新生牛血清检测要求
附录ⅩIII D
新生牛血清检测要求
本品系从出生14小时内未进食的新生牛采血分离血清，经除菌过滤后制成。
牛血清生产过程中不得任意添加其他物质成分。
新生牛血清用于生产前应逐批进行以下检查，并应符合规定。
蛋白质含量应为3.5%～5.0%（附录ⅥB第一法）。
血红蛋白用氰化高铁法或其他适宜的方法测定。
应不高于0.02%。
大肠杆菌噬菌体采用噬斑法和增殖法检测。
不得有噬菌体污染。
摩尔渗透压（指标待定）
无菌检查依法检查，应符合规定（附录ⅫA）。
支原体检查依法检查，应符合规定（附录ⅫB）。
细菌内毒素检查应不高于10EU/ml（附录ⅫE 凝胶限量试验）。
病毒检查
1. 细胞培养法
（1）非血吸附病毒检查
将新生牛血清供试品分别接种到人源（如人二倍体细胞）、猴源（如Vero细胞）以及牛肾传代细胞三种细胞，采用的牛肾传代细胞系应证明无牛病毒的污染。
每种细胞至少接种6瓶，每瓶细胞悬液接种量不少于培养液总量的25%。
于36±1℃培养21天。
接种的每种细胞都应同时设立牛血清阴性对照和病毒阳性对照，（阴性对照用牛血清应证明无牛病毒污染）。
培养过程中可根据细胞生长情况更换细胞培养液，每次更换培养液前应观察（肉眼/显微镜）有无细胞病变出现。
培养到期后，阴性对照应无任何细胞病变出现，阳性对照应出现典型的细胞病变，试验成立。
供试品检查应不出现任何细胞病变为阴性，符合要求。
（2）血吸附病毒检查
将上述接种供试品的每种细胞取2瓶进行血吸附病毒检查。
用0.2%~0.5%鸡和豚鼠红细胞混合悬液覆盖于细胞表面，置2~8℃分钟，然后置20~25℃30分钟，分别进行镜检，观察红细胞吸附情况，供试品检查结果均应为阴性。
试验同时应设立血吸附阳性对照。
2. 免疫荧光抗体检查法
采用直接或间接免疫荧光抗体检查法，至少应对牛腹泻病毒，牛腺病毒、牛细小病毒、呼肠孤病毒、狂犬病病毒以及牛副流感病毒进行检查，结果均应为阴性。
支持细胞增殖检查用Sp2/0 -Ag14或适宜的非贴壁传代细胞进行。
（1）细胞生长曲线的测定取供试品按10%浓度配制细胞培养液，按每1ml含104的细胞浓度接种细胞，每天计数活细胞，连续观察一周，并绘制生长曲线，细胞的最大增殖浓度应不低于每1ml含106。
（2）细胞倍增时间的测定按生长曲线计算细胞的倍增时间。
取细胞峰值前一天的细胞计数(Y)、接种细胞数(X)及生长时间(T)计算。
倍增时间=T/A A=log2Y/X
Sp2/0-Ag14细胞的倍增时间应不超过20小时。
1.（3）克隆率的测定按有限稀释法将细胞稀释，并按每孔1个细胞的浓
度接种于96孔细胞培养板，每板至少接种48孔，于37℃、5%二氧化碳培
养1周后计算克隆率，应不低于70%。
克隆率=A/B×100%
式中A为细胞生长阳性孔数；
B为接种细胞的总孔数。
新生牛血清病毒检测细胞培养法
细胞培养法检测新生牛血清病毒1原理某些病毒在其敏感的宿主细胞内增殖时，可引起细胞病变，即出现细胞变圆、细胞破裂、细胞融合等现象。
细胞培养法的主要特点是：广泛的适用性、操作方法简单、成本较低并且该技术方法成熟。
主要缺点是：特异性差、敏感性较低、检测速度慢。
该方法首先使用无病毒血清对实验用Vero细胞进行培养增值，然后分别制备阴性供试品、阳性供试品以及待测试供试品。
将Vero细胞均匀分为至少3份，分别加入以上供试品。
然后再适宜的温度条件下培养，每日进行观察，最多观察21天并记录细胞病变情况。
2材料和方法2.1材料2.1.1病毒牛腹泻病毒；狂犬病毒；牛腺病毒、牛细小病毒、牛副流感病毒、呼肠孤病毒。
2.1.2细胞Vero细胞(非洲绿猴肾细胞系)：购自中国生物制品检定所2.1.3试剂无病毒污染的新生牛血清：阴性对照品使用；MEM培养基：细胞基础培养基；胰蛋白酶：消化细胞。
2.1.4仪器设备①专门的病毒实验室:生物安全柜(CBK一D201)操作，符合国家生物安全要求；②洁净工作台；③倒置显微镜；④冰箱；⑤离心机；⑥离心管、注射器、吸管。
2.1.5阳性病毒将BVDV等，六种病毒在Vero细胞上连续传代至病毒滴度为5.0lgCCID50/mL以上时进行合并，分为若干批，零下70℃冻存，作为阳性病毒对照液。
2.2方法2.2.1非血吸附病毒检查是指利用传统的细胞培养或利用其他的对不具有动物血细胞吸附性质的病毒进行检测方法的统称。
2.2.2细胞制备以细胞密度为2~3×105/mL的Vero细胞，接种到适宜的细胞培养瓶后置于37℃培养箱培养，每天镜下观察细胞的分裂增殖情况，并记录形成良好单层的时间(镜下观察细胞生长成片率达90%以上为良好单层)。
注意将制备的细胞及时进行编号和标注，以免造成混淆。
2.2.3供试品检测取良好单层细胞培养瓶，弃掉Vero细胞旧营养液，在方瓶中分别加入胰蛋白酶消化液0.8mL，待可见细胞面呈松散状态，弃掉胰蛋白酶消化液，方瓶中分别加入适量生长液将所有细胞都从方瓶壁上吹打下来，再轻轻吹打几次，使细胞尽量分散成单个状态。
新生牛血清中乙脑抗体的检测及其方法的建立
测定方法 。 具有灵敏度高 、 重复性好等优点 ， 可真实
反映牛血清 中抗体中和乙型脑炎病毒（ 简称乙脑病 毒） 的能力。对 ｌ ６个批号 的新生牛血清用该方法 进行了抗乙脑病毒抗体的测定 ， 并对其结果进行 了
分析 比较 。
Ｐ Ｕ法 ， 中国生物制品规程》ຫໍສະໝຸດ 进行。 Ｆ 按《 ¨ ６ 待检血清
控标准》 进行质控外， 还应进行乙脑抗体的检测。
关键词 ： 蚀斑减少 中和试验 ； 乙脑病毒抗体 ； 新生牛血清 中图分类号 ：３ ３ ３ Ｒ ７ ． １ 文献标 识码 ： Ａ 文章 编号 ： ０ —６ ３（０ ６ ０ ４ ４ －３ １ ５５ ７ 。２０ ） １） ３０ ０ ０
Ｐａ ｕ ｅ ｕ ｔ ｎｎ ｕｒｌ ａｉｎｔｓ（ ＲＮ ｌｑ ｅｒｄ ｃ ｏ ｅ ｔａ ｚｔ ｅｔ Ｐ Ｔ）ｉ ｄｔｃ ｏ ｆ ｎｉ ａ ａ ｅｅｅ ｃｐ ａｉｓａ ｔ ｏ ｉｓｉ ｅ ｂ ｒ ｏ ｉ ｉ ｏ ｎ ｅｅｔ ｎｏ ｔＪｐ ｎｓ ｎ ｅｈ ｌｉ ｎｉ ｄｅ ｎ ｗ ｏｎ ｂ ． ｉ ａ — ｔ ｂ ｎ
维普资讯
屋 ０ ６年第 ３ ０ ４卷第 １ 期
Ｐｏ ｃｏｉ ｍ ｕ ｏ Ｆｂ ２ ０ Ｖ １ ４Ｎ ． ｒｇｉ Ｍｉ ｂｏ Ｉ ｍ ｎｌ ｅ ． ０６． ０ ｎ ｒ ｌ ．３ ｏ １
新生牛血清中乙脑抗体的检测及其方法 的建立
王 静， 李裕惠， 栗克喜 （ 成都生物制品研 究所 ， 成都 ６ ０２ ） １０３
ｓ ｏ ｌ ｅ ｔｓｅ ｎ ｎ ｗｂ ｒ ｏ ｉｅ ｓ ｌ ｉ ． ｈ ｕ ｄ ｂ ｅ ｔ ｄ ｉ ｅ ｏ ｌ ｂ ｖｎ ｅ－ １ ｌ ｕ１
Ｋｅ ｒ ｓ ｌｑ ｅｒｄ ｃｉｎ ｎ ｕｒｌ ａｉｎｔｓ；Ａｎｉ ａ ａ ｅｅｅ ｃ ｐ ａｉｓａ ｔ ｏ ｉｓ ｙ ｗｏ ｄ ：Ｐａ ｕ ｅ ｕ ｔ ｅ ｔａｉ ｔｏ ｅｔ ｏ ｚ ｔ． ｐ ｎ ｓ ｎ ｅ ｈ ｌ ｉ ｎｉ ｄｅ ；Ｎｅ ｏｎ ｂｖｎ ｅｔ ｌ Ｊ ｔ ｂ ｗｂ ｒ ｏ ｉｅｓ ｒｎ ｌ
大肠杆菌噬菌检验操作SOP
1.目的规定新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测方法。
指导操作者按本程序进行新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测操作。
2.适用范围本程序包括大肠杆菌菌种培养、样品培养、点样、判定标准和增殖试验。
适用于新生牛血清中大肠杆菌噬菌体检定操作的全过程。
3.职责3.1．质量管理部：负责本程序的起草。
3.2．质量管理部QC：负责本程序的操作。
3.3. 总经理：负责本程序的批准。
4.定义无5.引用标准《中华人民共和国药典》四部 2015版6.材料及设备6.1 供试品及参考品/标准品6.1.1 供试品：新生牛血清。
记录批号。
6.1.2 参考品/标准品：大肠杆菌C3000菌种，记录批号。
6.2 化学药品及试剂6.2.1 普通肉汤培养基， 1-2支/批血清，记录批号、数量及效期。
6.2.2 阳性血清，1-2ml,记录批号、效期。
6.2.3 阴性血清，1-2ml,记录批号、效期。
6.2.4 营养琼脂培养基平皿，1-2个/批，记录批号、数量及效期。
6.3 设备资料整理6.3.1 生物安全柜。
6.3.2 振荡培养箱。
6.4 玻璃器皿及辅助用具/易耗品6.4.1 灭菌效期内的尖毛细吸管1-2支6.4.2 1ml吸管，4-6支/批供试品6.4.3 有效期内的一次性使用无菌注射器，2支/批供试品6.4.4 有效期内的一次性无菌滤器（0.45μm)，1个/批供试品6.4.5 操作服，1件/人6.4.6 无菌帽、无菌口罩和橡胶检查手套，1副/人6.4.7 白金耳1个6.4.8 酒精灯1个6.4.9 砂片1片6.4.10 点火枪一把或火机6.4.11 效期内75%酒精棉（见《75%酒精棉配制程序》）7.流程图无8.内容8.1准备8.1.1 尖毛细吸管﹑1ml吸管、操作服经蒸汽高压灭菌，记录高压设备运行流水号8.1.1.1 将试验所需物料放入物料缓冲间。
8.1.1.2 人员按无菌操作室的要求更衣进入操作室，参见《人员进出QC洁净区程序》。
8.2 检测程序8.2.1 大肠杆菌C3000菌种启封、传代。
血清在细胞培养中的作用和质量要求
天津市灏洋生物制品科技有限责任公司血清在细胞培养中的作用和质量要求现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程，这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系，特别是在生物医药领域，细胞培养更具有特殊的作用和价值。
比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多都是通过细胞培养来实现的，基因工程乙肝疫苗大多是以CHO细胞作为载体；基因工程抗体药物的制备也离不开细胞培养。
细胞工程领域更离不开细胞培养技术，杂交瘤单克隆抗体的研究制备完全是通过细胞培养来实现的，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。
总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。
细胞培养的发展，培养基的质量是关键，而培养基的构成中动物血清对细胞的生长繁殖起着重要作用。
在动物血清中牛血清的应用又是最广泛的，所以牛血清的质量好坏直接影响生物制品的质量和安全性，保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。
一、牛血清的主要成分牛血清是一种成分复杂的混合物，其大部分成分已为人所知，但还有一部分仍不清楚，而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。
牛血清主要成分有以下几类：1、蛋白质类除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外还有白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白（抑制胰蛋白酶的作用）、胎牛血清中含胎球蛋白（促进细胞附着）、转铁蛋白（能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用）、纤维粘连素（促进细胞附着生长）等；2、多肽类主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子，最主要的生长因子是血小板生长因子，还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，虽然在血清中含量很少，但对细胞的生长和分裂也起着重要作用；3、激素类激素对细胞的作用是多方面的。
包括：胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关；类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用：促生长激素：促进细胞增殖的效应；氢化可的松：血清中含有微量该成分，它可能具有促细胞贴附和增殖作用。
dfsservice解读《中国兽药典》三部
四、通则和附录
新增附录
v 半数保护量（PD50）测定法 v 病毒半数致死量、感染量（LD50、ELD50、ID50、
EID50、TCID50）测定法 v 生物制品生产和检验用新生牛血清质量标准 v 兽用液体疫苗用塑料瓶质量标准 v 禽网状内皮组织增生症病毒（REV）检测（IFA法）
四、通则和附录
五、主要修订内容、修订原因及 应注意的问题
v 5.将血清抗体效价的表述方式均统一为用比号 表示，如：4 log2改为1∶16等。
v 6.在液体疫苗的检查项中统一增加了【装量检 查】项。“【装量检查】 按附录53页进行检 验，应符合规定。”
v 7.将所有XX抗原、阴阳性血清的名称均统一为 “XX抗原、阳性血清和阴性血清”，并将其英 文名称和汉语拼音名称也做相应修改。
v （4）剩余水分测定法：
v
删除费休氏法，仅保留真空烘干法。
通则的修订情况
v 1.将兽用生物制品通则做了修订； v 2.将通则细化为5个规定。
附录的修订情况
v 1.将病毒半数致死、感染量（LD50、ELD50、ID50、 EID50、TCID50、PD50）的测定法：修订为2个方法 ：“病毒半数致死量、感染量（LD50、ELD50、ID50 、EID50、TCID50）测定法”和“半数保护量（ PD50）测定法”。
六、“凡例”和“通则”及应 注意的问题
凡例： v （1）不得使用上版标准或已公布废止的原标
准进行检验。 v （2）中文通用名必须与新版兽药典一致。 v （3）应根据要求增加【装量检查】项。 v （4）应制定内控标准，内控标准不得低于兽
药典标准。 v （5）室温统一为15－25℃。
六、“凡例”和“通则”及应 注意的问题
最新新生牛血清病毒检测血吸附法
血吸附法检测新生牛血清病毒1原理有些病毒在其敏感宿主细胞中增殖，并不引起细胞病变，但在细胞表层存在病毒蛋白质，用一定百分比的红细胞悬液覆盖细胞表面，置于不同温度条件下一定时间，显微镜下观察，即可出现红细胞被吸附的现象。
血吸附法的技术主要特点是:敏感性高、速度快、成本低。
主要缺点是:病毒特异性检查问题尚未解决，结果判定的客观性较差，是间接检查病毒存在的方法，技术程序也还比较陈旧。
该方法首先使用无病毒血清对实验用Vero细胞进行培养增值，然后分别制备阴性供试品、阳性供试品以及待测试供试品。
取两瓶细胞，分别加入供试品。
然后在适宜的条件下处理，然后观察实验结果。
2材料和方法2.1材料2.1.1病毒牛副流感病毒。
2.1.2细胞Vero细胞(非洲绿猴肾细胞系)：购自中国生物制品检定所；2.1.3试剂无病毒污染的新生牛血清：阴性对照品使用；MEM培养基：细胞基础培养基；0.85%生理盐水：洗脱血细胞；胰蛋白酶：消化细胞；鸡血；豚鼠血。
2.1.4仪器设备①专门的病毒实验室：生物安全柜(CBK一DZOI)操作，符合国家生物安全要求；②洁净工作台；③倒置显微镜；④冰箱；⑤离心机；⑥离心瓶、注射器、吸管。
2.1.5阳性病毒将牛副流感病毒在Vero细胞上连续传代至病毒滴度为5.0lgCCID50/ml以上时进行合并，分为若干批，零下70℃冻存，作为阳性病毒对照液。
2.2方法2.2.1细胞制备以细胞密度为2~3×105/mL的Vero细胞，接种到适宜的细胞培养瓶后置于37℃培养箱培养，每天镜下观察细胞的分裂增殖情况，并记录形成良好单层的时间(镜下观察细胞生长成片率达90%以上为良好单层)。
注意将制备的细胞及时进行编号和标注，以免造成混淆。
2.2.2红细胞悬液配制取体重300一500g豚鼠，心脏采血2一3mL放入内含3一5mL生理盐水的离心管中，盖栓、轻摇。
豚鼠血加入生理盐水洗三次，800一1000转/分钟离心10一15分钟，压积血球，备用。
生物活性测定法
生物活性测定法
重组人促红素体内生物学活性测定法 网织红细胞法) (网织红细胞法)
本法系依据人促红素(EPO)可刺激网织红 可刺激网织红 本法系依据人促红素 细胞生成的作用,给小鼠皮下注射EPO后, 细胞生成的作用,给小鼠皮下注射 后 其网织红细胞数量随 EPO注射剂量的增加 注射剂量的增加 而升高. 而升高.利用网织红细胞数对红细胞数的 比值变化,通过剂量-反应平行线法检测 比值变化,通过剂量 反应平行线法检测 EPO体内生物学活性. 体内生物学活性. 体内生物学活性
按标准品说明书, 标准品溶液的制备 按标准品说明书, 标准品复溶, 将EPO标准品复溶,用稀释液将 标准品复溶 用稀释液将EPO标准 标准 品稀释成高, 个剂量EPO标准溶 品稀释成高,中,低3个剂量 个剂量 标准溶 液. 供试品溶液的制备 用稀释液将供试 品稀释成高, 个剂量与EPO标准 品稀释成高,中,低3个剂量与 个剂量与 标准 溶液单位相近的供试品溶液. 溶液单位相近的供试品溶液.
然后弃去细胞培养板中的上清液, 然后弃去细胞培养板中的上清液,每孔 加染色液50ul 室温放置30分钟后, 50ul, 30分钟后 加染色液50ul,室温放置30分钟后,用 流水小心冲去染色液,并吸干残留水分, 流水小心冲去染色液,并吸干残留水分, 每孔加入脱色液100ul 室温放置3 100ul, 每孔加入脱色液100ul,室温放置3～5分 混匀后,用酶标仪以630nm 630nm为参比波 钟.混匀后,用酶标仪以630nm为参比波 在波长570nm处测定吸光度, 570nm处测定吸光度 长,在波长570nm处测定吸光度,记录测 定结果. 定结果. 试验数据采用计算机程序或四参数回归 计算法进行处理. 计算法进行处理.并按下式计算试验结 果:
生物活性测定法
按标准品说明书, 标准品溶液的制备 按标准品说明书, 标准品复溶, 将EPO标准品复溶,用稀释液将 标准品复溶 用稀释液将EPO标准 标准 品稀释成高, 个剂量EPO标准溶 品稀释成高,中,低3个剂量 个剂量 标准溶 液. 供试品溶液的制备 用稀释液将供试 品稀释成高, 个剂量与EPO标准 品稀释成高,中,低3个剂量与 个剂量与 标准 溶液单位相近的供试品溶液. 溶液单位相近的供试品溶液.
将配制完成的标准品溶液和供试品溶液 移入接种WISH细胞的培养板中,每孔加 移入接种WISH细胞的培养板中, WISH细胞的培养板中 100ul. 37℃, 入100ul.于37℃,5%二氧化碳条件下 培养18 24小时 18～ 小时. 培养18～24小时.弃去细胞培养板中的 上清液.将保存的水泡性口炎病毒(VSV (VSV, 上清液.将保存的水泡性口炎病毒(VSV, 70℃保存 用攻毒培养液稀释至100 保存) -70℃保存)用攻毒培养液稀释至100 每孔100ul 100ul. 37℃, CCID50,每孔100ul.于37℃,5%二氧 化碳培养24小时(镜检标准品溶液的50 24小时 化碳培养24小时(镜检标准品溶液的50 病变点在lIU/m1) lIU/m1). %病变点在lIU/m1).
重组人白介素重组人白介素-2生物学活性测定法 (CTLL- 细胞/MTT比色法) /MTT比色法 (CTLL-2细胞/MTT比色法)
本法系根据在不同白介素-2 (IL-2)的 本法系根据在不同白介素- (IL-2)的 浓度下,其细胞依赖株CTLL CTLL浓度下,其细胞依赖株CTLL-2细胞存活 率不同,以此检测IL 的生物学活性. IL率不同,以此检测IL-2的生物学活性.
试剂 RPMI1640培养液 1640培养 (1) RPMI1640培养液 取RPMI 1640培养 基粉末1 规格为1L) 1L), 基粉末1袋(规格为1L),加水溶解并稀释至 1000ml,加青霉素10 IU和链霉素 和链霉素10 IU, 1000ml,加青霉素105IU和链霉素105 IU, 再加碳酸氢钠2.1g,溶解后,混匀,除菌 再加碳酸氢钠2.1g,溶解后,混匀, 2.1g 过滤,4℃保存 保存. 过滤,4℃保存. 取新生牛血清(FBS) (2) 基础培养液 取新生牛血清(FBS) 10ml, 1640培养液90ml.4℃保存 培养液90ml 保存. 10ml,加 RPMl 1640培养液90ml.4℃保存. (3)完全培养液 取基础培养液100ml 100ml, (3)完全培养液 取基础培养液100ml, 加重组人自介素- 至终浓度400 800IU. 400～ 加重组人自介素-2至终浓度400～800IU. 4℃保存 保存. 4℃保存.
生物制品生产和检验用新生牛血清质量标准
生物制品生产和检验用新生牛血清质量标准用于生物制品生产的牛血清应为从出生14小时内未进食初乳的新生小牛采血分离血清，经除菌过滤制成。
主要用于细胞培养。
【性状】为淡黄色澄清稍黏稠的液体，无溶血或异物。
【无菌检验】按附录页进行检验，应无菌生长。
【支原体检验】按附录页进行检验，应无支原体生长。
【外源病毒检验】将被检血清按10%浓度加入MEM培养基中，接种48孔细胞培养板培养的VERO、BHK21、PK15、牛睾丸细胞单层，每种细胞接种8孔，同时设立牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（BVDV）对照各2孔，37℃培养5日，观察细胞病变，细胞均不得出现细胞病变。
培养至第5日时，对每种细胞的2孔及病毒对照孔，用PBS洗涤3次，每孔加入80%丙酮0.5ml，4℃以下固定30分钟，弃丙酮后自然干燥，每孔加入BVDV荧光抗体染色0.3ml，室温染色30分钟，弃荧光抗体并用PBS洗涤3次，荧光显微镜观察，被检血清孔不得出现荧光染色。
剩余的6个细胞孔,前3孔，每孔加入0.2%豚鼠、人O型、鸡红细胞等量混合液0.3 ml，2～8℃作用30分钟，另3孔同样加入红细胞后室温作用30分钟。
倒置显微镜观察，均不得出现红细胞吸附现象。
【特异性抗体测定】生产企业应根据血清的使用对象确定测定的抗体种类，测定方法采用中和抗体测定法，如有适用的的ELISA方法，也可采用。
如用于生产口蹄疫疫苗的血清不得含有口蹄疫病毒抗体，用于生产猪瘟疫苗的血清不得含有BVDV抗体等。
【细菌内毒素测定】用凝胶法或细菌内毒素检测仪测定，按照鲎试剂或内毒素检测仪操作程序测定，每毫升血清的内毒素含量应低于10 EU。
【细胞增殖试验】取生长良好的Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞，弃营养液，用无血清MEM配成每毫升30万～50万细胞悬液，计数细胞后，用无血清MEM在96孔细胞板上作1:200、1:400、1:800、1:1600稀释，每稀释度加8孔，每孔0.1ml，每孔再分别补加0.1ml含20%标准血清或20%被检血清MEM营养液，置5％CO2培养箱37℃培养至48小时，倒置显微镜下计数，取每孔克隆数均在30～50之间的稀释度的8个孔，求和计为总克隆数。
胰岛素测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求frrk
胰岛素测定试剂盒（化学发光免疫分析法）适用范围：用于体外定量测定人血清中胰岛素的浓度水平。
1.1规格96T。
1.2 组成2.1 外观a)包装标签应清晰、无磨损;b)试剂盒各组份应齐全、包装完好，液体无渗漏。
2.2 线性本试剂盒线性范围为：[1，320]μIU/mL。
线性相关系数r≥0.9900。
2.3空白限不大于1 μIU/mL。
2.4准确度用参考物质作为样本进行检测，其测量结果的相对偏差应在±10%范围内。
2.5重复性重复检测质控品Q1和 Q2各10次，其批内变异系数（CV）应不大于10%。
2.6批间差用三个批号的试剂盒检测质控品Q1和 Q2，三批号试剂盒之间的批间变异系数（CV）应不大于15%。
2.7质控品赋值有效性质控品测量值应在质控范围内。
2.8特异性2.8.1与人胰岛素原的交叉反应检测浓度为320μIU/mL的人胰岛素原, 交叉反应率应小于1%。
2.8.2与白蛋白的交叉反应检测浓度为320μIU/mL的白蛋白, 交叉反应率应小于1%。
2.8.3与C-肽的交叉反应检测浓度为320μIU/mL的C-肽, 交叉反应率应小于1%。
2.9稳定性规定产品2℃～8℃储存，有效期6个月。
取到效期后的样品检测准确度、空白限、线性、重复性，应符合2.2～2.5的要求。
2.10溯源性根据《GB/T 21415—2008 体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供校准品的来源，赋值过程以及不确定度等内容，校准品溯源至中国食品药品检定研究院标准品（150519）。