多克隆抗体
多抗制备的基本流程
多抗制备的基本流程
多克隆抗体的制备，即多抗制备，是一种获取具有多种抗原决定簇抗体的方法。
基本流程如下：
1. 抗原制备：首先，需要制备具有多种抗原决定簇的抗原。
这些抗原可以是蛋白质、多肽、糖、脂类等生物大分子或小分子。
2. 动物免疫：将制备好的抗原注射到动物体内，激发其免疫系统产生抗体。
常用的免疫动物有兔子、小鼠、大鼠等。
3. 收集血清：在免疫动物后，收集其血清。
血清中含有多种抗体，即多克隆抗体。
4. 抗体的分离和纯化：将收集的血清进行分离和纯化，以获得目标抗体。
常用的方法有离心、层析、电泳等。
5. 鉴定和评价抗体：通过酶联免疫吸附试验、免疫印迹、免疫荧光等方法，对分离出的抗体进行鉴定和评价，确定其特异性和灵敏度。
6. 抗体应用：经过鉴定和评价后的多克隆抗体可应用于生物医学研究、诊断、治疗等领域。
需要注意的是，多克隆抗体的制备过程较为复杂，涉及多个环节，如抗原制备、动物免疫、血清收集等。
在实际操作中，需严格控制实验条件，以确保制备出的多克隆抗体具有较高的质量和应用价值。
多克隆抗体特点
多克隆抗体特点1.引言1.1 概述概述多克隆抗体是一种由多个不同B细胞克隆产生的抗体，与单克隆抗体相比，它具有更高的抗原特异性和更广泛的抗原识别能力。
多克隆抗体的制备方法相对简单，能够同时识别抗原上的多个表位，因此在科学研究和医学应用中具有重要的价值。
本文将首先介绍多克隆抗体的定义和原理，包括多克隆抗体的组成、产生过程以及克隆筛选的方法。
接着，将详细探讨多克隆抗体的制备方法，包括抗原免疫、脾细胞融合、杂交瘤筛选等步骤。
同时，还将介绍如何利用多克隆抗体对特定抗原进行鉴定和检测，以及多克隆抗体在各种实验和临床应用中的优势和局限性。
最后，本文将总结多克隆抗体的优点，包括更好的抗原识别能力、更高的敏感性和更广泛的应用范围。
同时，也将展望多克隆抗体在生物医学领域的应用前景，包括药物研发、病毒检测、免疫治疗等方面。
通过深入了解多克隆抗体的特点和应用前景，我们可以更好地理解这一技术的潜力，为生物医学研究和临床诊断提供更多的选择和可能性。
1.2 文章结构文章结构部分的内容主要是对整篇文章的结构进行介绍和概述。
在本文中，文章的结构分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分（1. 引言）用于引出本文的研究背景和意义，对多克隆抗体的特点进行概述，说明本文将要探讨的问题和目的，即本文要对多克隆抗体的特点进行详细的介绍和分析。
正文部分（2. 正文）是文章的核心部分，主要包括两个小节：多克隆抗体的定义和原理（2.1）和多克隆抗体的制备方法（2.2）。
在多克隆抗体的定义和原理中，将从理论角度对多克隆抗体的概念进行解释，并介绍多克隆抗体的产生原理。
而在多克隆抗体的制备方法一节里，则会详细介绍多克隆抗体的制备过程和方法。
结论部分（3. 结论）对文章进行总结和归纳，列举多克隆抗体的优点，并探讨了多克隆抗体在未来的应用前景。
通过本文对多克隆抗体特点的介绍和分析，可以更好地认识和理解多克隆抗体，为其在临床和科研领域的应用提供参考和指导。
综上所述，本文主要从引言、正文和结论三个部分介绍了多克隆抗体特点。
多克隆抗体的原理及制作方法
多克隆抗体的原理及制作方法一、原理多克隆抗体是由针对多种不同抗原表位的抗体组成的混合物。
外源性抗原初次进入动物体内后，可引发机体初次免疫应答，即在抗原呈递细胞（antigenpresenting cell，APC）和T细胞的作用下，未成熟B细胞被激活分化为产生抗体的浆细胞，对于大多数可溶性蛋白抗原而言，动物注射后5～7天，血清中开始出现抗体，并在12天左右达到顶峰，然后逐渐下降。
初次免疫应答产生的抗体持续时间较短，亲和力也较低。
但是受抗原刺激的B细胞除了分化为抗体产生细胞外，还增殖形成大量记忆性B细胞，它们在实施加强免疫时被快速激活，加强免疫后抗体滴度迅速上升，并持续更长时间，抗体合成率也比初次反应增加几倍到几十倍，加强免疫后7～14天出现抗体的峰值。
由于记忆B细胞的存在，需要更少的抗原刺激即可引起再次免疫应答。
记忆B细胞是长寿细胞，因此，特异性抗体应答在最后一次加强免疫之后6个月到一年都会存在。
本节介绍用佐剂乳化的抗原免疫动物获得多克隆抗血清的方法。
该法可用于免疫家兔，小鼠、大鼠或地鼠，也可用于更大的动物如绵羊、山羊或马。
二、材料（一）动物选择根据需要可选择适当品系的家兔，小鼠，大鼠或地鼠等动物进行免疫获得抗体。
动物的选择取决于所需的抗血清量以及特异性抗原的物种来源和免疫动物物种之间进化上的差异。
家兔常被选作免疫动物，因为兔与人、兔与小鼠之间的遗传学差异大，而人和小鼠来源的蛋白是最经常被研究的对象。
每次获取25ml血清的采血量，对兔本身没有明显的损伤。
（二）抗原制备优质抗血清很大程度上取决于抗原的质量、纯度和数量。
常用纯化的抗原或部分纯化的抗原免疫动物，所用抗原往往是蛋白质或肽。
一般而言，细菌或病毒蛋白如血凝素或细菌包膜蛋白有很强的免疫原性，而哺乳动物蛋白如多肽类激素或细胞膜受体则免疫原性较弱。
有时也会用到与适当的蛋白质载体、细胞或细胞与组织提取物相交联的半抗原（多糖、核酸、脂类和小分子化学物质等）以增强半抗原的免疫原性，通过化学方法将半抗原连接到已知的免疫原性强的载体蛋白上，常用的载体蛋白有匙孔戚血蓝素（KLH）、牛血清白蛋白（BSA）、鸡卵清蛋白（OVA）等。
多克隆抗体
多克隆抗体多克隆抗体: 原理、应用和优势摘要：多克隆抗体是一种可以广泛应用于生物医学研究、临床诊断和治疗的重要工具。
本文将介绍多克隆抗体的原理、应用和优势，帮助读者更好地了解和使用多克隆抗体。
1. 引言多克隆抗体是由多个不同的B细胞克隆所产生的抗体群体。
相比于单克隆抗体，多克隆抗体具有多种来源细胞、多样性抗体特异性和高抗原亲和力的优势。
2. 多克隆抗体的原理多克隆抗体的制备需要经历免疫原注射、免疫细胞制备、抗体筛选和克隆扩增等步骤。
通过注射抗原刺激机体免疫系统，激发B细胞产生特异性抗体。
然后通过细胞融合技术或酶消化法获得抗体产生的细胞系，最后经过筛选和扩增获得多克隆抗体。
3. 多克隆抗体的应用多克隆抗体在生物医学研究、生物工程和医学诊断等领域具有重要应用价值。
在科研中，多克隆抗体可用于蛋白质表达分析、免疫组化染色、免疫印迹、酶联免疫吸附测定等实验技术。
在临床诊断中，多克隆抗体可用于检测病原体感染、肿瘤标志物和药物浓度。
此外，多克隆抗体还可应用于治疗，如癌症免疫治疗和抗体药物研发。
4. 多克隆抗体的优势相比于单克隆抗体，多克隆抗体具有以下几个优势：4.1 多源性：多克隆抗体通过多个细胞克隆产生，能够识别抗原上的多个不同部位，从而提高抗体的特异性和亲和力。
4.2 可灵敏性：多克隆抗体可以通过融合多个细胞系来增加抗体的生产量，提高实验的灵敏性和可靠性。
4.3 高特异性：多克隆抗体可识别抗原上多个不同的表位，在检测复杂样本中具有更高的特异性。
4.4 宽适应性：多克隆抗体对于不同类型的抗原具有较强的适应性，可以应用于多种研究领域和技术平台。
5. 多克隆抗体的挑战与优势相对应的是多克隆抗体也存在一些挑战。
制备多克隆抗体需要免疫动物，然后通过脾细胞和骨髓细胞等制备免疫细胞，这个过程较为复杂且不易实施。
此外，多克隆抗体的批次间差异性较大，因此需要进行一定的筛选和验证工作。
6. 结论多克隆抗体作为一种重要的实验工具，在生物医学研究、生物工程和医学诊断等领域发挥着重要作用。
多克隆抗体的制备(1)(1)
免疫乳剂制备成功的判别标准
油包水状态 鉴定方法是将乳化剂滴入4℃左右冷水中， 若保持完整不分散，成滴状浮于水面，即 乳化完全，为合格的油包水剂。
免疫
将制成的乳剂吸入注射器，在兔子背部及 颈部皮下注射8-10点，每点约0.2ml
每隔14天用初次用量的2/5的抗原于不完全 抗原中，在皮下多点注射加强免疫,每点 0.2ml,共加强2次。
多克隆抗体
天然抗原分子中常含有多种不同抗原 特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激 机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激 活，产生的抗体中含有针对多种不同抗 原表位的免疫球蛋白，称为多克隆抗体。
多克隆抗体制备的意义
免疫血清：将抗原注入机体所产生的抗体
是针对多种抗原决定簇的混合抗体，含有 这种特异性抗体的血清。
第一次免疫（基础免疫）
2-4周
第一次加强免疫
2-3周
第二次加强免疫
7天
效价测定
第一次免疫（基础免疫）
免疫乳剂的制备 ①研磨法:
取1.2ml佐剂加入到无菌的研钵中，缓慢加 入1ml抗原+0.2ml卡介苗混合液，每加一 滴研磨至小滴消失，边加边往同一个方向研 磨，抗原全部加入后继续研磨至乳白色粘稠 的油包水乳剂。
动物：健康家兔 抗原：生化大实验中制备的LDL 佐剂：弗氏佐剂 注射器、研钵 等
动物的选择
动物的选择常根据抗体的用途和量来决定，也与 抗原的性质有关
如要获得大剂量的抗体，则采用大动物； 如要获得直接标记诊断用的抗体，则直接采用本
动物； 如要获得间接的标记诊断用抗体，则必须用异源
动物制备抗体
佐剂
佐剂的条件作为一种良好的佐剂，必须具备下列条件： （1）增加抗原的表面积，并改变抗原的活性基团构 型，从而增强抗原的免疫原性； （2）佐剂与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留 时间，减低抗原的分解速度，使抗原缓慢释放至淋巴 系统中，持续刺激机体产生高滴度的抗体； （3）佐剂可以直接或间接激活免疫活性细胞并使之 增生，从而增强了体液免疫、细胞免疫和非特异性免 疫功能； （4）良好的佐剂应具有无毒性或副作用低的特点。
多克隆抗体
多克隆抗体科技名词定义中文名称：多克隆抗体英文名称：polyclonal antibody定义1：由多个B细胞克隆所产生的抗体，可与不同抗原表位结合且免疫球蛋白类别各异。
应用学科：免疫学（一级学科）；免疫系统（二级学科）；免疫分子（三级学科）定义2：对特定抗原所产生的一组免疫球蛋白混合物，每种免疫球蛋白能识别抗原分子上的一个表位。
应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；总论（二级学科）定义3：多种抗原表位刺激机体免疫系统后，机体产生的针对不同抗原表位的混合抗体。
应用学科：细胞生物学（一级学科）；细胞免疫（二级学科）抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白，这就是免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。
组织结构：抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体（Monclone antibody）。
由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外，同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD 等五类抗体。
抗原上那部分可以引起机体产生抗体的分子结构，叫做抗原决定簇。
一个抗原上可以有好几个不同的抗原决定簇，因而使机体产生好几种不同的抗体，最终产生出抗体是浆细胞。
只针对一个抗原决定簇起作用的浆细胞群就是一个纯系，纯系的英文为Clone，音译就是克隆。
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。
单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就象导弹精确地命中目标一样。
另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。
多克隆抗体又简称多抗。
与之相对应的叫单克隆抗体，简称单抗。
多克隆抗体制备课件
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免疫方式
• 注射途径: 免疫注射的途径也很重要。一般 采用多点注射，一只动物注射总数约为8～ 10点，包括足掌及肘窝淋巴结周围，背部 两侧、颌下、耳后等处皮内或皮下，皮内 易引起细胞免疫反应，对提高抗体效价有 利
多克隆抗体制备
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多克隆抗体的制备方法
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动物选择
一、选择制备多克隆抗体(抗血清)的动物种类 应考虑的要点: •需要制备的抗血清的质量; •供给蛋白质抗原的动物与免疫动物之间的种 系关系; •免疫动物产生的抗体特性（针对不同性质的 免疫原选用相应的动物）。 二、动物的年龄、性别和数量对抗体制备的 影响
血液采集
采血量
少量
采血部位
尾静脉，耳静脉，眼 底静脉
中量
耳中央动脉，颈动/静 脉，心脏
大量
股动脉，颈动脉，心 脏，摘眼球
血清的分离：采取4℃静置过夜，3000-4000 转离心10-15min钟。
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多克隆抗体纯化
•蛋白A亲和层析 •蛋白A可与多种哺乳动物的IgG重链的Fc片段 相结合也可与某些IgM和IgA相结合 •抗原亲和纯化 •多抗的亲和层析是基于抗原与抗体结合的一 种层析方式。基本思路是将抗原固定在一种 基质上, 然后与抗血清孵育以捕获相应的抗体, 然后从基质上洗掉非特异性结合的抗体, 最后 再将抗体洗脱下来
.鸡Biblioteka 鸡的种系距哺乳动物较远,用以制备抗哺乳动物蛋白 质的抗体具有独特的优点。
鸡的IgG常称IgY,其特点是不会激活哺乳动物的补体 成分C1,也不会与细菌蛋白A或蛋白质G、哺乳动物的 Fc受体或类风湿因子等发生反应。在极端条件下,鸡 IgY的稳定性不如家兔IgG,不过,鸡的IgY在鸡蛋内可保 持稳定达数月之久,纯品IgY在中性缓冲液和冷藏条件 下则可保存数年之久。用鸡IgY已经制备出Fc和单价 的Fab或Fab′等片段。 鸡可将大量IgY输送入鸡蛋黄中, 从鸡蛋中收获抗体 可避免采用损伤性的收集手段。
单克隆抗体和多克隆抗体的区别
单克隆抗体和多克隆抗体有很多区别首先1.制备上的区别经过特定抗原处理过的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞通过细胞融合的方法得到杂交瘤细胞,经HAT培养基筛选、ELISA检测效价后就得到阳性克隆株,最后进行细胞培养或将细胞注入到动物一般为balb/c小鼠腹腔中用腹水培养,收集上清/腹水纯化后就能得到单克隆抗体;而制备多克隆抗体就没有单克隆抗体繁琐,只需将抗原纯度越高越好直接注入到动物体内进行免疫,经过3~4次免疫,ELISA测其效价合格后,收集血液离心得到上清,纯化后即能得到多克隆抗体;因此制备多抗的周期就比单抗的短,首次制备价格也比单抗要低;2.应用上的区别单抗和多抗都有各自鲜明的特点与优势;单克隆抗体的特异性高,一旦制备成功就可以永续的生产完全一致的抗体,因此可以对其特异性进行全面、系统地验证;但如果所识别的抗原表位被破坏,实验的结果将会受到很大的影响,这也是单抗的缺点之一;而多克隆抗体的特异性较差,即使是使用相同的抗原制备多抗,不同批次间也会存在差异,因而在特异性、一致性方面有很大的局限;所以在用多抗做免疫检测时,更容易造成背景,例如在WB中有杂带,在IHC中背景较深等等;虽然还存在着交叉反应的问题,但由于多抗识别多个抗原表位,即使是有少数几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变,实验的结果也不会受到影响;在相同条件下,使用多抗可以提高检测的灵敏度,对于丰度偏低的蛋白也更容易检出;单抗与多抗的区别是什么摘要：本文主要介绍了单克隆抗体与多克隆抗体的定义,并介绍单抗、多抗在制备流程、特点及应用上的区别;单抗与多抗的定义抗原上可以引起机体产生抗体的分子结构叫做抗原决定簇,也称为抗原表位;一个抗原可以有许多不同的抗原决定簇,因此,机体也可以产生多种不同的抗体;由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅识别某一特定抗原表位的抗体,称为单克隆抗体;而由多个B淋巴细胞克隆产生的,受到多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体;从某种角度而言,多抗是多种单抗的混合物;制备上的区别经过特定抗原处理过的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞通过细胞融合的方法得到杂交瘤细胞,经HAT培养基筛选、ELISA检测效价后就得到阳性克隆株,最后进行细胞培养或将细胞注入到动物一般为balb/c小鼠腹腔中用腹水培养,收集上清/腹水纯化后就能得到单克隆抗体;而制备多克隆抗体就没有单克隆抗体繁琐,只需将抗原纯度越高越好直接注入到动物体内进行免疫,经过3~4次免疫,ELISA测其效价合格后,收集血液离心得到上清,纯化后即能得到多克隆抗体;因此制备多抗的周期就比单抗的短,首次制备价格也比单抗要低;应用上的区别单抗和多抗都有各自鲜明的特点与优势;单克隆抗体的特异性高,一旦制备成功就可以永续的生产完全一致的抗体,因此可以对其特异性进行全面、系统地验证;但如果所识别的抗原表位被破坏,实验的结果将会受到很大的影响,这也是单抗的缺点之一;而多克隆抗体的特异性较差,即使是使用相同的抗原制备多抗,不同批次间也会存在差异,因而在特异性、一致性方面有很大的局限;所以在用多抗做免疫检测时,更容易造成背景,例如在WB中有杂带,在IHC中背景较深等等;虽然还存在着交叉反应的问题,但由于多抗识别多个抗原表位,即使是有少数几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变,实验的结果也不会受到影响;在相同条件下,使用多抗可以提高检测的灵敏度,对于丰度偏低的蛋白也更容易检出;如果对抗体的特异性要求高,用量较大或需要长期使用一致的抗体,制备的抗体应用要求多WB/IP/IF/ICC等,可以选择;若对抗体的特异性要求不高,需要做沉淀和凝集反应的检测性实验或者只需做ELISA检测,可以选择;单克隆抗体与多克隆抗体的对比表格交叉反应：从理论上说,用小鼠抗原制备的抗体应只能用于小鼠,但是由于动物种属之间,特别是相近的动物之间存在着同源性如大鼠与小鼠,这样会导致抗体发生交叉反应,即用一种动物抗原制备的抗体也可与其它一些物种的抗原反应;。
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第六章多克隆抗体传统的抗体制备方法是将一种天然抗原经不同途径免疫动物，由于抗原性物质具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌抗各种决定簇的抗体，故在其血清中实际上是含多种抗体的混合物，所以称这种免疫法所获得的免疫血清为多克隆抗体(polyclonal antibody，PcAb)。
多克隆抗体的亲和力较一般单克隆抗体高。
多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为制备高效价和高特异性的多克隆抗体，必须要有理想的免疫原、适宜的动物及切实可行的免疫方法。
本章主要介绍多克隆抗体的制备及相关技术。
第一节动物选择实验动物是生物医学中的重要组成部分。
目前常用于生物医学科学研究的实验动物种类很多，主要包括有两栖纲的青蛙、蟾蜍，鸟纲的鸡、鸭、鸽等，哺乳纲啮齿目的小鼠、大鼠、豚鼠等，兔形目的家兔，食肉目的猫、狗，有蹄目的羊、猪和灵长目的恒河猴、猩猩、绒猴等。
其中最常用和用量最大的是哺乳纲啮齿目动物，其次是兔形目和食肉目等。
一、实验动物的生物学特性实验动物选择得当与否是实验研究成败关键之一。
掌握实验动物的生物学特性，则能以最佳的设计选择实验动物，进行科学实验，从而获得预期的实验结果。
1. 小鼠小鼠是啮齿目中体型较小的动物。
新生小鼠1.5g左右，21天断乳时12～15g，1.5至2月龄体重达20g以上，可供实验使用。
成年雌小鼠体重18~35g，成年雄鼠体重20~40g。
小鼠性情温顺，易于捕捉，对外来刺激敏感，喜群居于阴暗环境。
2．兔草食性动物，性情温顺，胆小易惊，喜居安静、清洁、干燥、凉爽、空气新鲜的环境，耐冷不耐热，耐于不耐湿。
兔耳大，表面分布有清晰的血管。
有特殊的血清型和唾液型，血清型分为α'、β'、α'β'和O型四种。
α'、α'β'型易产生人A型抗体，β'、O型易产生人B型抗体。
唾液型分两种：排出型与非排出型。
排出型易获得人血细胞A型物质，非排出型不易获得，这种A型物质与A型抗体产生能力有关。
因此，要获得A型抗体，应选用排出型的α'、α'β'血清型兔。
由于抗原刺激机体后，体液免疫应答反应强烈，故兔被广泛用于制备高效价的特异性强的免疫血清。
3．豚鼠草食动物，性情温顺，胆小，对外界刺激极为敏感，喜居干燥、清洁的环境。
自动调节体温的能力较差，对环境温度变化较为敏感，最适宜的温度为18~20℃，对抗生素敏感。
4．羊草食动物，性情温顺，合群，易于接近，喜居干燥、清洁的环境，怕潮湿，怕热不怕冷，寿命为15年。
山羊可用于生产多种抗血清，也可用于营养学、免疫学、微生物学、生理学等方面的研究。
绵羊常用作制备抗血清，其红细胞是血液学诊断中最常用的材料。
二、选择实验动物的原则1．3R原则3R指的是reduction(减少)、replacement(替代)和refinement(优化)。
“减少”指减少实验用的动物和实验的次数；“替代”指尽可能采用可以替换实验动物的替代物；“优化”指对待实验动物和动物实验工作应做到尽善尽美。
2．从微生物学和寄生虫学标准去选择实验动物要求选用三级的实验动物，原因是三级实验动物已经排除了人兽共患疾病，排除了实验动物本身的传染病，也排除了影响实验研究的相应微生物和寄生虫，使实验研究处于没有或很少有外源干扰的情况下进行。
3．从遗传学的观点选择实验动物即根据动物的不同生物学特性选择适宜的实验动物。
4．不能忽略的一些因素如性别、年龄、体重、营养状况、饲养环境等。
三、免疫动物的选择可作为免疫用的动物主要是哺乳类和禽类，常选用的有家兔、绵羊、豚鼠、马、鸡等。
动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗体的数量和用途，如制备抗γ-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清。
具体选择时，应考虑以下因素：(一)动物种系免疫学理论研究已经证实：机体的免疫应答受遗传基因的控制。
同一种系不同个体对不同抗原的免疫应答以及不同种系对同一抗原的免疫应答均不尽相同。
一般认为，抗原与免疫动物种属的差异越远越好，亲缘关系太近不易产生抗体应答(如兔一大鼠之间，鸡-鸭之间)。
实验中最常用的动物是家兔，因它与人类的交叉较少。
(二)动物个体的选择由于个体差异的存在，同一抗原免疫同一种系不同个体的动物，产生的抗体效价有很大的差异，这与动物的年龄及营养状况密切相关。
用于免疫的动物应适龄、健壮、无感染性疾患，体重合乎要求，如用家兔，应选择年龄在6个月以上，体重以2-3kg为宜。
(三)抗血清的需要量需要大量制备免疫血清时，应选用马、驴、绵羊等大型动物，如一头成年马反复采血可获得10 000ml 以上的抗血清。
若需要量不多，则可选用豚鼠、家兔等小动物。
(四)抗原性质不同种类的动物对同一种抗原有不同的免疫应答表现。
因此，对不同性质的免疫原，所选用的动物有所不同。
蛋白质类抗原对大部分动物皆适合，常选用家兔和山羊。
但在某些动物体内有类似的物质或其他原因，对这些动物免疫原性极差，如IgE对绵羊，胰岛素对家兔，多种酶类(如胃蛋白酶原等)对山羊等，免疫时皆不易出现抗体，这些物质有时可用豚鼠(如胰岛素等)、火鸡，甚至猪、狗、猫等做试验免疫。
(五)免疫血清的要求按免疫动物的种类不同，所获免疫血清可分为两大类，即R型(rabbit)和H型(horse)。
R型是用兔及其他动物免疫产生的抗体，H型是用马以蛋白质类抗原免疫获取的抗体。
在免疫扩散实验中，R型免疫血清能和很小量的抗原结合，形成肉眼可见的沉淀线，具有较宽的抗原抗体合适比例范围，只有抗原过量时才形成可溶性复合物，使沉淀线减弱或消失。
而H型免疫血清的抗原抗体适合反应的比例范围较狭窄，抗原或抗体过量时易形成可溶性复合物，均不出现可见的沉淀反应，在沉淀反应中难以掌握，因而极少应用，人和许多大型动物皆属此型。
此外，动物免疫后还要认真做好编号、标记、管理和记录，注意动物的体温、体重、呼吸、粪便是否正常，注射部位的变化及是否有其他异常表现等。
第二节抗原的剂量与免疫途径抗原初次进入具有应答能力的动物体内需经过一段较长的潜伏期(一般为7～10天)才能出现抗体，经过一段高峰期后，抗体量逐渐下降直至消失，这段时间总的抗体生成量是较低的，主要成分为IgM，称为机体对抗原的“初次应答”。
但当相同抗原再次进入同一动物体内时，血清中的抗体很快出现，并迅速到达高峰期，持续较长时间后才逐渐下降。
这一次抗体的含量远高于初次应答，其成分主要是高亲和力的IgG，称为“再次应答”。
由此可知，要获得高效价的抗血清，不仅与免疫剂量有关，而且免疫方法、接种途径和免疫的间隔时间等均至关重要。
一、抗原剂量抗原剂量的选择应考虑抗原性强弱、分子质量大小、注射途径、免疫时间及动物的个体状态等因素。
抗原剂量过低不能形成足够强的免疫刺激，剂量过高，又有可能造成免疫麻痹。
在一定范围内，抗原量与免疫反应强度成正相关。
一般而言，对于蛋白质抗原，小鼠首次剂量为50~400μg／次，大鼠为0.1～1mg ／次，兔为0.2～1mg／次；对于细胞抗原，每次用于免疫羊的细胞数一般不低于1×108，免疫兔不低于1×107，免疫小鼠不低于1×106。
第一次免疫剂量宜小，随后可增大抗原剂量。
加强注射剂量，依据抗原的性质不同而不同。
有的抗原用量与首次剂量相同或增加一倍，有的则减少一半。
加强免疫通常用不完全佐剂乳化。
如果抗原的免疫原性弱，需多次加强才能获得满意的抗血清。
为了增强免疫反应，可以把免疫佐剂注射到接种抗原结合部位的附近或对侧，或者先注射佐剂，再注射抗原。
如用可溶性蛋白质抗原免疫家兔，在加用佐剂后一次注入量一般为0.5~1mg／kg。
如不加佐剂，则抗原剂量应加大10～20倍。
用半抗原免疫时，使用的载体必须始终相同，以免影响淋巴细胞的识别功能。
下面是几种成功的免疫方案。
1．家兔初次免疫用50～200μg蛋白加入福氏完全佐剂，在背部皮下注射6～8点，每点0.1～0.2ml，也可肌内或皮内注射。
每隔10天用50～200μg蛋白于PBS或福氏不完全佐剂中，在肌内、皮下、静脉或腹腔内注射加强免疫一次，每点0.25～2ml。
2．豚鼠和大鼠初次免疫用10～100μg蛋白加入福氏完全佐剂，在背部皮内注射4~6点，每点0.1ml，也可肌内或皮下注射，每隔7~8天用10~50μg蛋白于PBS或福氏不完全佐剂中，在肌内、皮下或静脉注射，加强免疫一次，每点0.25～2ml。
3．小鼠与大鼠一样，但每次免疫量用5~50μg蛋白。
4．绵羊或山羊初次免疫用0.5~10mg蛋白加入福氏完全佐剂，在肌内、皮下或皮内注射4~6点，每点0.2～2ml。
14～28天后用0.5~10mg蛋白于PBS或福氏不完全佐剂中，在肌内、皮下或静脉注射，加强免疫一次，每点0.25～2ml。
有时可用较少量的抗原，特别是在免疫间隔较长的情况下。
二、免疫途径抗原的进入途径决定了抗原吸收、分布和代谢的速度，吸收越快，分解代谢越快，对机体的影响时间越短。
吸收越快，单位时间内的有效抗原量就越大，机体的免疫应答就越强，不良反应也越强。
应根据不同抗原及实验要求选择不同的注射途径。
注射途径多种多样，常用的注射途径有皮内、皮下、肌内、静脉、腹腔、脾脏、淋巴结。
对抗原的吸收速度为：静脉=脾脏=淋巴结>腹腔>肌内>皮下>皮内。
途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物活性抗原，一般不宜采用静脉注射。
免疫时一般采用多点注射，如足掌、腋窝淋巴结周围、背部两侧、颌下、耳后等处的皮内或皮下。
皮内易引起细胞免疫反应，对提高抗体的产生很有利。
通常认为半抗原适宜采用皮肤多点注射(一般注射40点左右)。
但皮内注射较困难，特别是天冷时更难注入(因佐剂加入后黏度较大)。
静脉或腹腔注射后抗原能很快进入血流，一般多用于颗粒性抗原的免疫和加强注射，如抗原昂贵可采用淋巴结内微量注射法，只需10～100μg抗原即可获得较好的免疫效果。
方法是先用不完全佐剂在动物足部做基础免疫，10~15天后可见肘窝处有肿大的淋巴结(有时可在腹股沟处触及)，用两手指固定好淋巴结，消毒后用微量注射器直接注射人抗原(一般不需要佐剂)。
三、间隔时间免疫间隔时间也是重要因素之一。
第一次免疫后，因动物机体正处于识别抗原和B细胞增殖阶段，如很快接着第二次注入抗原，极易造成免疫抑制。
一般以间隔10～20天为好。
两次以后每次的间隔一般为7～10天，不能太长，以防刺激变弱，产生的抗体效价不高。
对于半抗原的免疫间隔则要求较长，有的报告1个月，有的长达40～50天，这是因为半抗原是小分子，难以刺激机体发生免疫反应之故。
免疫的总次数多，多为5~8次。
如为蛋白质抗原，第8次免疫未获得抗体，可在30～50天后再追加免疫一次；如仍不能产生抗体，则应更换动物。