荧光分光光度法的原理
水质 汞、砷、硒、铋和锑的测定 原子荧光分光光度法
水质汞、砷、硒、铋和锑的测定原子荧光分光光度法原子荧光分光光度法是一种用于汞、砷、硒、铋和锑等元素测定的快速、准确、灵敏和无损的分析方法。
该方法利用元素的原子在入射能量作用下发生跃迁，从而产生特定的荧光光谱，通过光谱的测量和分析，可以确定样品中元素的含量。
原子荧光分光光度法的基本原理是利用元素的原子在高能激发光照射下吸收光能，电子从基态跃迁到高激发态，然后再返回基态时发射出特定波长的荧光光。
每个元素都有其独特的荧光光谱，可以作为元素测定的指纹。
通过测量样品荧光光谱的强度和相对强度，可以确定样品中元素的含量。
原子荧光分光光度法具有以下优点：1.高灵敏度：原子荧光分光光度法对元素的测定具有极高的灵敏度。
荧光光谱的特征峰强度和相对强度与元素的浓度成正比关系，因此可以实现对低浓度元素的准确测定。
2.快速分析：原子荧光分光光度法的分析过程简便快速，不需要繁琐的前处理步骤。
可以直接对样品进行测定，样品的准备时间大大缩短。
3.准确性：原子荧光分光光度法的测定结果具有高准确性。
通过校准曲线方法，可以用标准物质测定得到的荧光峰强度和相对强度来计算未知样品中元素的浓度。
原子荧光分光光度法在汞、砷、硒、铋和锑测定中的应用：1.汞测定：汞是一种常见的有毒重金属，其超标污染会对环境和人体健康造成严重危害。
原子荧光分光光度法可以通过测定样品中汞元素的特征荧光峰强度来快速准确地测定汞的含量。
2.砷测定：砷是一种常见的有毒元素，其存在于地下水、土壤和食物中，在超标情况下会对人体健康产生严重的影响。
原子荧光分光光度法可以通过测定样品中砷元素的荧光峰强度来实现对砷的准确测定。
3.硒测定：硒是一种重要的微量元素，对人体健康有重要影响。
原子荧光分光光度法可以通过测定样品中硒元素的荧光峰强度来测定硒的含量，用于评价食品和水源中的硒含量。
4.铋测定：铋是一种重要的金属元素，广泛应用于医药、能源和材料等领域。
原子荧光分光光度法可以通过测定样品中铋元素的荧光峰强度来准确测定铋的含量，为铋的分析和质量控制提供有力的分析手段。
选最大吸收波长进行分光光度法的原因
选取最大吸收波长进行分光光度法的原因一、概述分光光度法是一种常用的分析化学方法，通过测量物质在特定波长光线下的吸光度来确定物质的浓度或者其他相关性质。
在进行分光光度法测定时，选择合适的吸收波长对于获得准确的测定结果至关重要。
本文将介绍选取最大吸收波长进行分光光度法的原因。
二、分光光度法的基本原理1.分光光度法的基本原理分光光度法是利用物质对于特定波长的光线的吸收来进行定量或者定性测定的方法。
当一束光通过包含待测物质的溶液时，物质会吸收与其特性相对应的波长的光线，从而使通过溶液的光线强度发生变化。
通过测量入射光和透射光之间的差异，可以计算出物质的吸光度，并通过吸光度和浓度的关系，确定物质的浓度。
2.最大吸收波长的选择最大吸收波长是指在特定波长范围内，物质对光的吸收达到最大值的波长。
分光光度法中，选择最大吸收波长进行测定可以提高测定的准确性和灵敏度。
选择最大吸收波长是进行分光光度法测定时需要考虑的重要因素。
三、选取最大吸收波长进行分光光度法的原因1.提高测定的准确性选择最大吸收波长进行分光光度法测定可以提高测定的准确性。
在最大吸收波长处，物质对光的吸收达到最大值，这意味着此时光线与物质的相互作用最强烈。
在最大吸收波长处测定能够获得最明显的吸光信号，减小测定误差，提高测定的准确性。
2.提高测定的灵敏度选择最大吸收波长进行分光光度法测定可以提高测定的灵敏度。
在最大吸收波长处，物质对光的吸收达到最大值，这意味着即使待测物质浓度较低，也能够获得明显的吸光信号。
在最大吸收波长处测定能够提高测定的灵敏度，使测定结果更加可靠。
3.克服干扰选择最大吸收波长进行测定可以克服干扰。
在最大吸收波长处，物质对光的吸收最强，而其他物质可能对同一波长的光没有吸收，或者吸收较小。
在最大吸收波长处进行测定可以有效地克服干扰，获得准确的测定结果。
4.简化实验过程选择最大吸收波长进行分光光度法测定可以简化实验过程。
在最大吸收波长处进行测定可以消除其他波长光线的干扰，简化了实验所需的步骤和条件，提高了实验的操作性和稳定性。
第八章 荧光分光光度法与检测技术
第八章 荧光分析法检测技术与应用
2. 用荧光分析法测定食品中维生素B2的含量：称取2.00g食品，用 10.0ml氯仿萃取（萃取率100%），取上清液2.00ml，再用氯仿稀释 为10.0ml。维生素B2氯仿标准溶液浓度为0.100µg/ml。测得空白溶液、 标准溶液和样品溶液的荧光强度分别为：F0=1.5，Fs=69.5，Fx=61.5， 求该食品中维生素B2的含量（μg/g）。
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第八章 荧光分析法检测技术与应用
5. 下列叙述中，错误的是（ ）。 A、荧光分析的待测物应含有大π键 B、紫外分光光度法待测物应含有π键 C、质谱法待测物应含离子 D、气象色谱分析物的沸点应较低 6. 下列因素会导致荧光效率下降的有（ ）。 A、激发光强度下降 B、溶剂极性变小 C、温度下降 D、溶剂中含有卤素离子
能产生荧光的物质进行定性分析的依据。实验证明，
在稀溶液中，荧光强度与荧光物质的浓度成正比，这 是荧光分光光度法对荧光物质进行定量分析的依据。
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第二节 荧光定量分析
一、荧光强度与物质浓度的关系
当溶液中荧光物质的浓度为c，液层厚度为（吸收 池内径）L时，由于荧光强度F正比于被荧光物质吸
收光的强度：F∝（I0 – I），用线性方程表示为：
➢ 最强荧光波长λem和最强激发波长λex是物质的定性 依据，也是定量测定时的最适宜波长。
➢强荧光物质的分子结构体征：一、具有长共轭结构， 如芳香环、稠环或杂环；二、刚性和共平面性。
➢ 影响荧光强度的主要因素是分子结构与外界条件。
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第二节 荧光定量分析
第二节 荧光定量分析
由于荧光物质的结构不同，其吸收光的波长不同， 发射出荧光的波长也不同，这就是荧光分光光度法对
荧光分光光度法
荧光效率（φf）=
2、分子结构与荧光的关系 A 长的共轭结构 例 激发光 荧光 205nm 278nm 286nm 321nm 0.29 356nm 404nm 0.36
荧光效率 0.11
B 分子的刚性和共平面性
荧光效率：0.2
1.0
C 取代基：给电子基团使荧光效率增大，如 -OH、-OCH3、-NH2等。
表面吸 光物质
F
问题（1）不同强度的光照射物质所产生 的荧光光谱形状是否相同？ （2）不同波长的光照射物质所产生的荧 光光谱是否相同？ 是否影响荧光强度? 单色器
I0
λex
I
表面吸 光物质
λem 单色器
检测器
3、激发光谱：荧光λex不变时，记录荧光 强度F与激发波长之间的关系。
单色器 F荧光的产生
（1）振动弛豫：同一电子能级电子从高的 振动能级到最低的振动能级。
电子能级
原因：分子碰撞 结果：热能，无辐射
振动能级
（2）内部能量的转移
产生原因：受激分子常由高电子能级以无辐射 （热）跃迁方式转移至低电子能级。
电子能级 振动能级
（3）荧光发射 无论分子处于哪一个激发单线态，通过内转换 及振动弛豫，均可返回到第一激发单线态最低 能级，然后以辐射的形式发射光量子而返回到 基态的任一能级。 第二激发态 第一激发态
散射光波长与荧光接近，对荧光强度测定 有干扰，使其读数增大。
荧 光 光 谱
散 射 光 谱
不同波长激发光下主要溶剂的拉曼光波长 溶剂 水 248 271 313 350 365 416 405 469 436 511
乙醇
环已烷 四氯化 碳 氯仿
267
267 — —
344
荧光分光光度法原理
荧光分光光度法原理荧光分光光度法是一种基于物质吸收与发射荧光的分析技术。
它利用物质在吸收紫外光能量后，发生电子从基态跃迁到激发态，再经过热辐射和无辐射跃迁的复合过程，从激发态退回基态，释放出的能量以荧光形式发射出来。
通过测量荧光的强度和波长分布，可以对样品中的化合物进行定量和定性分析。
1.激发：激发光源照射样品溶液，激发光源通常为紫外光和可见光，其波长需要与所研究的物质的激发波长匹配。
激发光源经过滤波器选择特定波长的光线，然后通过光导纤维引导到样品室中。
2.激发态产生：样品中的物质吸收光能量，使得物质的电子由基态跃迁到激发态。
激发态的产生取决于样品中的化合物种类，以及激发光源的能量和波长等因素。
3.荧光发射：激发态的物质经过热辐射和无辐射跃迁的复合过程，返回基态。
在这个过程中，部分能量以荧光的形式发射出来。
发射的荧光波长与激发光的波长不同，可以通过光栅或者单色仪分离出来。
4.荧光光谱测量：通过荧光光谱仪对荧光进行测量，荧光光谱仪通常由光栅、检测器（如光电倍增管）和数据采集系统组成。
荧光光谱仪能够选择特定波长范围的荧光进行测量，并将荧光信号转化为电信号。
5.信号处理：荧光信号经过光电器件转换为电信号后，通过放大、调理和滤波等处理，最终通过数据采集系统记录和分析。
荧光分光光度法的优势在于其高灵敏度、高选择性和广泛的应用范围。
它可以应用于环境、食品、制药、生物化学等领域的定量分析和荧光标记分析。
此外，荧光分光光度法还可以结合其他技术，如高效液相色谱、毛细管电泳等，提高其分析的准确性和灵敏度。
荧光分光光度法的一些应用包括：药物分析、痕量元素测定、蛋白质分析、环境污染物检测、核酸分析、生物标记等。
在荧光分析中，还有一些常用的技术方法，如荧光共振能量转移（FRET）、荧光探针和荧光染料等，这些方法进一步扩展了荧光分光光度法的应用范围和分析手段。
总之，荧光分光光度法基于物质的吸收与发射荧光原理，通过测量荧光的强度和波长分布，实现对物质的定量和定性分析。
荧光分光光度法测定维生素B2的含量
荧光分光光度法测定维生素B2的含量实验项目：荧光法定量测定维生素B2的含量实验目的：1.掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理含有荧光基团的化学物质维生素B2，在吸收光能而被激发以后发射荧光，因此溶液的荧光强度与该溶液中荧光物质吸收光能的程度以及荧光效率有关。
溶液中维生素B2被入射光（I0）激发后，可以在溶液的各个方向观察荧光强度（I f）。
在低浓度时，溶液的荧光强度与溶液中荧光物质的浓度呈线性关系。
标准曲线法是取一定已知量的维生素B2的对照品与待分析试样溶液经过相同的处理后，将对照品配制成一系列浓度的对照溶液，测定其荧光强度，并以荧光强度为纵坐标，以对照溶液浓度为横坐标绘制工作曲线，然后在同样条件下测定试样溶液的荧光强度，由工作曲线求出维生素B2片试样中荧光物质的含量。
2.了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，基本操作荧光分光光度计的基本原理：由氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接收，然后以图或数字的形式显示出来。
物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光.。
荧光分光光度计的主要部件：①光源：为高压汞蒸气灯或氙灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。
②激发单色器：置于光源和样品池之间的为激发单色器，筛选出特定的激发光谱。
③发射单色器：置于样品池和检测器之间的为发射单色器，常采用光栅为单色器，筛选出特定的发射光谱。
④样品池：通常由石英池组成。
⑤检测器：一般用光电管或光电倍增管作检测器，可将光信号放大并转为电信号。
光源发射的激发光通过入射狭缝，经激发单色器分光后照射到被测物质上，发射的荧光再经发射单色器分光后用光电倍增管检测，并经信号放大系统放大后记录。
荧光分光光度法
问题（ ） 问题（1）不同强度的光照射物质所产生 的荧光光谱形状是否相同？ 的荧光光谱形状是否相同？ （2）不同波长的光照射物质所产生的荧 ） 光光谱是否相同？ 是否影响荧光强度? 光光谱是否相同？ 是否影响荧光强度 单色器 I0 λex λem 单色器 检测器 I
表面吸 光物质
3、激发光谱：荧光λex不变时，记录荧光 、激发光谱：荧光 不变时， 强度F与激发波长之间的关系 与激发波长之间的关系。 强度 与激发波长之间的关系。
定性、 ③TLC定性、定量 定性
§2 原理 一、分子荧光产生 1、分子的电子能级： 、分子的电子能级：
C = C −C = C
ψ4 π*
π*
ψ3 ψ2 ψ1
π
π
三线态与单线态比较： 三线态与单线态比较： UV 基态单线态 ① 单线态 ②三线态
激发态 E2<E1 ，ε2<ε1， ② 的寿命可达 秒，而①的 的寿命可达1秒 寿命为10 跃迁几率① 寿命为 -8，跃迁几率①是②的106倍。
三、荧光与分子结构的关系 荧光物质发生荧光的过程： 荧光物质发生荧光的过程： A 荧光物质对光的吸收 B通过无辐射跃迁，跃迁到第一电子激发态 通过无辐射跃迁， 通过无辐射跃迁 的最低振动能级。 的最低振动能级。 C 跃迁至基态各振动能级 D 各振动能级分子，通过无辐射跃迁回基 各振动能级分子， 态的最低振动能级。 态的最低振动能级。
引起荧光熄灭的形式： 引起荧光熄灭的形式： 碰撞熄灭： 碰撞熄灭：由于碰撞而损失能量 化学淬灭：荧光物与加入的物质发生反应， 化学淬灭：荧光物与加入的物质发生反应， 生成新的化合物。 生成新的化合物。 体系间跨越：单线态变成三线态。 体系间跨越：单线态变成三线态。 自熄灭现象：当荧光物质的浓度升高而产生。 自熄灭现象：当荧光物质的浓度升高而产生。
简述荧光分光光度法的原理
简述荧光分光光度法的原理荧光分光光度法（Fluorescence Spectrophotometry）是一种分析化学技术，利用物质在荧光激发下发出更长波长的荧光辐射来测定物质的含量或性质。
与紫外-可见分光光度法相比，荧光分光光度法对于具有天然或人工诱导荧光性质的分析物具有更高的灵敏度和选择性。
荧光分光光度法的原理基于分子的电子能级结构和电荷转移的量子化学过程。
当物质吸收辐射能量而处于激发态时，其分子内的电子会跃迁至高能级的激发态轨道，而随后又会返回到基态。
返回基态时，分子会通过非辐射跃迁散失能量，部分以辐射形式释放出来，即发出荧光。
荧光的波长通常较原始激发辐射能量的波长长，一般在可见光或近紫外光区域。
荧光分光光度法的基本设备包括激发源、选择性的滤光片或光栅、样品室、接收器和数据处理器。
光源通常是一个Xe闪光灯、汞灯或激光器，可提供适当波长的辐射。
这些辐射经过选择性的滤光片或光栅进行波长选择，然后照射到样品上。
样品与激发光发生作用后，会发射出荧光，其中一部分被收集并导入接收器中。
接收器随后将荧光信号转换为电信号，并通过数据处理器进行进一步分析和处理。
荧光分光光度法具有以下优点：1.高灵敏度：荧光信号的检测灵敏度远高于吸收光度法。
这是因为荧光信号的检测不受激发光波长影响，而仅受物质的荧光效率影响。
2.高选择性：由于荧光分光光度法是通过分子特征的电子能级来分析样品，因此具有较高的选择性。
可以通过设计适当的荧光探针或使用特异性荧光标记物来分析特定物质。
3.宽测量范围：荧光信号的测量范围通常宽于吸收光度法。
这是因为吸收光度法所测量的信号是来自于激发光的吸收，而荧光信号的测量是来自于荧光发射。
4.低背景噪声：相对于吸收光度法，荧光分光光度法的背景噪声通常较低。
这是因为背景荧光的产生通常很少，且荧光信号较强烈，很容易与背景噪声区分开来。
5.可检测多组分：荧光分光光度法可以使用不同的激发波长和荧光波长来分析多组分样品。
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荧光分光光度法的原理
荧光分光光度法是一种常用的分析技术，主要用于测定物质中的荧光发射强度。
它基于荧光物质吸收能量后发生激发态转变的原理，通过测量样品在不同波长下发射的荧光强度来分析物质的成分和浓度。
荧光分光光度法的原理基于荧光现象，即物质在吸收辐射能量后，会从基态跃迁到激发态，然后再发射出荧光。
这种荧光发射的波长和强度与物质的结构和环境有关，因此可以通过测量荧光的特性来获得样品的信息。
荧光分光光度法的基本装置包括激发源、选择性的滤光片或光栅、样品池和荧光检测器。
激发源通常使用紫外光或可见光，其波长可以根据待测样品的特性进行选择。
滤光片或光栅用于选择特定的波长范围，以便测量样品在该波长下的荧光强度。
样品池用于容纳待测样品，并通过光路使激发光和荧光光进入检测器进行测量。
在进行荧光分光光度测量时，首先需要选择适当的激发光源和荧光检测器，以及调节合适的滤光片或光栅。
然后将待测样品放入样品池中，使其与激发光发生作用。
样品吸收激发光后，发生激发态转变，并发射出荧光。
荧光光通过滤光片或光栅进行选择性筛选，然后进入荧光检测器进行测量。
荧光分光光度法的应用十分广泛。
在生物医学领域，它常用于荧光染料的检测和荧光标记的分析。
在环境监测中，荧光分光光度法可以用来检测水中的有机物污染物。
此外，荧光分光光度法还可以用于食品检测、药物分析、环境污染监测等领域。
荧光分光光度法相比于其他分析技术具有许多优点。
首先，它具有极高的灵敏度，可以检测到很低浓度的物质。
其次，荧光分光光度法对样品的破坏较小，可以进行非破坏性分析。
此外，荧光分光光度法还具有选择性和快速性的特点，可以同时测定多个物质。
然而，荧光分光光度法也存在一些局限性。
首先，荧光分光光度法对样品的环境要求较高，如温度、pH值等因素都会影响荧光强度。
其次，荧光分光光度法在样品有强荧光背景的情况下，可能会受到干扰。
此外，荧光分光光度法对荧光物质的选择性较差，容易受到其他物质的影响。
总结起来，荧光分光光度法是一种基于荧光现象的分析技术，通过测量样品在不同波长下的荧光发射强度来获得样品的信息。
它具有灵敏度高、选择性好和快速性等优点，广泛应用于生物医学、环境监测、食品检测等领域。
然而，荧光分光光度法也存在一些局限性，需要在实际应用中进行合理的选择和优化。