纸层析法分离氨基酸实验报告
层析法_实验报告
一、实验目的1. 了解层析法的原理和操作步骤。
2. 掌握利用层析法分离氨基酸的方法。
3. 熟悉层析实验中各种试剂和仪器的使用。
二、实验原理层析法是一种利用混合物中各组分在两相中分配系数不同，通过流动相的移动使各组分在固定相上形成不同的浓度梯度，从而实现分离的方法。
在本实验中，我们使用纸层析法分离氨基酸混合物。
纸层析法的基本原理是：滤纸作为固定相，氨基酸混合物作为样品，展开剂作为流动相。
样品点在滤纸一端，展开剂在滤纸上扩散，使氨基酸在固定相和流动相之间进行分配，从而实现分离。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：氨基酸混合物、滤纸、展开剂、显色剂等。
2. 实验仪器：层析槽、滴管、铅笔、剪刀、尺子、显微镜等。
四、实验步骤1. 准备层析槽：将滤纸剪成长约10cm、宽约2cm的条状，对折成V形，并将两端用剪刀剪去一小段，使其呈三角形状。
2. 准备样品：取一定量的氨基酸混合物，用少量蒸馏水溶解，配制成一定浓度的溶液。
3. 点样：用滴管将样品溶液滴在滤纸的三角顶端，使样品点直径约为1mm。
4. 展开层析：将点好的滤纸放入层析槽中，加入适量展开剂，使展开剂液面低于样品点。
静置一段时间，待展开剂液面接近滤纸底部时取出滤纸。
5. 显色：将层析后的滤纸晾干，用显色剂进行显色。
6. 观察结果：将显色后的滤纸放在显微镜下观察，记录各氨基酸的层析点位置。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过观察显微镜下的显色结果，可以看到氨基酸混合物在滤纸上分离成几个不同的层析点。
2. 结果分析：（1）各氨基酸的层析点位置与已知标准样品的层析点位置进行对比，可以鉴定出氨基酸的种类。
（2）根据各氨基酸层析点的Rf值（层析比移值），可以计算各氨基酸在混合物中的含量。
（3）通过改变展开剂和层析条件，可以进一步优化层析效果，提高分离纯度。
六、实验总结本实验通过层析法成功分离了氨基酸混合物，验证了层析法的原理和操作步骤。
在实验过程中，需要注意以下几点：1. 点样时样品点直径要适中，不宜过大或过小。
氨基酸的分离鉴定 纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究生物化学和生物学具有重要意义。
而氨基酸的分离鉴定是了解其性质和结构的关键步骤之一。
本实验旨在通过纸层析法对混合氨基酸溶液进行分离和鉴定，以探究纸层析法在氨基酸分析中的应用。
实验步骤：1. 实验前准备：准备好混合氨基酸溶液、纸层析纸、色谱槽和色谱溶液。
2. 制备纸层析纸：将纸层析纸剪成适当大小的长方形，用铅笔在距离底部1.5cm处画一条水平线，再在该线上距离左边1cm处画一个小点。
3. 装置纸层析槽：将纸层析纸的底端浸入色谱槽中，确保纸层析纸上方的溶液不超过纸层析纸的底端。
4. 样品加载：用微量吸管将混合氨基酸溶液滴在纸层析纸上的小点上，尽量避免溶液滴到纸层析纸以下的溶液中。
5. 开始分离：将色谱槽盖好，待溶液上升至纸层析纸的顶端时，取出纸层析纸，迅速标记各个斑点的位置。
6. 斑点分析：将纸层析纸放入紫外灯下观察，记录各个斑点的颜色和位置。
结果与讨论：通过纸层析法，我们成功地将混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
在紫外灯下观察，我们可以清晰地看到在纸层析纸上出现了多个斑点。
根据斑点的颜色和位置，我们可以初步判断其中的化合物。
在本次实验中，我们使用的混合氨基酸溶液包含了苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸三种氨基酸。
根据实验结果，我们可以看到在纸层析纸上出现了三个主要的斑点。
根据颜色和位置的初步判断，我们可以推测第一个斑点为苏氨酸，第二个斑点为甘氨酸，第三个斑点为丙氨酸。
然而，仅凭颜色和位置的初步判断还不足以确定化合物的身份。
为了进一步确认各个斑点的化合物，我们可以利用已知标准物质进行对照。
通过比较已知标准物质的斑点与实验样品的斑点，我们可以准确地鉴定各个斑点所代表的氨基酸。
结论：通过纸层析法，我们成功地对混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
根据初步判断，我们可以推测出混合溶液中的苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸的存在。
氨基酸纸层析实验报告
氨基酸纸层析实验报告
目录
1. 概述
1.1 氨基酸层析原理
1.1.1 纸层析技术
1.1.2 氨基酸分离原理
1.2 实验材料和仪器
1.3 实验步骤
1.4 结果与分析
1.5 实验应用和意义
概述
在本实验中，我们将探讨氨基酸纸层析实验，通过这项实验来了解氨
基酸的分离原理以及纸层析技术的应用。
氨基酸层析原理
纸层析技术
纸层析技术是一种常用于分离物质混合物的方法，基于不同物质在纸
上移动的速度不同而实现分离的原理。
氨基酸分离原理
氨基酸具有不同的疏水性和亲水性，因此在纸层析过程中会根据它们
与试剂液之间的相亲和力不同而移动的速度有所不同，从而实现分离。
实验材料和仪器
本次实验所需材料包括：氨基酸样品、纸层析试纸、显色剂等。
实验
所用仪器主要有吸管、显微镜等。
实验步骤
1. 在纸层析试纸上加载混合的氨基酸样品。
2. 将试纸放入显色剂中进行显色反应。
3. 观察试纸上氨基酸斑点的分离情况。
结果与分析
根据实验结果可以得出各个氨基酸在纸层析试纸上的分离情况，进而分析其性质和相互作用。
实验应用和意义
氨基酸纸层析实验在生物化学和医学领域有着重要的应用价值，可以帮助科研人员了解氨基酸之间的关系和性质，为后续的实验研究提供参考依据。
实验一纸层析法分离鉴定氨基酸
【三、器材与试剂】
【三、器材与试剂】 器材： 1、层析缸 2、毛细管 3、喷雾器 4、培养皿 5、层析滤纸(新华一号) 试剂： 1、扩展剂 （正丁醇：水：冰醋酸= 4：3：1） 2、显色剂 0.1％茚三酮正丁醇溶液。 3、氨基酸溶液 0.5％的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸溶液 及它们的混合液
显色： 用喷雾器均匀喷上0。1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
计算Rf值
【五、实验结果与分析】
【六、注意事项】
【七、思考题】
1、实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？ 2、Rf值的含义、影响因素？
下次实验 ： 实验二 蛋白质和氨基酸的颜色反应
值 日 生 值 日
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小实验
当滤纸接触到溶剂时，溶液将上升。 滤纸上的小圆点是4种不同的氨基酸的混合物。 看看接下来会发生什么事情…
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可以看出1号氨基酸上升的最高，在滤纸上跑得最快。 而4号氨基酸与滤纸的结合最紧，因此跑的速度比其他的氨基酸慢。
这就是纸色谱法。 对照上图，可知道1-4号的各代表什么氨基酸。 纸色谱法是分离鉴定蛋白质的氨基酸组成的重要工具。
实验一 纸层析法分离鉴定氨基酸
【一、实验目的】
【二、实验原理】
层析技术 是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。 可分离物质 糖类、有机酸、氨基酸、核苷等
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固定相 在层析中起分离作用而不随层析过程移动的物质。如纸层析中固定相是滤纸纤维中结合的水。固定相被看成是样品移动的阻力。
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告一、实验目的1、掌握纸层析法分离和鉴定氨基酸的基本原理和操作方法。
2、学习如何根据氨基酸在层析纸上的迁移率（Rf 值）来鉴定氨基酸。
二、实验原理纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
滤纸纤维上的羟基具有亲水性，能吸附一层水作为固定相，而有机溶剂作为流动相。
当有机相沿滤纸经过样品点时，样品点中的溶质在水和有机相之间进行分配。
由于不同的氨基酸在两相中的分配系数不同，导致它们在滤纸上的迁移率不同，从而实现分离和鉴定。
Rf 值（比移值）是氨基酸在层析中的特征值，计算公式为：Rf ＝溶质移动的距离／溶剂移动的距离。
三、实验材料与仪器1、实验材料标准氨基酸溶液：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸。
混合氨基酸溶液。
展开剂：正丁醇：冰醋酸：水＝ 4:1:5（体积比）。
显色剂：025%茚三酮溶液。
2、实验仪器层析缸。
毛细管。
喷雾器。
烘箱。
直尺。
四、实验步骤1、准备滤纸选用一张大小合适的滤纸，在距底边 2cm 处用铅笔轻轻画一条横线，作为起始线。
2、点样用毛细管分别吸取标准氨基酸溶液和混合氨基酸溶液，在起始线上轻轻点样，每个点的直径不超过 2mm，点样后自然风干。
3、层析将滤纸垂直放入装有展开剂的层析缸中，滤纸下端浸入展开剂约1cm，注意滤纸不要与缸壁接触，盖上盖子，进行层析。
当展开剂前沿上升至距滤纸顶端约 1cm 时，取出滤纸，用铅笔标记展开剂前沿的位置，自然风干。
4、显色用喷雾器将显色剂均匀地喷在滤纸上，放入烘箱中，在 80℃左右烘 5 10 分钟，直至斑点显色清晰。
五、实验结果与分析1、测量并计算 Rf 值用直尺分别测量标准氨基酸和混合氨基酸斑点中心到起始线的距离（a）以及展开剂前沿到起始线的距离（b），计算 Rf 值。
2、结果分析根据计算得到的 Rf 值，对照标准氨基酸的 Rf 值，鉴定混合氨基酸溶液中的成分。
六、注意事项1、点样时要避免毛细管的尖端刺破滤纸，且点样量要适中，过多会导致斑点扩散，影响分离效果。
氨基酸纸层析实验报告
氨基酸纸层析实验报告氨基酸纸层析实验报告本实验旨在通过氨基酸纸层析技术，分离并鉴定所给混合氨基酸中的各个成分。
实验原理：氨基酸分子具有酸性和碱性两个官能团，分别为羧基与氨基，其pH值和离子强度也对分子运动轨迹产生显著变化。
氨基酸纸层析就是基于这一原理，依靠吸附、电荷、配位等酸碱性质的不同，通过在滤纸中运用缩小缩液法制备分子筛层，从而在一定的溶剂作用下无规运动，完全分开各组分的谱带，从而实现氨基酸的分离和检验。
实验步骤：步骤一滤纸制备1. 在蒸馏水中加入10％（w/v）海藻酸钠，稳定后取出一部分滤纸，将其浸泡在其中。
并让其均匀地浸入溶液中，看待其依次从表面吸收水分。
2. 把浸润的滤纸用毛刷移到桌面上。
如果水在表面不能自由移动，那么抽去滤纸上的多余水分。
然后将滤纸直接放在桌子上晾干。
步骤二混合氨基酸的样品准备1.向分析仪器中按顺序分别加入氨基酸混合液10μl，Pb(Ac)2溶液0.5ml并在机械震荡下均匀搅拌。
2.在这样的过程中，可以看到各个氨基酸组分在溶液中的展开听待，但由于不同氨基酸之间的反应性差异，这种现象只会在一定程度上显现出来。
步骤三：纸层析操作1.将干燥的滤纸放在台盆上。
在其表面滴上2~3滴混合样品。
2.运用蒸馏水浸润纸层。
然后在温室中干燥。
溶质部分因为吸收了纸层中水分而向上移动。
水分按照两个层面运动，它们之间的活动产生了多个谱带，每个谱带都代表着一组溶质。
3.在整个流程中，我们还需要对纸层的某个部分进行显色，比如使用LC中醛试剂，用其混合氨基酸样品可优先在纸层中显示出为碘色的Phe的谱带。
比较这个谱带与所分析的样品，就可以对其成分进行初步鉴定。
实验结果：通过以上实验操作，我们成功地将所给的混合氨基酸分离出来，同时也对不同成分的酸碱性质有了更为深入的了解。
本次实验最大的收获是，学习到了一种新的分析技术，掌握了其操作方法，这对我今后的化学实验研究中将会有很大的帮助。
总结：氨基酸是大分子有机化合物。
层析法的实验报告
一、实验目的1. 了解层析法的原理及其在生物化学中的应用。
2. 掌握纸层析法分离氨基酸的操作步骤。
3. 学会利用层析法对氨基酸进行定性分析。
二、实验原理层析法是一种利用不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，使混合物中的组分分离的技术。
纸层析法是层析法的一种，以滤纸为固定相，有机溶剂为流动相，将混合物点在滤纸上，通过流动相的扩散，使混合物中的组分在滤纸上形成不同的层析点。
氨基酸在纸层析过程中的分离原理如下：1. 氨基酸在固定相（滤纸纤维）和流动相（有机溶剂）之间进行分配。
2. 由于氨基酸在两相中的分配系数不同，其在滤纸上的移动速度不同，从而实现分离。
3. 通过测量氨基酸层析点的位置（Rf值），可以对其进行定性分析。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：层析缸、滤纸、毛细管、移液管、烘箱、剪刀、尺子等。
2. 试剂：氨基酸混合物、正己烷、丙酮、无水乙醇、三酮显色剂等。
四、实验步骤1. 准备层析缸：将层析缸装满正己烷，静置使其水面平齐。
2. 准备滤纸：取一张滤纸，剪成与层析缸相同大小的长方形。
3. 点样：用毛细管吸取少量氨基酸混合物，点在滤纸的一端，距离底部约2cm。
4. 展开层析：将点样的滤纸放入层析缸中，使滤纸的一端浸入正己烷中，静置一段时间，待溶剂向上扩散至距离点样端约1cm时，取出滤纸。
5. 显色：将层析后的滤纸放入烘箱中，用100℃烘箱烘10分钟，取出后用三酮显色剂进行显色。
6. 测量Rf值：用尺子测量氨基酸层析点的位置，计算Rf值。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过观察层析后的滤纸，可以发现氨基酸混合物中的组分在滤纸上形成了不同的层析点，且每个组分的Rf值不同。
2. 结果分析：根据Rf值，可以确定氨基酸混合物中的组分，并与已知氨基酸进行对比，进行定性分析。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了纸层析法分离氨基酸的操作步骤，并学会了利用层析法对氨基酸进行定性分析。
实验结果表明，纸层析法是一种简单、有效的方法，可用于分离和鉴定氨基酸混合物。
氨基酸的纸层析实验报告
氨基酸的纸层析实验报告氨基酸的纸层析实验报告引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
纸层析是一种简单而有效的分离技术，可用于分离和鉴定氨基酸。
本实验旨在通过纸层析技术对氨基酸进行分离和鉴定，进一步了解氨基酸的性质和特点。
实验材料和方法：材料：苯酚、丙酮、氨基酸溶液（酪氨酸、赖氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丝氨酸）方法：1. 准备纸层析板：在纸层析板的一端绘制一个起点线，距离底部约2 cm。
2. 在起点线上分别滴加不同氨基酸溶液，每个溶液滴加约1 cm。
3. 将纸层析板放入含有苯酚和丙酮的密闭容器中，使其与溶剂接触，但不要浸泡。
4. 等待溶剂前进至纸层析板的顶端，取出纸层析板并迅速标记出溶剂前进的距离。
5. 用紫外灯照射纸层析板，观察各氨基酸的色谱带。
结果与讨论：通过实验，我们成功地进行了氨基酸的纸层析分离和鉴定。
根据实验结果，不同氨基酸在纸层析板上产生了不同的色谱带，表明它们在溶剂中的迁移速度和亲和性不同。
首先，酪氨酸的色谱带位于起点线上方最高位置，表明酪氨酸与溶剂的亲和性最低，迁移速度最慢。
这可能是由于酪氨酸分子结构中的芳香环和羟基团导致了其与溶剂的较弱相互作用。
其次，赖氨酸和谷氨酸的色谱带位于起点线上方，但位置较低。
这表明赖氨酸和谷氨酸与溶剂的亲和性较高，迁移速度较快。
赖氨酸和谷氨酸分子中的带正电荷的氨基团可能与溶剂中的负电荷相互作用，加快了它们的迁移速度。
甘氨酸和丝氨酸的色谱带位于起点线以下，迁移速度最快。
这表明甘氨酸和丝氨酸与溶剂的亲和性最高，迁移速度最快。
甘氨酸和丝氨酸分子中的带负电荷的羧基可能与溶剂中的正电荷相互作用，加快了它们的迁移速度。
总结：通过纸层析实验，我们成功地分离和鉴定了不同氨基酸。
实验结果表明，氨基酸的迁移速度和亲和性与其分子结构密切相关。
进一步研究氨基酸的纸层析技术可以帮助我们更好地了解蛋白质的结构和功能，对于生物化学和生物医学领域的研究具有重要意义。
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纸层析法分离氨基酸
一、前言
纸层析法
纸层析法又称纸色谱法，是目前广泛应用的一种分离技术。
本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。
现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。
它是一种以纸为载体的色谱法。
固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。
将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。
当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。
将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。
根据组分移动距离(Rf值)与已知样比较，进行定性。
用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量(如光度法、比色法等)。
纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定;也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工具。
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。
在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。
但不如GC、HPLC应用普遍。
做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液(石油醚)混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。
由此观查出各种色素的相对含量和种类。
纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，反之则慢;含量较多者色素带也较宽。
最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中的色素分离。
氨基酸
氨基酸是构成蛋白质的基本单位，广泛用于食品、医药、添加剂及化妆品行业。
随着生物工程技术产业的发展逐渐成为2l世纪全球的主要产业之一，氨基酸的需求量越来越大，品种变更越来越快，工艺改革越来越新。
目前全世界氨基酸每年的产量为100万吨，而需求总量是800万吨。
我国自20世纪60年代起，氨基酸的应用在食品工业占61,，在饮料工业占30,，医药、日用化工、农业、冶金、环保、轻工、生物工程技术等方面占用的比例逐年增加。
氨基酸在人类生活的很多方面都有着应用:
（1）在食品行业的应用
（2）在医药工业的应用
（3）在饲料添加剂行业的应用
（4）在化妆品行业的应用
（5）在农业上的应用
（6）在其他行业的应用
氨基酸工业还有着广阔的发展前景:
（1）传统的氨基酸生产方法
（2）运用基因工程手段生产氨基酸
（3）大力发展药用中间体,具体为:
①氨基酸及其衍生物逐渐成为药用中间体
②非天然氨基酸是合成活性药物的重要原料
③生产高附加值的非天然氨基酸
二、实验目的
1.掌握分配层析的原理，学习氨基酸纸层析法的操作技术(包括点样、平衡、展层、显色、鉴定及定量)。
2.学习未知样品的氨基酸成分(水解、层析及鉴定)分析的方法。
三、实验原理
1.纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。
滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。
当有机相流经固定相时，物质在两相间不断分配而得到分离。
2.溶质在滤纸上的移动速度用比移值Rf值表示：
3.Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离
4.在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
本实验利用纸层析法分离氨基酸。
四、实验试剂和器材
实验试剂：
1.氨基酸标准液(1mg/mL)
亮氨酸、甘氨酸和脯氨酸标准液。
2.80%甲酸
3.0.1%茚三酮丙酮溶液
4.氨基酸混合液(每种氨基酸500mg/mL)
5.正丁醇
实验器材：
1.新华滤纸
2.培养皿
3.电热鼓风干燥箱
4.吹风机
5.毛细管
6.针、线、尺。
7.钟罩(高约430mm,直径约290mm，具磨口塞)
五、操作步骤
标准氨基酸纸上层析
单向上行层析
氨基酸Rf值的测定
1.滤纸：选用国产新华1号滤纸，6cm×7cm。
在距滤纸2cm 处划线，用铅笔在线上标上四个点作为点样位子（留出缝线空间）。
2.点样：
①点样要合适，样品点的太浓，斑点易扩散或拉长，以致分离不清；
②用毛细管吸取氨基酸样品，与滤纸垂直方向轻轻碰触点样处的中心，这时样品就自动流出；
③点样的扩散直径控制在0.5cm之内，点样过程中必须在第一滴样品干后再点第二滴，为使样品加速干燥，可用吹风机吹干，但要注意温度不可过高，以免氨基酸破坏，影响定量结果；
④将点好样品的滤纸两侧比齐，用线缝好，揉成筒状。
注意缝线处纸的两边不要接触。
避免由于毛细管现象使溶剂沿两边移动特别快而造成溶剂前沿不齐，影响Rf值。
3.将揉成圆筒状的滤纸放入培养皿内(注意滤纸不要碰皿壁)，当溶剂展层至距离纸的上沿约1cm时，取出滤纸，立即用铅笔标出溶剂前沿位置。
4.显色：待展层基本结束后, 置65℃鼓风箱中10-20min，鼓风保温，滤纸上即显出紫红色/黄色斑点。
5.Rf值的计算：用尺测量显色斑点的中心与原点(点样中心)之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，求出此值，即得氨基酸的Rf值。
计算出3种氨基酸在酸系统中的Rf值，判断待测样组成。
酸溶剂系统：正丁醇：80%甲酸：水=15:3:2(体积比)，茚三酮2ml。
温度25℃，时间1h。
六、实验结果
七、注意事项
1.点样过程中必须在第一滴样品干后再点第二滴；
2.为使样品加速干燥，可用吹风机吹干，但要注意温度不可过高，以免氨基酸破坏，影响定量结果；
3.将揉成圆筒状的滤纸放入培养皿内时，注意滤纸不要碰皿壁；
4.使用的溶剂系统需新鲜配制，并要摇匀；
5.点样要合适，样品点的太浓，斑点易扩散或拉长，以致分离不清；
6.使用茚三酮显色法，必须在整个层析操作中避免手直接接触层析纸，因为手上常常有少量含氮物质。
显色时它也呈现紫色斑点。
污染了层析结果，因此操作时应戴橡皮手套或指套。
同时也要防止空气中的氨；
7.展层展开时切勿是样品点浸入溶剂中。
八、思考题
1.为什么在展层时有时用一种溶剂系统，而有时用两种溶剂系统？
答：这是根据Nernst在1891年提出的分配定律：一种溶质在两种给定的互不相溶的溶剂中分配时，在一定温度下达到平衡后，溶质在两相中的浓度比为一常数，即分配系数(Kd)。
Kd=Ca/Cb Ca和Cb是互不相溶的两相，即A相和B相的浓度。
这里的两相可以使固
相、液相和气相。
意思就是溶质在A和B两种溶剂组成的混合溶剂里分配时，分配比是恒定的。
2.酸性溶剂系统(或碱性溶剂系统)对氨基酸极性基团的解离有何影响?
答：酸性溶液中，有利于氨基酸的碱式电离，氨基结合质子，整个分子带正电荷；反之，碱性溶液中有利于羧基的酸式电离，氨基酸分子整体带负电荷。
3.酸性溶剂系统(或碱性溶剂系统)对碱性氨基酸(赖、精、组)和酸性氨基酸(天冬、谷)的Rf值有什么影响?
答：酸性溶剂系统对碱性氨基酸的溶解性加强，在层析过程中易溶于流动相。
所以跑得比较快，因此Rf 值增大。
反之，碱性性溶剂系统中酸性氨基酸Rf 值增大。
4.什么是分配系数？
答：分配系数是指一定温度下，处于平衡状态时，组分在固定相中的浓度和在流动相中的浓度之比，以K表示。
九、讨论
经过本次利用纸层析法分离氨基酸实验，使我较为熟练的掌握了
利用纸层析法分离氨基酸的具体流程及方法，并且了解了其工作原理，这对于以后的学习是有很大帮助的。
经查阅资料得，亮氨酸的理论Rf值为0.79（酸相），脯氨酸的理论Rf值为0.48（酸相），甘氨酸的理论Rf值为0.30（酸相）。
通过比对滤纸上单一氨基酸层析位置、计算出其实验Rf值并查阅资料得知，滤纸上待测氨基酸的种类及具体位置，较为粗略地分离了亮氨酸、脯氨酸及甘氨酸这三种氨基酸。
总体来讲，本次试验三种氨基酸实验Rf值偏小，。
经过分析后，得出几点影响实验结果的因素，如下：
1.点样过程中未在第一滴样品干后再点第二滴；
2.虽用玻璃罩将滤纸罩住，但还是会有些许空气中的氨在其中，影响实验结果；
3.将揉成圆筒状的滤纸放入培养皿内时，滤纸不小心触碰到皿壁，出现虹吸现象；
4.使用新鲜配制的溶剂系统时，并未完全摇匀；
5.使用茚三酮显色法，必须在整个层析操作中避免手直接接触层析纸，因为手上常常有少量含氮物质。
显色时它也呈现紫色斑点。
污染了层析结果，因此操作时应戴橡皮手套或指套，但实验操作过程中，并未戴橡皮手套或指套，在制作滤纸筒时手不小心触碰到滤纸内侧面，导致手上的物质沾染到滤纸内侧，影响了实验结果；
综上所述，本次实验的误差主要是由于操作误差导致，，因此在以后的学习实验过程中，会更加着重注意实验前对实验器材完好程度
的检查以及实验操作的规范性，严格要求自己，努力做到更好！。