肌肉组织中DNA的提取ppt课件
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选修一5.1DNA的粗提取和鉴定人教版高二生物下课件(共29张PPT)
再用来自mol/L的NaCl溶液溶 解DNA。
Q1：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，搅拌 1min，注意应沿一个方向，目的是？
目的是使DNA充分溶解
过滤溶解有DNA的2mol/L的NaCl溶液，目的是什么？
含DNA的滤液、除去不溶的杂质
含核物质的滤液
Q2：再加蒸馏水的目的是？同时搅拌的目的是？（轻轻地沿 一个方向不停地均与搅拌）过滤含DNA黏稠物的0．14mol/L 的NaCl溶液，目的是什么？
部分发生盐析(沉淀) 溶解 某些蛋白质可溶
（二）对酶、高温和洗涤剂的耐受性
①蛋白酶水解蛋白质，对DNA没有影响。 ②60～80°C的高温中，蛋白质变性后溶解度降 低而产生沉淀，DNA在80°C以上才会变性。 ③洗涤剂瓦解细胞膜（脂质），对DNA没有影 响（在植物材料中提取DNA使用）。
DNA具有耐受性
提取DNA的方法：利用DNA与蛋白质、 RNA 和 脂质等在 物理和 化学 性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
一、DNA的提取的原理： （一）溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶 液中和酒精中的溶解度不同。
❖ 据图： ❖ ①在什么浓度下，DNA的溶解度最小？
0.14 mol/L
课题 DNA的粗提取与鉴定
人教版高二年级 选修1
生物体内的DNA犹如“雾中花”，神秘莫 测，真实的DNA是什么模样？
探究DNA的提取与鉴定的原理
【问题思考】 1.细胞中有哪些生物大分子？ 2.DNA与蛋白质的物理化学性质有哪些主要差异？ 3.提取生物大分子的基本思路是什么？ 4.提取DNA分子的方法是什么？
DNA含量相对较高的组织，成功的可能性更大。
材料：新鲜的鸡血（注意要加入柠檬酸钠，防止血液凝固）
Q1：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，搅拌 1min，注意应沿一个方向，目的是？
目的是使DNA充分溶解
过滤溶解有DNA的2mol/L的NaCl溶液，目的是什么？
含DNA的滤液、除去不溶的杂质
含核物质的滤液
Q2：再加蒸馏水的目的是？同时搅拌的目的是？（轻轻地沿 一个方向不停地均与搅拌）过滤含DNA黏稠物的0．14mol/L 的NaCl溶液，目的是什么？
部分发生盐析(沉淀) 溶解 某些蛋白质可溶
（二）对酶、高温和洗涤剂的耐受性
①蛋白酶水解蛋白质，对DNA没有影响。 ②60～80°C的高温中，蛋白质变性后溶解度降 低而产生沉淀，DNA在80°C以上才会变性。 ③洗涤剂瓦解细胞膜（脂质），对DNA没有影 响（在植物材料中提取DNA使用）。
DNA具有耐受性
提取DNA的方法：利用DNA与蛋白质、 RNA 和 脂质等在 物理和 化学 性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
一、DNA的提取的原理： （一）溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶 液中和酒精中的溶解度不同。
❖ 据图： ❖ ①在什么浓度下，DNA的溶解度最小？
0.14 mol/L
课题 DNA的粗提取与鉴定
人教版高二年级 选修1
生物体内的DNA犹如“雾中花”，神秘莫 测，真实的DNA是什么模样？
探究DNA的提取与鉴定的原理
【问题思考】 1.细胞中有哪些生物大分子？ 2.DNA与蛋白质的物理化学性质有哪些主要差异？ 3.提取生物大分子的基本思路是什么？ 4.提取DNA分子的方法是什么？
DNA含量相对较高的组织，成功的可能性更大。
材料：新鲜的鸡血（注意要加入柠檬酸钠，防止血液凝固）
人教版高中生物选修一5.1《DNA的粗提取与鉴定》ppt课件
1、鸡血细胞做实验材料，一是因为鸡血细胞核的 DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水 胀破。 2、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同， 3、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶，其作用是分解 蛋白质，使提取出的DNA纯度较高 4、预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水 解酶活性，防止DNA降解，二是降低分子运动，易 于形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNA分子柔 韧性，减少断裂； 5、洗涤剂等去污剂可以溶解细胞的细胞壁，破坏细 胞膜，同时也能使蛋白质变性； 6、在60—75度条件下加温处理，蛋白质变性，而 DNA结构不会受到破坏，提取纯度较高的DNA 7、甲基绿能使DNA染成绿色
DNA的鉴定
总结：
实验原理
DNA
的
粗
提
DNA粗提取
取
与
鉴
定
鉴定DNA
DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同 DNA与二苯胺呈现蓝色反应
选择适宜材料
破碎细胞
DNA的纯化
DNA的溶解和析出
与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应
D． 有利于搅拌
3. 若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗
涤剂和食盐，加入食盐的目的是
A. 利于DNA的溶解
B. 分离DNA和蛋白质
C. 溶解细胞膜
D. 溶解蛋白质
4. 在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl溶液中，不断加
入蒸馏水的目的是
A．有利于溶解DNA的方案：
方案一：30mL含DNA的滤液＋2mol/L NaCl→同方向搅拌，DNA溶解→加入蒸 馏水→DNA析出→过滤得到过滤物→放 到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl 溶解液 方案二：30mL滤液＋嫩肉粉（木瓜蛋白 酶）→静置10～15分钟→DNA滤液 方案三：30mL滤液→60～75℃恒温保温 10~15分钟→过滤获得DNA滤液
实验九动物组织中DNA的提取与鉴定PPT课件
DNA鉴定
琼脂糖凝胶电泳
将提取的DNA进行琼脂糖 凝胶电泳，观察电泳结果， 判断DNA的纯度和浓度。
紫外吸收法
利用紫外分光光度计测量 DNA溶液在260nm处的吸 光度值，计算DNA的浓度 和纯度。
荧光染料染色法
利用荧光染料染色DNA， 通过荧光分光光度计测量 DNA的荧光强度，判断 DNA的纯度和浓度。
细胞内的DNA。
DNA提取
离心
将匀浆后的样品进行离心，使细胞碎片和 杂质沉淀到底部，上清液中含有DNA。
洗涤
用洗涤液清洗吸附柱，去除未被吸附的杂 质。
吸附
将上清液加入到吸附柱上，DNA被吸附在 吸附柱的硅基质膜上，而蛋白质和其他杂 质被排除。
洗脱
用洗脱液将DNA从吸附柱上洗脱下来，收 集洗脱液中的DNA。
移液器
用于精确移取和量 取实验试剂。
电脑和PPT软件
用于制作和展示实 验课件。
03
实验步骤
样品处理
样品收集
选择新鲜的动物组织样品，确保 无菌条件下收集，避免样品受到
污染。
样品处理
将收集的动物组织切成小块，用 生理盐水或磷酸盐缓冲液冲洗，
去除表面的污物和血液。
样品匀浆
将处理过的组织块放入匀浆器中， 加入适量的匀浆介质（如石英砂、 玻璃珠等），破碎细胞，释放出
电泳技术的局限性
琼脂糖凝胶电泳技术虽然能够较好地分离DNA条带，但对于较长片段和大分子量DNA的 分辨率有限，未来可考虑采用其他电泳技术或优化现有技术。
纯度分析的注意事项
在紫外分光光度计检测过程中，需要注意消除样品中蛋白质、酚类等物质的干扰，以确保 纯度分析的准确性。同时，对于不同来源和性质的DNA样品，可能需要采用不同的纯度 分析方法。
专题DNA的粗提取与鉴定ppt
优劣分析
各种方法均有优缺点，应根据实际 情况选择合适的方法，或结合多种 方法提高鉴定准确性。
04
DNA粗提取实验结果分析与解读
实验结果展示
DNA粗提取结果
通过在显微镜下观察，可以看到细胞中的DNA呈现为细长的丝状，有时甚至可以看到 DNA的螺旋结构。
电泳结果
通过电泳技术，可以看到DNA在凝胶中的迁移情况。纯DNA应该呈现一条明亮的带状， 而杂质则会影响带状的形成。
紫外光谱分析
通过紫外光谱分析，可以确定DNA的纯度和浓度。纯DNA应该在260nm和280nm处有强 烈的吸收峰。
结果差异分析
01
DNA纯度差异
不同样品间的DNA纯度存在差异。有些样品的DNA纯度较高，而有
些则较低。这可能与样品的来源、提取方法等因素有关。
02 03
DNA浓度差异
不同样品间的DNA浓度也存在差异。有些样品的DNA浓度较高，而 有些则较低。这可能与样品中细胞的数目、细胞中DNA的含量等因素 有关。
。通过OD260/OD280 的比值来判断DNA的纯 度。
3. 将DNA溶液进行凝胶 电泳检测，观察DNA条 带的亮度、完整度和分 子量大小来判断DNA的 质量。
03
DNA粗提取中的关键步骤及注意事 项
细胞破碎方法的选择与优化
物理破碎
使用研磨杵、珠磨机、匀浆器等方 法破碎细胞。
化学破碎
使用溶菌酶、EDTA、SDS、Triton X-100等化学物质溶解细胞壁。
THANKS
谢谢您的观看
DNA粗提取涉及从生物样品中分离出细胞，破碎细胞并释放 出其中的DNA，接着通过一系列的洗涤和沉淀步骤将DNA分 子纯化出来。
DNA粗提取的重要性
DNA提取PPT课件
.
37
引物设计的原则（二）
④避免引物内部出现二级结构
– 避免两条引物间互补， 特别是 3’端的互补，否则会形成引物二聚体， 产生非特异性的扩增条带。
温度(℃)
40 50 60 70 80 90 100 Saiki（1988）将耐热DNA聚合酶引入P.CR，使利用热变性解链DNA模板可30行。
(%)
PCR反应循环
94℃
变性
55℃
退火
PCR循环
.
72℃
延伸
31
引物
5’
3’
3’
5’
变性、退火
延伸
变性、退火
延伸
PCR的指数. 扩增（2n）
32
.
33
G+C含量以40-60%为宜。引物退火温度计算：Tm=2（A+T）+4（C+G）。 Tm在55-65 ℃最好。
– G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。
– ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
– 引物的解链温度：两个引物之间的 Tm 值差异最好在 5℃之内。
.
5
（二）提DNA
酚抽提法： ① 加RNase，37℃1 h， ② 加蛋白酶K，50 ℃ ，3 h ； 或 37 ℃ 12 h , 不时mix
③ 加等体积酚，充分mix，9000rpm，3min，小心吸取上层粘稠水相。 ④ 加等体积酚，充分mix，9000rpm， 3min，小心吸取上层粘稠水相。 ⑤ 氯仿-异戊醇(24:1)抽提1次。9000rpm ，3min，小心吸取上层粘稠水
的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能 和多糖结合，有效去除多糖。
肌肉组织中DNA的提取
实验原理
动物的肌肉、心脏、肝、肾、脾等器官组织都是 DNA的良好来源,其中肝脏的DNA虽然产量最大,但肝脏中 丰富的基因组DNA酶对提取的DNA降解比较严重,相对来 说，肌肉组织则由于具有相对少量的DNA酶而使得提取的 DNA质量较好,尤其是新鲜组织的DNA产量高,质量好 。 肌肉DNA的提取一般有两种方法：SDS法和异硫氰酸 胍法，但我们一般采用前一种，即SDS法。 DNA是一切生物细胞的重要组成成分，主要存在于细 胞核中。通过研磨和SDS作用破碎细胞；苯酚和氯仿可 使蛋白质变性，用其混合液（酚：氯仿：异戊醇）重复抽 提，使蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质；RNase降 解RNA，从而得到纯净的DNA分子。
器材和试剂
• 1、仪器设备 恒温水浴锅、台式离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、 吸嘴 • 2、试剂 （1）组织匀浆液：100mM NaCl，10 mM 三羟甲基氨基 甲烷(Tris)-HCl (pH8.0)，25mM乙二胺四乙酸（ EDTA pH 8.0)。（2) 2×细胞裂解缓冲液：200mM NaCl，20 mM Tris-HCl (pH8.0)，50 mM EDTA (pH 8.0)，蛋白酶K (200 μg/mL)，1%SDS (十二烷基硫酸钠）（3）蛋白酶K：双蒸 水配制10mg/mL，-20℃保存 （4）TE缓冲液：10 mM Tris-HCl (pH8.0)，1 mM EDTA (pH 8.0)，室温贮存 （5） 平衡酚(pH8.0)/氯仿/异戊醇（25:24:1） （6）3 M NaAc、 冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水、生理盐水 • 3、材料 新鲜动物（兔子）肌肉组织
实验步骤
• 5、加入等体积酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，缓慢颠倒混匀， 冰上静置10min，12000 rpm离心 10min； • 6、用钝化的黄吸嘴吸取上清水相（含DNA，粘稠）入另 一新1.5mL 离心管中（注意不可 吸取两相间的蛋白质）； • 7、估算上清体积，加入等体积氯仿/异戊醇(24:1)，缓慢 颠倒混匀，12000 rpm离心10min；
DNA的提取(34张)ppt课件
柠檬酸钠溶液
①
提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1蒸馏水
②
2. 溶解细胞核内的 DNA
2 m1／L的 NaCI溶液40 mL
③
3. 析出含DNA 的黏稠物
蒸馏水
④
4. 滤取含DNA物再溶解 2 mol／L的 NaCl溶液 20 mL
⑥
6. 过滤含DNA的 NaCl溶液
ppt课件完整
25
5．在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl
溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ C ）
A．有利于溶解DNA B．有利于溶解杂质 C．减少DNA的溶解度 D．减少杂质的溶解度
ppt课件完整
26
感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！
方案一：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度 为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl 溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶 液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。
ppt课件完整
9
方案二：直接在滤液中加入嫩肉 粉，反应10-15min，嫩肉粉中木 瓜蛋白酶能够分解蛋白质。
DNA
DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同
DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同
的
DNA与二苯胺呈现蓝色反应
粗
提
DNA粗提取
选择适宜材料
破碎细胞
取
与
DNA的纯化
DNA的溶解和析出
鉴
定
鉴定DNA
与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应
ppt课件完整
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1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加
入蒸馏水的作用是( B )。
肌肉组织中DNA的提取
目的
随着生物技术的不断发展，肌肉组织中DNA的提取技术也在不断改进和完善。传统的DNA提取方法通常使用化学试剂和离心机等设备，但这些方法可能会对DNA造成损伤或丢失。因此，开发更加高效、稳定和可靠的DNA提取方法对于生物医学研究具有重要意义。
背景
目的和背景
肌肉组织中DNA的提取是科学研究的重要基础。通过对肌肉组织中DNA的分析，科学家可以深入了解基因与疾病之间的关系，探索疾病的发病机制，为疾病的预防、诊断和治疗提供科学依据。
检测方法
影响DNA完整性的因素包括肌肉组织的保存状况、DNA的降解程度、提取过程中使用的试剂和操作方法等。
影响因素
完整性检测
04
结果分析
结果分析
a name's name-the other side of which the name's name-the other side of which the name sinks the other side of which this name's name-other side of which this name's name-other side of which this name's name-other side of which this name's name-other side of which this method of which this (other name's name's name's name's 挂钩 this name's question marks the first name's name's name's first name's question marks' name's name's first name's name's name's first name's question, however, which this other name's name's name's question marks' first name's name's firstname's name's firstname's firstname's secondname's secondname's secondname's secondname's secondname's secondname's secondname's secondname's secondname's secondname's firstname's secondname's firstname's secondname's firstname's second,ois names the first name's firstname's secondname's firstname's secondname''s firstname''s firstname''''s firstname''s secondname''
随着生物技术的不断发展，肌肉组织中DNA的提取技术也在不断改进和完善。传统的DNA提取方法通常使用化学试剂和离心机等设备，但这些方法可能会对DNA造成损伤或丢失。因此，开发更加高效、稳定和可靠的DNA提取方法对于生物医学研究具有重要意义。
背景
目的和背景
肌肉组织中DNA的提取是科学研究的重要基础。通过对肌肉组织中DNA的分析，科学家可以深入了解基因与疾病之间的关系，探索疾病的发病机制，为疾病的预防、诊断和治疗提供科学依据。
检测方法
影响DNA完整性的因素包括肌肉组织的保存状况、DNA的降解程度、提取过程中使用的试剂和操作方法等。
影响因素
完整性检测
04
结果分析
结果分析
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动物的肌肉、心脏、肝、肾、脾等器官组织都是 DNA的良好来源,其中肝脏的DNA虽然产量最大,但肝脏中 丰富的基因组DNA酶对提取的DNA降解比较严重,相对来 说，肌肉组织则由于具有相对少量的DNA酶而使得提取的 DNA质量较好,尤其是新鲜组织的DNA产量高,质量好 。 肌肉DNA的提取一般有两种方法：SDS法和异硫氰酸 胍法，但我们一般采用前一种，即SDS法。 DNA是一切生物细胞的重要组成成分，主要存在于细 胞核中。通过研磨和SDS作用破碎细胞；苯酚和氯仿可 使蛋白质变性，用其混合液（酚：氯仿：异戊醇）重复抽 提，使蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质；RNase降 解RNA，从而得到纯净的DNA分子。
实验步骤
• 1. 取新鲜或冰冻动物肌肉组织块0.1g，用冷生理盐水洗3 次，置于培养皿中剪碎（动作要快），将碎肌肉组织转入 玻璃匀浆器中，加入1mL的匀浆液， 匀浆至不见组织块 （低温操作） • 2、将匀浆液倒入1.5mL 离心管中（转前先静置一会，防 止未碎的组织进入离心管）， 5000rpm离心2min； • 3、弃上清，沉淀加0.25 mL灭菌水，用微量移液器吸嘴 吹散悬浮沉淀，再加0.25 mL 2×细 胞裂解缓冲液，盖上 离心管盖子，颠倒混匀； • 4、将离心管插入泡沫浮板中，置于55℃恒温水浴锅中水 浴2-3h，可间歇性颠倒混匀离心 管数次；
实验步骤
• 5、加入等体积酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，缓慢颠倒混匀， 冰上静置10min，12000 rpm离心 10min； • 6、用钝化的黄吸嘴吸取上清水相（含DNA，粘稠）入另 一新1.5mL 离心管中（注意不可 吸取两相间的蛋白质）； • 7、估算上清体积，加入等体氯仿/异戊醇(24:1)，缓慢 颠倒混匀，12000 rpm离心10min；
器材和试剂
• 1、仪器设备 恒温水浴锅、台式离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、 吸嘴 • 2、试剂 （1）组织匀浆液：100mM NaCl，10 mM 三羟甲基氨基 甲烷(Tris)-HCl (pH8.0)，25mM乙二胺四乙酸（ EDTA pH 8.0)。（2) 2×细胞裂解缓冲液：200mM NaCl，20 mM Tris-HCl (pH8.0)，50 mM EDTA (pH 8.0)，蛋白酶K (200 μg/mL)，1%SDS (十二烷基硫酸钠）（3）蛋白酶K：双蒸 水配制10mg/mL，-20℃保存 （4）TE缓冲液：10 mM Tris-HCl (pH8.0)，1 mM EDTA (pH 8.0)，室温贮存 （5） 平衡酚(pH8.0)/氯仿/异戊醇（25:24:1） （6）3 M NaAc、 冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水、生理盐水 • 3、材料 新鲜动物（兔子）肌肉组织
注意事项
• 1．动物肌肉应新鲜，处理应迅速，细胞破碎应完 全。 • 2．抽提每一步用力要柔和，防止机械剪切力对DNA 的损伤。 • 3．取上层清液时，注意不要使其浑浊吸起中间的蛋 白质层。
• 4．离心后，不要晃动离心管，拿管要稳，斜面朝外。
• 5. 在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散， 以减少DNA团块形成。
肌肉组织中DNA的提取
主讲内容
1 .实验目的 2 .实验原理 3 .实验器材与试剂 4 .实验步骤 5 .注意事项
实验目的
• 1. 学习并掌握动物组织中DNA的提取方法 及其原理 • 2. 熟悉肌肉中提取DNA的基本操作以及使 用各个器材的基本方法。
• 3. 了解现今从组织中提取DNA的方法
实验原理
•
8、 用钝化的黄吸嘴吸取上清水相入另一新1.5 mL离心管 中，并加1/10体积的3 M NaAc 和两倍体积的无水乙醇， 盖上离心管盖子， 缓慢颠倒混匀， 冰浴30 min后10000 rpm离心5min；
实验步骤
• 9、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将管口 的残余液滴除掉； • 10、用1mL 预冷的70%乙醇洗涤沉淀物，10000 rpm离心 1min； • 11、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上吸去管口 的液滴，短暂离心，用吸嘴将附 于管壁的残余液滴除掉， 室温干燥； • 12、加100μL TE缓冲液重新溶解沉淀物，然后置于4℃ 或-20℃保存备用。
实验步骤
• 1. 取新鲜或冰冻动物肌肉组织块0.1g，用冷生理盐水洗3 次，置于培养皿中剪碎（动作要快），将碎肌肉组织转入 玻璃匀浆器中，加入1mL的匀浆液， 匀浆至不见组织块 （低温操作） • 2、将匀浆液倒入1.5mL 离心管中（转前先静置一会，防 止未碎的组织进入离心管）， 5000rpm离心2min； • 3、弃上清，沉淀加0.25 mL灭菌水，用微量移液器吸嘴 吹散悬浮沉淀，再加0.25 mL 2×细 胞裂解缓冲液，盖上 离心管盖子，颠倒混匀； • 4、将离心管插入泡沫浮板中，置于55℃恒温水浴锅中水 浴2-3h，可间歇性颠倒混匀离心 管数次；
实验步骤
• 5、加入等体积酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，缓慢颠倒混匀， 冰上静置10min，12000 rpm离心 10min； • 6、用钝化的黄吸嘴吸取上清水相（含DNA，粘稠）入另 一新1.5mL 离心管中（注意不可 吸取两相间的蛋白质）； • 7、估算上清体积，加入等体氯仿/异戊醇(24:1)，缓慢 颠倒混匀，12000 rpm离心10min；
器材和试剂
• 1、仪器设备 恒温水浴锅、台式离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、 吸嘴 • 2、试剂 （1）组织匀浆液：100mM NaCl，10 mM 三羟甲基氨基 甲烷(Tris)-HCl (pH8.0)，25mM乙二胺四乙酸（ EDTA pH 8.0)。（2) 2×细胞裂解缓冲液：200mM NaCl，20 mM Tris-HCl (pH8.0)，50 mM EDTA (pH 8.0)，蛋白酶K (200 μg/mL)，1%SDS (十二烷基硫酸钠）（3）蛋白酶K：双蒸 水配制10mg/mL，-20℃保存 （4）TE缓冲液：10 mM Tris-HCl (pH8.0)，1 mM EDTA (pH 8.0)，室温贮存 （5） 平衡酚(pH8.0)/氯仿/异戊醇（25:24:1） （6）3 M NaAc、 冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水、生理盐水 • 3、材料 新鲜动物（兔子）肌肉组织
注意事项
• 1．动物肌肉应新鲜，处理应迅速，细胞破碎应完 全。 • 2．抽提每一步用力要柔和，防止机械剪切力对DNA 的损伤。 • 3．取上层清液时，注意不要使其浑浊吸起中间的蛋 白质层。
• 4．离心后，不要晃动离心管，拿管要稳，斜面朝外。
• 5. 在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散， 以减少DNA团块形成。
肌肉组织中DNA的提取
主讲内容
1 .实验目的 2 .实验原理 3 .实验器材与试剂 4 .实验步骤 5 .注意事项
实验目的
• 1. 学习并掌握动物组织中DNA的提取方法 及其原理 • 2. 熟悉肌肉中提取DNA的基本操作以及使 用各个器材的基本方法。
• 3. 了解现今从组织中提取DNA的方法
实验原理
•
8、 用钝化的黄吸嘴吸取上清水相入另一新1.5 mL离心管 中，并加1/10体积的3 M NaAc 和两倍体积的无水乙醇， 盖上离心管盖子， 缓慢颠倒混匀， 冰浴30 min后10000 rpm离心5min；
实验步骤
• 9、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将管口 的残余液滴除掉； • 10、用1mL 预冷的70%乙醇洗涤沉淀物，10000 rpm离心 1min； • 11、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上吸去管口 的液滴，短暂离心，用吸嘴将附 于管壁的残余液滴除掉， 室温干燥； • 12、加100μL TE缓冲液重新溶解沉淀物，然后置于4℃ 或-20℃保存备用。