黄酮标准曲线绘制的实验报告记录
黄酮提取实验报告
实验报告
一、实验课题：石韦总黄酮的提取及鉴定
二、实验目的：对不同种石韦的总黄酮的提取以及鉴定；
三、实验原理：利用超声波技术，是超声波的空化作用对细胞膜的破坏有助于黄酮类化合物
的释放和溶出；
四、实验仪器及试剂：
仪器：超声波清洗仪、搅拌机、紫外分光光度计、离心机、分析天平；
试剂：80%乙醇、0.1mg/ml芦丁溶液、5%亚硝酸钠、10%硝酸铝、4%氢氧化钠；
五、实验步骤：
Ⅰ、样品的处理：
称取1g干燥的样品，置于搅拌机中搅拌30-40秒，取出粉末，置于50ml离心管中，以1:30的比例加入80%乙醇，放入超声波清洗仪中振荡40min；振荡后取出，1500r离心15min，离心后取上清液保存；
Ⅱ、标准曲线的制备：
取1mg芦丁，加入10ml无水乙醇，制成0.1mg/ml芦丁溶液，分别精密吸取芦丁对照液0.00,0.50,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00ml于10.00ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，静置6min；再加10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，静置6min；再加4%氢氧化钠溶液4ml，用80%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12min，以试剂做空白参比液，于510nm处测定吸光度；
Ⅲ、提取物含量的测定：
精密吸取各样品液0.1ml，置于10ml容量瓶中，按标准曲线的制备方法测定各样品吸光度
六、实验结果分析：。
紫外测黄酮实验报告
一、实验目的1. 掌握紫外-可见分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理和方法。
2. 学习使用紫外-可见分光光度计进行定量分析。
3. 了解黄酮类化合物的性质及其在自然界中的应用。
二、实验原理黄酮类化合物是一类广泛存在于植物中的天然化合物，具有较强的生物活性。
本实验采用紫外-可见分光光度法测定黄酮含量，其原理基于黄酮类化合物在特定波长下有最大吸收峰，通过测定该波长下的吸光度值，根据标准曲线计算样品中黄酮的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：芦丁标准品、样品（含黄酮类化合物）、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等。
2. 仪器：紫外-可见分光光度计、电子天平、容量瓶、移液管、试管等。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）准确称取芦丁标准品0.01g，用无水乙醇溶解，转移至100mL容量瓶中，定容至刻度，得到0.1mg/mL的芦丁标准溶液。
（2）分别取1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL芦丁标准溶液于试管中，加入2.5mL 5%NaNO2溶液，混匀，放置6分钟。
（3）加入2.5mL 10%Al（NO3）3溶液，混匀，放置6分钟。
（4）加入10mL 4%NaOH溶液，混匀，用无水乙醇定容至25mL，摇匀。
（5）以无水乙醇为空白，在510nm波长下测定吸光度值。
（6）以吸光度值为纵坐标，芦丁标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定（1）准确称取样品0.01g，用无水乙醇溶解，转移至100mL容量瓶中，定容至刻度，得到0.1mg/mL的样品溶液。
（2）按照绘制标准曲线的步骤，测定样品溶液在510nm波长下的吸光度值。
（3）根据标准曲线，计算样品中黄酮的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线根据实验数据绘制标准曲线，得到线性回归方程为：A=0.0685C+0.0035，相关系数R2=0.9988。
2. 样品测定根据标准曲线，计算样品中黄酮的含量为0.045mg/g。
六、实验结论1. 本实验成功运用紫外-可见分光光度法测定了样品中黄酮的含量，结果表明该方法准确可靠。
黄酮含量测定实验报告
黄酮含量测定实验报告1. 实验目的本实验旨在探究不同食材中黄酮含量的差异，并利用比色法测定黄酮的含量。
2. 实验原理比色法是利用物质对可见光的吸收特性进行定量分析的方法。
黄酮是一类具有广泛生物活性的天然化合物，常常用作药物和食品添加剂。
黄酮的浓度可以通过其在特定波长下的吸光度来确定。
3. 实验步骤3.1 准备工作- 准备所需食材样品，如黄芩、枸杞、山楂等。
- 准备试剂：甲醇、石油醚、2N盐酸、硼酸溶液、盐酸。
3.2 提取黄酮1. 将所选食材样品粉碎，并称取3克样品。
2. 将样品加入25mL石油醚，室温条件下搅拌30分钟，以去除油脂。
3. 过滤样品，将滤液收集入锥形瓶中。
4. 再加入25mL甲醇，室温条件下搅拌30分钟，以提取黄酮。
5. 过滤后，用甲醇定容至100mL。
3.3 构建标准曲线1. 取黄酮标准品，分别称取0.1g、0.2g、0.3g、0.4g和0.5g，置于50mL锥形瓶中。
2. 分别加入25mL石油醚和25mL甲醇，按上述方法提取黄酮。
3. 过滤后，用甲醇定容至50mL，得到浓度分别为2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL和10mg/mL的黄酮溶液。
3.4 测定样品黄酮含量1. 将提取得到的样品溶液取5mL，并用甲醇定容至25mL。
2. 取适量样品溶液置于比色皿中，以甲醇为对照组。
3. 在波长为380nm的紫外可见光谱仪中测定吸光度。
4. 实验结果与分析4.1 标准曲线根据所得的吸光度数据，绘制出黄酮浓度与吸光度之间的标准曲线。
4.2 样品含量计算根据所测得的样品吸光度值，利用标准曲线可得到样品中黄酮的浓度。
5. 实验讨论与结论本实验利用比色法测定了不同食材中黄酮的含量。
通过对标准曲线的测定和样品吸光度的测量，可以准确计算出样品中黄酮的含量。
本实验的结果对于食品科学和药物研发具有重要意义。
黄酮作为一种天然化合物，具有多种生物活性，可以抗氧化、抗炎和抗肿瘤等。
因此，了解黄酮含量对于评估食材的营养价值和药物疗效具有指导意义。
槐花药材中总黄铜的质量分析设计
槐花药材中总黄酮的质量分析一、实验目的1.掌握比色法测定槐花药材中总黄铜含量的方法和原理。
2.熟悉槐花药材的薄层色谱鉴别法。
二、实验原理槐花为豆科植物槐的干燥花及花蕾。
夏季花开放或花蕾系形成时采收，及时干燥，除去枝、梗及杂质。
前者习称“槐花”。
槐花药材的主要有效成分是黄铜类化合物，其中芦丁的含量最高，所以槐花药材的鉴别及含量测定均以芦丁为指标。
芦丁（C27H30O16，610.510)黄酮类化合物在碱性条件下与铝盐发生配位反应，生成红色的配位化合物，使得最大吸收波长红移至可见光区，且具有较高的吸收系数。
黄酮类与铝盐的配位反应是定量完成的，因此可采用比色法测定槐花药材中宗黄酮的含量，避免其他非黄酮成分对测定准确度的影响。
三、仪器与试药仪器:紫外-分光光度计1台、分析天平1台、25ml容量瓶9个、100ml容量瓶3个、具塞锥形瓶2个、10ml量筒2个、移液管(1ml、2ml、5ml、10ml)各2个、药匙1个、玻璃棒1个、50ml烧杯1个、250ml烧杯1个试剂与药材:槐花药材25g、芦丁对照品60mg、三氯化铝试液、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、氢氧化钠试液：甲醛、乙酸、乙醇。
四、实验步骤（一）、总黄酮的含量测定（1）对照品溶液的制备：取芦丁对照品50mg，精密称定取，置于25ml量瓶中，加乙醇适量，至水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。
精密量取10ml时，置于100ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得浓度为0.2mg/ml的芦丁对照品溶液。
（2）标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml与6ml时，分别置于6个25ml量瓶中，各加水使成6.0ml时，精密加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，再加10%硝酸铝溶液1.0ml，摇匀，放置15分钟，不加对照品溶液同法配置空白溶液，按照紫外可见分光光度法，在500nm波长处测定各溶液的吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
实验报告（终2）
实验报告（终2）紫外分光光度法测定槐花中总黄酮含量的方法学验证（实验报告）实验日期温度相对湿度实验人员学号一、实验目的1、掌握比色法测定槐花药材中总黄酮含量的方法及原理2、掌握方法学验证并证明采用的方法适合于相应的检测要求二、实验原理槐花药材的主要有效成分是黄酮类化合物，其中芦丁的含量最高，所以槐花药材的鉴别及含量测定均以芦丁为指标成分。
黄酮类化合物在碱性条件下与铝盐发生配位反应，生成红色的配位化合物，使得最大吸收波长红移至可见光区，且具有较高的吸收系数。
黄酮类与铝盐的配位反应是定量完成的，因此可采用比色法测定槐花药材中黄酮的含量，避免其他非黄酮成分对测定准确度的影响。
药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求，在建立药品质量标准时，分析方法需经验证。
本次实验所进行的是槐花总黄酮含量测定的方法学验证，验证内容包括线性、精密度、重现性、稳定性、准确度（回收率）。
三、仪器与试剂仪器：紫外-可见分光光度计，电子天平，玻璃比色皿，超声仪，25ml量瓶（15个），100ml量瓶（10个），150ml锥形瓶（6个），100ml量筒（2个），50ml烧杯（7个），洗耳球（2个），洗瓶(2个)，胶头滴管（2支），药匙（2支），玻棒（2支），移液枪（2支），移液枪头（若干），长颈漏斗（4个），1ml吸量管（3支），2ml吸量管（2支），5ml吸量管（2支），10ml吸量管（2支），500ml烧杯（1个）试剂：槐花药材，芦丁对照品，5%亚硝酸钠溶液，10%硝酸铝溶液，氢氧化钠试液，甲醇，乙醇四、实验步骤1．供试品溶液的制备：将槐花研碎，取粗粉约1g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入60%（v/v）乙醇100ml，称定重量，超声30分钟，取出冷却至室温，用60%（v/v）乙醇补足失重，摇匀，过滤，取续滤液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
2．对照品溶液的制备：取芦丁对照品50mg，精密称定，置于25ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热时溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。
大山楂丸中总黄酮的含量测定 报告模板
实验题目学生姓名学号班级同组姓名学号班级学号班级学号班级上交日期综述山楂为蔷薇科植物( Rosaceae) 山楂( Crataeguspinnatifida Bunge ) 、山里红( Crataegus pinnatifida Bunge var. Major N. E. Br. ) 及野山楂( Crataeguscuneata Sieb et Zucc. )的干燥成熟果实,是我国为数不多的既是食品又是药品的天然产物。
可食用植物，核果类水果，质硬，果肉薄，味微酸涩。
落叶灌木。
枝密生，有细刺，幼枝有柔毛。
小枝紫褐色，老枝灰褐色。
山楂形态特征：落叶小乔木。
枝密生，有细刺，幼枝有柔毛。
小枝紫褐色，老枝灰褐色。
叶片三角状卵形至棱状卵形，长2～6cm，宽0.8～2.5cm，基部截形或宽楔形，两侧各有3～5羽状深裂片，基部1对裂片分裂较深，边缘有不规则锐锯齿。
复伞房花序，花序梗、花柄都有长柔毛；花白色，有独特气味。
直径约1.5cm；萼筒外有长柔毛，萼片内外两面无毛或内面顶端有毛。
梨果深红色，近球形。
花期5～6月，果期9～10月。
果实较小，类球形，直径0.8～1.4cm，有的压成饼状。
表面棕色至棕红色，并有细密皱纹，顶端凹陷，有花萼残迹，基部有果梗或已脱落。
山楂的作用：山楂能防治心血管疾病，具有扩张血管、强心、增加冠脉血流量、改善心脏活力、兴奋中枢神经系统、降低血压和胆固醇、软化血管及利尿和镇静作用；防治动脉硬化，防衰老、抗癌的作用。
山楂酸还有强心作用，对老年性心脏病也有益处。
它能开胃消食，特别对消肉食积滞作用更好，很多助消化的药中都采用了山楂；山楂有活血化淤的功效，有助于解除局部淤血状态，对跌打损伤有辅助疗效；山楂对子宫有收缩作用，在孕妇临产时有催生之效，并能促进产后子宫复原；山楂所含的黄酮类和维生素C、胡萝卜素等物质能阻断并减少自由基的生成，能增强机体的免疫力，有防衰老、抗癌的作用。
山楂中有平喘化痰、抑制细菌、治疗腹痛腹泻的成分。
黄酮含量测定
植物黄酮含量测定
对照品溶液的制备
精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。
精密量取20ml，置50ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1ml中含无水芦丁0.2mg）。
标准曲线的制备
精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外-可见分光光度法（通则0401），在500mn 的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定方法
取植物干燥细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色（约4小时），提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品贮备液。
取供试品贮备液，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。
黄酮的鉴定实验报告
一、实验目的本实验旨在通过化学和色谱方法对黄酮类化合物进行鉴定，验证样品中是否含有黄酮类成分，并对其结构进行初步分析。
二、实验原理黄酮类化合物是一类广泛存在于植物中的天然酚类化合物，具有多种生物活性。
其结构特点为含有两个苯环通过三碳链相连。
本实验采用以下方法进行鉴定：1. 紫外光谱法：黄酮类化合物在紫外光区有特征吸收峰，可通过测定其紫外光谱图进行鉴定。
2. 薄层色谱法（TLC）：利用黄酮类化合物在特定溶剂中的分配系数差异，将其与其他物质分离，并通过与标准品进行对比鉴定。
3. 高效液相色谱法（HPLC）：对黄酮类化合物进行定性和定量分析。
三、实验材料与仪器材料：1. 样品：茶叶、水果皮、植物提取物等。
2. 标准品：槲皮素、芦丁等黄酮类化合物。
3. 试剂：甲醇、乙酸乙酯、乙醇、浓盐酸、镁粉等。
4. 仪器：紫外可见分光光度计、薄层色谱仪、高效液相色谱仪、电子天平等。
四、实验步骤1. 紫外光谱法鉴定（1）将样品用甲醇溶解，配制成一定浓度的溶液。
（2）用紫外可见分光光度计测定溶液在200-400nm范围内的吸收光谱。
（3）与标准品的光谱图进行对比，确定样品中是否含有黄酮类化合物。
2. 薄层色谱法鉴定（1）将样品用甲醇溶解，制成一定浓度的溶液。
（2）取少量溶液点于薄层板上，并将标准品溶液点在同一薄层板上作为对照。
（3）将薄层板置于展开缸中，加入适宜的展开剂，进行展开。
（4）取出薄层板，晾干，用紫外灯照射，观察样品斑点与标准品斑点的对应关系，鉴定黄酮类化合物。
3. 高效液相色谱法鉴定（1）将样品用甲醇溶解，制成一定浓度的溶液。
（2）用高效液相色谱仪对溶液进行检测，记录色谱图。
（3）与标准品的色谱图进行对比，鉴定黄酮类化合物。
五、实验结果与分析1. 紫外光谱法结果通过紫外光谱法，样品在200-400nm范围内有特征吸收峰，与标准品的光谱图相似，表明样品中可能含有黄酮类化合物。
2. 薄层色谱法结果在薄层色谱板上，样品斑点与标准品斑点位置一致，表明样品中可能含有黄酮类化合物。
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黄酮标准曲线绘制的实验报告记录————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：黄酮标准曲线绘制的实验报告1.总黄酮的测定1.1 实验仪器电子天平AR2140;紫外可见分光光度计UV2754;型数控超声波清洗器KQ3200DB;超级恒温槽;Rotavapor R200 旋转蒸发仪 ;FD21C250 冷冻干燥机21.2 试剂及药品芦丁标准品硝酸铝国产分析纯（配成5 %）亚硝酸钠国产分析纯（配成10 %）氢氧化钠国产分析纯配成（配成1mol/L）95%乙醇，无水乙醇国产分析纯（配成60%乙醇 50%乙醇）DPPH·（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，二苯代苦味肼基自由基）Vc（Ascrobic acid，维生素 C，抗坏血酸）没食子酸对照品：基准纯。
大青叶子采摘于海南大学东坡湖畔1.3实验步骤：1.3.1准备工作及波长的确定样品60℃烘干粉碎机粉碎，过20目筛，装入试剂瓶中备用。
根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。
1.3.2参照品芦丁标准溶液的制备精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁标准样品37.5mg置于100mL烧杯中,用60%乙醇溶解后定容至25mL 容量瓶中,摇匀，即可得1.5mg/mL的芦丁标准溶液。
1.3.3标准品的测量及绘制标准曲线精密吸取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL ,分别置于10mL 容量瓶中，并定容至刻度线。
得到0.0mg/ml、0.15mg/ml、0.3mg/ml、0.45mg/ml、0.6mg/ml、0.75mg/ml、0.9mg/ml的标准品溶液，分别取1ml到试管中各加5 %亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol /L氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min 后,分别在510nm 处测定其吸光度（Tai,Cai&Dai,2011）。
（以试剂空白做参比）以吸光度A 为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线。
用最小二乘法进行线性拟合,得c与A 的线性回归方程以及相关系数R2。
序号浓度（ug/ml）吸光度1 0 02 15 0.1803 30 0.3494 45 0.5465 60 0.7276 75 0.8847 90 1.063表1-1：芦丁标准曲线测定数据图1-2：芦丁标准曲线1.3.5样品的测试根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。
取黄酮提取液，取提液2ml至10ml的比色管中用60%的乙醇定容至刻度线则稀释5倍。
取稀释好的溶液4份1ml置入10ml的比色管中，其中一份用60%的乙醇定容，作为参比溶液。
其余各份各加5%亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol 氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min后,分别在510nm处测定其吸光度。
代入标准曲线回归方程可得浓度数据（以芦丁为参比）,三次结果取平均值。
经换算后得样品中总黄酮含量。
/( V *W)样品总黄酮含量(mg/g)=X*n*V1式中：X—测出的浓度，mg/ mL;（直接代入，不用换算。
）n—稀释倍数，量纲为1;—样液总体积，mL;VIV—测定时取样体积，mL;W—样品质量，g。
2.总分含量的测定2.1 实验仪器ALZO4型电子分析天平:上海梅特勒一托利多仪器有限公司;DELA犯O型pH计:上海梅特勒一托利多仪器有限公司;723可见分光光度计:上海菩华科技仪器有限公司;DK一512型电热恒温水浴锅:上海森信实验仪器有限公司;容量瓶(250mL，10OmL，25mL)、比色管管(10mL);烧杯、移液管、吸耳球。
2.2试剂及药品没食子酸对照品：基准纯，购于上海分析试剂厂，置50℃真空干燥箱真空中干燥4 h。
乙醇为工业级，蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2.3 Folin—Ciocalteu比色法测定总酚酸含量3.3.1 Folin—Ciocalteu试剂的配制称取20 g钨酸钠和5 g钼酸钠于圆底烧瓶中，用140 ml蒸馏水溶解，加入10ml 85％的磷酸溶液和20 ml浓盐酸，文火回流10 h，然后加入3 g硫酸锂及15 ml双氧水，加热沸腾15 min至亮黄色，不得带微蓝和绿色。
冷却，移入250 ml容量瓶中，定容，贮于棕色瓶中，4℃冰箱保存。
2.3.2对照品溶液制备准确称取15．00 mg干燥的没食子酸，加蒸馏水适量，超声溶解，放冷，以蒸馏水定容至50ml，制成0.3mg/mL没食子酸的溶液，作为对照品溶液。
将0.3mg/mL的没食子酸标准溶液分别配制成0.0mg/mL，0.03mg/mL，0.06mg/mL，0.09mg/mL，0.12mg/mL，0.15mg/mL、0.18mg/mL、0.21mg/mL的溶液，分别取1mL置于10mL的容量瓶中，加入2 ml福林试剂，充分摇匀，加入0．75ml 7.5％碳酸钠溶液．混匀，以蒸馏水稀释至刻度。
振荡一下，静置2h (Guo&Wei,2011)。
同时制作空白管。
为消除供试品溶液本身颜色的干扰，同时制作不加显色剂的对照管。
于765 nm 波长处测定吸光度值。
2.3.3标准曲线的制备以吸光度A 为纵坐标,浓度c 为横坐标,绘制标准曲线。
用最小二乘法进行线性拟合,得c 与A 的线性回归方程以及相关系数R 2。
表3-1：没食子酸标准曲线测定数据图3-1：没食子酸标准曲线2.3.4样品的测定取提液2ml 至10ml 的比色管中用60%的乙醇定容至刻度线则稀释5倍。
取稀释后溶液1ml 四份,分别置于10mL 比色管中，加入2 ml 福林试剂，充分摇匀，加入0．75ml 7.5％碳酸钠溶液．混匀，以蒸馏水稀释至刻度。
振荡一下，静置2h 。
同时制作空白管。
为消除供试品溶液本身颜色的干扰，同时制作不加显色剂的对照管。
于765 nm 波长处测定吸光度值。
总酚酸含量计算：序号浓度（ug/ml ） 吸光度（WL765.0） 0 0 01 3 0.132 26 0.284 39 0.411 412 0.582 515 0.712 618 0.843 7211.013多酚含量（mg/100g ）=100g 0.5X(mg)⨯⨯⨯）总酚酸称样量（稀释倍数3.清除 DPPH ·的能力的测定 3.1.实验仪器、药品及试剂 2.1.1 实验仪器ALZO4型电子分析天平:上海梅特勒一托利多仪器有限公司; DELA 犯O 型pH 计:上海梅特勒一托利多仪器有限公司; 723可见分光光度计:上海菩华科技仪器有限公司; DK 一512型电热恒温水浴锅:上海森信实验仪器有限公司; 容量瓶(250mL ，10OmL ，25mL)、比色管(10mL); 烧杯、移液管、吸耳球。
3.1.2试剂及药品DPPH·（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl ，二苯代苦味肼基自由基）； Vc （Ascrobic acid ，维生素 C ，抗坏血酸）为分析纯； 无水乙醇，蒸馏水3.2.1配制DPPH 溶液配制0.06mMDPPH 试剂，放入冰箱4℃进行冷藏，以备用。
3.2.2参照品Vc 标准溶液的制备准确称取17.6mgVc 到100mL 的烧杯中用无水乙醇溶解后，置于50mL 的容量瓶中定容至刻度线及可以得到2mmol/L 的母液，分别量1、2、3、4、5、6ml 至10ml 的比色管中用无水乙醇定容至刻度线，则可以得到0.2mmol/L 、0.4mmol/L 、0.6mmol/L 、0.8mmol/L 、1mmol/L 、1.2mmol/L 的溶液。
从以上比色管中分别取0.1ml 溶液置于试管中再加入3.9ml 的DPPH ，反应30min,在517nm 测出吸光值(Thoo&Ho,2010)，用无水乙醇代替待测液作为对照，用无水乙醇作空白，重复三组。
清除率=[(Ac-Ai)/Ac]×100%式中，Ac ：0.1 mL 无水乙醇加 3.9mL DPPH 溶液的吸光度；Ai ：0.1 mL 待测液加 3.9mLDPPH 溶液的吸光度。
3.2.3标准曲线的绘制3.2.2测试数据及标准曲线的绘制序号C（mmol/L）吸光度清除率/%0 0 01 0.2 0.529 14.922 0.4 0.424 30.903 0.6 0.32 46.734 0.8 0.209 63.625 1 0.11 78.696 1.2 0.02 92.39表3-1：VC标准曲线测定数据以吸光度A 为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线。
用最小二乘法进行线性拟合,得c与A 的线性回归方程以及相关系数R2。
图3-1：VC含量与吸光度的关系图3-1：VC含量与清除率的关系3.2.4样品的测定取提液4ml至10ml的比色管中用60%的乙醇定容至刻度线则稀释2.5倍。
取稀释后溶液0.1mL三份,分别置于10mL 试管中，再分别加入配置好的DPPH溶液3.9mL,摇匀，反应30min后，分别在517nm处测定其吸光度。
代入标准曲线回归方程可得浓度数据（以Vc为参比）,三次结果取平均值。
经换算后得样品自由基清除率。
4. 清除ABTS+自由基能力的测定4.1ABTS+自由基的配制准确称取0.19215gABTS于50mL的容量瓶中，用无水乙醇定容，摇匀，浓度7mmol/L；7mmol/LABTS+.与2.45mmol/L的高硫酸钾等体积混合，在室温、避光黑暗的条件下静置过夜反应12~16h，形成ABTS+自由基储备液。
该储备液在室温，避光的条件下稳定。
用前用无水乙醇稀释成工作液，于波长734nm处测得其吸光度为0.7000（±0.02），再装入棕色试剂瓶中，放入冰箱4℃进行冷藏，以备用。
4.2标准曲线的绘制4.2.1参照品Vc标准溶液的制备及测试准确称取8.8.mgVc到100mL的烧杯中用无水乙醇溶解后，置于50mL的容量瓶中用无水乙醇定容至刻度线及可以得到1mmol/L的母液，分别量1、2、3、4、5、6、7、8ml至10ml的比色管中用无水乙醇定容至刻度线，则可以得到0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.3mmol/L、0.4mmol/L、0.5mmol/L、0.6mmol/L、0.7mmol/L、0.8mmol/L 的溶液。
从以上比色管中分别取0.1ml溶液置于试管中再加入3.9ml的DPPH，反应30min,在517nm测出吸光值，用无水乙醇代替待测液作为对照(Zhu&Lian,2011)，用无水乙醇作空白，重复三组。