微生物的培养
微生物培养方法
微生物培养方法微生物培养是一种用于研究微生物生理生化特性、生长繁殖规律及其与环境条件的关系等的重要技术手段。
以下是一些常见的微生物培养方法：1、固体培养基培养法固体培养基是在培养液中加入凝固剂，使培养基成为凝固状态的培养基。
这种培养基具有良好的稳定性，可以防止培养液中的微生物在培养过程中流失，同时也可以使微生物在固体表面生长繁殖，方便观察和检测。
固体培养基一般用于细菌、放线菌、酵母菌等微生物的培养。
2、液体培养基培养法液体培养基是一种不添加凝固剂的培养基，使培养基呈液体状态。
液体培养基中，微生物在培养液中自由悬浮生长繁殖，可以充分接触培养液中的营养物质，有利于微生物的生长繁殖。
液体培养基一般用于工业生产中的微生物培养，如发酵工业中制备各种发酵产品。
3、半固体培养基培养法半固体培养基是在液体培养基中加入少量凝固剂，使培养基成为半凝固状态的培养基。
这种培养基可以固定培养液中的微生物，同时也可以使微生物在半固体表面生长繁殖。
半固体培养基一般用于观察微生物的运动和生长情况。
4、厌氧培养法有些微生物需要在无氧或低氧分压条件下生长繁殖，因此需要采用厌氧培养法。
厌氧培养法一般采用密闭容器或厌氧手套箱中进行，可以提供无氧或低氧环境。
在厌氧培养法中，需要使用专门的厌氧培养基和厌氧菌株，以保证微生物的生长繁殖。
5、富集培养法富集培养法是一种常用的分离高浓度微生物的方法。
该方法是通过在培养基中添加一些特殊成分，如高浓度营养物质、抑制剂等，以抑制其他微生物的生长繁殖，从而增加目标微生物的数量和浓度。
富集培养法一般用于从自然界或工业生产中分离特定种类的微生物。
微生物培养方法有很多种，每种方法都有其特定的适用范围和特点。
在实际操作中，需要根据具体情况选择合适的培养方法，以达到最佳的培养效果。
还需要注意无菌操作、环境控制等方面的技术细节，以保证微生物生长繁殖的良好环境和条件。
微生物的分离培养方法微生物的分离培养是微生物研究中常用的技术之一，它能够将目标微生物从复杂的微生物群体中分离出来，并进行纯培养。
微生物的培养方法
微生物的培养方法微生物的培养是指通过合适的基质、培养条件和方法，以及恰当的培养容器，将微生物从自然环境中分离出来，使其在人工环境下繁殖和生长，以满足科学研究、生产和应用的需要。
微生物培养方法的选择与微生物的性质有关，包括生理和形态特征、营养来源、气体要求、温度、pH值等。
常见的微生物培养方法有液体培养、固体培养、扩散培养、暂时培养和微生物保存等。
液体培养是指将培养基和待培养微生物接种于培养容器中，并进行摇床培养加以促进其繁殖。
液体培养广泛用于培养微生物的大量斜坡以及学习微生物的生长动力学特性。
液体培养方法多种多样，可以依据培养条件来选择合适的方法。
固体培养是将微生物和培养基混合均匀后，倾倒在含有沉淀剂的培养容器中，培养容器在固化前，适当摇晃以均匀分布培养基。
固体培养适用于分离纯化菌株和观察菌落形态及颜色变化。
最常用的固体培养基是琼脂培养基。
琼脂是一种提取自海藻的胶质物质，它能够在适当温度下形成透明、坚硬和有弹性的凝胶，为微生物提供一个适于繁殖生长的环境。
扩散培养是将实验用的液体培养基加入琼脂培养基中，在固化前将液体培养基轻轻摇晃以均匀分散，待琼脂培养基凝胶固化后，液体培养基只能通过恒温箱中的小孔扩散到培养基上。
扩散培养适用于需供氧微生物的培养，同时又避免了氧和有机物的过量供给，是一种相对较为精细的培养方法。
暂时培养是将微生物接种在较为理想的培养基上，借助于其中的营养物质和适宜的环境条件促使微生物生长，但没有进行分子生物学鉴定或保存。
它适用于需要短期观察和分析微生物的特点和功能的实验。
微生物保存是将微生物接种于含有特定物质（保护剂）的培养基上，配制成液体或固体样品，并通过一定的技术和方法，使微生物经过预处理后，进入休眠状态，长期保存以备后用。
常见的微生物保存方法有冷冻保存法、低温保存法和干燥保存法。
冷冻保存是指将微生物接种于含有保护剂的培养基中，制成液体样品，经过短暂培养后，在恒温箱中真空冷冻干燥装置中进行冷冻保存。
培养微生物五个步骤
培养微生物五个步骤培养微生物是微生物学研究中非常重要的一环，通过培养可以获得大量的微生物，从而进行各种实验和研究。
下面将介绍培养微生物的五个步骤。
第一步：选择培养基培养基是培养微生物的基础，选择合适的培养基对于微生物的生长和繁殖至关重要。
培养基可以分为固体培养基和液体培养基两种形式。
固体培养基通常是用琼脂糖制成的，而液体培养基则是溶解在适当的溶液中。
在选择培养基时需要考虑微生物的类型和所需的生长条件，例如温度、pH值等。
第二步：准备培养基准备培养基时需要按照一定的比例混合各种成分，并加热至溶解。
然后将培养基分装到培养皿或试管中，并进行高温高压灭菌，以杀死其中的微生物和孢子。
灭菌后，将培养基冷却至适宜的温度，使其凝固（固体培养基）或保持液态状态（液体培养基）。
第三步：接种微生物接种微生物是将待培养的微生物转移到培养基中的过程。
接种时需要用无菌的工具（如匀菌针或无菌吸管）取少量微生物液体或菌落，均匀涂抹在培养基表面（固体培养基）或加入培养基中（液体培养基）。
接种后需要注意避免交叉污染，以保证培养的纯度。
第四步：培养微生物培养微生物的过程中需要提供适宜的生长条件，如适宜的温度、湿度和氧气含量。
对于不同的微生物，这些条件可能有所不同。
在培养过程中，需要定期观察和记录微生物的生长情况，如菌落的形状、颜色和大小等。
培养时间的长短也取决于微生物的生长速度。
第五步：分离纯种在培养微生物的过程中，可能存在多种微生物混合生长的情况。
为了得到纯种微生物，需要进行分离。
常用的分离方法有传代分离法、挑选分离法和稀释分离法等。
通过这些方法，可以将不同的微生物分离出来，得到纯种菌株。
总结起来，培养微生物的五个步骤分别是选择培养基、准备培养基、接种微生物、培养微生物和分离纯种。
通过这些步骤，可以获得大量的微生物，为微生物学研究提供了基础条件。
在进行微生物培养时，需要注意无菌操作，以避免外来的污染。
此外，培养条件的选择要根据微生物的需求进行调整，以促进微生物的生长和繁殖。
《微生物的培养》课件
微生物培养的步骤包括选择培养基、接种、培养和观察等。
微生物培养的分类
固体培养：将微生物接种到固体培养基上， 使其生长繁殖
液体培养：将微生物接种到液体培养基中， 使其生长繁殖
半固体培养：将微生物接种到半固体培养 基中，使其生长繁殖
厌氧培养：在无氧条件下培养微生物，如 乳酸菌、酵母菌等
接种与培养
接种步骤：将菌种接种到培 养基上，注意无菌操作
接种方法：选择合适的接种 工具，如接种环、接种针等
培养条件：控制温度、湿度、 光照等环境因素
培养时间：根据微生物种类 和实验目的确定培养时间
观察与记录
观察微生物的生长情况，记录 其形态、颜色、大小等特征
记录培养基的pH值、温度、湿 度等环境条件
固体培养基培养
固体培养基：由琼脂、淀粉、蛋白胨等成分组成 培养目的：观察微生物的生长、形态和代谢产物 培养步骤：配制培养基、接种、培养、观察 注意事项：无菌操作、温度控制、时间控制
气相培养
原理：利用微生 物在气相中的生 长特性进行培养
特点：无需液体 培养基，操作简 便
应用：适用于厌 氧菌、好氧菌等 微生物的培养
安全防护措施
实验室环境：保持清洁、通风良好 实验操作：正确使用防护设备，如手套、口罩、防护服等 实验废弃物：妥善处理，避免污染环境 实验记录：详细记录实验过程和结果，以便追溯和改进
实验器具的消毒灭菌
实验器具的消 毒：使用70% 乙醇或0.1%苯 扎溴铵溶液进
行消毒
实验器具的灭 菌：使用高压 蒸汽灭菌器进 行灭菌，温度 为121℃，时 间至少15分钟
微生物培养的基本原理
微生物生长的阶段
迟缓期：微生 物适应新环境，
微生物培养实验
微生物培养实验微生物是一类微小的生物体，存在于自然界的各个角落，包括土壤、水体、空气中等。
它们是地球上最早出现的生命形式之一，对维持生态平衡起到至关重要的作用。
为了研究微生物的特性和行为，科学家们常常进行微生物培养实验。
一、培养基的配制在微生物培养实验中，培养基是至关重要的。
培养基是提供微生物生长所需的营养物质的物质，可以分为固体培养基和液体培养基。
常用的培养基成分包括碳源、氮源、矿物质、维生素等。
不同的微生物种类对培养基的要求不同，因此科学家们需要精心设计和配制培养基，以符合特定微生物的生长需求。
二、微生物的分离与筛查在微生物培养实验中，科学家们常常需要从自然环境中分离并筛选出特定的微生物。
首先，他们会采集来自不同环境的样本，如土壤、水体或人体。
然后，通过将样本分离于不同培养基上，将微生物分离出来。
这些微生物会在培养基上形成孤立的菌落，科学家们可以通过观察不同菌落的形状、颜色和质地等特征，初步判断菌落中所包含的微生物种类。
接下来，科学家们会进一步进行细菌的筛查，以确定具体的微生物种类，并进行单菌培养。
三、微生物的单菌培养单菌培养是微生物培养实验的关键步骤之一。
在分离出的微生物菌落中，可能有多种不同的微生物共存。
为了获取纯净的微生物菌株，科学家们会将菌落进行分离培养。
具体方法是通过取极小的菌落，用铲子或接种针将其转移到新的培养基上，进行单独培养。
这样，菌落中的微生物会逐渐蔓延并形成纯净的单菌培养基。
这些单菌培养基可以用于后续的微生物特性研究。
四、微生物特性研究在获得纯净的单菌培养基之后，科学家们可以进行微生物的特性研究。
他们通常会观察微生物的生长速度、形态特征和代谢活性等指标。
同时，科学家们还会对微生物的抗性和致病性进行研究，以了解微生物对外界环境和生物体的影响。
这些研究有助于深入理解微生物的生物学过程，并为治疗疾病和环境保护提供重要参考。
五、应用领域微生物培养实验在各个领域中都有广泛的应用。
在医药领域中，科学家们通过培养和研究微生物，开发新的抗生素和药物来治疗疾病；在食品领域中，微生物培养实验可以应用于食品质量检测和菌种培养；在环境保护领域中，科学家们可以通过微生物培养实验来研究微生物对环境中污染物质贡献的分解能力和处理效果。
微生物培养实验方法_
微生物培养实验方法_一、选材和操作环境1.选材：根据实验目的，选择适当的微生物进行培养。
可以选择广谱微生物培养基来适应多种微生物的生长，或者选用特定的微生物培养基来培养其中一种特定的微生物。
2.操作环境：为了避免实验污染和交叉感染，实验室应该严格执行无菌操作，使用无菌操作台进行培养实验。
二、无菌技术1.灭菌：使用高压蒸汽灭菌器或者乙醇灭菌器将培养器具、培养基和植物培养基灭菌，以杀灭存在的菌种。
2.无菌操作：将培养器具放在无菌操作台上，进行接种、移植以及采样等操作，确保操作过程中不受外界菌种污染。
三、液体培养实验1.静态培养：在无菌培养基中接种微生物，放入试管或培养瓶中，静置培养。
根据需求，可以在静态培养过程中添加适量的养分补充剂。
2.摇床培养：将含有微生物的培养基放在摇床上进行培养，设置合适的温度和摇动速度，可以促进微生物的生长和代谢。
3.发酵罐培养：将含有微生物的培养基放入发酵罐中进行大规模培养。
控制发酵罐内的温度、pH值、氧气供应等条件，可以实现微生物的高密度培养。
四、固体培养实验1.平板培养：将含有微生物的培养基倒入培养皿中，使其均匀分布在培养皿表面，待其凝固后，将微生物接种于其上。
培养过程中可以观察到微生物的孤悬、菌落的形成和生长情况。
2.涂布法：将含有微生物的培养基均匀涂布在玻璃片、培养皿或者培养瓶内壁上，形成薄膜状，待其凝固后，进行微生物的接种。
3.动植物体内培养：将微生物接种在动植物的体内，如动物的腹腔、皮肤或者植物的叶片、根系等，利用动植体提供的养分来满足微生物的生长需求。
五、检测微生物生长和代谢特性1.可视方法：通过观察培养基上微生物的生长情况、菌落的形态和颜色等，判断微生物的生长情况。
2.双抗法：使用特定的抗体和染料来染色微生物，使其表现出不同的颜色或者形态，以便于鉴别和分析微生物。
3.生化检测方法：通过检测微生物在培养基上产生的特定代谢产物，如酶活性、气体产生等，来评估微生物的生长情况和代谢特性。
微生物的培养方法
微生物的培养方法微生物的培养是通过提供适当的营养物质和环境条件，使细菌、真菌、病毒等微生物在实验室中进行生长和繁殖的过程。
微生物的培养方法适用于科学研究、药物研发、环境监测等各个领域。
本文将详细介绍微生物的培养方法，包括无菌技术的使用、平板、液体和固体培养基的制备、以及培养条件的控制。
一、准备工作在进行微生物培养之前，必须进行准备工作来确保培养的环境是无菌的。
这个步骤主要包括以下内容：1.环境消毒：实验室工作台面、设备和仪器必须经过适当的消毒处理，以杀灭可能存在的微生物。
通常会使用消毒剂，如75%酒精或次氯酸钠等。
2.器材消毒：如试管、培养皿、瓶口和瓶盖等都需要在高温条件下进行干热消毒或使用高压蒸汽灭菌器进行湿热消毒。
3.人员消毒：实验者在进行微生物培养时，要注意用洁净手术衣、手套、口罩等个人防护用品。
同时，要将手部进行彻底的洗涤和消毒，以防止自身的微生物污染。
以上准备工作完成后，可以正式开始微生物的培养。
二、平板培养法平板培养法是最常用的微生物培养方法之一，主要适用于菌落计数、培养纯种菌株、观察生长特性等。
1.制备培养基：平板培养基通常由营养物质、琼脂和水组成。
常用的培养基有LB培养基、TSA培养基等。
将培养基加热溶解后，倒入试管中，装入培养皿，待凝固。
2.接种：通常使用接种环或接种针从含有所需微生物的样品中取出微生物，并涂抹在培养基表面。
可以通过涂抹法、点接种法或环接种法进行接种。
3.培养条件：接种完后，将培养皿倒置，放入恒温箱中，根据所需微生物的生长温度进行相应的控制。
4.菌落观察：培养一段时间后，可以观察培养皿上出现的菌落，包括形态、颜色、大小等特征。
如果需要，可以进行菌落计数和进一步的培养。
三、液体培养法液体培养法适用于微生物的生长、增殖和产生代谢产物等研究。
1.制备培养基：液体培养基通常由营养物质和水组成。
常用的培养基有LB培养基、甘露醇盐水培养基等。
将培养基通过高温杀菌处理后装入洗涤干净的试管中。
微生物的培养与应用知识点总结
微生物的培养与应用知识点总结微生物是一类微小的单细胞生物，包括细菌、真菌、藻类和微型原生动物等。
它们具有十分重要的生态功能和应用价值，因此微生物的培养与应用成为生物学和生物技术领域的重要研究内容。
接下来，我们将总结微生物的培养与应用知识点，以便更好地了解微生物的特性和应用前景。
一、微生物培养的基本原理1. 培养基选择：微生物培养的关键是选择适当的培养基，常见的培养基有富营养基、简单培养基、选择性培养基和不同生理功能的专门培养基。
2. 培养条件：微生物培养需要控制适宜的温度、湿度、氧气浓度和pH值，以提供最适宜的生长环境。
二、微生物培养方法1. 素养平板法：将微生物悬液均匀地涂抹在固体培养基表面，培养一段时间后，可观察到单个菌落的形态和数量，从而进行纯化分离。
2. 液体培养：将微生物悬液加入到培养基中，静置或振荡培养，用于观察微生物在液体中的生长和代谢特性。
3. 发酵法：通过控制培养条件和提供适宜的滋养物质，使微生物产生有用的代谢产物，如乳酸、酒精和抗生素等。
三、微生物应用领域1. 医学上的应用：微生物在药物生产、抗菌素研发、疾病诊断和治疗等方面发挥着重要作用。
2. 工业上的应用：微生物在发酵工业、食品加工、环境保护和生产化工产品等领域有广泛的应用。
3. 农业上的应用：微生物肥料、生物农药和转基因作物技术的发展，使微生物在农业生产中发挥着越来越重要的作用。
4. 生态环境中的应用：微生物在土壤修复、水质净化、废弃物处理和生物能源生产等环境方面也有着重要的应用价值。
四、微生物应用的新趋势1. 微生物资源的发掘：利用微生物多样性资源，寻求更多的有益微生物群落，以发展新型微生物产品或提高传统微生物产品的质量和产量。
2. 微生物功能基因的研究：通过深入研究微生物的功能基因，探索其在代谢途径、抗性机制和生态适应的规律，为微生物工程的开发和应用提供更多的科学依据。
3. 微生物生态系统的应用：利用微生物在自然界中形成的复杂生态系统的协同作用，发展生物防治、生物修复和生物能源等新技术。
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目录实验二土壤中微生物分离纯化培养实验三菌种保藏实验四细菌形态观察及单染色实验五放线菌及霉菌形态观察实验六革兰氏染色及芽孢染色实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定实验八微生物直接计数法及测微技术实验九大肠杆菌生长曲线的测定实验十水中细菌总数的测定实验十一细菌细胞的生化反应实验实验十二噬菌体的分离、纯化及效价测定实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒一、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。
二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。
培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。
根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。
生长繁殖之用。
干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
三、试剂与器材微孔滤膜过滤器、镊子等。
四、实验内容1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制。
2.调pH不要过头。
3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70ºC以下放物、取物。
4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。
5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。
实验二土壤中微生物分离纯化培养一、实验目的掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在掌握微生物培养方法。
二、实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法稀释涂布平板法步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。
三、试剂与器材1.器材盛9m1无菌水的试管、盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、酒精灯、无菌培养皿、显微镜、血细胞计数板等。
四、实验内容1.土壤稀释液的制备2.微生物分离纯化：稀释涂平板法，平皿划线分离法，微生物培养技术五、关键步骤及注意事项1.掌握含菌培养基的配制，严格控制温度。
2.平板划线应防止染菌，同时应注意划线深度及密度。
实验三菌种保藏一、实验目的2.掌握常用的几种不同的菌种保藏方法。
二、实验原理微生物个体微小、代谢旺盛、生长繁殖快，如果保存不妥容易发生变异和杂菌污染，甚三、试剂与器材低温冰箱(—30℃)、超低温冰箱和液氮罐等。
四、实验内容1.斜面保藏法2.液体石蜡法3.穿刺保藏法4.砂土管保藏法5.冷冻真空干燥保存法五、关键步骤及注意事项1.清楚各种保藏方法的优缺点，针对不同要求选择适宜的保藏方法。
2.熔封安瓶时防止封闭不严。
3.液氮冻存操作应防止冻伤。
实验四细菌形态观察及单染色一、实验目的1.了解简单染色法的原理，并掌握其操作方法。
2.学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。
3.巩固显微镜(油镜)的使用方法。
4.初步认识细菌的形态特征。
二、实验原理细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，与背景形成鲜明的对比，以便在显微镜下进行观察。
根据实验目的不同，可分为简单染色法、鉴别染色法和特殊染色法等。
简单染色法是最基本的染色方法，是利用单一染料对细菌进行染色。
此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色。
三、试剂与器材3.器材显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)等。
四、实验内容简单染色法：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检五、关键步骤及注意事项1.涂片时，生理盐水及取菌不宜过多，涂片应尽可能均匀，2.水洗步骤水流不宜过大，过急，以免涂片薄膜脱落。
实验五放线菌及霉菌形态观察一、实验目的1.了解放线菌、霉菌形态观察的原理。
2.学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的操作方法。
3.初步了解放线菌、霉菌的形态特征。
二、实验原理线菌只产生基丝而无气丝。
在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。
孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。
霉菌可产生复合分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征。
本实验采用插片法。
面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。
观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。
这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。
2.实验器材经灭菌的：平皿、玻璃纸、无菌吸管、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片、接种环、接种铲、镊子、显微镜等。
四、实验内容倒平板→接种→插片→培养→镜检五、关键步骤及注意事项1.倒平板要厚一些，接种时划线要密。
2.插片时要有一定角度并与划线垂直。
3.观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，更换高倍镜观察。
4.如果用0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。
实验六革兰氏染色及芽孢染色一、实验目的1.了解革兰氏染色法和芽孢染色法的原理，并掌握其操作方法。
2.了解革兰氏染色法在细菌分类鉴定中的重要性。
3.学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。
4.学习显微镜(油镜)的使用方法。
5.初步认识细菌的形态特征。
二、实验原理革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。
经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为规范的染色方法是十分必要的。
染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。
三、试剂与器材1.材料：枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物，大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物2.试剂革兰氏染色液(结晶紫液、碘液、95％乙醇、番红液)。
5％孔雀绿水溶液3.实验器材小试管、滴管、烧杯、试管架、滤纸、木夹子、载玻片、盖玻片、凹载玻片、无菌水、显微镜等、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)、擦镜纸、生理盐水等。
四、实验内容1.革兰氏染色法制片→初染→媒染→脱色→复染→镜检。
2.Schaefer-Fulton氏染色法制片→染色→水洗→复染→水洗→镜检。
五、关键步骤及注意事项1.涂片时，生理盐水及取菌不宜过多，涂片应尽可能均匀，2.乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，严格掌握脱色时间。
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
酵母菌的繁殖方式分为无性母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、试剂与器材1.材料酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验内容1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检2.水-碘浸片观察五、关键步骤及注意事项1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。
2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。
实验八微生物直接计数法及测微技术一、实验目的1.了解血球计数板计数原理，并掌握计数方法。
2.掌握用测微尺测定微生物大小的方法。
二、实验原理显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体或孢子悬液注入血球计数板的计数室中，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
因为计数板是一块特别的载玻片。
其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格(见图2—3—44)；另一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格，无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。
每一个大方格边长为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。
计数时，通常只用5个中格内的菌体(孢子)数即可。
然后求出每个中方格的平均值，再乘上25或16，得出一个大方格中的总茵数，再换算成lml菌液中的总菌数。
若设5个中方格中总菌数为N，菌液稀释倍数为M，如果是25个中方格计数板，则计算方法为：lml菌液中的总菌数=平均每个中格中菌的个数×25×104×M=50000N·M(个)微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。
微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长0．01mm(即10pm)。
镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。
三、试剂与器材1.材料酿酒酵母、藤黄微球菌和大肠杆菌的染色标本片、酿酒酵母24h马铃薯斜面培养物。
2.实验器材细胞计数板、显微镜、盖玻片、无菌毛细滴管、目镜测微尺、镜台测微尺、载玻片、盖玻片、显微镜等。
四、实验内容1.微生物直接计数法菌悬液制备→镜检计数室→加样品→显微镜计数→清洗血细胞计数板2.微生物测微技术装目镜测微尺→校正→菌体大小测定五、关键步骤及注意事项1.防止加样空气泡产生。
2.调节显微镜光线的强弱适当。
实验九大肠杆菌生长曲线的测定一、实验目的1.了解大肠杆菌的生长曲线特征和繁殖规律，并学会绘制生长曲线。