猪卵母细胞体外成熟的研究进展

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哺乳动物卵胞质内单精注射的研究进展

哺乳动物卵胞质内单精注射的研究进展摘要：哺乳动物卵胞质内单精注射技术发展很快，而且已在很多领域发挥其重要的作用。

简单综述了哺乳动物卵胞质内单精注射(ICSI)的研究概况、存在的问题以及今后的应用前景。

关键词：哺乳动物；卵胞质内单精注射；进展显微受精是20世纪80年代发展起来的一种新型的体外受精技术。

即借助显微操作仪，将精子直接或精子细胞注入卵母细胞内(或卵周隙)，促使其在体外相互结合的技术，这项新技术是体外受精和显微操作技术相结合而形成的，也可以说是显微操作辅助受精，目前显微受精技术主要有3种途径：①透明带开孔技术(PZD)；②卵透明带下注射技术(SUZI)；③卵胞质内单精注射技术(ICSI)。

其中①PZD不为人们接受的主要原因是需要足够量的精子。

⑦SUZI法受精令人失望的缺点是多精受精难以控制。

而③ICSI就克服了①PZD和②SUZI的缺点。

ICSI是20世纪80年代后期发展起来的一项新型的体外受精技术，它是借助显微操作仪，将一个精子或生精细胞直接注入卵母细胞胞质内。

使精卵结合完成受精的过程。

ICSI技术可排除透明带和卵质膜对精子人卵的阻碍作用。

故对精子的死活及其完整性无严格要求。

因此一跃成为当前显微受精技术的主流，广泛应用于畜牧生产、野生动物保护、人类的深度不育和受精机理的理论研究中。

1 哺乳动物卵胞质内单精注射受精的效果关于卵胞质内单精注射受精的效果，国内外已有很多成功的报道，但是针对不同的哺乳动物而言，还存在一些问题。

现简单综述如下。

小鼠单精注射的首次尝试在1983年，但当时的试验结果很差，因为小鼠卵母细胞的质膜缺乏弹性。

直接注射精子时非常容易死亡。

Kimura等对显微操作仪进行了改进，采用Piezo-driven操作系统克服了小鼠卵母细胞的细胞膜抗损伤能力差的特点，使小鼠注射卵的存活率由16％提高到80％，囊胚率由33％提高到68％，产仔率达30％。

之后，人们广泛试验睾丸精子，精子头，形态异常精子等各种极端条件处理下精子的受精产仔情况并取得了成功，证明了精子的新鲜度和活动力对ICSI的结果没有显著影响。

内质网应激对哺乳动物卵母细胞成熟的影响研究进展

动物医学进展,２０２０,４１(４):１１０Ｇ１１４P r o g r e s s i nV e t e r i n a r y Me d i c i n e 内质网应激对哺乳动物卵母细胞成熟的影响研究进展㊀收稿日期:２０１９Ｇ０５Ｇ０５㊀作者简介:贾甜甜(１９９２－),女,陕西渭南人,硕士研究生,主要从事动物胚胎研究.∗通讯作者贾甜甜,文㊀扬,高蕾蕾,王丽丽,袁一田,雷安民∗(西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心,陕西杨凌７１２１００)㊀㊀摘㊀要:在卵母细胞成熟过程中以及胚胎着床前,具备特定功能的各类蛋白质必须在内质网(e n d o pl a s Ｇm i c r e t i c u l u m ,E R )中完成折叠与修饰,这对于维持卵母细胞成熟和胚胎发育是至关重要的.然而,外界不良因素的刺激会破坏内质网功能,阻碍蛋白质合成,诱发E R 应激和未折叠蛋白反应(u n f o l d e d p r o t e i nr e Ｇs po n s e ,U P R ),适当的应激反应有利于细胞恢复功能.卵母细胞和早期胚胎对各类外源刺激高度敏感,多项研究表明E R 应激和U P R 信号影响卵母细胞成熟和胚胎着床前发育.论文总结了E R 应激㊁U P R 信号通路及其在哺乳动物卵母细胞成熟和胚胎着床前发育中的作用和机制的现状,以期为卵母细胞体外发育成熟及人类生殖临床提供借鉴.㊀㊀关键词:卵母细胞;内质网应激;未折叠蛋白反应中图分类号:S ８５２．２文献标识码:A文章编号:１００７Ｇ５０３８(２０２０)０４Ｇ０１１０Ｇ０５㊀㊀对于真核生物而言,生命活动的正常进行归功于细胞之间流畅的信息交流,某些信息交流需要通过受体结合方式实现,包括可溶性配体(各类激素和递质)和细胞表面分子(受体和黏附因子),其化学本质一般为蛋白质,未经修饰的蛋白质都需要在E R 的膜状网络上进行成熟修饰,折叠成具有特定生物学功能的三维结构,才能向高尔基体转运[１].E R 包含大约一半的总膜面积和三分之一新翻译的蛋白质,通过细胞互作的方式,向其他细胞器转运脂质㊁蛋白㊁钙离子等,其结构和功能的完善对于细胞是必需的[２].然而在外界不良因素刺激下,E R 腔中错误折叠或未折叠蛋白发生积累,这会破坏E R 稳态并诱发E R 应激[３]和未折叠蛋白反应(U P R ),其主要目的是恢复该细胞器的生理活性[４].根据其诱发原因的不同,E R 应激可分为３种类型:①U P R ,这是由于蛋白质未折叠或者错误折叠,在E R 腔内蓄积而引发的,实际上,如不特别说明,大多数的E R 应激指的就是U P R ;②内质网超负荷反应(e n d o p l a s m i cr e t i c u l u m o v e r l o a d r e s po n s e ,E O R ),大量已经正确折叠的蛋白质未能及时输送驻留于E R 腔内,造成细胞核因子κB (N F ＧκB )被激活;③胆固醇缺乏引发的固醇调节元件结合蛋白质(s t e Ｇr o l Ｇr e g u l a t o r y e l e m e n t b i n d i n gpr o t e i n s ,S R E B P )通路调节的反应[５].在正常生理状态下,未折叠和错误折叠的蛋白质通过E R 相关降解(E R Ｇa s s o c i a t e dd e gr a d a t i o n ,E R A D )系统和细胞质蛋白酶体去除.E R 应激时,E R 可以通过减少蛋白质的合成以及加快未折叠蛋白的处理来缓解细胞内外因素对于E R 的破坏,使其恢复生物学功能.通常主要通过３种途径实现:①U P R ,通过此方式增强E R 对多肽的折叠以及加工能力;②激活蛋白酶体依赖性E R 相关降解(E R A D ),以从E R 中去除蛋白质[６];③控制蛋白质翻译以调节多肽进入E R 的总量.通常这套反应能够成功恢复E R 稳态.然而,当E R 应激持久或过于严重的情况下,细胞将会发生凋亡[７].新蛋白质的合成对于卵母细胞成熟以及随后的胚胎发育是极为重要的.在卵母细胞成熟过程中和胚胎着床前,E R 作为蛋白质,脂质分泌和合成的主要位点,在满足卵母细胞对新蛋白质的需求中起着关键作用.这些功能性蛋白质必须在E R 中正确折叠,从而维持卵母细胞成熟和胚胎发育.卵母细胞和胚胎体外培养过程中可能会遇到各种外源性刺激,对E R 功能和蛋白质合成产生负面影响,导致E R 应激和U P R 信号通路的激活,E R 应激和U P R信号在卵母细胞减数分裂恢复和胚胎着床前发育过程中发挥关键作用,可能参与调节这些重要的生理过程[８].因此,了解E R 应激和体外发育之间的机制关系可以帮助改善卵母细胞成熟和胚胎早期发育质量.本文总结了E R 应激和U P R 信号通路的有关知识,探讨了它们在哺乳动物卵母细胞成熟和着床前胚胎发育中的作用.１㊀内质网应激信号通路哺乳动物细胞利用U P R应对E R稳态扰动,主要是由E R分子伴侣蛋白免疫球蛋白结合蛋白B i P (也称为葡萄糖调节蛋白７８或G R P７８)介导的,３种E R跨膜蛋白参与E R应激反应:P E R K,I R E１和A T F６.在生理状态下,当内质网蛋白折叠和加工能力与新合成的蛋白质负荷相匹配时,E R伴侣G R P７８与这些蛋白质结合.当未折叠蛋白在内质网腔中积累时,G R P７８与P E R K㊁I R E１和A T F６解离,并与未折叠的蛋白质结合,以协助其折叠[９].１．１㊀I R E１信号通路酵母中,I R E１监测E R应激,它是一种E R驻留的跨膜蛋白,具有内源性核糖核酸酶结构域.哺乳动物有I R E１p的２个同源物I R E１α和I R E１β, I R E１α在所有组织中都是可检测的,而I R E１β仅限于肠上皮.应激时,I R E１从内质网分子伴侣G R P ７８上解离下来磷酸化为I R E１p,其内切核酸酶活性被激活,对X B P１基因进行剪接.X B P１是调节U P R基因表达的主要激活因子,受Ⅱ型跨膜蛋白A T F６的调控.就E R应激反应而言,X B P１活性至关重要,它调节哺乳动物U P R中参与蛋白质折叠,分泌和降解的基因.应激时诱导X B P１转录,转录产物在I R E１p的非常规剪接下,从无活性的X B P１Ｇu 形式转变为具有活性的X B P１Ｇs.只有X B P１Ｇs可以易位至细胞核并与特定启动子元件如E R S E(E R应激反应元件)和U P R元件结合,触发U P R靶基因的激活[１０].１．２㊀A T F６信号通路A T F６是一个E RⅡ型跨膜蛋白,哺乳动物有２个A T F６同源物A T F６Ｇα和A T F６Ｇβ.在正常情况下,A T F６与E R中的G R P７８相结合,E R应激时,A T F６与G R P７８解离,从E R转移到高尔基体,在S１P(位点Ｇ１蛋白酶)与S２P(位点Ｇ２蛋白酶)切割下活化,活性A T F６移动到细胞核,在那里它诱导E R应激应答基因以及E R S EＧ１和E R S EＧ２的转录激活.U P R时A T F６的重要靶基因包括G R P７８, XB P１和C HO P(C/E B P同源蛋白)[１１].１．３㊀P E R K信号通路哺乳动物E R应激时还有一条控制蛋白质翻译的途径.这是由真核翻译起始因子真核翻译起始因子２α(e u k a r y o t i ct r a n s l a t i o ni n i t i a t i o nf a c t o r２a lＧp h a,e I F２α)磷酸化介导的.磷酸化的e I F２α抑制其自身的鸟嘌呤核苷酸交换因子(g u a n i n en u c l e o t i d eＧe x c h a n g e f a c t o r,G E F)从而全面降低蛋白质的翻译.哺乳动物有４种e I F２α激酶,即G C N２㊁P K R㊁H R I和P E R K,可响应各种应激刺激.所有这些激酶都能够抑制应激反应中的蛋白质翻译.P E R K是一种E R跨膜传感蛋白,是E R应激时的主要转导因子之一,由腔结构域和胞质激酶结构域组成,并且是MAM(线粒体相关内质网膜)的一个组成部分. MAM是E R和线粒体的物理和功能接触位点,其紧密堆积着包括感应氧化应激和调节细胞死亡等各种功能的蛋白质[１２].P E R K在细胞内普遍表达,与G R P７８结合存在于E R腔中.在E R应激下,P E R K 释放G R P７８并触发e I F２α的二聚化和磷酸化,导致蛋白质合成的抑制.P E R K的存在使人们认识到细胞能够调节其新蛋白质合成水平以匹配其E R折叠能力[１３].但是e I F２α磷酸化时,转录因子A T F４及其下游靶蛋白C HO P在翻译水平会上调.A T F４上调既能促进细胞存活,又能诱导细胞死亡.轻度E R应激时,A T F４通过调节参与应激反应㊁蛋白质分泌和氨基酸代谢的基因促使细胞存活.但是E R 应激不可克服时,P E R K信号通过上调A T F４和C HO P诱导细胞凋亡,可以说P E R K信号传导决定E R应激的细胞命运[１４].综上所述,为了减少在应激时E R中新蛋白质的合成,磷酸化的e I F２α抑制翻译,随后上调A T F４的表达.A T F６被高尔基体室中的S１P和S２P切割并转化为活化的A T F６,I R E１的磷酸化诱导X B P１的剪接,调节E R分子伴侣的转录.最后,重复和持久的E R应激诱导C HO P的活化促使细胞凋亡.２㊀卵母细胞中的内质网应激反应许多报道显示,G R P７８介导的３种U P R信号通路也参与卵母细胞减数分裂成熟.已经在未成熟或成熟卵母细胞中检测到E R应激标记基因A T F４㊁A T F６㊁X B P１㊁H S P A５和G R P７８.G R P７８存在于猪卵母细胞的G V㊁G V B D㊁MⅠ和MⅡ阶段.培养４４h的卵丘Ｇ卵母细胞复合物(C O C s)中G R P７８m R N A表达水平比培养２２h时显着增加.此外,相对于２２h,４４h时C O C S中的G R P７８㊁A T F４㊁p５０A T F６和C HO P的蛋白表达水平显著升高,E R 应激会导致猪卵母细胞成熟延迟,成熟过程中使用褪黑激素作为E R应激抑制剂时可以恢复猪卵母细胞成熟[１５].在小鼠G V期卵母细胞,X B P１蛋白主要定位于核内,MⅠ期定位于纺锤体微管,E R应激信号通路对小鼠卵母细胞成熟至关重要[１６].猪X B P１蛋白主要位于G V期卵母细胞细胞核中,R TＧP C R显示猪X B P１Ｇu和X B P１Ｇs的m R N A存在于１１１贾甜甜等:内质网应激对哺乳动物卵母细胞成熟的影响研究进展G V期卵母细胞中,但在MⅠ期和MⅡ期卵母细胞中仅检测到X B P１Ｇu的m R N A[１７].这表明猪X B P１可能在卵母细胞成熟中起重要作用.在山羊的卵泡闭锁和颗粒细胞凋亡时,G R P７８和C HO P的表达显著上调[１８].玻璃化冷冻处理的绵羊C O C s显示E R应激标记物A T F４,A T F６,G R P７８和C HO P的m R N A的表达水平增加,表明绵羊卵母细胞冷冻保存与E R应激和U P R信号传导有关[１９].肥胖以及多囊性卵巢综合征与E R应激有关,将小鼠C O C在富含脂质的卵泡液中培养,会诱发卵母细胞E R应激,成熟率降低[２０].另外,在临床上大剂量注射激素会导致E R应激,造成内质网聚集体S E R C的发生,这会降低卵母细胞核和胞质的成熟,造成形态异常的卵母细胞,影响受精及胚胎发育成熟[２１].这些结果表明E R应激和U P R信号传导在哺乳动物卵母细胞中存在的,并且它们对于卵母细胞发育成熟以及确保卵母细胞质量是必需的.３㊀早期胚胎内的内质网应激反应在小鼠中,敲除U P R相关基因对胚胎发育具有负面影响,表明E R伴侣蛋白和E R应激信号在胚胎着床前起重要作用.在小鼠１Ｇ细胞阶段发现E R应激信号,并且在囊胚期尤为丰富.在２Ｇ㊁４Ｇ㊁８Ｇ细胞,桑椹胚和囊胚期卵母细胞的胞质和核中均检测到XＧb o x结合蛋白Ｇ１(XＧb o xb i n d i n gp r o t e i nＧ１,X B P１)信号,但是核中的信号高于质中.R TＧP C R分析表明,X B P１Ｇu和X B P１Ｇs在２Ｇ细胞至囊胚期均有表达,而１Ｇ细胞期仅检测到X B P１Ｇu.在E R应激反应相关基因的分析中,在小鼠胚胎着床前的所有阶段均检测到双链R N A激活蛋白激酶样E R激酶(d o u b l eＧs t r a n d e dR N AＧa c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s eＧl i k e E Rk i n a s e,P E R K),细胞凋亡信号调节激酶１(a p o pＧt o s i s s i g n a lＧr e g u l a t i n g k i n a s e１,A S K１),激活转录因子４(a c t i v a t i n g t r a n s c r i p t i o n f a c t o r４,A T F４),激活转录因子６(a c t i v a t i n g t r a n s c r i p t i o nf a c t o r６, A T F６),葡萄糖调节蛋白７８(g l u c o s eＧr e g u l a t e d p r oＧt e i n７８,G R P７８),C HO P,生长停滞和D N A损伤诱导基因３４(g r o w t ha r r e s tＧa n dD N A d a m a g eＧi n d u cＧi b l e g e n e３４,G A D D３４)和肌醇需求酶１(I n o s i t o lＧr eＧq u i r i n g e n z y m e１,I R E１)的m R N A.此外,还在囊胚期小鼠胚胎中检测到G R P７８㊁A T F６和P E R K相关基因的m R N A[２２].在孤雌激活的猪胚胎中,在４Ｇ细胞㊁桑椹胚和囊胚阶段检测到X B P１Ｇs和X B P１Ｇu 的m R N A,而在１Ｇ和２Ｇ细胞阶段仅发现X B P１Ｇu.４Ｇ细胞㊁桑椹胚和胚泡期㊁猪X B P１蛋白在定位于细胞核中,有证据表明E R应激诱导的X B P１剪接可能调节猪的早期胚胎基因组活化[１７].有研究通过实时定量P C R和免疫荧光技术测定X B P１和G R P７８的R N A丰度来评估早期和晚期胚胎的E R应激[２３].在水牛体外受精胚胎的囊胚期检测到E R 伴侣基因G R P７８和G R P９４的m R N A.E R应激相关的m R N A,包括G R P７８㊁E D E M㊁A T F６㊁I R E１㊁A T F４㊁C HO P和X B P１在牛体外受精胚胎中也有表达[２４],表明E R应激和U P R信号影响哺乳动物胚胎着床前发育.此外,在猪㊁牛和小鼠的卵母细胞成熟和胚胎发育过程中,将褪黑激素添加到培养基中可有效抵抗E R应激[２５Ｇ２６].牛磺熊去氧胆酸(t a u r o u r s o d e o x yＧc h o l i c a c i d,T U D C A)也已用于减轻小鼠卵母细胞成熟和胚胎发育过程中的E R应激[２７],E R应激抑制剂处理可以减少E R应激,从而减少细胞凋亡,促进猪孤雌胚胎的体外发育[２８].在显微操作时添加E R 应激抑制剂,尤其是T U D C A,可以降低E R中的应激水平,从而抑制细胞损伤并增强猪体细胞核移植胚胎的体外发育[２９].在玻璃化冷冻保存的小鼠C O C s培养基中添加枸杞多糖可以减少E R应激,从而提高小鼠C O C s的成熟率和发育能力[３０].表明在体外培养过程中,可以通过减少或者消除内质网应激从而降低细胞凋亡,促进卵母细胞成熟,增强胚胎发育潜能.４㊀展望U P R信号通路对于恢复E R稳态和维持正常E R功能极其重要,当错误折叠或未折叠的蛋白质在E R腔中累积时,U P R信号通路被激活以改善E R 应激状态.卵母细胞和早期胚胎在体外培养过程中会遭受到许多不可控的外力侵袭,引发E R应激.这些应激对于卵母细胞成熟和着床前胚胎发育是不利的甚至是致命的.人类临床上高发的多囊卵巢综合症已经被证明是由于E R应激造成的病理现象,而在对女性不孕治疗上,使用过多的超排激素会导致S E R C的发生,造成卵母细胞的异常发育.作为对E R应激的适应性反应,U P R可以促进未折叠或错误折叠的蛋白质的清除,从而帮助卵母细胞去抵抗外界带来的不良影响.然而,如果错误折叠或未折叠的蛋白质持续存在且应激无法缓解时,卵母细胞将通过激活C HO P,J u nN末端激酶(J u n NＧt e rＧm i n a l k i n a s e,J N K)和C a s p a s e１２[３１]途径诱导细胞凋亡,这对于哺乳动物卵母细胞成熟和着床前胚胎发育是非常重要的[３２].此外,E R应激抑制剂T U D C A和褪黑素已被用于减轻哺乳动物卵母细胞成熟和胚胎发育过程中的E R应激,但是褪黑激素２１１动物医学进展㊀２０２０年㊀第４１卷㊀第４期(总第３２２期)在哺乳动物卵母细胞成熟和胚胎着床前对E R应激和U P R信号通路起作用的机制仍不清楚.未来仍需要继续研究E R应激和U P R信号影响哺乳动物卵母细胞成熟和着床前胚胎发育的机制,这对于哺乳动物体外受精及单精子注射技术的提高具有非常重要的指导意义.预防以及规避内质网应激是提高卵母细胞成熟率与质量的有效途径,理解E R应激与体外发育之间的机制关系可以有效改善人类体外辅助生殖技术水平,为人类生殖临床提供借鉴.参考文献:[１]㊀C A O SS,K A U F MA N RJ．E n d o p l a s m i c r e t i c u l u ms t r e s sa n d o x i d a t i v e s t r e s s i nc e l l f a t e d e c i s i o na n dh u m a nd i s e a s e[J]．A nＧt i o x i dR e d o xS i g n a l,２０１４,２１(３):３９６Ｇ４１３．[２]㊀颜㊀冰,胡俊杰．内质网相关细胞器互作的研究进展[J]．中国细胞生物学学报,２０１９,４１(２):１７５Ｇ１８４．[３]㊀P A R KJY,K I M J W,e ta l．M e l a t o n i ni m p r o v e st h e m e i o t i c m a t u r a t i o no f p o r c i n eo o c y t e sb y r e d u c i n g e n d o p l a s m i c r e t i c uＧl u ms t r e s s d u r i n g i nv i t r om a t u r a t i o n[J]．J P i n e a lR e s,２０１８,６４(２):e１２４５８．[４]㊀K R O E G E R H,C H I A N G W C,F E L D E NJ,e t a l．E Rs t r e s s a n d u n f o l d e d p r o t e i n r e s p o n s ei n o c u l a r h e a l t h a n d d i s e a s e[J]．F E B S J,２０１８,２８６(２):３９９Ｇ４１２．[５]㊀庄㊀娟．内质网应激[J]．生物学教学,２０１２,３７(１２):２Ｇ４．[６]㊀K O N D R A T Y E V M,A V E Z O V E,S H E N KMA N M,e ta l．P E R KＧd e p e n d e n t c o m p a r t m e n t a l i z a t i 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t e i n r e s p o n s e(U P R)i nm a mm aＧl i a no o c y t e m a t u r a t i o na n d p r e i m p l a n t a t i o ne m b r y od e v e l o pＧm e n t[J]．I n t JM o l S c i,２０１９,２０(２):４０９．[１２]㊀L I UZ W,Z HU H T,C H E N K L,e t a l．P r o t e i nk i n a s eR N AＧl i k e e n d o p l a s m i c r e t i c u l u mk i n a s e(P E R K)s i g n a l i n gp a t h w a yp l a y s am a j o r r o l e i n r e a c t i v e o x y g e ns p e c i e s(R O S)Ｇm e d i a t e de n d o p l a s m i c r e t i c u l u ms t r e s sＧi n d u c e d a p o p t o s i s i n d i a b e t i c c a rＧd i o m y o p a t h y[J]．C a r d i o v a s c u l a rD i a be t o l,２０１３,１２(１):１５８．[１３]㊀G I O R G IC,M I S S I R O L I S,P A T E R G N A N I S,e t a l．M i t o c h o nＧd r i aＧa s s o c i a te d m e m b r a n e s:c o m p o s i t i o n,m o l e c u l a r m e c h aＧn i s m s,a n d p h y s i o p a t h o l o g i c a l i m p l i c a t i o n s[J]．A n t i o x i dR e d o xS i g n a l,２０１５,２２(１２):９９５Ｇ１０１９．[１４]㊀L I UZ,L V Y,Z H A O N,e t a l．P r o t e i nk i n a s eRＧl i k eE Rk i n a s ea n d i t sr o l e i ne n d o p l a s m i cr e t i c u l u m s t r e s sＧd e c i d e dc e l l f a t e[J]．C e l lD e a t hD i s,２０１５,６(７):e１８２２．[１５]㊀P A R K HJ,P A R KJY,K I MJW,e t a l．R e g u l a t i o no f t h e e nＧd o p l a s m i c re t i c u l u ms t r e s s b y B I P/G R P７８i s i n v o l v e d i nm e iＧo t i cm a t u r a t i o no f p o r c i n eo o c y t e s i nv i t r o[J]．D e v R e p r o d,２０１７,２１(４):４０７Ｇ４１５．[１６]㊀Z H A N GJY,D I A O Y F,K I M H R,e t a l．I n h i b i t i o no f e n d oＧp l a s m i c r e t i c u l u ms t r e s s i m p r o v e sm o u s e e m b r y o d e v e l o p m e n t[J]．P L o SO n e,２０１２,７(７):e４０４３３．[１７]㊀Z H A N GJY,D I A O Y F,O Q A N IR K,e t a l．E f f e c to f e n d oＧp l a s m i cr e t i c u l u m s t r e s so n p o r c i n eo o c y t e m a t u r a t i o n a n dp a r t h e n o g e n e t i c e m b r y o n i cd e v e l o p m e n t i nv i t r o[J]．B i o lR eＧp r o d,２０１２,８６(４):１２８．[１８]㊀L I NP,Y A N G YZ,L IX,e t a l．E n d o p l a s m i c r e t i c u l u ms t r e s si s i n v o l v e d i n g r a n u l o s a c e l l a p o p t o s i sd u r i n g f o l l i c u l a r a t r e s i ai n g o a t o v a r i e s[J]．M o lR e p r o dD e v,２０１２,７９(６):４２３Ｇ３２．[１９]㊀B A R R E R A N,D O SS A N T O SN E T OPC,C U A D R OF,e t a l．I m p a c t o f d e l i p i d a t e d e s t r o u s s h e e p s e r u ms u p p l e m e n t a t i o no ni nv i t r o m a t u r a t i o n,c r y o t o l e r a n c ea n de n d o p l a s m i cr e t i c u l u ms t r e s s g e n e e x p r e s s i o no f s h e e p o o c y t e s[J]．P L o S O n e,２０１８,１３(６):e０１９８７４２．[２０]㊀Y A N G X,WU LL,C HU R ALR,e t a l．E x p o s u r e t o l i p i dＧr i c hf o l l i c u l a r f l u i d i s a s s o c i a t e dw i t he n d o p l a s m i c r e t i c u l u ms t r e s sa n d i m p a i r e do o c y t em a t u r a t i o n i nc u m u l u sＧo o c y t e c o m p l e x e s[J]．F e r t i l S t e r i l,２０１２,９７(６):１４３８Ｇ４３．[２１]㊀F E R R E U X L,S A L L E M A,C H A R G U IA,e t a l．I s i t t i m e t o r e c o n s i d e rh o wt o m a n a g eo o c y t e sa f f e c t e db y s m o o t he n d oＧp l a s m i c r e t i c u l u ma g g r e g a t e s[J]．H u m R e p r o d,２０１９,３４(４):５９１Ｇ６００．[２２]㊀A L I I,L I U H X,Z HO N GＧS HU L,e t a l．R e d u c e d g l u t a t h i o n ea l l e v i a t e s t u n i c a m y c i nＧi n d u c e d e n d o p l a s m i c r e t i c u l u ms t r e s s i nm o u s e p r e i m p l a n t a t i o ne m b r y o s[J]．JR e p r o d D e v,２０１８,６４(１):１５Ｇ２４．[２３]㊀D I C K SN,B O H R E RRC,G U T I E R R E ZK,e t a l．R e l i e f o f e nＧd o p l a s m i c re t i c u l u ms t r e s se n h a n c e sD N Ad a m a g e r e p a i r a n di m p r o v e s d e v e l o p m e n t o f p r eＧi m p l a n t a t i o ne m b r y o s[J]．P L o SO n e,２０１７,１２(１１):e０１８７７１７．[２４]㊀S O N GBS,K I MJS,Y O O NSB,e t a l．I n a c t i v a t e dS e n d a iＧv iＧr u sＧm e d i a t e d f u s i o n i m p r o v e s e a r l y d e v e l o p m e n t o f c l o n e db oＧv i n ee m b r y o sb y a v o i d i n g e n d o p l a s m i cＧr e t i c u l u mＧs t r e s sＧa s s oＧc i a t ed a p o p t o s i s[J]．Re p r o dF e r t i lD e v,２０１１,２３(６):８２６Ｇ３６．[２５]㊀L I N T,L E EJE,K A N GJ W,e t a l．T h e i nf l u e n c e a n dr o l eo f m e l a t o n i no n i nv i t r oo o c y t em a t u r a t i o na n d e m b r y o n i c d e v e lＧo p m e n t i n p i g a n d c a t t l e[J]．K o r e a n JA g r i c S c i,２０１７,４４:３０９Ｇ３１７．[２６]㊀L I N T,L E E J E,K A N GJW,e t a l．M e l a t o n i n s u p p l e m e n t a t i o nd u r i n gp r o l o n ge d i nv i t r om a t u r a t i o n i m p r o v e s t h e q u a l i t y a n dd e v e l o p m e n t o f p o o rＧq u a l i t yp o r c i n e o o c y t e s v i a a n t iＧo x i d a t i v ea n d a n t iＧa p o p t o t i c e f f e c t s[J]．M o lR e p r o dD e v,２０１８,８５(８Ｇ９):６６５Ｇ６８１．[２７]㊀MO C H I Z U K I M,M I Y A G I K,K I S H I G AM IS．O p t i m i z i n g t r e a t m e n t o f t a u r o u r s o d e o x y c h o l i c a c i d t o i m p r o v ee m b r y o n i cd e v e l o p m e n t a f t e r i nv i t r om a t u r a t i o no f c u m u l u sＧf r e e o o c y t e s３１１贾甜甜等:内质网应激对哺乳动物卵母细胞成熟的影响研究进展i nm i c e[J]．P L o SO n e,２０１８,１３(８):e０２０２９６２．[２８]㊀P A R K H B,K I M MJ,J U N GBD,e t a l．E f f e c t o f e n d o p l a s m i c r e t i c u l u m(E R)s t r e s s i n h i b i t o r t r e a t m e n t d u r i n gp a r t h e n o g eＧn e t i c a c t i v a t i o no nt h ea p o p t o s i sa n d i nv i t r od e v e l o p m e n to f p a r t h e n o g e n e t i c p o r c i n ee m b r y o s[J]．D e v R e p r o d,２０１８,２２(３):２３５Ｇ２４４．[２９]㊀P A R K Y R,P A R K H B,K I M MJ,e t a l．E f f e c t so f e n d o p l a sＧm i c r e t i c u l u ms t r e s s I n h i b i t o r t r e a t m e n t d u r i n g t h em i c r o m aＧn i p u l a t i o no f s o m a t i cc e l ln u c l e a r t r a n s f e r i n p o r c i n eo o c y t e s[J]．D e vR e p r o d,２０１９,２３(１):４３Ｇ５４．[３０]㊀Y A N G L,L E IL,Z H A O Q,e t a l．L y c i u m b a r b a r u m p o l y s a cＧc h a r ide i m p r o v e s t h ed e v e l o p m e n to fm o u s eo o c y t e sv i t r if i e da t t h e g e r m i n a l v e s i c l e s t a g e[J]．C r y ob i o l o g y,２０１８,８５:７Ｇ１１．[３１]㊀HU A N G N,Y U Y,Q I A OJ．D u a l r o l e f o r t h e u n f o l d e d p r o t e i n r e s p o n s e i nt h eo v a r y:A d a p t i o n a n d a p o p t o s i s[J]．P r o t e i nC e l l,２０１７,８(１):１４Ｇ２４．[３２]㊀L I N T,L E E J E,O Q A N I RK,e t a l．D e l a y e d b l a s t o c y s t f o r m aＧt i o no r a ne x t r ad a y c u l t u r e i n c r e a s e s a p o p t o s i s i n p i g b l a s t oＧc y s t s[J]．A n i m R e p r o dS c i,２０１７,１８５:１２８Ｇ１３９．P r o g r e s s o nR o l e s o fE n d o p l a s m i cR e t i c u l u mS t r e s s i nM a m m a l i a nO o c y t eM a t u r a t i o nJ I A T i a nＧt i a n,W E N Y a n g,G A O L e iＧl e i,WA N GL iＧl i,Y U A N Y iＧt i a n,L E IA nＧm i n(１．C o l l e g e o f V e t e r i n a r y M e d i c i n e,S h a a n x i S t e mC e l lE n g i n e e r i n g T e c h n o l o g y R e s e a r c hC e n t e r,N o r t h w e s tA&FU n i v e r s i t y,Y a n g l i n g,S h a a n x i,７１２１００,C h i n a)A b s t r a c t:D u r i n g o o c y t em a t u r a t i o n a n db e f o r e e m b r y o i m p l a n t a t i o n,v a r i o u s t y p e s o f p r o t e i n sw i t h s p e c i f i c f u n c t i o n sm u s t b e f o l d e d a n dm o d i f i e d i n t h e e n d o p l a s m i c r e t i c u l u m,w h i c h i s c r u c i a l f o rm a i n t a i n i n g o o c y t e m a t u r a t i o na n d e m b r y o n i cd e v e l o p m e n t．H o w e v e r,t h es t i m u l a t i o no f e x t e r n a l a d v e r s e f a c t o r sw i l l d e s t r o y t h e f u n c t i o no fE R,h i n d e r p r o t e i n s y n t h e s i s,i n d u c e e n d o p l a s m i c r e t i c u l u ms t r e s s a n du n f o l d e d p r o t e i nr eＧs p o n s e,a n da p p r o p r i a t es t r e s s r e s p o n s e i sb e n e f i c i a l t oc e l l r e c o v e r y f u n c t i o n．O o c y t e sa n de a r l y e m b r y o s a r eh i g h l y s e n s i t i v e t o a l l k i n d s o f e x o g e n o u s s t i m u l i．M a n y s t u d i e s h a v e s h o w n t h a t e n d o p l a s m i c r e t i c u l u m s t r e s s a n dU P Rs i g n a l a f f e c t o o c y t em a t u r a t i o na n de m b r y o p r e i m p l a n t a t i o nd e v e l o p m e n t．T h e p a p e r s u mＧm a r i z e d t h e s t a t u s o fE Rs t r e s s,U P Rs i g n a l i n gp a t h w a y a n d i t s r o l e i nm a mm a l i a no o c y t em a t u r a t i o na n d p r e i m p l a n t a t i o nd e v e l o p m e n t,i no r d e r t o p r o v i d e r e f e r e n c e f o ro o c y t em a t u r a t i o na n dh u m a nr e p r o d u c t i o n c l i n i c．K e y w o r d s:o o c y t e;e n d o p l a s m i c r e t i c u l u ms t r e s s;u n f o l d e d p r o t e i n r e a c t i o n４１１动物医学进展㊀２０２０年㊀第４１卷㊀第４期(总第３２２期)。

卵母细胞体外成熟的影响因素

卵母细胞体外成熟的影响因素乔利敏1,2 黄成定2　李向臣1　姚雅馨2　关伟军13 马月辉1(1中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100094　2甘肃农业大学动物科技学院兰州730070) 【摘要】随着哺乳动物体外受精、细胞核移植技术的不断深入,人们对成熟卵母细胞以及哺乳动物胚胎需求量日益增加,卵巢内丰富的卵泡资源是胚胎工程迅速发展的基础。

本文从卵巢因素、供体、体外培养条件和成熟培养液中添加成分等对卵母细胞IVM的影响进行了分析,为胚胎的体外生产提供理论基础和科研依据。

关键词:卵母细胞;体外成熟;影响因素胚胎移植技术成熟与否是胚胎工程技术成败的基础,而卵母细胞体外成熟质量又是决定胚胎移植技术成功的关键。

IVM可以为体细胞核移植提供大量的受体细胞,也为体外受精提供大量的MⅡ期卵母细胞,因此IVM已经成为胚胎体外生产和体外受精的重要环节之一。

虽然近几年来在卵母细胞的体外成熟方面已经取得了飞速发展,但是卵母细胞的体外成熟还存在很多问题。

现就卵母细胞体外成熟的影响因素进行概述。

1　卵巢因素和供体对卵母细胞体外成熟的影响1.1　卵巢所处性周期的影响有学者研究表明,卵巢所处性周期阶段影响卵母细胞的成熟培养,在无黄体期卵巢上的卵母细胞比黄体期和黄体前期卵巢上卵母细胞成熟效果要好。

崔亚利等〔1〕根据卵巢上是否有明显突出卵巢表面的黄体,将卵巢分为黄体期和卵泡期,分别在两期卵巢上卵泡中抽取卵母细胞进行体外成熟培养发现,二者无统计学差异,但是卵泡期卵母细胞成熟培养效果(63.9%)较好,说明卵巢性周期阶段对卵母细胞体外成熟存在一定影响,但影响不大。

2000年郭继彤〔2〕对繁殖季节和非繁殖季节山羊卵母细胞进行研究发现,非繁殖季节可采集到比繁殖季节更多的可用卵母细胞,并且非繁殖季节的屠宰山羊卵巢卵母细胞成熟培养效果(74.1%)优于繁殖季节的屠宰山羊卵巢卵母细胞(67.7%)。

在非繁殖季节屠宰的山羊,几乎没有大卵泡的发生。

成熟液中不同来源促性腺激素对猪卵母细胞早期孤雌发育的影响

ａｄＴｃｎｌｇｏｌｅｕｎｘｎｖｒｔ。Ｇａｇｉａｎｎ３０４，ｈｎ）ｎｅｈｏｙＣｌｇ，ＧａｇｉｉｅｉｏｅＵｓｙｕｎｘＮｎｉｇ００Ｃｉ５ａ
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成熟液中不同来源促性腺激素对猪卵母细胞早期孤雌发育的影响
兰宗宝，韩晓慧，梁世忠何若钢卢晟盛，，，卢克焕，
（．１广西亚热带生物资源保护利用重点实验室，广西南宁摘５００；．３０４２广西大学动物科技学院，广西南宁５００３０４）
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人教版高中生物选修3[知识点整理及重点题型梳理]胚胎工程(二)技术手段

人教版高中生物选修三知识点梳理重点题型（常考知识点）巩固练习胚胎工程（二）技术手段【学习目标】1、简述哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。

2、简述哺乳动物胚胎的早期培养方法。

3、举例说出胚胎移植和胚胎分割。

4、关注胚胎工程的研究进展和应用价值。

【要点梳理】要点一、体外受精1．原理人工模拟体内环境（包括营养、温度、PH等），使初级卵母细胞成熟和精子获能，最终完成受精和胚胎保存。

哺乳动物体外受精主要包括卵母细胞的采集、精子的获取和受精等主要步骤。

2.卵母细胞的采集3.精子采集和获能（1）收集精子的方法：假阴道法、手握法和电刺激法要点诠释①假阴道法是用特制的假阴道，满足雄性动物交配时对压力、温度和润滑度的要求。

同时要配备有与采精动物相适应的台畜，训练动物爬跨台畜，借假阴道收集精液。

②手握法是通过徒手或戴乳胶手套的手，直接把握雄性动物阴茎，施以适当压力和刺激引起射精，并收集富含精子的精液。

③电刺激法是采用特制的电极伸入动物的直肠，直接刺激位于腰荐部的射精中枢神经，引起射精，此方法多用于野生或某些经济动物。

（2）精子获能的处理方法：在体外受精前，必须先对精子进行获能处理，诱导方法有：4.体外受精获能的精子和培养成熟的卵子可以在获能液或专用的受精溶液中完成受精过程。

要点二、胚胎的早期培养早期胚胎一般指可用于移植的胚胎，在原肠胚之前的囊胚、桑椹胚甚至更早的阶段。

（1）培养的目的：检测受精状况和受精卵的发育能力。

（2）胚胎早期培养液成分与动物细胞培养液成分基本相同，除无机盐、营养成分和调节物质外，还需要血清、抗生素等，两者都是液体培养基。

植物组织培养则为固体培养基，其中加入琼脂，所需植物激素主要是生长素和细胞分裂素两大类。

（3）移植方式：当胚胎发育到适宜的阶段时，冷冻保存或移植到受体动物子宫内培养。

（4）试管动物生产流程：要点三、胚胎移植 1. 胚胎移植的概念（1）胚胎移植的概念：是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。

猪蛔虫的生活史及体外培养研究进展

猪蛔虫的生活史及体外培养研究进展
陈宁;黄翠琴;朱兴全
【期刊名称】《热带医学杂志》
【年(卷),期】2006(6)2
【摘要】猪蛔虫病对养猪业的危害严重。蛔虫体外培养技术即是人工模拟宿主体
内环境条件,从而使蛔虫在离开宿主状态下完成生活史中的部分或全部的发育阶段。
通过该技术可对其生活史、不同发育阶段的形态变化、感染机制及基因功能等方面
进行深入研究,对寄生虫学发展意义重大。本文主要阐述不同学者对蛔虫生活史的
看法及培养过程中培养条件变化,如pH、气相、培养基化学成分的变化,对虫体生
长发育的影响。但目前对蛔虫体外培养的研究,还处于探索阶段,最适培养基、气相
及pH值的筛选还有待进一步的研究。

【总页数】4页(P220-223)
【关键词】蛔虫;生活史;体外培养
【作者】陈宁;黄翠琴;朱兴全
【作者单位】华南农业大学兽医学院寄生虫学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R383.11
【相关文献】
1.猪卵母细胞体外成熟培养的研究进展 [J], 周荣;石俊松;王青来;蔡更元;吴珍芳
2.猪腔前卵泡体外培养研究进展 [J], 权青;陶勇;霍道坦;田宁宁;章孝荣
3.猪细小病毒体外培养研究进展 [J], 冯静;杨青
4.猪精原干细胞体外分离培养及移植的研究进展 [J], 张明睿;刘志国;王冰源
5.猪蛔虫幼虫体外培养的初步研究 [J], 陈宁;黄翠琴;林瑞庆;宋惠群;朱兴全

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核移植中卵母细胞激活方法的研究进展

率；刘国世等［５］报道用１．３ｋＶ／ｃｍ，８０ｓ，１次脉冲法具有操作方便、激活率高和无化学毒副作用等特对猪体外成熟卵母细胞进行孤雌激活可以获得较高而马利兵［６］则认为１ｋＶ／ｃｍ。３０Ｉｘｓ和２点而被广大研究者所青睐早在１９８９年．Ｏｎｏｄｅｒａ的囊胚率：间隔１ｍｉｎ）是激活小鼠卵母细胞的最佳电和Ｔｓｕｎｏｄａ的研究表明小鼠和兔卵母细胞在施以直次脉冲（
激活物质．但是这种激活没有电刺激简单省事．因为电激活时有半数以上卵母细胞激活后形成一个以上
收稿日期：２０１３ — ０３ — １３
作者简介：王爱萍（１９７７一），女，山东济宁人，硕士，讲师，主要从事细胞生物学方面研究。
联合激活主要是单纯的物理刺激或化学刺激以后再用蛋白质合成抑制剂或蛋白质磷酸化抑制剂或细胞松弛素b联合处理的一种激活方式
第３４卷第４期
２０１３年０４月
湖北畜牧兽医
ＨｕｂｅｉＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＳｃｉｅｎｃｅｓ
激活有关。对核移植中卵母细胞激活方法进行了综述。对常用的几种激活方法及其激活原理进行了介绍。
关键词：核移植；卵母细胞；激活方法
中图分类号：￥８１３．３
文献标识码：Ｂ
文章编号：１００７ — ２７３Ｘ（２０１３）０４ — ００７４ — ０４

人猪杂交实验报告(3篇)

第1篇一、实验背景随着医学技术的不断发展，器官移植已成为治疗多种疾病的重要手段。

然而，供体器官的短缺、免疫排斥反应等问题严重制约了器官移植的广泛应用。

近年来，科学家们尝试通过生物技术手段，将人类干细胞植入动物胚胎中，以期培育出可供移植的器官。

本实验旨在探讨人猪杂交的可能性，为解决人类器官移植难题提供新的思路。

二、实验目的1. 验证人猪杂交胚胎的培育技术；2. 探究人类干细胞在猪胚胎中的生长和发育情况；3. 为未来人类器官移植提供实验依据。

三、实验材料与方法1. 实验材料- 人类干细胞- 猪胚胎- 代孕母猪- 实验室设备（显微镜、培养箱、离心机等）2. 实验方法（1）提取人类干细胞：从健康志愿者体内采集血液，分离出单个核细胞，经过体外培养和诱导分化，得到人类干细胞。

（2）制备猪胚胎：从健康母猪体内采集卵母细胞，经过体外成熟、受精、胚胎培养等步骤，得到早期猪胚胎。

（3）人猪杂交胚胎的制备：将人类干细胞与猪胚胎进行体外融合，形成人猪杂交胚胎。

（4）胚胎移植：将人猪杂交胚胎移植到代孕母猪体内，观察胚胎的发育情况。

（5）组织学观察：对移植后的胚胎进行组织学观察，分析人类干细胞在猪胚胎中的生长和发育情况。

四、实验结果1. 成功制备人猪杂交胚胎：通过体外融合技术，成功制备了人猪杂交胚胎。

2. 胚胎发育：将人猪杂交胚胎移植到代孕母猪体内，观察到胚胎在28天内正常发育，形成了心脏、肝脏等器官的前体。

3. 组织学观察：对移植后的胚胎进行组织学观察，发现人类干细胞在猪胚胎中成功整合，并参与了胚胎的发育过程。

五、实验讨论1. 人猪杂交胚胎的培育成功，为人类器官移植提供了新的思路。

通过将人类干细胞植入动物胚胎中，有望培育出可供移植的器官，解决供体器官短缺问题。

2. 本实验成功地将人类干细胞整合到猪胚胎中，表明人类干细胞可以在猪胚胎中生长和发育。

这为未来人类器官移植提供了实验依据。

3. 然而，人猪杂交实验仍处于初步阶段，存在伦理、技术等方面的问题。

猪未成熟卵母细胞玻璃化冷冻的研究

（．１西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌７２０；．１１０２燕山大学环境与化学工程学院，河北秦皇岛０６ｏ；浙江省农业科学院畜牧兽医研究所６ｏ４３
．
浙江杭州３１２；．１０１４山东省日照市畜牧局，３山东日照２６２）７８６
摘要研究了乙二醇（Ｇ、甲基＿Ｅ）二Ｅ￣（ＭＯ、，ＤＳ）丙二醇（ＲＨ和甘油（Ｌ）４ＰＯ）ＧＹ这种渗透性冷冻保护剂及其两两组合对玻璃化冷冻未成熟（Ｖ期）卵母细胞的影响；Ｇ猪比较了３种不同冻前预处理方法和２不同的解冻方法。结果表明：Ｇ组卵母细胞所取得的成熟率为种Ｅ１、％，ＤＳ２９０与ＭＯ组（．％）Ｅ８６及Ｇ和ＤＳ２ＭＯ混合组（．ｌ）９６％差异不显著（００）但明显好于其他各组（００）６步预处理法和３Ｐ＞、，５Ｐ＜．；５步预处理法所取得的卵母细胞存活率和成熟率显著高于ｌ步预处理法（００）成熟率分别为１、％和ｌ、１３步和４步解冻法Ｐ＜．，５２３３１ｌ％；取得的成熟率要显著好于ｌ步解冻法，成熟率分别达ｌ．％、、％。２７０ｌ４０７关键词猪；卵母细胞；玻璃化冷冻；外成熟体中图分类号Ｑ５、９２６文献标识码Ａ文章编号０１ — ６１２７ｏ — １６ — ３５７６１（ｏ）０６５０ｏ６
ＫｅｒｓＰｒｉｅＯｏｙｅＶｉｉｃｔｎＭａｕａｉｎｙｗｏｄｏｃｎ；ｅｔ；ｔｆａｉ；ｔｒｔｒｉｏｏ

卵巢生理状态、精子获能时间及精卵共孵育时间对猪体外受精及胚胎发育的影响

５０４）１６２
５７０；．２４０２华南农业大学动物科学学院，广东广州
摘
要：的体外受精受温度、猪多精受精等因素影响一直效率较低。文研究了卵巢生理状态、子本精
获能时间及精卵共孵育时间对猪体外受精及胚胎发育的影响。实验结果表明：１从存在黄体的卵（）
共同孵育的时间是体外受精的关键。关于精子体外过改进。
获能时间普遍采用的方式是获能１ｈ但也有人认为１．猪卵巢和精液，．２１
猪卵巢来自本地的屠宰场，
不需要额外获能，因为精卵共同孵育时就在受精液精液来自广东温氏集团水台原种猪场的优秀纯种公
好，卵裂率和囊胚率显著高于其他获能时间（＜．１。（）卵共孵育６ｈ和１受精和胚胎发ＰＯ０）３精２ｈ对育无显著影响，孵育１但２ｈ的囊胚率稍高于６ｈ的。关键词：；外受精；胚胎发育）男，１８一，硕士。
１ — ５
黑龙江动物繁殖
第１９卷
第１期
２１０年３
ＳＹＡＮＨＩＹＡＮＪＵＩ
卵巢生理状态、子获能时间及精卵共孵育时间精
对猪体外受精及胚胎发育的影响
石俊松，赵云翔 ’罗绿花，，周
（．１广东温氏食品集团有限公司研究院，广东新兴
荣，郑少芳，周
秀，麦然标，吴珍芳

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节，受到众多因素的调控，其调控机制非常复后，线粒体又移向核周围，形成幼稚型线粒体。
杂。
随着卵母细胞的成熟，粗面内质网减少，滑面内
尽管猪卵母细胞体外成熟技术至今已经取得质网增多，到成熟晚期，滑面内质网变得很少。
ＰＥ的活性，使卵母细胞内的ｃＭ处ＡＰｃｃ５氨酸磷酸酶。此外，ＣｃｉＢｄ２酪ｙｌｎ在激活ＭＦ磷酸二酯酶（Ｄ）Ｐ从而抑制卵母细胞成熟ｕ。的同时还激活了ｐ９ｏ，ｐ９ｏ控制微管组织中于高浓度状态，３ｍｓ３ｍｓ心的变化，影响纺锤体的形成ｕ。
．母细胞胞质均匀、形态完好、裸卵较少，果好。初情期前的青年母猪的卵巢卵母细胞
生长因子对卵母细胞成熟的作用是正向的。
体外成熟后可得到后代，但是效率不如成年母猪发育卵泡中存在多种促生长因子及其受体，它们卵巢体外成熟的卵母细胞，即使是性成熟后还没同时影响卵膜细胞和颗粒细胞的增殖和分化，并
丘细胞的有无和层数，猪卵丘一卵母细胞复合体外成熟培养中，研究较多的就是表皮生长因子分５级。Ａ：扩展且颜色较暗，卵丘细胞有５（Ｇ）Ｇ是一种卵母细胞成熟的诱导剂，能级ＥＦ。ＥＦ
层以上包裹的胞质均匀的卵母细胞；Ｂ：卵丘促进ＣＣ的体外成熟，在ＣＣ上存在ＥＦ级ＯｓＯｓＧ受体，细胞颜色较浅且稀疏的，卵丘细胞有５以上包随着卵泡的发育表达增强，排卵前达到高峰。层
卵母细胞体外成熟（Ｍ是随着动物胚胎体外程中移向皮质，皮质颗粒完全形成后，高尔基Ｉ）Ｖ
生产（Ｖ）ＩＰ技术的产生和发展而起来的。ＩＭＶ是体复合体在皮质中消失。发育早期的线粒体为圆
外受精、核移植、转基因等生物技术的重要环形或椭圆形，主要分布于皮质部，卵母细胞成熟
ＭＦＰ是一种蛋白激酶，由调解亚基细胞周期
要考虑卵巢保存的温度和离体时间对卵母细胞２５卵母细胞成熟促进因子（Ｆ．Ｍ）Ｐ储存时间的比较，其结果表明，牛卵巢在２ ℃ 蛋白ＣｃｉＢｇ４ｙ１ｎ＊催化亚基ｐ４ｃｃ两种蛋白组成３ｄ２
植（ＣＴ时经产母猪以及初情期前母猪卵母细胞酸性成纤维细胞生长因子（ＦＦ、胰岛素样生ＳＮ）ａＧ）
对发育影响不大。２２卵母细胞的分级．
长因子（Ｇ）ＩＦ、血小板衍生生长因子（ＤＦ、血ＰＧ）管内皮生长因子（ＥＦ、转化生长因子（Ｇ）ＶＧ）ＴＦ、
了很大的进步，并已经建立了比较完善的体外成胞质成熟的特点就是积累一些稳定的ｍＮ，并在ＲＡ熟培养体系，但卵母细胞体外成熟的质量还不够卵母细胞成熟的一定阶段进行蛋白质的翻译。并
高，达不到大量生产体外胚胎的要求，还有待于且，细胞质成熟与细胞核成熟中有些内容也是
进一步完善提高。相互关联的。有些细胞质成熟过程依赖于细胞
１卵母细胞体外成熟的机理下，经过一系列生长发育最终形成有受精、胚胎
核成熟。因此，只有当体外成熟和体内成熟非核、质的成熟与卵丘细胞的成熟及其卵丘一
（吉林省农业科学院畜牧科学分院，吉林公主岭１６０）３１０
摘要：综述了猪卵母细胞体外成熟的分子机理和影响因素，以期为后续工作奠定基础。关键词：猪；卵母细胞；体外成熟中图分类号：￥２．８８３文献标识码：Ｂ文章编号：１０ — ７９（０４００ — ５０５２３２１）０ — ０７０１
２．％８８ …。Ｐｍｒｐｒｉｐａａ比较了把猪卵巢分别放于解造成ＭＦＰ复合体的失活。ＭＦＰ前体转化为ＭＦＰ需
一
８ —
ＨｉｎｊｎｏｒａｏｎｍｌｅｒｄｃｉＶ１９Ｎ．２１ｅｏｇｉｇＪｕｎｌｆｉａＲｐｏｕｔｎｏ．ｏ０ｌａＡｏ１４１
有怀孕经历。而且，发情周期渐趋正常的青年母参与调节卵母细胞的成熟。颗粒细胞一旦开始猪其卵母细胞在支持后期发育上也比初情期前的增殖分化，就分泌大量的细胞因子，如表皮生长青年母猪好。但是，ＫｈｏｚｒＪｕｈｌｅ等体细胞核移因子（Ｇ）ＥＦ、碱性成纤维细胞生长因子（ＦＦ、ｂＧ）
成熟率的影响。Ｙｎ等系统进行了运输温度和ａｇ
程中蛋白质的合成，提高卵母细胞质的成熟质量，添￣ＥＦ养成熟的卵母细胞受精后的发育ＭＧ培
能力更强ｕ。另有研究报道，ＥＦ猪雌性原核Ｇ对
形成有促进作用，ＥＦＧ不但能促进卵母细胞减数分裂，也间接调节卵母细胞浆的成熟。
ｐ４ｄ２磷酸化。而ＣｃｉＢ仅是ＭＦ调节的抑制作用，与卵母细胞内的ｃＭ的水平有关。３ｃｃ去ｙ１ｎ不Ｐ的ＡＰ
亚基，而且还可以直接激活与ＭＦ活有关的已￣ｃＭ可以抑制卵母细胞成熟，而Ｈ可以抑制Ｐ激ＨＡＰｘ
猪不同品种之间，其卵母细胞质量也存在差异，如瘦肉型猪与非瘦肉型猪，野猪与家猪，外国品种与国内品种。即便是国内不同省份的品种，也可能因遗传背景、特定营养环境、气候条件的不同，导致卵母细胞质量和体外成熟培养的
当回收温度为３～３６９ｏＣ、２～２５８ｏＣ、１～１４７℃ 地产生，在分裂问期这种周期蛋白不断积蓄，时，体外受精的卵裂率分别为５．％９８和超过激活ＭＦ猪２３、４．％Ｐ的临界值，在分裂后期这种蛋白降
卵母细胞体外成熟是指在体外特定的条件常接近的生活环境，才能获得较高的成熟率。
发育能力的过程。卵母细胞的成熟包括细胞核的卵母细胞复合体的发育成熟之间也存在着复杂的相
成熟和细胞质的成熟，核成熟先于质成熟。细胞互促进和相互抑制作用。体外培养实验证明，从腔核成熟包括：卵母细胞恢复减数分裂、细胞核前卵泡来的卵母细胞剥去颗粒细胞或与散在的颗膜破裂、核仁发生致密化、生发泡破裂（ＶＤ并粒细胞共同培养，都不能进行明显的生长ｕ。这ＧＢ）发育到第１次减数分裂中期；同时，卵母细胞进是由于卵母细胞的生长依赖于与它周围的颗粒细
保存２后收集的卵母细胞体外受精后不影响其的复合体，它以非激活的前体物质存在于成熟前４ｈ
后期发育。与其他哺乳动物相比，卵母细胞的卵母细胞中。Ｃｃ＊ＣｃＢ猪ｄ２Ｈｙｌｎ的变化直接影响ｉ对温度特别敏感，卵巢的回收温度较高或较低，卵到ＭＦＰ的活性。ｐ４ｄ２无分裂能力的卵母细胞３ｃｃ在
皮质颗粒在胞质合成后，逐渐迁移到质膜下的皮致。质区。高尔基复合体最初位于核的周围，成熟过２影响卵母细胞体外成熟的因素２１动物的种类、年龄及健康状况．
收稿日期：０卜０— ６２１２１
基金项目：吉林省科技发展计划项目《利用体细胞核移植技术生产转基因猪的研究》（０８５６２００６）
一
步跨越第１次减数分裂中期，排出第ｌ极体，并胞之间的缝隙连接所介导的通讯，其生长速度与
停止于第２次减数分裂的中期，直到受精、激活它周围的颗粒细胞有关。这些虽然被人们所了
后才完成第２次减数分裂并排出第２极体。细胞质解，但机理还不是非常清楚，有待于进一步的探的成熟包括：细胞器的变化和细胞基质的变化。索，以使体外成熟效果与体内成熟的效果趋于一
同一猪种在不同年龄、个体其卵母细胞体外９后ＩＭＶ，发现在２￣３ｈＶ、ＩＦ５５ｏＣ保存６ｈ仍可以
成熟的情况也有所不同。成年期的健康猪体其卵有效维持猪卵的发育能力，但是发育率比３５℃ 巢表面直径３６ｍ＇泡比例较高，所抽取的卵保存３的低。～￣ｍＢｈ
包裹在卵母细胞周围的卵丘细胞的层数也白细胞介素（Ｌ、神经生长因子（Ｇ）干扰Ｉ）ＮＦ、影响着卵母细胞的体外成熟。不同的研究者对素一（Ｆ — ）ｒＩＮｒ、抑制素和活化素等，这些因子对卵母细胞的分类不尽一致。根据卵母细胞外卵卵母细胞的生长起决定作用。在猪的卵母细胞体