动物组织总DNA的提取与浓度测定
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
生化实验课件-动物肝脏中DNA的提取和测定
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
一. 实ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ目的 掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法 二. 实验器材 坐标纸 试管 吸管 722型分光光度计 恒温水浴锅
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
三.实验耗材 1. DNA标准溶液（取DNA钠盐用5mmol/L的NaOH 配成200ug/L的溶液） 2. 二苯胺溶剂（纯二苯胺1g溶于100ml冰醋酸 （A.R.）再加入10ml过氯酸（A.R.浓度>60%） 混匀待用。临用前加入1ml 1.6%乙醇溶液） 3. DNA样液（将实验1提取的DNA粗品用蒸馏水 溶解，定容至25ml，控制其DNA含量在100ug/ml 左右）
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
四. 实验操作 1.标准曲线的绘制 按表1加入各种试剂，混匀，于60°C恒温水浴45min，冷却后， 在595nm波长下于分光光度计比色测定，以吸光度对DNA浓度作 图，制作标准曲线。 2.样品的测定 取DNA样液1.0ml，加入蒸馏水1.0ml，混匀。然后准确加入二苯 胺试剂4.0ml，混匀，于60°C恒温水浴45min，冷却后，595nm 波长下于分光光度计比色测定，根据所测的吸光度对照标准曲线 求得DNA的质量（ug）。
实验1 动物肝脏中DNA的提取
2. 在沉淀中加入20ml柠檬酸钠缓冲液、10.5ml氯仿-异 戊醇混合液、2ml SDS使其最终浓度为0.41%，振荡 30min，然后缓慢加入固体NaCl（约1.8g），使其最 终浓度为1mol/L。将其在3500r/min离心20min，取 上清水相。 3. 在上述水相溶液中加入等体积冷乙醇，边加边用 玻棒慢慢搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶 状物用滤纸吸去多余的乙醇，即得DNA 粗品。用蒸馏水溶解并定容至25ml。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告修订版
动物肝脏中D N A的提取及检测实验报告集团标准化小组：[VVOPPT-JOPP28-JPPTL98-LOPPNN]动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic?acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
动物组织中DNA的提取与鉴定
实验目的
1. 掌握动物组织中DNA提取的原理和操作过程 2. 了解DNA的组分，掌握DNA的定性检测的具 体方法 3. 掌握DNA纯度检测和浓度测定方法
实验原理—DNA提取
动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖 核酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。 RNA核蛋白和DNA核蛋白在不同浓度氯化钠溶液 中的溶解度有显著区别。DNA核蛋白在0.14 mol/L 氯化钠中溶解度低，但在1 – 2 mol/L氯化钠中溶 解度高；RNA核蛋白在0.14 mol/L氯化钠中溶解度 仍有相当大的溶解度。调节氯化钠浓度，可使 RNA核蛋白和DNA核蛋白分步提取开来。
实验原理—DNA提取
氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀，将核酸 物质萃取出来；再向萃取液中加入适量乙醇，可 使DNA析出。氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在 DNA纯化研究中非常常用，氯仿-异戊醇抽提的原 理是，氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相 分层；异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。 而DNA不溶于乙醇等有机溶剂，因此可以通过乙 醇沉淀来纯化和浓缩DNA。
实验原理—DNA鉴定
DNA是由脱氧核糖核苷酸单体构成，其组成部分包括磷酸、 有机碱（嘌呤与嘧啶）、戊糖（脱氧核糖）。
1）磷酸
钼酸铵
磷钼酸
Vc 或 氨基萘酚磺酸 钼蓝
（显蓝色） 2）嘌呤碱
硝酸银
嘌呤银化合物（灰褐色、絮状）
3）脱氧核糖 蓝色化合物
硫酸
ω-羟基-γ-酮基戊醛
二苯胺
实验试剂 1. 含有0.14 mol/L NaCl的0.015 mol/L柠檬酸 钠溶液 2. 1mol/L NaCl溶液 3. 氯仿-异戊醇（24 : 1, V/V） 4. 95%乙醇 5. 氨水溶液 6. 5% AgNO3溶液
动物肝脏中DNA得提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA得提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid得缩写),又称去氧核糖核酸,就是脱氧核糖核酸染色体得主要化学成分,同时也就是组成基因得材料。
有时也被称为“遗传微粒”,原因就是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA得一部分复制传递到子代中,从而完成性状得传播。
DNA就是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高得粘度,可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来得水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间得氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA 得解螺旋。
在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言,正常得体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中得拟核内。
染色体上得染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其她蛋白质进行交互作用,进而调节基因得转录。
脱氧核糖核酸得结构DNA得结构: DNA得结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构与四级结构四个水平。
DNA就是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。
而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。
动物组织DNA的提取与鉴定
五、注意事项
1.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。 2.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减 少DNA团块形成。 3. 提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液 太少使浓度过大。沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困 难。 4. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。 5.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8；不纯，含有 蛋白质等杂质。在这种情况下，应加入SDS至终浓度为 0.5%，并重复步骤2～8。 6.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含 高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组 织的量。
*鉴定：
1、安装电泳槽 将有机玻璃的电泳凝胶床洗净，晾干，用胶带将两端的 开口封好，放在水平的工作台上，插上样品梳。 2、琼脂糖凝胶的制备 称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中，（按0.3-1.5%的琼脂 糖含量，1-25kb大小的DNA用1%的凝胶，20-100kb的 DNA用0.5%的凝胶，200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶） 置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化（不要加热至沸 腾），取出摇匀。 3、灌胶 将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上 4、待琼脂糖胶凝固后，在电泳槽内加入电泳缓冲液，然 后拔出梳子。
二、实验原理
• 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基 硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/ 异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从 溶液中析出。 • 琼真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基 因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内， 因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等 分离，又要保持DNA分子的完整。 • 脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。 琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷， 是一种很好的电泳支持物。DNA在碱性条件下（pH8.0的缓冲液） 带负电荷，在电场中通过凝胶介质向正极移动，不同DNA分子 片段由于分子和构型不同，在电场中的泳动速率液不同。溴化 乙锭（EB）可嵌入DNA分子碱基对间形成荧光络合物，经紫外 线照射后，可分出不同的区带，达到分离、鉴定分子量，筛选 重组子的目的。
实验九动物组织中DNA的提取与鉴定PPT课件
DNA鉴定
琼脂糖凝胶电泳
将提取的DNA进行琼脂糖 凝胶电泳，观察电泳结果， 判断DNA的纯度和浓度。
紫外吸收法
利用紫外分光光度计测量 DNA溶液在260nm处的吸 光度值，计算DNA的浓度 和纯度。
荧光染料染色法
利用荧光染料染色DNA， 通过荧光分光光度计测量 DNA的荧光强度，判断 DNA的纯度和浓度。
细胞内的DNA。
DNA提取
离心
将匀浆后的样品进行离心，使细胞碎片和 杂质沉淀到底部，上清液中含有DNA。
洗涤
用洗涤液清洗吸附柱，去除未被吸附的杂 质。
吸附
将上清液加入到吸附柱上，DNA被吸附在 吸附柱的硅基质膜上，而蛋白质和其他杂 质被排除。
洗脱
用洗脱液将DNA从吸附柱上洗脱下来，收 集洗脱液中的DNA。
移液器
用于精确移取和量 取实验试剂。
电脑和PPT软件
用于制作和展示实 验课件。
03
实验步骤
样品处理
样品收集
选择新鲜的动物组织样品，确保 无菌条件下收集，避免样品受到
污染。
样品处理
将收集的动物组织切成小块，用 生理盐水或磷酸盐缓冲液冲洗，
去除表面的污物和血液。
样品匀浆
将处理过的组织块放入匀浆器中， 加入适量的匀浆介质（如石英砂、 玻璃珠等），破碎细胞，释放出
电泳技术的局限性
琼脂糖凝胶电泳技术虽然能够较好地分离DNA条带，但对于较长片段和大分子量DNA的 分辨率有限，未来可考虑采用其他电泳技术或优化现有技术。
纯度分析的注意事项
在紫外分光光度计检测过程中，需要注意消除样品中蛋白质、酚类等物质的干扰，以确保 纯度分析的准确性。同时，对于不同来源和性质的DNA样品，可能需要采用不同的纯度 分析方法。
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Hunan Agricultural University
2、DNA纯度及含量测定
取待测DNA溶液20ml放入1cm内经石英比色皿,加蒸 馏水至2ml（稀释100倍），以蒸馏水作空白对照， 于紫外分光光度计上测定230nm、260nm、280nm和 270nm波长下的光吸收值。然后计算出OD260/OD280 和OD260/OD270的比值。 DNA浓度（ng/μ l）=( OD260nm /(0.02×d))×稀 释倍数, d：为石英比色皿的内径，单位为cm。 若OD260/OD280＜1.8，说明还残存有蛋白质； OD260/OD270＞1.2，说明还残存有酚； OD260/OD230＜2.0，则残存基酸、核苷酸、基酸盐 等物质。
Hunan Agricultural University
实验十四 动物组织中总DNA的提取与纯度鉴定
湖南农业大学动物科技学院
贺长青
Hunan Agricultural University
一、实验目的
动物DNA的提取原理和方法 动物DNA纯度的鉴定技术
Hunan Agricultural University
Hunan Agricultural University
四、实验方法
1、动物DNA的提取
取猪耳或其它组织器官约1.5g，洗净，切碎，移至1.5ml离心管中； 加入DNA提取液0.5ml； 加入蛋白酶K （10mg/ml） 15μ l，充分混匀； 放于45℃摇床消化，转速120 rmp，以完全消化为准； 加入等体积饱和酚，充分摇匀，10000 rmp离心5′，取上清液； 加等体积氯仿/异戊醇混合液，充分混匀，10000 rmp离心5′，取上清液 加入2倍体积冰冷的无水乙醇，轻轻混匀，7000 rmp离心2′，弃去上清液。 加入适量TE溶解。
二、实验原理
去污剂如SDS（十二烷基硫酸钠）使组织细胞裂解，并 破坏蛋白质的二级、三级结构； 蛋白酶K水解蛋白质； 有机溶剂如苯酚/氯仿抽提去除变清的蛋白质及多糖、 脂类等杂质物质，氯仿抽提去除多余的酚； 无水乙醇：含DNA的上清液DNA分子发生凝聚（脱水） 离心得到DNA沉淀
Hunan Agricultural University来自三、实验的材料、仪器及试剂
1、实验材料：猪耳或其它组织器官 2、仪器设备： 高速离心机、离心管、微加热系统、移液枪、紫外分光光度计 3、试剂 （1）DNA提取液（PH 8.0）: ① EDTA： 10mM； ② Tris-Hcl： 10mM； ③ SDS： 2%； ④ Nacl： 30mM （2）饱和苯酚 （3）氯仿:异戊醇混合液（24：1） （4）无水乙醇 （5）蛋白酶K （6）TE：Tris-Hcl 10mM ； EDTA 1mM （PH 8.0）