5种酵母菌的体外抑菌实验
体外抑菌实验方案
体外抑菌实验方案一、实验目的1.探究不同抑菌剂对特定细菌的抑制效果。
2.优化抑菌剂的配方，提高抑菌效率。
3.为临床应用提供理论依据。
二、实验材料1.实验菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等。
2.抑菌剂：酒精、碘伏、过氧化氢等。
3.实验器材：培养皿、移液器、酒精灯、生物安全柜等。
三、实验方法1.菌株活化：将实验菌株从冻存管中取出，接种至斜面培养基，37℃培养24小时。
2.制备菌液：将活化后的菌株用无菌生理盐水洗涤，调整菌液浓度为10^6CFU/mL。
3.抑菌剂配制：按照实验设计，配制不同浓度和配比的抑菌剂。
4.抑菌实验：在生物安全柜中，将菌液均匀涂布于培养皿，加入不同抑菌剂，置于37℃培养箱培养24小时。
5.观察结果：观察各培养皿中细菌生长情况，记录抑菌效果。
6.数据处理：统计分析各抑菌剂的抑菌效果，计算抑菌率。
四、实验步骤1.活化菌株：从冰箱取出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等菌株，接种至斜面培养基，放入37℃培养箱培养24小时。
2.制备菌液：将活化后的菌株用无菌生理盐水洗涤，调整菌液浓度为10^6CFU/mL。
3.配制抑菌剂：按照实验设计，配制酒精、碘伏、过氧化氢等抑菌剂的不同浓度和配比。
4.抑菌实验：在生物安全柜中，将菌液均匀涂布于培养皿，加入不同抑菌剂，放入37℃培养箱培养24小时。
5.观察结果：观察各培养皿中细菌生长情况，记录抑菌效果。
6.数据处理：统计分析各抑菌剂的抑菌效果，计算抑菌率。
五、实验结果1.不同抑菌剂对金黄色葡萄球菌的抑制效果：酒精浓度为75%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；碘伏浓度为5%时，抑菌率为99.95%。
2.不同抑菌剂对大肠杆菌的抑制效果：过氧化氢浓度为3%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；酒精浓度为75%时，抑菌率为99.90%。
3.不同抑菌剂对白色念珠菌的抑制效果：碘伏浓度为5%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；过氧化氢浓度为3%时，抑菌率为99.95%。
5种酵母菌的体外抑菌实验
王旗 王祎丹 耿旭浩 河北农业大学5种酵母菌的体外抑菌实验Ｈ计， 梅特勒－托利多仪器 （上海） 有限公司。
指示平板法（１）指示平板的制备试验菌株酵母菌制备：将５种酵母菌接种于ＹＰＤ培养基中进行活化及传代培养，并利用分光亮度计测定吸亮度以测其菌液量，使其菌液量达到１０６ＣＦＵ／ｍ Ｌ。
（２）指示菌液的制备将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 分别接种于ＬＢ肉汤中进行活化及传代培养，并利用分光亮度计测定其吸光值使其菌液量达到１０６ＣＦＵ／ｍ Ｌ。
牛津杯法测定结果与分析酵母菌抑菌结果分析 注：＋＋＋，抑菌圈直径（ｄ）＞２０ｍｍ，表示极其敏感；＋＋，２０ｍｍ＞ｄ≥１５ｍｍ，表示高度敏感；＋，１５ｍｍ＞ｄ≥１０ｍｍ，表示中度敏感；－，ｄ＜１０ｍｍ，表示抗药。
从表结果可以看出，胶红酵母、葡萄有孢汉逊酵母对大肠杆菌具有抑菌能力，且葡萄有孢汉逊酵母对大肠杆菌抑菌能力最强，胶红酵母对大肠杆菌抑菌能力相对较弱，另外三种酵母无明显抑菌性能；胶红酵母、葡萄有孢汉逊酵母对金黄色葡萄球菌具有抑菌能力，且葡萄有孢汉逊酵母对金黄色葡萄球菌抑菌能力强于胶红酵母，克鲁斯假丝酵母Ｍ５－１３对金黄色葡萄球菌抑菌能力相对较弱，另外两种酵母无明显抑菌性能。
本实验所选取的５种酵母菌通过体外抑菌实验表明：隐球酵母ＡＰ－２０、毕赤克鲁维酵母ＢＰ－１８对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌无明显抑制作用，而葡萄有孢汉逊酵母、胶红酵母、克鲁斯假丝酵母Ｍ５－１３对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。
验室或临床实践研究表明，酵母菌对肠道细菌如大肠杆菌、沙门氏菌等引起的肠道感染、腹泻等疾病有保护预防性作用。
酵母菌代谢后产物对致病菌的拮抗、竞争排斥作用是产生上述功能的主要因素。
酵母菌拮抗作用产生的原因是多方面的： （１）酵母菌产酸，如乙酸、丙酸、乳酸等，酸对有害菌起生长抑制作用。
（２）酵母菌产抗生素或细菌素类物质，对有害菌有杀菌作用。
本试验从上述观点出发，用牛津杯法对５株酵母菌在体外的抑制菌能力及抑菌作用物质进行研究，为下一步动物实验打下基础。
抑菌实验方案
抑菌实验方案抑菌实验方案一、菌种大肠杆菌ATCC25922 金黄色葡萄球菌ATCC6538二、培养基LB培养基：胰蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L、琼脂15~20g，用10mol/LNaOH调pH，范围7.0~7.4倒平板（平板培养基）1.将培养皿洗净、干燥，使各培养皿盖方向一致，用牛皮纸包好，或放入特制铁罐内，注明皿盖的方向。
高压灭菌或干燥灭菌后备用。
2.取刚灭菌后尚未凝固的培养基置于无菌箱或超净工作台内，先左手持三角瓶,右手反转手掌用中指和无名指拨出棉塞或硅胶赛(或不翻转手掌用小指和手掌拨出棉塞) ,同时将三角瓶转换至右手，而后左手拿平皿,以大拇指和中指将皿盖打开一缝，至瓶口刚好伸入。
三角瓶口经火焰烧灼后，倾入灭菌或溶化、冷却至55~60°C的培养基约15mL(勿使瓶口靠在平皿壁上，以免沾染皿壁)，迅速盖好皿盖，置于桌上轻轻旋转平皿,使培养基均匀分布于整个平皿底部,冷凝后即为平板培养基。
有时凝固后的培养基表面有冷凝水，可将平皿盖打开倒置于37℃温箱，除去冷凝水，否则将影响平板分离培养效果。
为防止冷凝水过多，也可将培养基冷却至45 ~ 50°C再倒平板。
培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。
一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用三、器械培养皿（90mm）、滤纸、三角耙、接种环、试管四、实验步骤（一）、抑菌圈的测定(滤纸片法)1、菌种接种将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌反复转种2次，使菌种新鲜，置30℃恒温培养箱培养1d，备用。
2、菌悬液制备在超净台里将转接后生长良好的菌种试管斜面注入适量无菌水(约5mL)，接种环轻刮菌落，摇晃混匀。
3、涂布在超净台里用枪取0.1ml菌悬液注入平板，放置5min左右后用三角耙涂布均匀，每种菌设置两个重复平板4、贴片在超净台里将平板平均分为6个区，对角设置平行组，同时用无菌水做对照组,硫酸链霉素(10U)作阳性对照。
每两张滤纸片(直径1.1cm或0.6cm)为一贴，用镊子夹着滤纸片在样品中轻轻蘸一下后，取出贴在平板的指定位置，轻摁一下使滤纸片牢固，置(正放)4℃冰箱中放24h。
体外抗真菌药物敏感性试验ATB FUNGUS 3法与微量肉汤稀释法的对比评价
１１３ 抗 真 菌 药物 氟 康 唑 （ Ｃ 辉瑞 制 药 有 限 ．． Ｆ Ａ， 公 司 ）伊 曲康 唑 （Ｔ Ａ， ； ＩＲ 西安 杨 森 制药 有 限公 司 ） ； 伏立 康唑 （ Ｒ 珠 海亿 邦 制 药 有 限公 司 ） 两 性 霉 Ｖ Ｃ， ； 素 Ｂ（Ａ ， 海新 先锋制 药有 限公 司 ） ＭＢ 上 。水 溶性 药
为临床微生物实验室抗真菌 药物氟康 唑的敏感性 实验 的筛
选方 法。
１ １ １ 菌株 来 源 收集 ２ ０ ． ． ０ ６年 ｌ ２月份 ～ ０ ７年 ２０ ６月份 安徽 医科大 学第一 附 属 医院 临床感 染 患 者 的 标本（ 、 痰 咽拭 子 、 液 、 便 、 液 、 腹 水 、 尿 粪 血 胸 胃液 、
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安徽 医科 大学学报
Ａｔ ｎｖ ｓａｉＭｅｉｎ ｌ ｎ ｕ ０ ８Ｏ ｔ ３ ５ ｃ Ｕ ｉｒ ｔ ｓ ｄｃ ａｉＡ ｈｉ ０ ｃ； （ ） ａ ｅ ｉ ｔ ｉ ｓ ２ ４
体 外抗真菌药物敏感性试验 Ａ Ｂ Ｆ Ｎ Ｕ Ｔ Ｕ Ｇ Ｓ３法与 微量 肉汤稀释法的对 比评价
近 年来 ， 真菌病 发病率 呈 明显 上升 趋势 ， 特别是 条件致病 性真 菌感 染 更 为常 见 ， 真 菌药 物 合 理有 抗 效 的使 用 已越 来越 引起重 视 ， 是 ， 但 由于抗真 菌药 物 的广泛 应用 ， 别 是 随着 吡 咯类 药 物 的 耐药 菌 株不 特 断增 多 ， 临床 采用 合适 的实 验 方法 进 行抗 真菌 药 物 敏感性 测定 已是 当务之 急。评 价抗 真菌药物 敏感性 的最 基本 方法之一 是测 定其最 低抑 菌浓度 ＭＩ Ｃ值 。 美 国国家 临床 实 验 标 准 化 委 员 会 （ ＬＩ Ｍ ７Ａ 方 ＣＳ） ２一
抑菌实验步骤
抑菌实验步骤受试菌液浓度的确定：使用麦氏比浊管校准！0.5单位的麦氏比浊管的配置如下：取0.048mol/L的氯化钡0.5ml，加入到99.5ml的0.18mol/L的硫酸中即可。
此比浊管在625nm下吸光度为0.08---0.1之间，相当于10的8此方个菌体浓度！1 配药粗提物高、中、低剂量：50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL2 供试阳性药的制备阿米卡星：无菌条件下，分别吸取1.28mL、0.64mL硫酸阿米卡星注射液于50mL无菌容量瓶中，以pH7.8的磷酸盐缓冲溶液溶解定容，密封并冷藏保存。
庆大霉素：无菌条件下，分别吸取3.2mL、1.6mL硫酸庆大霉素注射液于50mL 无菌容量瓶中，以pH7.8的磷酸盐缓冲溶液溶解定容，密封并冷藏保存。
氯霉素：无菌条件下，分别吸取0.512mL氯霉素注射液于25mL、50mL容量瓶中，以pH6.0的磷酸盐缓冲溶液溶解定容，密封并冷藏保存。
头孢曲松钠：无菌条件下，取1.0g注射用头孢曲松钠溶于5mL pH6.0的磷酸盐缓冲溶液中，分别吸取0.32mL、0.64mL定容于50mL无菌容量瓶中，密封并冷藏保存。
以上供试阳性药的有效浓度均为2.56mg/mL和1.28mg/mL。
3 供试培养基MH（Mueller-Hinton）培养基（0.6%牛肉膏、1.75%蛋白胨、0.5%氯化钠，pH为7.4）；MHA培养基（0.6%牛肉膏、1.75%蛋白胨、0.5%氯化钠、1.7%琼脂，pH为7.4-7.6）。
4细菌培养无菌条件下，以移液枪吸取0.01mL菌种于MH培养基内，密封并轻轻摇匀，置37℃摇床(转速200r／min)中培养16-18h。
取直径为90mm灭菌的培养皿，每培养皿倒入20mL熔化并冷却至40℃左右的MHA培养基，待培养基完全凝固后，用移液枪吸取所需的供试菌悬液0.1mL于培养皿中，用涂布棒涂匀，使菌悬液均匀分布在培养基上。
取直径为7mm的圆形滤纸片蘸取供试溶液（完全浸透且无液滴滴落），将该滤纸片均匀摆放在涂有菌悬液的培养基上。
七组美容祛斑复方药的体外抑菌实验
外抑菌 活性 的筛 选实 验 ， 研究 在未 添加抗生 素 、 化学 药品 的情况 下 ， 菌悬 液 的浓度大 约为 １ ０ ｃ ／ 。菌悬 液需现配现 用 。 ×１ ｆ ｍｌ ｕ
对 １ 种常见 病原微 生物 的抑菌效 果 以及 它们 的最小 抑 菌浓度 。现 ２ ３ 含 茵平板 的制备 ６ ． 将 实验结果 报告 如下 。
２８ ２
《 求医问药》 下半月刊 Ｓｅ ｄｃ ｌ ｎ ｓ ｈ ｄｃ ｅ ０ １ 第 ９卷 ｅｋＭｅ ｉ ｄＡ ｋＴ ｅ ａＡ Ｍｅ ｉ ｎ ２ １ 年 ｉ
第７ 期
七组美容祛斑 复方药 的体 外抑菌 实验
姜 国银 杨 本寿 王 所 荣
（ 曲靖医学高等专科学校 云南 曲靖 ６ ５ ０ ） ５ ０ ０
白附子 防风 组方 五 ： 白丑 白蔹 细辛
内澄清透 明 ， 明无微生物生 长 ； 除观察试 管液 体清 亮透 明外 ， 证 真菌
还 需观察 是否有悬 浮物和 沉淀 ， 无悬 浮物 、 淀、 沉 混浊 证 明无 微生物
生长 ， 悬浮物 ， 有 沉淀 、 浊其 中任 何一 项 为有 微生 物 生 长； 混 以肉 眼 无 无沉 淀管 的 最低 药物 浓度 为 该药 的 ＭＩ 。 Ｃ 组方六 ： 白芨 白附子 白芷 白蔹 白僵 虫 细辛 益母 草 观察到 混 浊 、 悬浮 物 、 抑菌圈 直径 １ 以上 为抑 菌作 用 强 ， ～９ｍｍ 为具 有 中 等抑 菌 ０ｍｍ ８ 苦参 皂角刺 重楼 等 ２ 种 中药 。 ２
中医中药祛 斑是我 国传 统的 医疗美 容方 法 ， 一直 以来都 是市 场 ２１ 七组 纯 中药美容祛斑 复方 药旋 蒸液的制备 各 组 中药严 格按 ． 混匀 。用 ５ 倍体 积的 ５ 乙醇浸 提 中药 ２ ， 次放 ０ 次 每 开 发和科 学研究 的热点 。 目前 ， 市场 上很多 美容祛 斑产 品是 中药加 照配 比称取 ， 化 学药 品 ， 中药 美容 祛斑制 剂还很 少见 。根据 临床使 用效 果及 经 置 ４ 。过 滤除渣 ， 次滤液合 并后旋蒸 、 缩至终 浓度为 １ ／ 。 纯 ８ｈ 两 浓 ｍｌ ｇ
酵母样真菌体外抗菌活性检测报告
酵母样真菌体外抗菌活性检测报告发表时间：2010-06-02T08:32:45.140Z 来源：《中外健康文摘》2010年第4期供稿作者：陶萍[导读] 随着抗生素和细胞毒药物的广泛使用，导致真菌尤其是酵母菌的感染日益增多陶萍（湖北省荆州市第二人民医院湖北荆州 434020）【中图分类号】R978.5 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)04-0006-01【摘要】本文旨在了解临床常见真菌对常用抗真菌药物的敏感性，为临床使用抗真菌药提供依据；对试剂盒的质量与适用性进行评价。
【关键词】酵母样真菌药物敏感性试验随着抗生素和细胞毒药物的广泛使用，导致真菌尤其是酵母菌的感染日益增多，在免疫功能缺损者和AIDS患者中，真菌感染是最常见的并发症之一。
本文以法国生物梅里埃公司生产的ATB Fungus体外抗酵母菌药物敏感性试剂盒对临床分离的深部真菌予以试验研究，结果如下：1 材料和方法1.1实验菌株为近年来从临床送检的痰咽拭子（45株）、生殖道分泌物（31株）、血（2株）等样本中分离的菌株，其中白色念珠菌55株，热带念珠菌15株，光滑球拟酵母10株，克柔氏念珠菌2株，近平滑念珠菌1株，高里氏念珠菌5株，未定型3株。
1.2 ATB Fungus试剂盒成分该试剂盒具有32个孔的塑料条，含6种抗真菌剂，即5—氟胞嘧啶（5—FC）、两性霉素B（AmB）、制霉菌素（NYS）、咪康唑（MIZ）、益康唑（ECO）和酮康唑（KET）。
药物共占22孔，塑料条的前、中、后共有10孔为不含药的生长对照孔。
1.3标准参照株白色念珠菌ATCC90028为中科院皮肤病研究所馈赠。
1.4培养基 ATB Fungus试剂盒带有ATBF半液体培养基，实际上就是酵母氮源基础加天冬酰胺和葡萄糖培养基。
1.5缓冲液称取含3个结晶水的磷酸氢二钾157.5g，加水至100ml溶解pH9.8～10.0的缓冲液。
1.6方法按ATB Fungus操作指南进行菌液制备及接种。
真菌抑菌实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解真菌的抑菌特性及其应用。
2. 探究不同真菌对特定细菌的抑菌效果。
3. 学习微生物实验的基本操作技能。
二、实验原理真菌是一种广泛存在于自然界中的微生物，具有多种生物活性物质，如抗生素、酶、生物碱等，可以抑制或杀死其他微生物。
本实验通过培养特定细菌，然后分别用不同真菌提取物进行抑菌实验，观察并记录其抑菌效果。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 细菌菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌- 真菌菌种：曲霉菌、青霉菌、酵母菌- 琼脂、牛肉膏、蛋白胨- 有机溶剂：甲醇、乙醇、氯仿- 其他试剂：pH试纸、NaCl、KCl、CaCl2等2. 实验仪器：- 培养箱、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、无菌操作台、无菌试管、滴管、培养皿等四、实验方法1. 细菌和真菌的培养：- 将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
- 将曲霉菌、青霉菌、酵母菌分别接种于PDA培养基，置于25℃恒温培养箱中培养5天。
2. 真菌提取物的制备：- 将培养好的真菌分别用甲醇、乙醇、氯仿等有机溶剂提取，制成真菌提取物溶液。
3. 抑菌实验：- 将培养好的细菌菌液均匀涂布于琼脂平板上。
- 将真菌提取物溶液滴加于平板上，形成抑菌圈。
- 将平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察并记录抑菌效果。
4. 结果分析：- 记录不同真菌提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈直径。
- 比较不同真菌提取物的抑菌效果。
五、实验结果1. 曲霉菌提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果较好，抑菌圈直径分别为10mm和8mm。
2. 青霉菌提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果次之，抑菌圈直径分别为8mm和6mm。
3. 酵母菌提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为5mm和4mm。
六、实验讨论1. 本实验结果表明，曲霉菌、青霉菌和酵母菌均具有一定的抑菌作用，其中曲霉菌的抑菌效果最好。
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5种酵母菌的体外抑菌实验
作者：王旗王祎丹耿旭浩
来源：《食品界》2018年第08期
实验室或临床实践研究表明，酵母菌对肠道细菌如大肠杆菌、沙门氏菌等引起的肠道感染、腹泻等疾病有保护预防性作用。
酵母菌代谢后产物对致病菌的拮抗、竞争排斥作用是产生上述功能的主要因素。
酵母菌拮抗作用产生的原因是多方面的：（1）酵母菌产酸，如乙酸、丙酸、乳酸等，酸对有害菌起生长抑制作用。
（2）酵母菌产抗生素或细菌素类物质，对有害菌有杀菌作用。
本试验从上述观点出发，用牛津杯法对5株酵母菌在体外的抑制菌能力及抑菌作用物质进行研究，为下一步动物实验打下基础。
目前，在动物养殖中抗生素被大量使用，由抗生素残留引发的食品安全问题日益增多，因此，健康养殖已成为保障动物性食品安全的关键。
酵母菌是一种常见的适应性很强的兼性厌氧微生物。
因其含有丰富的蛋白质、核酸、维生素、微量元素等营养物质，且具有易发酵、增殖成本低等优点，被广泛应用于食品、化工、药物、饲料、环境治理和生物工程等行业。
本文前期研究发现，5种常见酵母菌具有一定的抑菌性。
对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌抑菌效果显着，为其微生态制剂的开发及应用奠定基础。
材料与方法
材料与试剂
（1）菌种
试验菌种：毕赤克鲁维酵母BP- 18、胶红酵母、隐球酵母AP- 20、克鲁斯假丝酵母M5-13、葡萄有孢汉逊酵母、枯草芽孢杆菌、沙雷氏菌、巨大芽孢杆菌（本实验室保存）
指示菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌（本实验保存）
（2）培养基
营养琼脂培养基（NA）、LB肉汤培养基、YPD培养基。
（3）试剂
LB肉汤培养基，北京路桥技术有限责任公司；YPD培养基，北京路桥技术有限责任公司；蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、氯化钠、葡萄糖，北京奥博星生物技术有限公司，以上试剂均为分析纯。
仪器与设备。
ZSD- A1160生化培养箱、ZHWY- 2102C恒温摇床、ZHJ H- C1109B型超净工作台，上海智城分析仪器制造公司； FE20 p H计，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。
指示平板法
（1）指示平板的制备
试验菌株酵母菌制备：将5种酵母菌接种于YPD培养基中进行活化及传代培养，并利用分光亮度计测定吸亮度以测其菌液量，使其菌液量达到106CFU/m L。
（2）指示菌液的制备
将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌分别接种于LB肉汤中进行活化及传代培养，并利用分光亮度计测定其吸光值使其菌液量达到106CFU/m L。
牛津杯法测定
结果与分析
酵母菌抑菌结果分析
从表结果可以看出，胶红酵母、葡萄有孢汉逊酵母对大肠杆菌具有抑菌能力，且葡萄有孢汉逊酵母对大肠杆菌抑菌能力最强，胶红酵母对大肠杆菌抑菌能力相对较弱，另外三种酵母无明显抑菌性能；胶红酵母、葡萄有孢汉逊酵母对金黄色葡萄球菌具有抑菌能力，且葡萄有孢汉逊酵母对金黄色葡萄球菌抑菌能力强于胶红酵母，克鲁斯假丝酵母M5- 13对金黄色葡萄球菌抑菌能力相对较弱，另外两种酵母无明显抑菌性能。
本实验所选取的5种酵母菌通过体外抑菌实验表明：隐球酵母AP- 20、毕赤克鲁维酵母BP- 18对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌无明显抑制作用，而葡萄有孢汉逊酵母、胶红酵母、克鲁斯假丝酵母M5- 13对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。