胰岛素放射免疫分析质控血清的研制
血清胰岛素固相放射免疫测定
血清胰岛素固相放射免疫测定
郭爱岩;汪寅章;陆思珍
【期刊名称】《标记免疫分析与临床》
【年(卷),期】1994(000)002
【总页数】1页(P97)
【作者】郭爱岩;汪寅章;陆思珍
【作者单位】中国人民解放军总医院内分泌科;中国人民解放军总医院内分泌科【正文语种】中文
【中图分类】R446.112
【相关文献】
1.人血清胰岛素放射免疫测定对诊断糖尿病的临床价值 [J], 孙跃超;王信;马月兰;郭权;
2.血清胰岛素抗体放射免疫测定及其临床应用 [J], 孙述强;李俊爱
3.抗胰岛素血清的制备及血清胰岛素的放射免疫测定 [J], 钟光恕;周振群
4.尿游离T_3固相放射免疫测定结果分析 [J], 苏天水;欧阳安;李风良;李辰成
5.人血清胰岛素铕螯合物竞争性固相荧光免疫测定 [J], 王德利;童钟杭;朱艮;赵元威;张楚
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3种化学发光检测系统测定血清胰岛素及 C-肽结果的差异比较
3种化学发光检测系统测定血清胰岛素及 C-肽结果的差异比较卢晋英;唐雪峰;张淑文【摘要】目的：比较3种化学发光检测系统测定血清胰岛素（ INS）、C 肽（ C-P）的结果。
方法进行口服葡萄糖耐量试验（OGTT）患者20例，均按照OGTT要求，于空腹及服糖后0．5、1、2、3 h采集静脉血，同时应用Immulite-2000、ADVIA Centaur XP（Certaur XP）、Elecsys 2010等3种化学发光免疫分析系统，检测同一患者在OGTT中各时间点血清INS和C-P水平，并分别计算血清INS和C-P在服糖后各时间点水平与其空腹水平的比值，比较各系统检测结果差异及相关性。
结果①血清INS测定结果在Elecsys 2010与CentaurXP 系统间差异无统计学意义（ P＞0．05），在Elecsys 2010与Immulite-2000、Immulite-2000与CentaurXP间差异有统计学意义（P均＜0．01）。
血清C-P测定结果在Elecsys 2010与Immulite-2000系统间差异无统计学意义（P＞0．05），在Elecsys 2010与CentaurXP、Im-mulite-2000与CentaurXP间差异有统计学意义（P均＜0．01）。
各系统血清INS、C-P测定结果均两两相关（P均＜0．01）。
②不同系统检测OGTT后同一时间点血清INS、C-P水平与其空腹水平的比值差异均无统计学意义（ P均＞0．05）。
结论血清INS或C-P的测定结果在不同检测系统间存在一定的差异，虽均具有很好的相关性，但不能互相通用，各系统检测血清INS、C-P服糖后与各自空腹水平的比值无明显差异。
【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】3页(P60-61,62)【关键词】化学发光免疫分析;胰岛素;C肽;比值参数;胰岛功能【作者】卢晋英;唐雪峰;张淑文【作者单位】天津市第三中心医院，天津300170;天津市第三中心医院，天津300170;天津市第三中心医院，天津300170【正文语种】中文【中图分类】R446.6血清胰岛素(INS)、C肽(C-P)水平可反映INS合成与分泌功能［1］，是评价胰腺β细胞功能和鉴别糖尿病类型的重要指标。
胰岛素化学发光免疫测定法的建立
胰岛素化学发光免疫测定法的建立李旭甡;韩松涛;刘雁飞;初秋【期刊名称】《北华大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2006(007)003【摘要】目的建立化学发光免疫法测定胰岛素及临床糖尿病患者胰岛素治疗跟踪与稳定性的可行性评估.方法 CLIA采用竞争法.结果该方法的灵敏度为1.24 mIU/L,在2.5～160 mIU/L的范围内线性良好.CLIA测定胰岛素的批内与日间变异系数分别为3.05%,4.61%和4.80%,4.92%.在血红蛋白浓度<2.4 g/L、总胆红素浓度<342 μmol/L、甘油三酯<9.9 mmol/L时的干扰率无临床意义.与放射免疫分析法有较好的相关性(r=0.915 6).结论 CLIA法测定胰岛素能及时有效地满足糖尿病患者的临床需要,有助于进一步对检测试剂盒的研制.【总页数】3页(P262-264)【作者】李旭甡;韩松涛;刘雁飞;初秋【作者单位】北华大学,医学院,吉林,吉林,132013;吉林省吉林中西医结合医院,吉林,吉林,132012;北华大学,医学院,吉林,吉林,132013;北华大学,医学院,吉林,吉林,132013【正文语种】中文【中图分类】R58【相关文献】1.血清心肌肌钙蛋白Ⅰ光激化学发光免疫测定法的建立 [J], 马宏伟;赵卫国;潘柏申2.血清肌红蛋白光激化学发光免疫测定法的建立 [J], 马宏伟;赵卫国;潘柏申3.胃蛋白酶原光激化学发光免疫测定方法的建立 [J], 周伟;金磊;孟伟;高月求4.化学发光免疫测定胰岛素的研究 [J], 杨秀岑;郭爱萍5.用夹心法化学发光免疫测定胰岛素 [J], 杨秀岑;江涛;邓安平;伍莉萍;刘惠佳;杨红;陈达进因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
胰岛素免疫放射分析方法的建立
ｃ ｎ ｒ ｔｏ ｆｉｓ ｌ 。 ｅ ｖ ｌｅｆ ｒｎ ｒ １ｓ ｍｐ ｅ 一 ３ ）ｉ ４ ７ １ ． Ｕ／ ｅ ｔａ ｉｎ ｏ ｎ ｕｉ Ｔｈ ａｕ ｏ ｏ ｍａ ａ ｌｓ（ ｎ ９ ｓ 。 — ４ ３ ｍＩ Ｌ．Ｃｏ ａ ｅ ｍｐ ｒｄ
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维普资讯
第２ Ｏ卷 第 ３期
２０ ０ ７年 ８月
同 位 素
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＩｏｏ ｅ ｏ ｒ ａ ｓ ｔｐ ｓ ｏ
Ｖｏ ． Ｏ ＮＯ ３ １２ ．
Ａｕ ２ ｇ． ００７
胰 岛素免 疫 放 射 分析 方 法 的建 立
董 宏 广 ，贾 娟 娟 ， 一 兵 ， 文 革 刘 许
ｓ ｎ ｉｉｉｙ ｏ ｈ ｓ ａ ｓ ２ ８ ｍＩ Ｌ ａ ｄ ｔ ｅ ｒｃ ｖ ｒ ｓ９ 。 一 １ ． ． ｅ ｉｔａ ｓ ａ ｅ ｓｔｖｔ ｆｔ ｅａ ｓ ｙ ｉ ． Ｕ／ ｎ ｈ ｅ ｏ ｅ ｙ ｉ ２ ３ １ ２ ６ Ｔｈ ｎ ｒａ ｓ ｙ
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化学发光法和放射免疫法检测胰岛素
要 目 的 比较 化 学 发 光 法 （ ＬＡ） 放 射 免 疫 法 （ Ｉ 检 测 胰 岛 素 测 定 结 果 。 方 法 ＣＩ 和 ＲＡ）
法测 定 ５ ２名 患 者血 清样 本 胰 岛素 含 量 ， 比较 两 种 方 法测 定 结 果 的 差 异 和 相 关 性 。 结 果 Ｃ Ｉ 测 定 胰 岛 素 结 果 为 ３ ． ８ ／ ， ＬＡ ３ ４ ｍＵ Ｌ Ｒ Ａ测 定 胰 岛 素 结 果 为 ２ ．０ ｌ／ ｌ二 者 比较 有 统 计 学 差 异 （ ＜ ． １ 。Ｓ ｅｒ ｎ检 测 结 果 表 明两 种 检 查 结 果 有 相 关 性 （ ＜ Ｉ ７５ｉＵ ｍ ， ｘ Ｐ ０ ０ ） ｐａｍａ Ｐ ０Ｏ ） ． １ 。结 论 ＣＩ ＬＡ和 Ｒ Ａ检 测 胰 岛 素 结 果 有 差 异 ， 有 显 著 相 关 性 。 Ｉ 但 放 射 免 疫 法
Ｌｕ Ｙ ａｎ， Ｙ ｅ ａ ｙｕ ｕ ｎ ｎ，Ｙ ｎ Ｆａｎ ｕａ ｇ，Ｗ ａ ｇ Ｃｈ ｎ ｏ ｇ，Ｄ ｕ Ｗ ｅ． — ｎ ｅ ｇｌ ｎ ｉ Ｄｅ
关键 词 胰 岛素 化 学 发 光 法
Ｄｅｅ ｔｏ ｆＩ ｓ ｌｎｂ ｅ ｌ ｔｃｉｎ ｏ ｎ ｕｉ ｙ Ｃｈ ｍｉ ｕｍｉｅ ｃｎｃ ｎ ｄｏｍ ｍｕ ａ ｓ ｙ ｎ ｓｅ ｅａ ｄ Ｒａ ｉｉ ｎｏ ｓａ ．
Ａｂ ｔａ ｔ ０ｂ ｅｔｖ Ｔ ｏ ａａｉｅｙｓ ｄ ｈ ｉｅｅ ｃ ｆｄ ｔｃｅ ｅｕｔ ｏ ｎｕｉ ｙｃｅ ｌｍｉｅｃ ｎ ｅ（ Ｌ Ａ）ａ ｄｒｄｏ ｓｒ ｃ ｊ ｃｉｅ ｏｃｍｐ ｒｔ ｌ ｔ ｙｔｅｄｆ ｒｎ ｅｏ ｅｅｔｄｒｓｌｓ ｆ ｓ ｌ ｂ ｌｍｉ ｎ ｓｅ ｃ Ｃ Ｉ ｖ ｕ ｆ ｉ ｎ ｕ ｎ ａ ｉ— ｉ ｍｍｕ ｏ ｓａ ＲＩ ．Ｍ ｅｈ ｄ Ｔ ｅ ｉｓ ｌ ｏ ｔｎ ｆ５ ａｉｎｓｗａ ｅｅ ｔｄ ｂ Ｉ ｎ Ａ，ａ ｄ ｔｅｒｒｓｌ ｅｅ ｃ ｍｐ ｒｄ ｎ ａｓｙ（ Ａ） ｔ ｏ ｓ ｈ ｎ ｕｉ ｃｎｅ ｔｏ ２ ｐ ｔ ｔ ｎ ｅ ｓｄ ｔｃｅ ｙＣＬＡ ａ ｄ ＲＩ ｎ ｈ ｉ ｅ ｕｔ ｗ ｒ ｏ ａｅ ． ｓ
化学发光免疫分析法检测血清C肽与胰岛素的结果分析
化学发光免疫分析法检测血清C肽与胰岛素的结果分析摘要：目的：探讨化学发光免疫分析法检测血清c肽与胰岛素的临床应用价值。
方法：将2011年06月至2012年12月我院收治的ⅱ型糖尿病患者120例设为观察组，将同期在我院体检的非糖尿病健康者120例设为对照组，对两组血清c肽及胰岛素的检测情况进行对比。
结果：两组的c-p及insulin相比差异具有显著性（p<0.01）。
结论：对血清c肽和胰岛素进行检测，借助化学发光免疫分析法，不但敏感度非常的高，而且具有很强的特异性。
关键词：化学发光免疫分析法血清c肽胰岛素doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.01.209 chemiluminescence immunoassay detection serum c peptide and insulin clinical analysiszhang yangwenabstract：objective：to investigate chemiluminescence immunoassay detection serum c peptide and insulin clinical application value.methods：december 2010 to december 2012 were our ⅱ diabetes patients were set to observe group， will be in the same period of our medical without diabetes health is set to 120 cases of control group， the two groups of serum insulin and c-peptide test comparing.result：two groups of c-p insulin and compared with significant difference（p<0.01）.conclusion：serum c peptide and insulin testing，with the aid of chemiluminescence immunoassay， not only the sensitivity is very high， and has a strong specificity. keywords：chemiluminescence immunoassay serum c peptide insulin【中图分类号】r9 【文献标识码】b 【文章编号】1671-8801（2012）01-0231-01最近几年，非同位素免疫检测在世界各国得到了越来越广泛的应用，化学发光免疫分析就是其中一种[1]。
人胰岛素定量测定试剂盒化学发光免疫分析法的建立及方法学评价
人胰岛素定量测定试剂盒化学发光免疫分析法的建立及方法学评价陈超;彭波;李基【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2015(007)005【摘要】目的建立了一种定量测定人血清中胰岛素的化学发光免疫方法,并对其试剂盒性能进行方法学评价. 方法试剂盒采用双抗体夹心法,以磁微粒交联的单抗作为捕获抗体,碱性磷酸酶标记的单抗作为检测抗体,分别对本试剂盒的溯源性、参考范围、最低检测限、线性、准确度、精密性、分析特异性、抗干扰性、药物影响及样本比对方面进行评价. 结果用胰岛素NIBSC国际标准品(66/304)进行溯源,相关性方程为y=1.0335x +0.3349,相关系数r=0.999;建立了健康人群空腹血清胰岛素参考范围,覆盖2.5％～97.5％百分位数人群的参考值范围为1.59 μIU/mL～14.64 μIU/mL;对此方法建立的试剂进行了方法学评价,最低检测限可达0.08μIU/mL;线性在0μIU/mL～300 μIU/mL内,相关系数r=0.9999;精密性CV＜8％;准确度在±10％之内;当样本中的胰岛素浓度为200 000 μIU/mL时,未发现钩状效应;与Roche电化学发光系统测定结果显著相关,相关方程为y=0.9541x+0.177,相关系数r=0.9917,两种方法学的测定结果具有较高的一致性. 结论本研究建立的人胰岛素化学发光免疫分析定量检测试剂盒的各项性能指标均达到了临床检测要求,可用于临床血清胰岛素的检测.【总页数】5页(P313-317)【作者】陈超;彭波;李基【作者单位】上海科华生物工程股份有限公司,上海200233;上海科华生物工程股份有限公司,上海200233;上海科华生物工程股份有限公司,上海200233【正文语种】中文【相关文献】1.游离β人绒毛膜促性腺激素定量测定化学发光免疫分析法的建立与性能评价 [J], 伍华颖;王小艳;李志雄;董志宁;吴英松;徐伟文2.促黄体生成素定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的临床性能评价 [J], 周颖;方婉仙;吴英松3.硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的研制及性能评价 [J], 苏立;贾晨路4.总前列腺特异性抗原定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的性能验证 [J], 方婉仙;李志雄;董志宁;李明;吴英松5.癌胚抗原定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的临床性能评价 [J], 梁丽萍;李志雄;董志宁;李明;吴英松因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
胰岛素 C-肽质控品产品技术要求北京康彻思坦
胰岛素/C-肽质控品
适用范围：本品适用于使用厦门万泰凯瑞生物技术有限公司生产的胰岛素测定试剂盒(化学发光微粒子免疫检测法)、C-肽测定试剂盒(化学发光微粒子免疫检测法)进行临床检测时的实验室内部质量控制。
1.1 包装规格
水平1（复溶体积）：1×2mL，10×2mL，30×2mL；
水平2（复溶体积）：1×2mL，10×2mL，30×2mL；
水平3（复溶体积）：1×2mL，10×2mL，30×2mL；
全水平（复溶体积）：水平1 1×2mL，水平2 1×2mL，水平3 1×2mL。
1.2 主要组成成分
注：不同批次质控品不能混用；每批次质控品的质控范围见试剂盒内靶值单。
2.1外观
试剂（盒）各组分应齐全、完整；标签应清晰，包装无破损。
质控品冻干品应为疏松体，复溶后液体应澄清。
2.2 质控品赋值有效性
检测结果应在质控范围内。
2.3 均匀性
2.3.1瓶间差
瓶间变异系数应不高于15%。
2.3.2瓶内均匀性
瓶内变异系数应不高于10%。
2.4稳定性
2.4.1复溶稳定性
原包装质控品在开瓶完全复溶后，置于2℃～8℃条件下保存。
放置28天后，胰岛素和C-肽测试结果应符合2.2项的规定；
2.4.2 效期稳定性
原包装质控品在2℃～8℃条件下储存，有效期为36个月。
取效期末产品进行检测，结果应符合2.1、2.2、2.3.2项的规定。
化学发光免疫法测定胰岛素的实验研究(精)
化学发光免疫法测定胰岛素的实验研究【关键词】胰岛素（IRI）；光量子数；前胰岛素原；胰岛素原；化学发光免疫法【Abstract】 Objective To explore a reliable method for the determination of insulin.Methods Gather fasting agglutinating blood, centrifugalize them respectively to get the serum, which were directly set on instrument to determine.Results Linear rang: 0～335.0mIU/L，senitivity: the mean quantum of 0mIU/L IRI,10.1mIU/L IRI, 152.0mIU/L IRI and 335.0 mIU/L IRI were 3808,30350,357399 and 684567.Specificity: when the control serum was determined,the measure vlalue was within the standard deviation （SD）,95%-105%.Precision:N=60 CV≤5%.Conclusion Chemiluminescence is a reliable,stable measurement method for determination of insulin with high sensitivity,precision and specificity.【Keywords】 insulin;quantum;preproinsulin;proinsulin;chemiluminescence胰岛素（IRI）是一种蛋白质激素，这是由胰岛中的β细胞所合成、储存和分泌的。
用于定量测定人血清或血浆中胰岛素（Ins）的浓度。[用途]
[药品名称]通用名：碘[125I]-胰岛素放射免疫分析药盒盒汉语拼音：Dian[125I]Yidaosu Fangshemianyifenxi Yaohe英文名:Iodine[125I]-Insulin Radioimmunoassay Kit简称：碘[125I]胰岛素（Ins）放免药盒[使用目的]用于定量测定人血清或血浆中胰岛素（Ins）的浓度。
[用途]胰岛素的测定主要用于对糖尿病的分型，即通过胰岛素释放实验，区分糖尿病的类型。
另外对于研究胰岛素β细胞的分泌功能、胰岛素瘤的分析、探讨冠心病机理等也有一定的意义。
[试验原理]本品采用了第二抗体＋聚已二醇沉淀法放射免疫分析试验原理：含胰岛素（Ins）的样品和125I标记的胰岛素（Ins）与相应的抗体反应形成抗原抗体复合物。
反应后加入二抗及PEG，使免疫复合物沉淀，离心，测沉淀放射性计数。
通过标准曲线得到样本中胰岛素（Ins）的浓度。
[试剂主要组成成分]1、胰岛素标准品：6瓶，冻干品A-F，浓度分别为7、20、40、90、180、350mIU/L，使用时加1.0ml温育液溶解。
2、质控血清：两瓶，冻干品，使用时加0.5ml蒸馏水溶解。
浓度为：L：H：3、抗Insulin血清：一瓶，蓝色溶液，2～8℃冷存。
4、125I-Insulin标记物：冻干品1瓶，<88.23kBq/100T，50管加5.5ml，100管加11ml，200管加22ml温育液溶解。
5、分离剂：一瓶，含二抗血清、PEG等，充分摇匀后使用，2～8℃冷存。
6、温育液：一瓶，2～8℃冷存。
[仪器]1、γ－计数器2、低温离心机样本收集和保存：220微升人血清样本。
采静脉血5ml于塑料试管中，静置使其凝固后，1500转／分离心，取其上清液，放置玻璃瓶中。
如果样本不立即使用，可在-18℃~-25℃储存6个月。
严重溶血、高浓度的脂类、胆红素对测定结果有影响。
[使用前准备]试验前，恢复样本至室温，小心摇匀血清样本。
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过柱处理
过柱前 过柱后
白蛋白 67. 9 68. 2
蛋白组分及含量
Α球蛋白
Β球蛋白
8. 7
5. 9
8. 3
5. 8
Χ球蛋白 17. 3 17. 6
R 1)
2. 13 2. 15
注: 1) R 指血清中白蛋白与球蛋白含量之比
214 胰岛素质控血清制备
将W HO 人胰岛素免疫测定用国际标准品 50 IU L 浓溶液定量加入上述胰岛素零值血清
完全佐剂, 每隔 1 个月用福氏不完全佐剂加强免疫, 免疫时每只动物注射含 015 m g 胰岛素的 佐剂 1 mL , 第 6 个月放血后分离血清, 经检验, 大部分适用于放免分析。 部分抗体的滴度曲线 示于图 1。 本工作选用 2# 抗体作为制备亲和层析柱的原料。
图 1 胰岛素抗体稀释度曲线
212 亲和层析柱的制备 4 mL 2# 豚鼠抗胰岛素血清在偶联液 (011 m o l L N aHCO 3, 015 m o l L N aC l) 中透析过
© 1994-2006 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
沈洪征: 男, 57 岁, 研究员, 放免药品的分析与检定专业 收稿日期: 1997202221 修收稿收到日期: 1997206220
© 1994-2006 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
第 1 期 沈洪征等: 胰岛素放射免疫分析质控血清的研制
25
112 主要仪器 美国A bbo tt 实验室 A n sr Χ计数器; 国营 261 厂 FT 1901G1 医用 Χ谱仪。
2 实验方法与结果
211 抗体制备 以人胰岛素生物测定用国家标准品为免疫原, 对 10 只雄性豚鼠进行免疫, 首次使用福氏
(2) 经亲和层析柱处理的血清未检出胰岛素, 在质控血清标定中, 其实测值与预期值相对 偏差小且无系统偏低或偏高倾向, 证明所用血清中已无“胰岛素本底”存在, 可作为零值血清使 用。
(3) 亲和层析柱制备所用的抗体一般是采用先提取 IgG, 然后再进行偶联。 但这样易使抗 体活性下降, 考虑到胰岛素抗体较难得到, 本工作目的是为去除而非提纯胰岛素, 应尽可能保
蛋白含量 g·L - 1
61058 01011 0 01018 5 01012 9 01012 3 01010 5 01012 4 01011 5 01000 5
总蛋白量 m g
24123 11012 01444 01413 01455 01399 01459 01437 01017 5
抗体含量1) mL
3 讨 论
(1) 在胰岛素零值血清制备时, 曾对胰岛素含量分别为 99、74 和 3. 84 m IU L 的血清用活 性碳非特异吸附法去胰岛素, 经处理后血清胰岛素含量分别为 7. 33、6. 26 和 1116 m IU L , 证 明其具有降低血清中胰岛素的作用, 但不能彻底去除干净。尽管此法已广泛应用于小分子类型 激素 (T 3, T 4, 甘胆酸等) , 但同时也将其它类似物质无选择的除掉, 使血清成分和颜色发生明 显变化。亲和层析法是利用抗原和抗体特异反应去除胰岛素, 实验结果表明除胰岛素被特异吸 附外, 血清的蛋白组分、各蛋白含量及血清色泽都无明显变化, 进一步的研究亦证明此法适用 于 T SH、GH 和 HCG 等大分子多肽蛋白激素。
6. 14
中值 (n= 2)
47. 67 54. 98 53. 69 54. 15 50. 94 52. 29±2. 99
5. 72
高值 (n= 2)
89. 52 96. 35 100. 4 94. 87 99. 00 96. 02±4. 22
4. 40
表 6 本质控血清靶值和允许范围
样品
低值 中值 高值
中, 得到浓度为 20、50 和 100 m IU L 的低、中和高值血清样品并按每瓶 015 mL 分装, 经冻干
和密封后 4 ℃保存备用。
215 胰岛素质控血清的标定
取上述制品按 015 mL 瓶加入双蒸水或去离子水溶解并混匀, 以人胰岛素免疫测定用国
家标准品为对照品, 用放射免疫方法对其免疫活性进行标定, 标定中使用了两种质量较稳定的
胰岛素放免药盒, 在数据处理中进行了血样空白和试剂空白校正, 每瓶质控血清皆用同种药盒
重复标定两次, 并以两次测定均值进行统计分析, 结果列于表 4、表 5。 根据质控血清的允许范
围为均值±2
倍标准偏差ຫໍສະໝຸດ -(x±2s)
的惯例,
本质控血清的低、中和高值样品的靶值和允许范围
分别定为 18114 (15110- 21118)、51. 80 (44. 93- 58. 66) 和 95. 28 (81. 83- 108. 7)m IU L , 具体
第 11 卷 第 1 期 1998 年 2 月
同 位 素
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V o l. 11 N o. 1 Feb. 1998
胰岛素放射免疫分析质控血清的研制
沈洪征 黄 颖 彭新杰
(中国药品生物制品检定所, 北京 100050)
介绍了亲和层析法制备胰岛素零值血清和胰岛素放射免疫分析质控血清研制的过程。 胰岛素 为免疫原对豚鼠进行免疫获得抗血清, 将此抗血清直接偶联到溴化氰活化 Sep haro se 4B 凝胶上, 制 成亲和层析柱, 使正常人血清通过此柱, 胰岛素被特异地吸附在柱中而从血清中除掉。 用放免方法 测定过柱处理后的血清, 其中不含胰岛素, 经蛋白测定和醋酸纤维素膜电泳检测证明过柱前、后血清 蛋白含量和组成未产生明显变化。 向此血清中定量加入胰岛素并经标定确定其靶值和允许范围, 即 制成低、中和高值质控血清。
1 实验材料
111 主要试剂 标准品: 世界卫生组织人胰岛素免疫测定用国际标准品 (W HO H um an In su lin IR P 66
304 ) , 人胰岛素免疫测定用国家标准品 (91428602) , 人胰岛素生物测定用国家标准品 (5042 8708)。佐剂: 福氏完全佐剂及福氏不完全佐剂。溴化氰活化 Sep ha ro se 4B 凝胶购于 Pha rm acia 公司。正常人血清购于上海生物制品研究所, 经检验乙肝表面抗原阴性。胰岛素放射免疫分析 药盒为中国原子能科学研究院及上海生物制品研究所提供。 其他试剂为国产分析纯。
序号
1 2 3
表 2 过亲和层析柱处理前、后血清中胰岛素活性及蛋白含量比较
样品体积 mL
免疫活性 mU ·L - 1
过柱前
过柱后
蛋白含量 g·L - 1
过柱前
过柱后
750 1 100 500
1216
-
5. 35
-
6. 28
-
61. 2 66. 4 63. 7
63. 1 63. 2 65. 4
表 3 过亲和层析柱处理前、后血清中蛋白组分及含量比较
替洗涤三次后, 将此凝胶装入柱中, 其柱径 114 cm , 柱床高度 15 cm , 置 4 ℃冰箱中备用。 以 L ow ry 法对偶联过程各残液分析, 用放射免疫分析法测定各残液中的抗体, 结果列于表 1。 由 表 1 数据可得, 其蛋白偶联率为 85% , 抗体利用率大于 99%。
213 胰岛素零值血清制备 正常人血清加压过滤后, 用微量电子泵在 4 ℃下控制流速 8- 15 mL h, 通过亲和层析柱,
27
表 4 用中国原子能科学研究院放免药盒标定本质控血清的结果
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
-
x
±s
CV %
低值 (n= 2)
17. 73 18. 71 17. 32 18. 71 17. 73 18. 00 20. 92 20. 76 18. 74±1. 39
7. 40
中值 (n= 2)
52. 65 49. 63 58. 10 50. 87 52. 04 51. 25 45. 77 51. 41 51. 47±3. 42
-
x
±s
m
IU ·L -
1
18. 14±1152
51. 80±3143
95. 28±6. 72
注:
1)
最终标定结果预期值
预期值×100%
相对偏差1)
- 9. 3 + 3. 6 - 4. 7
CV % 8. 37 6. 63 7. 02
允许范围 m IU ·L - 1 15. 10- 21. 18 44. 93- 58. 66 81. 83- 108. 7
6. 65
高值 (n= 2)
102. 5 90. 03 105. 1 100. 9 90. 27 91. 67 87. 24 90. 83 94. 82±6. 86
7. 24
序号
1 2 3 4 5
-
x ±s CV %
表 5 用上海生物制品研究所放免药盒标定本质控血清的结果
低值 (n= 2)
15. 40 17. 84 18. 03 17. 53 17. 12 17. 18±1. 06
对经过亲和层析柱处理的血清定时取样分析, 测定其胰岛素含量, 并检查胰岛素抗体是否存 在, 分析结果表明: 过柱后的血清胰岛素含量已下降至放免测定灵敏度以下 (B B 0 接近或略大 于 100% ) , 且不含有胰岛素抗体 (即过柱处理后血清的空白管结合率接近或略低于试剂空白 管结合率)。用L ow ry 法对过柱处理前、后血清总蛋白含量测定, 结果列于表 2。用醋酸纤维素 膜电泳法测定血清过柱前、后其中白蛋白含量并计算各种球蛋白与白蛋白的比例, 结果列于表 3。 表 2、3 结果表明过亲和层析柱处理仅除去了血清中胰岛素, 而对血清蛋白组成及其含量未 产生明显影响。