对比Pb2+在酿酒酵母和出芽短梗霉菌的活、死细胞中的积累特征
2霉菌、放线菌、酵母菌的形态观察及酵母菌细胞死活鉴定
四、操作步骤
2.霉菌形态观察：
直接制片观察法滴一滴乳酸石碳酸棉蓝染液于载玻片上， 用解剖针从霉菌菌落边缘处挑取少量以产孢子的霉菌菌丝， 先置于50%乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子，再放在载玻片 上的染色液中，用解剖针小心地将菌丝分开，盖上盖玻片， 置低倍镜下找到适当视野，再换高倍镜观察。
繁殖方式：主要产生无性孢子和有性孢子繁殖。
乳酸石碳酸棉蓝染色：细胞不变形，不易干燥，防 腐，保存时间较长，防止孢子飞散。
霉菌的菌丝。构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。 菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很 像一根透明胶管，它的直径一般为3-10微米，比细菌 和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。菌丝可伸长并产 生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝 体。
酵母菌的形态
酵母菌细胞形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状和香肠 状。酵母菌细胞大小为2.5-10x4.5-21m。
酵母菌细胞形态
酵母菌出芽
酵母菌细胞形态
（2）霉菌：霉菌可产生复什分枝的菌丝体（基内菌 丝和气生菌丝），气生菌丝长到一定阶段分化产生分 生孢子梗，分生孢子梗上产生孢子。分生孢子梗和分 生孢子的形态特征是分类鉴定的重要依据。
胞。 ④染色30分钟后再次观察，注意细胞死活比例是否发生变化。 ⑤用0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。 （2）水-碘液浸片法 将革兰氏染色用碘液用水稀释4倍，滴加一滴于载玻片中央，无菌操作取少许菌体于染色液
中止菌丝污染显微镜物镜镜头。 采取恰当的处理方法永久保持微生物的自然形态。 美蓝染液水浸片法制作酵母菌制片注意染液的浓度和染色
实验三、霉菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
芽细胞
酿酒酵母
假丝酵母
子囊
子囊孢子
裂殖
毛霉
根霉
、霉菌形态 霉菌可产生复杂的分枝菌丝， 霉菌可产生复杂的分枝菌丝 ， 其菌丝可分为基 内菌丝和气生菌丝， 内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化 产生繁殖菌丝， 由繁殖菌丝产生孢子。 产生繁殖菌丝 ， 由繁殖菌丝产生孢子 。 霉菌菌丝 尤其是子实体） （尤其是子实体）及孢子的形态特征是识别不同种 类霉菌重要依据。 类霉菌重要依据。 霉菌菌丝和孢子的宽度比细菌粗得多， 霉菌菌丝和孢子的宽度比细菌粗得多， 通常是 细菌菌体宽度的几倍到几十倍，因此， 细菌菌体宽度的几倍到几十倍，因此，有低倍显微 镜即可观察。 镜即可观察。
四、操作步骤
1、酵母菌形态观察和死活细胞鉴别
1）在载玻片上滴加0.1%吕氏碱性美蓝染色液 在载玻片上滴加0 酵母菌菌悬液，与染液混匀， 酵母菌菌悬液，与染液混匀，盖上盖玻片 放置3min后镜检 放置3min后镜检
操作要点： 操作要点： • 染液不宜过多或过少，否则影响观察。 染液不宜过多或过少，否则影响观察。 • 盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。 盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。 • 先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。 先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。
三、实验器材
1、菌种：酿酒酵母、青霉菌、曲霉菌、毛霉菌等 菌种：酿酒酵母、青霉菌、曲霉菌、 2、染色剂： 0.1%吕氏碱性美蓝染色液，棉蓝染色 染色剂： 0.1%吕氏碱性美蓝染色液， 吕氏碱性美蓝染色液 液 3、仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、 仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、 接种环、解剖针、盖玻片、显微镜、擦镜纸、 接种环、解剖针、盖玻片、显微镜、擦镜纸、滤纸 等
微生物工程复习题库
微生物工程复习题库微生物工程复习题库第一部分名词解释上面酵母：发酵时随CO2漂浮在液面上，发酵终了形成了酵母泡盖，长时放置也很少下沉。
下面酵母：发酵时酵母悬浮于发酵液内，终了很快凝结成块并沉淀。
结构性不稳定：由于重组质粒DNA发生缺失、插入或重排引起的质粒结构变化。
复膜氧电极：电极的阴极、阳极和电解质被一层聚分子膜（如聚四氟乙烯）与被测溶液隔开；该膜能透过氧分子，但不能透过溶液中的其它离子或分子。
临界氧浓度：不影响菌的呼吸所允许的最低氧浓度称作临界氧浓度。
比耗氧速率：也称呼吸强度，相对于单位质量的干菌体在单位时间内消耗的氧的量。
全挡板条件：在一定转数下再增加附件而轴功率仍保持不变。
维持因数：供单位重量的细胞（干重）在单位时间内进行维持代谢所消耗的基质量称作维持因数（维持系数）。
Monod模型：温度和PH恒定时，μ随培养基组分浓度变化而变化；若着眼于某一特定培养基组分的浓度S，并假设其他培养基组分浓度不变，则μ是S的函数。
渗漏缺陷型：是一种特殊的营养缺陷型，是遗传性代谢障碍不完全的突变型。
其特点是酶活力下降而不完全丧失，并能在基本培养基上少量生长。
分离性不稳定：由于在细胞分裂过程中质粒缺失分配到子细胞中而导致整个质粒丢失。
氧的满足度：指血红蛋白被氧饱和的百分比，即血红蛋白的氧含量与氧结合量之比乘以100。
得率：生长得率（菌体得率）——干细胞的生长量与基质消耗量的比值。
比生长速率：基质比消耗速率和产物比生成速率。
呼吸商：对于需氧型微生物反应，CO2的生成量与O2的消耗量之比称为呼吸商，用RQ表示。
RQ:值随微生物菌种的不同，培养基成分的不同，生长阶段的不同而不同。
测定RQ值一方面可以了解微生物代谢的状况，另一方面也可以指导补料。
摄氧率（OUR）：单位时间内单位体积培养液中微生物摄取氧的量。
记作r O2(mmol/L·h)抗反馈突变株：通过抗结构类似物突变的方法筛选出的菌株。
侧系呼吸链：在标准呼吸链之外的一条不产ATP的呼吸链F值：单位时间内输入或输出的培养液体积。
酵母菌形态
网上：产朊假丝酵母网：酵母形态观察毕赤酵母网：1600倍放大,可看出此酵母菌大小和红细胞差不多我：我的酵母也同样存在这种一个是内部复杂的结构，一个是内部像鸡蛋一样的简单结构的2种酵母形态，我特别想知道，他们究竟是同一种酵母？还是不同的酵母？？后来查到这是一个测试过滤脏水能为能饮用的水的野外微型过滤器的效果，所以，这个酵母菌的不是培养出来的，而是过滤到的，应该是混合菌。
不是纯培养。
一些酵母只有图二的形态，另一些则在单细胞酵母和多细胞细丝状形态之间变化。
事实上，酿酒酵母在恶劣的繁殖条件下也会变成长丝状以便更好的吸收营养。
酵母到底是什么？2013-09-19 08:49 来源：光明网-国际观察频道我有话说图三是白假丝酵母菌，分别有酵母和细丝两种形态：图三，白色念珠菌，也称白假丝酵母菌简而言之，酵母是一种生存状态的别名，而非“鸟类”和“脊椎动物”这种严格的分类法。
1500种真菌在漫长的相似的环境下逐渐获得了类似的生存形态。
这称为趋同进化，是生物学主要的课题之一。
酵母通过不断萌芽来繁殖，比如酿酒酵母此时看起来就像一个鼓囊囊的气球。
图四展示了酵母萌芽：酵母菌可以漂浮在空气中或落在地球上所有表面。
比如一罐打开一段时间的奶油（表面会形奶油色菌落）或者葡萄表面，鲜榨葡萄汁晾着不久便能散发酒味，这也解释了第一杯葡萄酒如何得来。
酵母之所以能制作面包、啤酒和葡萄酒，是因为它可以在无氧环境下利用糖的能量发酵。
发酵产生2个副产品：二氧化碳——使面包鼓起、啤酒充满泡沫；乙醇——赋予啤酒或葡萄酒令人愉悦的口感（制作面包时则会蒸发）。
此过程对这三种食物都非常必要；联想到最初在发霉的小麦堆里闻到了诱人酒香，这也算是微生物赠与人类的大礼。
如今它的身影常出现在热烤箱和食物发酵积液里。
我们几乎可以肯定，若没有酵母革命性的生产，人类食物的历史将彻底改样。
（编译：崔浩）附图1 白色念珠菌-酵母美图酵母菌好实沃全球领先的稳定化耐高温乳酸菌供应商此为糖尿病患者的尿液,沈渣中可看到大量的酵母菌,白血球和细菌...白色念珠菌-第一节白假丝酵母菌Cnki上面查的：放大12000倍的正常热带假丝酵母菌形态图片来源：魏娟. 秸秆醋液抑菌和杀菌性能的研究, 2009>>查看本文图片摘要图片关键词：形态热带假丝酵母菌醋液菌体玉米秆所属学科：有机化工图片上下文：图5-1 放大12000 倍的正常白色念珠菌形态图5-2 放大12000 倍的醋液作用过的白色念珠菌形态Fig.5-1 Normal morphology of C. albicans Fig.5-2 The morphology of C. albicansaffe....>>展开全部∙季军远. 降氰真菌的筛选及其降氰特性研究, 2005>>查看本文图片摘要图片关键词：模式图模式图所属学科：环境科学与资源利用∙图片上下文：图.37酵母菌形态模式图Hahaha ha哈啊哈哈！！我操！真的找到这样的酵母菌了！！！降解氰化物！！∙图片来源：吕丹凤. 基于图像的酵母菌生长分析与筛选技术研究, 2012>>查看本文图片摘要沈楠,肖冬光,吴帅,丁书美,徐曼. 大豆脂肪酸对酿酒酵母酒精耐性的影响, 酿酒科技, 2006 (11). >>查看本文图片摘要图片关键词：沈楠,肖冬光,吴帅,丁书美,徐曼. 大豆脂肪酸对酿酒酵母酒精耐性的影响, 酿酒科技, 2006 (11孙万儒. 酵母菌, 生物学通报, 2007 (11).刘磊,吴晖,刘冬梅,余以刚,李晓凤. 黄酒生产用酵母的分离与筛选, 现代食品科技, 2007 (图片关键词：显微镜细胞形态结论酵母发酵力抗高温这张照片貌似也是两种不同的酵母，颜色深浅不一图274号酵母菌菌落形态及显微形态图263号酵母菌菌落形态及显微形态余翔. 金华火腿现代化发酵工艺中微生物区系研究, 2005>>查看本文图片摘要图片关键词：显微形态菌落形态酵母菌豆芽汁培养基显微形态菌落形态菌落菌体所属学科：轻工业手工业高玲美. 高蛋白海洋酵母的初步研究, 2007>>查看本文图片摘要王麟. 海洋酵母菌种资源库的建立及特殊类型海洋酵母菌的多样性研究, 2008普洱茶中分离的酵母方祥,陈栋,李晶晶,赵超艺,李斌,黄国资,陈忠正. 普洱茶不同贮藏时期微生物种群的鉴定,现代食品科技, 2008 (02)酵母细胞由酵母转化为真菌丝的过程及真菌丝结构吕文洲,刘英,陈和平,朱建林. 氮对酵母菌-SBR系统效能及酵母形态的影响研究, 环境科学, 2008 (05).聚胺酸修饰酵母的扫描电镜的图片许彬彬,佟蜜,孙小梅,李步海. 聚胺酸修饰酵母对碱性品红和亚甲基蓝的吸附行为, 化学工程师, 2008 (06克鲁维毕赤氏酵母42 自然发酵前期的相关酵母本试验发酵第 1 天所筛选的酵母在WL 培养基李梓,王军. 山葡萄酵母菌株的分离及初步鉴定, 食品科技, 2008 (09裂殖酵母在WL培养基上的菌落形态刘树文,王玉霞,陶怀泉,车兆虹,武胜叶. SO_2和酒精处理对葡萄酒自然发酵酵母菌群的影响, 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2008 (05).冬虫夏草子实体梁宗琦,韩燕峰,梁建东,董旋,杜文. 冬虫夏草Ophiocordycepssinensis研究中几个值得关注的问题, 微生物学通报, 2010 (11).次甲基蓝染色后的部分酵母菌株细胞显微形态∙徐勇. 木糖代谢关键酶基因克隆及重组酵母菌株构建, 2005类酵母细胞形态的演化∙段效辉. 普鲁兰多糖高产菌株Y68多糖发酵生产及其机理初步研究, 2007固定化酵母的选育及在木薯浓醪发酵生产燃料乙醇中的性能对比伍彦华,覃红梅,崔师泰,盘柳萍,凌成金. 固定化酵母的选育及在木薯浓醪发酵生产燃料乙醇中的性能对比, 酿酒科技, 2010 (07).驯化前后菌株形态比较周稳稳,张永奎,邹文婷,李永红. 圆红冬孢酵母在酒精废水中发酵产油, 化工进展, 2010 (S1又一个环境微生物！菌落形态龚方. 海洋季也蒙毕赤酵母菊粉酶的发酵生产、纯化、特性、基因克隆与表达的研究, 2008海洋嗜杀酵母的菌落形态海洋酵母G7a菌落形态图(A)与细胞形态图(B)海洋嗜杀酵母的细胞形态（1000倍Olympus相差镜头）嗜杀是指拮抗性较强，与其他物种不混生，产生抗生素的性能王麟. 海洋酵母菌种资源库的建立及特殊类型海洋酵母菌的多样性研究, 2008产香酵母51.53菌株个体形态特征图3一12产香酵母515.3菌株菌落形态特征张翠英. 优良果酒酵母的分离选育及发酵性能研究, 2006白念珠菌生物膜在h2时的镜下形态特点(X40)马海丽. 念珠菌致病机制的研究, 2006酵母细胞冷处理细胞核电镜观察箭头所指细胞核形态异常叶岚. 抗凋亡基因抑制酵母冷诱导的细胞凋亡及其调控机制, 2006DissoconiummultiseptataeA-B分生孢子;C-D分生孢子梗及疤痕Fig.3-9DissoconiummultiseptataeA-Bconidia;C-Dconidiophoresandscars∙图片来源：翟晓茹. 苹果果实表皮生态位点病原菌多样性研究, 2008>>查看本文图片摘要图片关键词：生活史疤痕分生孢子梗分生孢子所属学科：植物保护园艺∙图片上下文：32图3-9 DissoconiummultiseptataeA-B 分生孢子;C-D 分生孢子梗及疤痕Fig.3-9 DissoconiummultiseptataeA-B conidia; C-D conidiophores and scars3.4.3 出芽短梗霉属该....显微镜图片(放大1000倍)显微镜图（放大1000倍）佟蜜. 面包酵母的修饰表征及对重金属和染料吸附行为的研究, 2007酶解前（A）和酶解后（B）的酿酒酵母显微形态成志远. 大豆异黄酮转化菌株原生质体制备与融合研究, 2010康氏木霉孢子形态图(100×10)白晓青. 康氏木霉与酿酒酵母原生质体融合构建产酒精新菌株, 2010假丝酵母原生菌菌落形态高鹤. 脂肪酶产生菌的细胞融合选育及其产酶条件优化, 2010酵母形态生长的共生菌菌落研究一下这篇文章，看看，是不是有的微生物培养就很难纯培养？？邱振鲁. 石耳科真菌的分离培养及其生物活性的研究, 20114 株酵母菌菌株的镜检结果(100 ×)∙聂凌鸿,樊璐,季方. 大曲中细菌和酵母菌的分离及其Biolog微生物系统分析鉴定, 安徽农业科学, 2012 (02菌株HRZ002的菌落形态∙黄蓉姿. 造纸废水生化处理系统中纤维素降解菌的活性特征研究, 2012扣囊复膜酵母A11和敲除菌株A11-a的菌落及细胞形态王东升. 扣囊复膜酵母A11菌株酸性蛋白酶基因和MIG1基因敲除对酶的生产和海藻积累的影响, 2011酿酒酵母细胞（A）和糠醛耐受酿酒酵母细胞(B)的细胞形态（50X）林凤鸣. 糠醛和苯酚对酵母作用定量蛋白质组学及脂肪酸模块构建, 2011添加Phe0H对Y4#菌培养1od时细胞形态的影响武双. 真菌群体感应分子调控产油酵母的研究, 2008菌株WC43-3.菌落形态图（A）与细胞形态图（B）王致鹏. 汉逊德巴利酵母WC43-3菌株内β-1，3-葡聚糖酶及其基因的研究, 2011海洋酒精酵母菌株2E00558的菌落形态和细胞形态赵新灵. 海洋酒精酵母菌的筛选及酒精酵母菌W0的遗传改造, 2011酿酒酵母（a）及单倍体细胞（b）培养7d后产孢情况（看来这里用到了孢子的染色技术）宋保平. 产甘油假丝酵母生理生化特性、倍性及不同碳源发酵代谢的研究, 2012产甘油假丝酵母形态特征宋保平. 产甘油假丝酵母生理生化特性、倍性及不同碳源发酵代谢的研究, 2012酵母菌ZF －2 分离株的形态学特征A: 菌落; B: 细胞( × 400) ; C: 细胞( × 1000)胡秀彩,戚冰洁,顾丹,梁爽,吕爱军. 斑马鱼肠道中一株红酵母(Rhodotorula)的分离与鉴定, 生物技术, 2011 (04在显微镜放大1600倍得到的S酵母形态图在显微镜放大moo倍得到的T酵母形态图蔡金星. 酱油酿造酵母纯化、生长特性及初步应用研究, 2005柱状假丝酵母形态观察（10×40倍）∙滕宏飞. 固定化酵母细胞制备甘油酯型鱼油, 2011菌株CCNWHX13-160T扫描电镜照片∙郭军康. 铅锌尾矿抗重金属放线菌的分离筛选鉴定, 2008酿酒酵母形态∙江丹. 造纸污泥同步糖化发酵产乙醇的研究, 2010上面酵母形态∙于爱红. 控制上面发酵小麦啤酒中高级醇和乙醛含量的研究, 2011霍方珍. 抗盐酸克伦特罗单链抗体的高效表达及免疫学活性研究, 2007酵母形态显微摄影（600×）∙魏运平. 低产高级醇猕猴桃酒酵母菌株的筛选, 2004F16对猕猴桃汁中野生酵母的嗜杀作用Figure7-4killeractivityoffusantF16towildyeastinkiwifruitjuice罗安伟. 猕猴桃酒生香嗜杀酵母的选育, 2012近十来年，我国猕猴桃酒生产得到了长足发展。
苹果内生菌的分离纯化及发酵产物分析
苹果内生菌的分离纯化及发酵产物分析苹果含丰富的碳水化合物、维生素和微量元素、苹果酸、柠檬酸、水溶性膳食纤维（果胶等，在储藏过程或运条件不当的情况下易受微生物性的病害而引起腐败变质，其中酵母菌是常见的病害。
目前对苹果中酵母菌的分离、鉴定研究报道很少，本试验旨在分离和初步鉴定苹果中的酵母菌，并对其进行抑制试验研究，为研究苹果的保鲜和贮藏提供理论依据。
酵母菌分离及其抑菌试验用豆芽汁蔗糖培养基，生化鉴定试验用淀粉培养基、明胶培养基、蛋白陈水培养基、糖发酵培养基、石蕊牛奶培养基。
苹果中酵母菌的分离培养＂采用涂布平板法对样品菌悬液中酵母菌进行分离。
即将苹果菌悬液10倍级进行。
培养特征和形态特征观察：对所分离纯化菌株平板培养后进行培养特征的观察。
取典型菌落涂片，染色后进行显微镜形态观察。
生化鉴定试验：淀粉水解试验、明胶水解试验、石蕊牛乳试验、糖发酵试验、过氧化氢酶试验。
菌种初步鉴定4根据培养特征和形态特征及生化鉴定结果，对典型菌落进行初步菌种鉴定。
抑菌试验肉，取不同浓度的山梨酸和苯甲酸钠溶液，在120℃高压灭菌20min后添加于查氏培养基，然后从腐败部分体积占整体1/2的苹果中分离培养酵母菌，将分离后的酵母菌接种于添加了山梨酸及苯甲酸钠的查氏培养基上，另将酵母菌接种于未添加抑菌剂的查氏培养基作空白对照，培养24 h 后进行活菌菌落记数，计算抑菌率，研究山梨酸和苯甲酸钠对酵母菌的抑制效果。
本试验从苹果中分离到酵母菌4株，初步鉴定为酿酒酵母、出芽短梗霉、产假丝酵母、皮状丝孢酵母。
引起苹果腐败的主要酵母菌是否为此4株，还需进一步研究。
山梨酸和苯甲酸钠对本试验分离4株菌都有很好的抑制效果，其最适抑菌浓度均为0.08%，此浓度在食品安全要求范围之内。
实验7_酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
二、基本原理——美蓝染色液 基本原理——美蓝染色液
美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色， 美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无 用它对酵母菌染色时， 色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作 使细胞内具有较强的还原能力， 用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色 的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色； 的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色； 对于死细胞或代谢缓慢的老细胞， 对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原 能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。 能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。 因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态， 因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以 区分死、活细胞。 区分死、活细胞。
四、操作步骤——美兰染色 操作步骤——美兰染色
在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液， 在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，用接种环 0.05%吕氏碱性美蓝染色液 染液不宜过多或过少） 挑取少量酵母菌苔，混合均匀； 挑取少量酵母菌苔，混合均匀；（注：染液不宜过多或过少） 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触， 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖 玻片放下使其盖在菌液上； 盖玻片不宜平着放下） 玻片放下使其盖在菌液上；（注：盖玻片不宜平着放下）
二、基本原理——酵母菌形态 基本原理——酵母菌形态
酵母菌为单细胞真核微生物， 菌体比细菌大。 酵母菌为单细胞真核微生物 ， 菌体比细菌大 。 无 性繁殖主要是出芽生殖 出芽生殖， 性繁殖主要是 出芽生殖 ， 仅裂殖酵母属是以分裂 方式繁殖； 有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 方式繁殖 ； 有性繁殖是通过接合产生子囊孢子 。 本实验通过用美蓝染色浸片 美蓝染色浸片来观察生活的酵母形 本实验通过用 美蓝染色浸片 来观察生活的酵母形 态和出芽生殖方式。 态和出芽生殖方式。
微生物中文题库(附答案)
第一章 (3)选择题 (3)判断题 (3)问答题 (4)第二章 (5)选择题 (5)判断题 (6)填空题 (6)名词解释 (7)问答题 (7)第三章 (9)选择题 (9)判断题 (10)填空题 (10)名词解释 (11)问答题 (12)第四章 (13)选择题 (13)判断题 (14)名词解释 (14)问答题 (16)第五章 (17)选择题 (17)判断题 (18)填空题 (19)名词解释 (20)问答题 (21)第六章 (23)选择题 (23)判断题 (23)填空题 (24)名词解释 (24)问答题 (25)第七章 (26)选择题 (26)判断题 (28)填空题 (28)名词解释 (29)问答题 (29)第八章 (32)选择题 (32)判断对错 (32)填空题 (33)名词解释 (33)论述题 (36)第九章 (36)选择题 (36)判断题 (38)填空题 (38)名词解释 (39)论述题 (40)第十章 (42)判断题 (42)填空题 (42)中文、拉丁文互译 (42)简答题 (43)第一章选择题1.下列各项通常不认为是微生物的是（C） 1A.藻类B.原生动物C.蘑菇D.细菌2.人类对微生物的利用主要着眼于利用其（C） 2A.合成菌体蛋白质的能力B.高效的能量转化能力C.多种生化转化能力D.复杂有机物的降解能力3.巴斯德为了否定“自生说”，他在前人工作的基础上，进行了许多试验，其中（C）试验证实了有机质的腐败是由空气中的微生物引起的。
3A.厌氧试验B.灭菌试验C.曲颈瓶试验D.菌种分离试验4.我国学者汤非凡教授分离和确证了（B） 4A.鼠疫杆菌B.沙眼衣原体C.结合杆菌D.天花病毒5、放线菌的全细胞型可分为A,B,C,D四个类型，马杜拉放线菌的细胞壁属于（B）A类型 B B类型 C C类型 D D类型6、肽聚糖种类的多样性主要反映在（A）结构的多样性上。
5A 肽桥B粘肽 C 双糖单位 D 四肽尾7、磷壁酸决定（A）菌的抗原性 6A G+B G-C G+和G-8、按鞭毛的着生方式，大肠杆菌属于（B）7A 单端鞭毛菌B 周生鞭毛菌C 两端鞭毛菌D 侧生鞭毛菌9、细菌的菌毛的主要功能是（C）8A 运动B 传递遗传物质C 附着D 致病性10、原核细胞特有的碳源贮藏颗粒是（A）9A PHB B DAPC PHA11、构成多糖如淀粉和纤维素的单体单位是（C）10A 蔗糖B核糖 C 葡萄糖D 乳糖判断题1.研究表明，所有的细菌都是肉眼看不见的（X）2.第一个用自制显微镜观察到微生物的人是巴斯德，它是微生物系的奠基人。
酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别-学时
实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别活细胞数目比例有什么影响？4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。
5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?一、实验目的与要求1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法；2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
二、实验原理1. 酵母菌酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。
但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。
大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。
本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。
2. 美蓝染液图1：酵母菌美蓝浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美蓝浸片观察30min（10×40）三、实验设备及材料1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。
2. 溶液或试剂：0.1%和0.05%吕氏碱性美蓝溶液(或0.01%美蓝水溶液)，革兰氏染色用碘液等。
3．器材：显微镜，擦镜纸，吸水纸，盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。
四、实验步骤与内容1．美蓝浸片的观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。
水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。
芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。
本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、试剂与器材1.材料酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验内容1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检2.水-碘浸片观察五、关键步骤及注意事项1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。
2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。
六、思考题1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。
2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
实验二酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
实验⼆酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验⼆酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别⼀、实验⽬的与要求观察酵母菌的形态及出芽⽣殖⽅式；学习区分酵母菌死活细胞的实验⽅法。
⼆、基本原理1.单个的酵母菌合同是常见细菌的⼏倍甚⾄⼏⼗倍。
为单细胞，呈圆形，卵形或椭圆形，内有细胞核，液泡和颗粒体物质。
有的种类能产⽣⼦囊孢⼦或掷孢⼦、冬孢⼦、担孢⼦等。
有的种类⼀定条件下形成假菌丝或真菌丝。
⼤多数采取出芽⽅式进⾏⽆性繁殖，也可通过结合产⽣⼦囊孢⼦进⾏有性⽣殖。
2.酵母菌在液体培养基中⽣长时，能利⽤其中的可发酵型糖，并产⽣⽓体，有些产⽣挥发性的酯⾹味，菌体可沉于管的底部或悬浮在培养液中，或漂浮在培养液省形成菌膜或菌醭（分析⼀下为什么）。
当其⽣长在固体培养基上时，菌落形态与细菌相似，但较⼤较厚，呈乳⽩⾊或红⾊，表⾯湿润、粘稠，易被挑起。
随时间延长，菌落颜⾊往往变暗，有些菌落边缘呈皱褶状。
3. 由于细胞个体⼤，采取涂⽚的⽅法制⽚有可能损伤细胞，⼀般通过美蓝染液⽔浸法或⽔-碘液浸⽚法来观察酵母菌形态及出芽⽣殖⽅式。
美兰对细胞⽆毒，其氧化型呈蓝⾊，还原型呈⽆⾊。
由于细胞的新陈代谢，，活细胞内有较强还原能⼒，使美兰由氧化型转变为⽆⾊的还原型，染⾊后活细胞呈⽆⾊。
死细胞或代谢能⼒微弱的衰⽼细胞内还原⼒弱，染⾊后细胞呈蓝⾊或淡蓝⾊。
三、实验材料1.酵母液体培养物和斜⾯培养物。
2.吕⽒碱性美兰染液，⾰兰⽒染⾊⽤碘液。
3.仪器和其他⽤品四、⽅法步骤1.制⽚先在载玻⽚中央滴加⼀滴0.1％吕⽒碱性美蓝染液，再滴加少量⽔稀释。
⽆菌操作取试管中培养的酵母菌少许，放在吕⽒碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。
⽤镊⼦夹盖玻⽚⼀块，⼩⼼地盖在液滴上。
2.镜检将制好的⽔浸⽚放置3分钟后镜检。
先⽤低倍镜，再⽤⾼倍镜，观察酵母菌的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜⾊来区别死、活细胞。
染⾊30分钟后再次观察，注意死活细胞⽐例是否发⽣变化。
⽤0.05%染液作对照同时进⾏上述实验。
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对比Pb2+在酿酒酵母和出芽短梗霉菌的活、死细胞中的积累特征
Jung Ho Suh1, Jong Won Yun2and Dong Seog Kim3*
1化工系，釜山国立大学，釜山609-735，2生物技术系大邱大学，庆北712-714 3 环境科学系，大邱，晓星天主教大学，庆北712-702，韩国，电子邮箱：kimds@cuth.cataegu. ac.kr
Pb2+在酿酒酵母和出芽短梗霉的活、死细胞之间的积累是不同的。
对于酿酒酵母，活细胞Pb2+积累能力高于该死细胞，但他们表现出相反的初始Pb2+积累率。
相反，出芽短梗霉菌采用了一种不同的途径，由于物质的胞外聚合物的存在，这使得活细胞对Pb2+吸附能力和初始积累速率比死细胞高。
引言
虽然在许多文献中记载细菌、藻类以及其他水生植物的纯培养具有从溶液中吸附重金属离子的能力（Shumate和Strandberg,，1985年；Karavaiko等，1996；Stoll 和Duncan，1996年），但是微生物混合培养与纯培养吸附重金属相比是一个更合理的做法（劳森等人，1984年；陆克文等，1984）。
活性污泥中的微生物混合培养的方法被认为可以降低BOD值而不是重金属离子含量。
这种方法可能偶然除去重金属离子会被认为是显而易见的，但是存在着极大的变数。
然而，传统的活性污泥法被认为作为去除重金属离子的方法是不合理的。
因此，采用一种有效地去除重金属离子的新的生物治理是必需的。
一个高效的生物过程不仅解毒含金属离子废水还能回收贵金属和非贵重金属离子给消费者。
这些生物过程被设计和运作上在细胞构成上积累重金属离子，在后续步骤中可以是生物浸出或化学处理的方法在浓缩液中释放吸附的重金属离子。
最终，释放重金属离子的细胞组分可以循环吸附新的重金属离子。
在生物浸出和化学处理过程中，细胞的活力可能会急剧下降。
因此，细胞活力变化成为了有效控制整个闭合环流以去除重金属离子的重要因素。
酿酒酵母是一种廉价的现成的废水生物修复的原材料。
它已被证明能够积累多种重金属离子，如Co2+，Cd2+（Norris和Kelly，1977），Cu2+，Zn2+和Pb2+（黄等，1988）。
出芽短梗霉是一种多态真菌，其涉及酵母样细胞，菌丝和孢子形态转换（多明格斯等，1978）。
它表现出对重金属离子的耐受性相当大（Gadd，1983），并经常从被镉，铅，锌污染的植物叶所分离得到可能是主要的生物体（史密斯，1977; Bewley 和Campbell，1978；1980）。
尽管酿酒酵母和出芽短梗霉不能够在废水处理中微生物混合培养过程中使用的，但是它们可以用于去除重金属离子高效的生物过程，因为他们可以在一个封闭的生物循环中使用。
本文主要的研究工作，以调查为死细胞在重金属离子的去除过程中直接使用的可能性为目的，利用酿酒酵母和出芽短梗霉这些模式生物，研究比较Pb2+在活细胞与死细胞积累的特征。
材料和方法
微生物与生长条件
酿酒酵母KCTC（韩国培养保藏型号）1199，是从酿酒废弃物获得。
该菌种培养于装有100mL培养基的300mL锥形瓶中，在30℃、摇床转速为150rpm 下培养72小时。
培养基的配方如下：100g/L葡萄糖，8.5g/L酵母提取物，1.32g/L NH4Cl，0.11g/L MgSO4，0.06g/L CaCl2。
出芽短梗霉KFCC（韩国菌种保藏基金会）10245，是需氧培养。
该菌种培养于装有100mL培养基的300mL锥形瓶中，在30℃、摇床转速为150rpm下培养72小时。
培养基的配方如下：200g/L蔗糖，20g/L酵母膏，5g/L K2HPO4，2g/L MgSO4·7H2O，15g/L NaNO3。
细胞制备
首先离心收集菌体（10min，3000g），然后用去离子水清洗三次，并储存在4℃的冰箱备用。
将处理过细胞分为两部分，一个部分是在121℃高压灭菌15分钟作为死细胞，另一部分直接作为活细胞。
统计细胞存活率采用传统的梯度稀释涂平板计数方法。
实验方法
在这项研究中采用的方法可参照Mattuschka和Straube’s (1993) 的实验。
将制备好微生物悬浮液与等体积的Pb(NO3)2水溶液混合。
该Pb(NO3)2溶液的初始浓度是菌体吸附饱和所需浓度的两倍。
Pb2+溶液、细胞悬浮液和细胞与Pb2+的混合物的pH值分别为3.0-4.0、5.5-5.7和3.5-5.5。
没有采用任何缓冲液、酸和碱进行pH的调节。
观察配制好的Pb2+溶液无任何沉淀生成。
本实验将50mL Pb2+溶液与50mL微生物悬浮混合置于250mL锥形瓶中，将这些锥形瓶在30℃、150rpm的摇床中培养。
1.8 mL样品在培养到适当的生长期时立刻离心（10000g）。
用原子吸收光谱法测定上清液中Pb2+的浓度。
菌体在105℃下恒温2h直至恒重，采用生物干重法测定生物量。
该实验共进行三次平行实验，实验结果取平均值。
每单位的细胞干重所积累Pb2+量计算方法是Pb2+平均质量产量（Volesky 和May-Phillips，1995）：q（mg Pb2+/g 细胞干重）=（C i-C e）/m。
这里的C i和C e分别是指Pb2+在初始和平衡状态时上清液中的浓度(mg/L)，而m代表干细胞的浓度(mg/L)。
Pb2+的起始积累率
Pb2+的起始积累率的计算方法是测定每单位细胞干重所积累Pb2+量(mg/g)与时
间(min)建立的平面坐标中的斜率关系，起点为t=0。
.
透射电子显微镜（TEM）
电镜照片采用透射电子显微镜（日立H- 600）的40毫米口径镜头在80千伏的加速电压拍摄完成的。
在离心处理后（10000g，15min），戊二醛（2.5％V/ V 0.1M 磷酸缓冲液，pH=7.0）定影和乙醇清洗。
将清洗后的细胞包埋在Epon 812于60℃下过夜。
用超薄切片机（ULTRACUT, Reicher-Jung）切割细胞为350nm的碎片，再将其固定于涂有碳薄层的200目的镍或铜网上。
结果与讨论
Pb2+的积累能力
对于Pb2+的积累能力方面的评估主要采用的是比较酿酒酵母和出芽短梗霉的活、死细胞的单位细胞干重所积累Pb2+量（图1）能力来判断其对细胞活性的影响。
在Volesky 和May-Philips（1995）最近的研究报告中，死亡的酿酒酵母干细胞去除铀或锌是相应活体培养的约40%的量。
恰好相反的是在这项研究中，最大活细胞的Pb2+积累量是高压蒸汽灭菌法处理细胞的积累量的10倍（图1 a）。
采用
高压灭菌法处理细胞最大Pb2+积累量下降可能是由于以下两个原因。
第一，在酿酒酵母细胞死亡的情况下，Pb2+积累只发生细胞的表面上，因为Pb2+很难渗透到死细胞内。
第二，Pb2+吸附位点可能在高压蒸汽灭菌中因高温而变性。
对于出芽短梗霉来说，最大活细胞的Pb2+积累量是高压蒸汽灭菌法处理细胞的积累量的3倍（图1 b）。
与酿酒酵母的结果比较，其Pb2+在活与死细胞之间积累能力的差异不那么大。
这种差异可以通过透射电镜观察出酿酒酵母和出芽短梗霉，见图2所示。
在图2中，用透射电镜分别观察了未用Pb2+胁迫的原酿酒酵母与出芽短梗霉的形态，和采用Pb2+胁迫的酿酒酵母与出芽短梗霉的形态。
在Pb2+胁迫酿酒酵母情况下（图2 A- 2），Pb2+在细胞表面和细胞内部均有吸附。
相反，在细胞的死亡情况下（图2 A-3），Pb2+大部分吸附在死细胞的细胞膜，只有很少的一部分存在于细胞质中。
死亡的细胞很大一部分都会发生质壁分离，可以看出Pb2+的积累主要发生在细胞壁和细胞膜上。
在上述现象的基础上，得出的结论是，在酿酒酵母细胞死亡后Pb2+积累能力降低，因为Pb2+结合位点的数目由于高压灭菌而减少。
对于出芽短梗霉来说，Pb2+只在细胞表面积累（图2 B- 2，B - 3），这是由于胞外聚合物只附着在细胞的表面，不存在可以进入细胞内部的聚合物。