水产病理切片组织标本选择和固定注意事项
病理标本制作取材注意事项
病理标本制作取材注意事项1、标本收集和查验程序：对于所有送检的标本，必须认真执行查验程序，方能进入下一程序，其主要程序是：①收集标本时：要仔细查对申请单上的姓名与标本上的姓名，序号是否一致；标本的件数与申请单是否相符；标本是否用固定液固定过。
②标本经上述验收后，进行编号登记，以防错乱。
编号按年份和流水号两种方法，如果为了今后的查找较为方便，按年份编号为较好。
2、活检组织取材：在外科送检的诸多材料中，对于每一例病例的材料，大小都不一样，但对于较大的标本，不可能都对其进行制作切片，因此，选择适合于病理技术制作，适合于病理诊断且有利于回顾性研究等各方面的材料，是病理活检的关键，通常把这过程称为取材。
（一）取材时必须注意以下问题：① 取出所有送检的标本，量其大小，称其重量，描写其色泽，质地，形状和肉眼所见表面情况。
当标本切开后，应详细描写其切面的颜色，硬度，病变部位等，必要时绘图说明。
② 对于细小标本如肺支气管穿刺物标本胃肠镜活检标本[1]等，应将其染上伊红颜色后，用擦镜纸或特别脱水袋将其包上或装上，以防漏出脱水盒的小孔。
③ 对于有传染性的标本，让标本彻底固定后再取材。
如结核瘤标本等。
④ 对于罕见特殊的标本，应小心保存好，在不影响诊断的情况下，尽量保存好大体标本。
以利于教学标本，陈列标本的收集。
⑤ 边取材边固定，组织标本较多的单位，取材经常要花上几个小时，如果从下午2：30开始取材，至5：30完成，那么先取的材料就可以多固定几个小时，如此可以防止固定时间不足，同时也可防止组织发生自溶。
⑥ 对于骨髓穿刺的组织，可先用10%硝酸浸泡30分钟左右，然后再与其它组织进行处理。
⑦ 骨组织和钙化组织，应彻底脱钙后，方能进行制作。
具体用大头针能顺利扎入骨组织则可。
⑧ 活检组织取材，不能太厚，以不超过2mm为宜。
以防脱水不彻底，不利于制片。
⑨ 每取完一例标本后，所有的工具如刀，剪，盘镊，切板等，必须用水冲洗干净，以免污染，混淆于其它病例。
病理标本采集、送检及组织固定制度
病理标本采集、送检及组织固定制度1.凡手术切除或抽取、钳取、刮取自人体的组织、细胞学标本等均应按病理送检项目的要求，及时、完整送病理科检查，不得随意丢弃、切开、私自留取或仅部分送检标本；如有特殊需要必须征得病理科的同意，在病理医师的指导下切开或留取组织；2. 标本采集时要注意尽量减少烧灼，以免影响诊断；3. 标本切除后应立即固定，标本离体到固定时间不宜超过半小时，除有特殊要求外，标本必须使用足量10%中性缓冲福尔马林固定，固定液不少于标本体积的4-5倍；4. 对标本较小、难以制作切片或其他可能影响病理检查可行性和诊断准确性的情况（如标本干涸、严重自溶或腐败者），应与送检医师及时联系说明情况；对于一份标本分送两家或以上医院病理科者，应拒绝接收；5. 空腔标本和大的实质性脏器标本必须按操作规程及时剖开，充分固定，时间应大于12小时；6. 病人的标本由送检科室安排专人送检；7. 有标本采集时间、标本送达病理科时间、标本固定时间（时间精确到分钟）；8. 需要做冰冻切片检查的需提前一天预约，与患者签署知情同意书，以便病理科工作人员在手术当日提前开机等候。
一般不接受电话预约；9. 冰冻切片检查的标本切取后应保持新鲜，不要加任何液体，立即送到病理科，以免影响制片和诊断；10. 临床填写详细的病理电子申请单后，应将标本及时送到病理科，原则上不接收口头申请的标本，特殊情况下，可按流程接收和处理标本，但需要在限定的时间内（12小时）补充病理电子申请单，否则不出具书面病例报告；11. 建立标本核对、送检交接登记和互签字制度，以保证标本的可追溯性；12. 标本和申请单应有两套各自独立的标记，接收标本、取材时实行“双核对”。
参考文件:1.《病理诊断与技术规范》。
2.《临床技术操作规范病理学分册》。
3.《病理科建设与管理指南（试行）》。
制作动物组织切片时取材的注意事项
制作动物组织切片时取材的注意事项：一、选择合适的动物组织1. 选择健康的动物组织作为样本，避免患有重大疾病或病变的动物组织，以确保实验结果的准确性和可靠性。
2. 对于需要比较不同种类动物组织的研究，应当注意选择相似的芳龄、性莂和生理状态的动物组织进行比对。
二、采集动物组织的方式3. 在动物的麻醉状态下进行动物组织的采集，避免造成动物疼痛和压力，同时也有利于维持组织的正常形态和结构。
4. 采集后的动物组织应尽快放入适当的缓冲液中冷藏或固定，避免组织的变性和损坏。
三、处理采集的动物组织5. 对于需要切片的组织，应选择合适的切片工具和方法，以确保切片的质量和准确性。
常见的切片工具包括冰冻微切机和甲醇冻切机。
6. 在切片过程中，应确保切片的厚度和角度是一致的，避免因切片不均匀而影响后续的实验结果。
四、保存和保存动物组织切片7. 切片完成后，应妥善保存切片样本，避免氧化和水分蒸发导致切片的变性和变质。
8. 对于长期保存的切片样本，可以采用冷冻保存或真空封存的方式，以延长切片的使用寿命和稳定性。
五、实验前的样本处理9. 在进行实验前，应对切片样本进行必要的处理，比如染色、去脂、抗体标记等，以便于观察和分析组织结构和功能。
六、注意实验的条件和操作10. 在进行实验时，应注意保持实验室的清洁和卫生，确保实验操作的准确性和可重复性。
11. 应注意实验条件的控制，比如温度、湿度、光照等，以确保实验结果的准确性和可靠性。
七、合理记录实验过程和结果12. 在实验过程中，应详细记录实验条件、操作步骤和结果，以便于后续的数据分析和结论的提出。
13. 对于实验结果的分析和结论，应注意客观和科学的态度，避免主观偏见和不严谨的推断。
总结：在制作动物组织切片时，选择合适的动物组织，采集、处理和保存动物组织，注意实验的条件和操作，以及合理记录实验过程和结果，是确保实验结果准确可靠的关键步骤。
也应尊重动物的权益和保护动物的福祉，在实验过程中遵守相关的伦理规范和法律法规。
水产动物疾病学 水产动物病理学《病理学》实验方案
罗非鱼链球菌病研究的实验方案一、实验流程采集病鱼→观察记录临床症状→分离纯化病原体→病原体的扩大培养→病原体的药敏试验↓动物回归实验↓观察记录临床症状↓病理组织分析二、具体操作步骤1.病鱼录临床症状的观察和记录记录病鱼的活动特征、外观临床症状，解剖后观察内部器官病变特征，拍照。
2. 病原体的分离纯化对具典型细菌性症状的病鱼进行现场分离，取其脑（B）、肝（L）、脾（S）、肾（K），采用平板划线法接种于BHI固体培养基中，于27-28℃培养箱中培养24-72h，拍照。
将首次分离培养基上数量呈优势的疑似病原菌落进行进一步的分离纯化培养，对其进行革兰氏染色和镜检初步确定其是否为病原菌，拍照。
3. 病原体的扩大培养取上述纯化的菌株单菌落接种于BHI液体培养基中，进行扩大纯培养。
4. 病原体的药敏试验配置固体培养基→取0.2ml菌液均匀涂布于表面→干燥5mins后每板贴5片药敏试纸，试纸之间距离不小于24mm→反转平板，4℃放30min→37℃中反转培养24h→观察抑菌圈→拍照5. 动物回归实验将扩大培养病原体的病原体经腹腔注射入罗非鱼，6天后开始每天观察发病情况，记录病鱼的活动特征、外观临床症状，解剖后观察内部器官病变特征，拍照。
跟最初的病鱼进行比较，看是否症状一致，如果一致，说明分离到的菌株是致病的病原体，如症状不一致，则病原体分离错误。
6. 病鱼病理组织分析（可选做）取病鱼的病变组织（如皮肤、脑、肝、肾脏、脾脏等）进行病理切片分析，与正常组织对比，拍照，分析病变原因。
三、作业将上述实验流程和实验结果整理，写成一篇课程作业，图文并茂。
附件：石蜡切片的制作方法一、取材用丁香粉麻醉鱼，取病变组织（如皮肤、脑、肝、肾脏、脾脏等），在Bouin 氏液固定8-24小时。
取材时应注意以下事项：1.所取材料不宜太大以0.5×0.5×0.2厘米或1.0×1.0×0.2厘米较合适。
组织病理标本处理和观察中需要特别注意的问题
固定
固定的目的和原理：分子交联、防止细菌的 腐蚀和组织的自溶
固定液—甲醇、乙醇、多聚甲醛等
应用液：3.7% paraformaldehyde (多聚甲醛) + 1.0% methanol(甲醇 ) 储存液： 37% paraformaldehyde (多聚甲醛) + 10% methanol(甲醇 )
2分钟
4．二甲苯Ⅰ
5分钟
5．二甲苯Ⅱ
5。
封片
封片液要适量 封片液过少-气泡雾气 过多-显微镜聚焦困难
观察
取材和观察区域的一致性（脏器亚区域） 拍专业性照片：取景、颜色、亮度、对比度
等。 在同一条件下拍足、拍全
固定液要充足：>5倍 固定时间 标本大小
脱水
原因：水与透明剂及石蜡不相融合 酒精--最常用的脱水剂 程序--70％一80％一95％一100％。 关键--无水酒精纯度
透明
目的：使光易于通透 作用：脱酒精、透明 透明剂：二甲苯、水杨酸甲酯 最常用的良好透明剂二甲苯：
1）溶于酒精、能溶解石蜡 2）不吸收水（也用做封固剂）--不再脱水了，要
防水防潮 3）透明能力强 4）易使组织收缩、变脆，时间0.5-1h 5）有害
浸蜡、包埋
目的：支撑作用，软硬适度 浸：要蜡完全渗入组织细胞、组织与石蜡混
为一体 温度：比石蜡的熔点略高2度 时间：2-5小时
包埋：组织的方向
切片
修蜡 玻片处理：清洗；表面处理--甘氨酸、等离
子、甘油、 切片厚度：4-10m 切片机使用 捞、贴附切片：技术活 烤片：60℃烘烤过夜
使组织与玻片牢固粘贴
冰冻切片
OCT包埋（后固定）：防气泡、防切片前组织 融化
病理切片制备步骤
病理切片制备步骤全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：病理切片制备是病理学研究的重要步骤，通过对组织样本的切割、染色和观察，可以帮助医生准确诊断疾病。
下面我们来详细介绍病理切片制备的步骤。
一、组织采集和固定1. 组织采集：首先需要采集患者患病组织样本，可以是手术切除标本、活检标本或尸检标本。
2. 组织固定：将组织样本放入10%中性缓冲福尔马林或其他适当的固定液中，固定时间为6-48小时，确保组织细胞结构不变。
二、脱水和包埋1. 脱水：将固定的组织样本置于不同浓度的乙醇溶液中，逐渐去除水分。
2. 渗透：将脱水的组织样本放入蜡渗透剂中，使组织透明并与蜡充分渗透，以便进行切片。
3. 包埋：将渗透后的组织样本置于熔融的石蜡中，使组织固定在石蜡块中，以便进行切片。
三、切片和染色1. 切片：用旋转式切片机将石蜡包埋的组织块切割成厚度为3-5微米的切片。
2. 染色：将切片放入不同的染色剂中，如血液学染色、组织学染色、免疫组化染色等，以便观察组织结构和细胞形态。
四、封片和观察1. 封片：将染色后的切片放入显微镜玻璃片上，加入透明封闭剂，覆盖玻璃片，制成玻璃切片。
2. 观察：用光学显微镜观察切片，根据细胞形态和染色结果判断组织结构的变化，帮助医生做出疾病诊断。
以上就是病理切片制备的详细步骤，每一步都需要仔细操作和精心处理，以确保获得准确的组织切片和可靠的诊断结果。
希望以上内容对您有所帮助，如果有任何疑问，请随时向专业医学工作者咨询。
【2000字】第二篇示例：病理切片制备是一项关键的医学实验技朧，用于观察疾病组织的形态结构和病变情况。
正确的切片制备步骤对于准确诊断和治疗具有至关重要的意义。
本文将详细介绍病理切片制备的步骤及注意事项。
1. 采集标本：需要从患者身上采集组织标本。
这通常由有经验的医生或技术人员完成，确保采集到的标本完整、无损伤，并配有详细的临床信息。
2. 杀灭固定组织：采集到组织标本后，需要立即将其置入适当的固定液中进行固定。
FISH检测标本要求
FISH检测标本要求FISH（荧光原位杂交）被广泛应用于基因组学和细胞遗传学领域，用于检测染色体异常、基因扩增、基因融合及基因定位等。
对于进行FISH检测的样本，有一些要求需要满足，以确保检测结果的准确性和可靠性。
以下是FISH检测标本的要求：1.标本类型：FISH检测可以应用于多种不同的样本类型，包括固定细胞、血液、组织、骨髓、体液等。
具体选择何种样本类型应根据所需检测的目的来决定。
2.标本采集：标本采集应在临床上病情活体检查或治疗之前，并避免使用抗生素等干扰因素。
采集的样本应尽量新鲜，以避免DNA的降解和破坏。
对于外周血样本，常规采用采血管内导管的方式获得可大量的细胞样本。
3.标本固定：固定样本的目的是阻止细胞的自溶和降解，保持细胞的形态结构。
常用的样本固定剂包括甲醛、氯醋酸、琼脂糖等。
固定时间通常为24至48小时，不同样本类型和实验需求可能会有所不同。
4.样本处理：在进行FISH检测前，需要将样本进行一系列的处理步骤来去除可能存在的蛋白质、核酸或其他干扰物质，以确保FISH信号的清晰度和可见性。
处理步骤包括：蛋白酶消化、DNA解旋、脱色、去噪等。
5.样本制备：样本制备是FISH检测中非常重要的一步。
首先，将固定的细胞或组织样本进行切片或悬液制备。
对于细胞悬液，可以通过离心等方法获得高纯度的细胞。
对于组织，切片需要足够薄，以便光线可以通过并确保信号的清晰度。
6.探针选择：FISH检测使用到荧光标记的探针来定位特定的基因序列或染色体异常。
根据所需检测的目的，选择合适的探针。
对于染色体异常的检测，可以选择染色体特异性或基因特异性探针。
7.检测技术：在进行FISH检测时，需要使用高分辨率荧光显微镜来观察信号。
同时，还需要使用图像分析软件来分析和计算信号的数量和强度，并最终确定特定基因序列或染色体是否存在异常。
总之，从样本采集到最终的FISH检测结果，需要严格遵守一系列的操作步骤和要求，以确保检测结果的准确性和可靠性。
动物病理切片取样标准
动物病理切片取样标准
动物病理切片的取样标准通常遵循以下几点：
1.取材时间：在动物死后24小时内取材，以保证病理组织的新鲜度。
2.取材部位：根据病变的性质和程度，选择病变明显、典型的部位进行取材。
同时，为了全面反映
病变情况，需要从多个部位取材，包括病变部位和周围正常组织。
3.取材厚度：取材厚度应根据具体情况而定，一般以1.5cm×1.5cm×0.3cm为宜，最厚不超过0.5cm。
4.取材数量：根据实验目的、病变的性质和程度等因素确定取材数量，以确保能够充分反映病变情
况。
一般情况下，每只动物至少取三叶肝、脾、肺、肾等器官。
5.取材标记：取材后应做好标记，以便于后续的组织学观察和病理诊断。
标记应包括动物编号、取
材部位、日期等信息。
6.注意事项：在取材过程中，应注意避免机械损伤和人为污染。
同时，应保持取材工具的清洁和卫
生，以免对组织造成不必要的损伤。
总之，动物病理切片的取样标准需要根据具体情况而定，但应遵循以上几点原则，以确保取材的准确性和可靠性。
同时，取材过程中应注意操作的规范性和安全性，以避免对组织造成不必要的损伤。
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组织标本选择和固定的注意事项
组织标本的选择非常重要，不能随意切取组织来制作组织切片，否则病理检验的结果是不会令人满意的。
切取组织块时必须注意下列几点：
一愈新鲜愈好：
为了使组织切片的结构清楚，组织块必须争取时间及时固
定，组织的固定以愈新鲜愈好。
水产动物最好选择病重但还
没死的样品。
较大的标本不能及时检查时，可暂放在冰箱内，以减低
死后变化的速度，但应注意发生冰冻的变化。
水产动物上一
般不采用暂放在冰箱内的方法。
二切勿挤压或损伤：
在切取各组织块时，切勿挤压或损伤，以免造成人为的
“病变”，肠粘膜组织上沾有少量粪便，亦不应以手拭去或以
水洗去。
产生压力的原因甚多：
1．所用的刀过钝或过短，致使切块时不得不依靠下压的力量，
这样难免把组织挤压。
故作切块的刀要长而快，切时勿将
刀下压，应从刀根起向后拉，在拉的同时徐徐向下切，直
至切到刀尖时，组织的全后方被切开。
2．亦应避免其它形式的挤压，如镊子的钳夹，剪刀的剪切等。
3．避免摩擦、固定前不要用水过多地冲洗。
三切下的组织块，应尽量防止其弯曲扭转
如胃肠等组织，应先平展于草纸上，粘着以后，慢慢地放于
固定液中（故应在动手剖验之前做好准备工作）。
为了携带方
便、可备带50毫升的广口瓶，瓶装置适量10％甲醛液。
固定
液的量要充足，应为固定组织体积的10倍。
其他固定液如纯酒
精或Zenker氏液等亦需准备齐全，以便需要时即可应用。
瓶上
应先贴上一个标签，记录水产动物种类、组织名称、地点等情
况。
四组织切块的选择和切法：
1．若标本各部的病变不同，则应从各个不同的部位以及从病
变部与正常部相接处采取切块。
2．凡有层次结构的组织，如皮肤、胃、肠壁、主动脉壁等，
切块的切面应包括组织的所有各层，而且与各层的平面相垂直。
3．若标本为细的管状物，如血管等，则切块应为该管状组织的
横切面。
4．如为肌肉、神经等组织，则横切纵切都需要。
组织块的厚度以0．3厘米为宜，最厚不应超过0.5厘米，这样较易固定；至于长度和宽度，则无硬性规定，一般为0.3—1.0厘米（人蓄上，其大小不应小于1—3平方厘米，以便使病变可以看得全面些，又便于以后切取镜检组织块时修削）。
在典型病变部分不妨多切数块，以备日后研究的需要。
五各组织块应包括各脏器的重要结构：
如肾脏组织应包括前肾、中肾（也可分开固定）。
在有浆膜的脏器组织块中，要有一块带有浆膜。
六若同一种的组织块需分别左右或上下者，则应分别放置于不同的瓶内，或将各组织块切成不同形状（如长方形、四方形、三角形
等），以便分别。
七切块在放入固定液后，应不使其与瓶底互相粘附，以免妨碍固定。
八组织块的固定时间不宜过长或过短，
如以甲醛液固定，只需24—48小时即可，以后用水冲洗12小时则可应用。
用Zenker氏溶液固定12、24小时后，经水冲洗24小时，亦可应用。
九组织块冲洗完毕后，即可切取镜检组织块，其厚度一般不应超过0.3厘米（具体情况可根据组织的紧蜜度如何，而且其面积
通常不宜超过1.5平方厘米，这样经脱水、透明后组织不易翘
起变形，有利于制作切片。
十切取镜检组织块后，可将剩余的组织块放于70％酒精中保存，
这样有利于日后再取材切片时使用。
瓶之内外亦需以标签注明情况。
十一避免干化：
新鲜的或已固定的组织均不应干化。
组织干化后其细胞及构造即失去正常的形态，影响准确诊断。
因而必须把组织块全部
浸入固定液内，标本瓶一定要加盖。
十二其它：
作切块时须注意组织块内有无骨或钙化部分，若有，应在固定之后脱钙，以免损坏切片刀。
脱钙的方法：略
十三电镜材料的固定，组织块要小（0.2mm —0.3mm），固定液先预冷，尤其夏天先滴固定液，再切组织块。
普遍存在脂肪肝的特征，石蜡切片中呈大的空泡状是脂肪存在的部位，细胞质中中性脂肪过度储存并挤压细胞核，使有些细胞核变形或呈萎缩现象(宋振荣2000)。