研究并被认为是生殖发展领域的一个热点。
对孤雌激活机制的深入研究不仅可以理解胚胎发育的基本过程，还有助于解决某些生殖障碍的问题。
2.2 孤雌激活的机制目前，孤雌激活的机制尚不完全清楚，但有一些重要的研究和理论已经提出。
研究发现，内质网钙离子释放和细胞质内信号通路的活化是孤雌激活的重要因素。
H3K4me3对猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响
曾毅仁, 张彩玉, 侯晗琦, 恽雪丹, 李湘萍
亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,广西大学,南宁 530004
摘要:哺乳动物卵母细胞的成熟与组蛋白甲基化修饰密切相关.CPI-455是一种组蛋白去甲基化酶 抑 制 剂,可 特 异
性抑制组蛋白去甲基转移酶 KDM5A/B 的活性,提高 H3K4me3(组 蛋 白 H3 第 4 位 赖 氨 酸 三 甲 基 化)的 表 达 水 平.
本实验在猪卵母细胞体外成熟过程中添加 CPI-455,探究 H3K4me3组蛋白甲基化对猪卵母细胞体外 成 熟 和 早 期 胚
胎发育的影响.首先,用不同浓度 CPI-455在不同时间处理猪卵母细胞,发现在0~22h添加5μmolCPI-455的 处
理方法效果最佳,卵母细胞成熟率与囊胚形成率均显著高于未处理组(p<0.05).0~22h 添 加 5μmolCPI-455 处
卵母细胞中相关基因的表达,上调囊胚中多能性基因的表达,调控 H3K4me3的甲基化水平,从而促 进 猪 卵 母 细 胞
体外成熟和早期胚胎发育.
关 键 词:猪;卵母细胞;CPI-455;H3K4me3;体外成熟
中 图 分 类 号 :S828
文 献 标 志 码 :A
文章编号:1673 9868(2021)07 0045 07
收集不同时期的猪卵母细胞和孤雌囊胚,清洗干净后移入装有细胞裂解液的 EP 管中并于-80 ℃冰箱 保存.微量反转录按照试剂盒说明书进行操作,反转录得到的样品存放于-20 ℃备用.将反转录得到的产 物作为模板,进行qRT-PCR 检测,观察不同处理组基因的表达情况(表1).反应程序为:95 ℃进行5min, 95 ℃进行30s,60 ℃进行1min,共40个循环.猪的18S 作为内参基因,目的基因的相对表达量用2-ΔΔCT 法 计 算 ,引 物 设 计 和 试 验 方 法 参 考 文 献 [1]和 文 献 [5]. 1.3 统计与分析
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DescriptionIn 1950, Morgan, Morton and Parker described one of thefirst totally defined media that did not depend largely onanimal products or extracts as nutritive sources. This mediumsupported the growth of primary chick embryo heart cells andhas since become known as Medium 199 (M199). Its currentuse is with the addition of serum in virus and vaccineproduction, and in the culture of many non-transformedcells. It is also used in combination with less complex media.M199 with Hanks’ Balanced Salts is designed for use withcells maintained in non-CO2atmospheric conditions. Thismodified M199 formulation differs from the originalformulation by containing all L-amino acids. The originalformulation contained 10 DL-amino acids, which are lessbiologically active on a per-gram basis than the correspondingL-amino acids.FormulationPrecautionsUse aseptic technique when handling or supplementing thismedium. This product is for further manufacturing use. THISPRODUCT IS NOT INTENDED FOR HUMAN OR THERAPEUTICUSE.StorageStore medium protected from light at 2 to 8 C. Do not freeze.Do not use after the expiration date.United StatesSAFC Biosciences, Inc.13804 W. 107th StreetLenexa, Kansas 66215USAPhone+1 913-469-5580 Toll free-USA 1 800-255-6032 Fax+1 913-469-5584 E-mail info-na@ EuropeSAFC Biosciences Ltd.Smeaton Road, West PortwayAndover, Hampshire SP10 3LFUNITED KINGDOMPhone+44 (0)1264-333311Fax+44 (0)1264-332412E-mail info-eu@Asia PacificSAFC Biosciences Pty. Ltd.18-20 Export DriveBrooklyn, Victoria 3025AUSTRALIAPhone+61 (0)3-9362-4500Toll free-AUS 1 800-200-404Fax+61 (0)3-9315-1656E-mail info-ap@Medium 199 Modifiedwith Hanks’ Balanced Salts, with 0.68 mM L-glutamineCATALOG NO. 51322CProduct InformationWarranty, Limitation of RemediesSAFC Biosciences warrants to the purchaser for a period of one year from date of delivery that this product conforms to its specifications. Other terms and conditions of this warranty are contained in SAFC Biosciences’ written warranty, a copy of which is available upon request. ALL OTHER WARRANTIES, EXPRESSED OR IMPLIED, INCLUDING THE IMPLIED WARRANTY OF MERCHANTABILITY AND FITNESS FOR A PARTICULAR PURPOSE, ARE EXCLUDED. In no case will SAFC Biosciences be liable for any special, incidental, or consequential damages arising out of this product or the use of this product by the customer or any third party based upon breach of warranty, breach of contract, negligence, strict tort,or any other legal theory. SAFC Biosciences expressly disclaims any warranty against claims by any third party by way of infringement or the like. THIS PRODUCT IS INTENDED FOR PURPOSES DESCRIBED ONLY AND IS NOT INTENDED FOR ANY HUMAN OR THERAPEUTIC USE.Additional Terms and Conditions are contained in the product Catalog, a copy of which is available upon request.Tween TM is a trademark of the ICI Group of Companies.© 2006 SAFC Biosciences, Inc.Issued December 2006 P513221203 0905 1005 0406 0906Indications of DeteriorationMedium should be clear of particulates and flocculent material.Do not use if liquid medium is cloudy or contains precipitate.Other evidence of deterioration may include color change, pH shift or degradation of physical or performance characteristics.Preparation InstructionsSupplements, such as antibiotics, can be added to the sterilized solution using aseptic technique. Storage conditions and shelf life of the supplemented product may be affected by the nature of the supplements. Sterile serum should not be refiltered before or after being added to sterile medium because growth promoting capacity may be reduced upon refiltration.CharacteristicsAppearanceClear red solution Endotoxin≤1.0 EU/mLOsmolality (as supplied)270 - 310 mOsm/kg H 20pH (as supplied)6.9 -7.4SterilityNo microbial growth detectedReferences1.Morgan, J. F., Morton, H. J., Parker, R. C., PSEBM (1950)73:1.2.Morgan, J. F., Campbell, M. E., Morton, H. J., JNCI (1955)16:557.3.Rutzky, L. P . and Pumper, R. W., In Vitrol (1974) 9:468.4.Morton, H. J. and Toinai, S., TCA Manual (1978) 4:729.5.Ryan, J. M. And Walk, P . H., TCA Manual (1979) 5:1043.6.Bolton, W. E., Terrell, S. P ., et al., Tissue Culture Methods (1982) 7:39.United StatesSAFC Biosciences, Inc. 13804 W. 107th Street Lenexa, Kansas 66215 USA Phone +1 913-469-5580Toll free-USA 1 800-255-6032Fax +1 913-469-5584E-mail info-na@EuropeSAFC Biosciences Ltd.Smeaton Road, West Portway Andover, Hampshire SP10 3LF UNITED KINGDOM Phone +44 (0)1264-333311Fax +44 (0)1264-332412E-mail info-eu@Asia PacificSAFC Biosciences Pty. Ltd.18-20 Export DriveBrooklyn, Victoria 3025 AUSTRALIA Phone +61 (0)3-9362-4500Toll free-AUS 1 800-200-404Fax +61 (0)3-9315-1656E-mail info-ap@www.safcbiosciences .com。