植物细胞工程综合大实验
植物细胞工程实验 (1)
植物细胞工程实验一 培养基母液的制备一、实验目的与意义学习和掌握培养基母液的配制方法。
在配制培养基前, 为了使用方便和用量准确, 常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配制培养基时, 只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
二、实验器材电子天平（称量为0.0001g ）、电子天平（称量为0.01g ）、烧杯（500ml 、100ml 、50ml ）、容量瓶（1000ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、细口瓶（1000 ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、药勺、玻璃棒、电炉。
三、实验药品NH4NO3.KNO3.CaCl2·2H2O 、MgSO4·7H2O 、KH2PO4.KI 、 H3BO3. MnSO4·4H2O 、 ZnSO4·7H2O 、 Na2MoO4·2H2O 、CuSO4·5H2O 、CoCl2·6H2O 、FeSO4·7H2O 、Na2-EDTA ·2H2O 、肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素(维生素B1)、甘氨酸。
四、实验步骤每种母液均配制500ml, 各成分的质量如下:1.大量元素母液的配制 表1 MS 培养基大量元素母液制备序号 药品名称培养基浓度（mg/L ）扩大20称量(mg)备注1 NH 4NO 3 1650 16500 蒸馏水定容至500ml2 KNO3 1900 19000 3 CaCl 2·2H 2O 440 44004 MgSO 4·7H 2O 370 37005 KH 2PO 41701700各成分按照表1培养基浓度含量扩大20倍, 用称量为0.01g 的电子天平称取, 用蒸馏水分别溶解, 按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到500ml 的容量瓶中, 即为20倍的大量元素母液。
植物细胞工程综合设计实验的实践与思考
综合设计实验的内容和要求通常在学期初即告知学生 ， 这样
可使学生在不断深入学习理论课并积极 的进行基础实验的同时 ， 能仔细思考 自己感兴趣的题 目，并有充足 的时间查 阅相关 资料 ， 选择合适 的搭档和讨论各 自的实验方案。 了便 于教师在开题前 为 能对学生 的实验方案进行初步的指导 ， 要求学生在开题报告进行 前提交 实验方案 ， 这样既节省了时间 ， 保证在开题报告后大部分 组 的学生能正常开始实验 ， 又可以更深入地 了解每个学生对知识 的把握和创造性 ，便 于老师对不 同的学生因材施教。
组为单位进行一次开题报告 。要求所有 的学生 和参与实验 的老 师都必须参加 ，每一个组在作 开题 报告 时 ，其他 同学 和老师均 可对其实验 的各个环节提 出疑 问或建议 ，帮助其 完善方案 。实 验方案通过 以后 ， 每个组须将 自己所 需材料列一份详细的清单 ， 向实验室管理老 师申领 ，并 可利用 任何 一个 课余 时间准备并开 展 自己的实验 。在整个 实验的准备和实施过程中都有 实验教师 和实验 室管理 老师共 同协 助学生解 决实际遇到的问题 ，并对学 生错误 的操作给予及时更正 。
１２ 实 验 的 进 行 ． 所 有组 的实验方案经过指导教师 的初步审核后 ，学生需 以
参 与实验的老师一致认为， 综合设计实验的开设使实验教学 效果较之以往有了很大的进步。首先 ， 学生参与实验的积极性有 很大的提高 。其次 ，学生能更主动的观察实验 ， 出问题并想办 提 法解决问题 。再次 ，加强了学生做实验 的计划性 。因为要求学生 设计方案通过后 ，要提前 向实验室管理人员提供一份试剂 、耗材 清单和仪器 的预约申请 ，一方面便于实验员准备和管理 ， 另一方 面也锻炼了学生考虑问题 的全面性和做事情的计划性。另外 ，在 很大程度上锻炼 了学生 的创新能力 。 有很多学生的实验设计很有 新意 ，并且实验工作也非常有意义 ，有些学生的想法甚至给了听 结题报告的老师很大的启发 ， 而且在学生提交的实验论文中惊喜 地发现 ， 有几个组的学生只要再稍加完善实验 内容就会成为一篇 不错 的科技论文 。 同时， 综合设计实验的开设扩展了实验教师的 教学思路 ， 启发全体教师对进一步改革完善教学 内容和教学方法 做 出新 的思考 ，真正实现 了教学相长 。 （ 下转 第 １６页 ） ７
选修三专题二2..1..1《植物细胞工程的基本技术》教案
专题2 细胞工程2.1．1《植物细胞工程的基本技术》教案一、教材分析《植物细胞工程的基本技术》是人教版高中生物选修三《现代生物科技专题》专题2第一节《植物细胞工程》第1节课的教学内容，主要学习细胞的全能性、植物组织培养技术、植物体细胞杂交技术等三方面内容，其中，植物细胞的全能性是植物组织培养的基础，而植物体细胞杂交技术又是在植物组织培养的基础上发展起来的。
lJh5GwCP1S二、教学目标1．知识目标：<1）. 简述植物组织培养和植物体细胞杂交技术。
<2）. 尝试进行植物组织培养。
2．能力目标：尝试植物组织培养技术，培养学生实验能力以及勇于实践的科学精神和科学态度。
3．情感、态度和价值观目标：体验植物组织培养技术，通过联系知识与生产实践的关系，激发学生对生物学科的兴趣与热爱生物学的情感。
三、教学重点难点1.教学重点<1）植物组织培养的原理和过程。
<2）植物体细胞杂交的原理。
2、教学重点植物组织培养的实验四、学情分析本节教材内容对学生来说，虽说在必修模块中学了一些细胞的知识，但仍然是一个新的领域，学习起来有一定的困难。
教师可采用学案导学、讲授为主结合讨论的方法。
lJh5GwCP1S 五、教学方法：1．学案导学：见后面的学案。
2．讲授为主结合讨论的方法六、课前预习1．请分别理出细胞全能性和植物组织培养的知识结构和层次。
2．对高一必修课中与上述两知识点有关的内容进行全面地复习。
3．找出新旧知识之间的联系与区别。
七、课时安排：1课时八、教学过程(一>预习检查、总结疑惑检查落实了学生的预习情况并了解了学生的疑惑，使教学具有了针对性。
<二）情景导入、展示目标。
显示三幅图，教师按图讲解，以引入新课。
教师引导学生观看专题的首页的三幅图，题图的愚意是表明细胞工程是在细胞水平的操作，它包含植物细胞工程和动物细胞工程等方面。
在本章引言中通过列举细胞工程的应用，把学生带进细胞工程的科技领域。
植物细胞工程设计性实验
综合实训实验内容：每个小组选择一种植物为研究对象，提交研究方案、设施方案、结果总结，最终提交研究报告。
【目的】：进一步培养和提高学生思维能力、动手能力、分析问题和解决问题能力。
【要求】：用于试验设计的题目按照指导教师的要求任选。
要求学生独立完成试验设计和整个试验操作过程，并完成试验总结报告。
1植物培养研究方案的制订实验目的：培养学生查阅收集资料的能力，综合运用所学知识组织文字写出研究方案。
实验内容：1.1 网上、图书资料室收集查阅资料的方法。
1.2 制订方案的撰写方法①前言综述国内外与本研究领域有关的研究动态：包括取得的成就、存在的问题和进一步研究要解决的问题，提出进行本试验设计的方法及其研究的目的和意义。
②研究的材料和方法设计③观察的项目④预期的进度1.3实施研究方案的试验研究中注意的事项实验方法：课堂讲授，学生和老师讨论。
作业：选择一种植物为研究对象，在一周内写出小组的研究方案，交电子档案。
方案提交举例：例如：1.研究对象芥蓝Brassica albograbra2.设计内容2.1综述国内外与本研究领域有关的研究动态2.2 试验研究内容2.2.1试验材料实验材料选取的品种2.2.2外植体来源和消毒处理外植体采用由无菌苗得到的子叶和下胚轴切段。
2.2.3培养基设计2.3试验研究拟采取的实施方案和技术路线2.3.1拟采取的实施方案2.3.1.1 愈伤组织的诱导2.3.1.2诱导生芽2.3.1.3 根的诱导2.3.2 技术路线（框图）2 实验小组研究方案的实施实验目的：让学生在开放性实验室中做试验研究，完成自己的研究方案，在研究中熟练和掌握植物组培的全部技术过程，争取研究成功培养出植物组培苗。
实验内容：学生完成自己的研究方案实验方法：实验室完全开放给学生使用(钥匙给学生)，建立开放实验室的管理制度，让学生自由做实验研究。
上课时间指导老师到位，指导学生和给学生解决所需的比较特殊的试剂、仪器、用品等。
《细胞工程》实验指导书
实验指导书课程：细胞工程授课专业：生物工程、生物技术主编：徐艳实验一实验室的概况与培养基母液的配制一、实验目的：熟悉植物细胞工程实验室的基本结构、必须的基本设备及其用途与作用方法，掌握配制培养基母液的基本技能。
二、材料与用具：1、药品：生长调节类物质、无机盐类、有机化合物等。
2、用具：分析天平、移液管、量筒、培养瓶、烧杯、冰箱、母液瓶等。
三、教学时数：4课时。
四、实验内容：（一）实验室的基本结构及主要设备：1、洗涤室：水槽、工作台、蒸馏水器等功能：器皿及材料洗涤；蒸馏水制备。
2、消毒室：高压蒸汽灭菌锅、烘箱等功能：器皿的干燥；器皿及培养基的消毒。
3、试剂室：试剂柜、冰箱功能：存放试剂及器皿。
4、准备室：工作台、天平、水浴锅、电炉、显微镜及各种玻璃仪器、金属仪器等功能：培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析。
5、接种室（含缓冲室）：超净工作台、接种箱等功能：无菌操作。
6、培养室：培养架、摇床等功能：培养物的控制培养。
7、驯化移栽室：如温室、大棚等功能：试管苗的驯化移栽。
（二）培养基母液的配制：1、MS基本培养基母液：各成分单独称量、单独溶解后混合定容①大量元素母液：10倍，1L注意：CaCl2.2H2O易与其他成分反应产生沉淀；②微量元素母液：100倍，0.5L③铁盐母液：100倍，0.5L注意：两者等体积溶解后混合，且需80℃水浴1h充分螯合，等待冷却后定容；④有机母液：100倍，0.5L2、激素类母液的配制：①1mg/ml的6－BA 50ml：先用0.1mol∕L的 HCL或NaOH溶解后再加水定容；②0.1mg/ml的NAA 50ml：先用少量0.1mol∕L的NaOH溶解后再加水定容。
注：精度要求精确到小数点后三位。
（三）培养器皿的洗涤：1、对污染的培养器皿先进行消毒灭菌处理；2、清除残渣，用清水洗净，浸泡于合成洗涤剂中6-24小时；3、用洗涤刷洗涤，并用自来水冲洗干净；4、用烘箱烘干或晾干，存放于防尘橱内备用。
植物细胞工程实验报告
植物细胞工程实验报告学院：农学院班级： 07生物技术（2）班姓名：袁峰学号： B0704091时间： 2009年11月指导老师：莫庭辉老师目录实验一、培养基母液的配制实验二、培养基的配制与灭菌实验三、香蕉吸芽的组织培养实验四、烟草叶片的消毒、接种和培养实验五、柱花草外植体的消毒、接种和培养实验六、木薯外植体的消毒、接种和培养实验七、桉树外植体的消毒、接种和培养实验八、玉米不成熟胚的消毒、接种和培养实验九、花生成熟胚的消毒、接种和培养实验十、水稻盾片的消毒、接种和培养实验十一、洋葱的组织培养（自选实验）植物细胞工程实验一、实验目的1、了解植物组织培养技术的基本原理。
2、掌握植物材料灭菌、接种和培养。
3、学习培养基的配制与灭菌。
二、实验原理根据植物细胞具有全能性的特点，在人工的控制条件下，将植物的任何器官、组织或细胞，放在人工合成的培养基中进行培养，使其生长、分化并形成完整植株。
实验一、培养基母液的配制一、实验目的掌握培养基母液的配制。
在配置培养基之前，为了方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配置培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液。
二、实验试剂与仪器设备1、药品试剂：母液、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA、IAA、2，4-D等。
2、仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。
三、实验内容（一）母液的配制1、大量元素母液的配制无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，用感量为0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解.溶解时在每只烧杯中加入30-40mL重蒸馏水，置于酒精灯上,加热使其溶解(注意温度不可过高，60-70℃)。
溶解后，在1000mL量筒中，混合后用重蒸馏水定容到1000mL。
植物细胞工程实验 (1)
植物细胞工程实验一 培养基母液的制备一、实验目的与意义学习和掌握培养基母液的配制方法。
在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
二、实验器材电子天平（称量为0.0001g ）、电子天平（称量为0.01g ）、烧杯（500ml 、100ml 、50ml ）、容量瓶（1000ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、细口瓶（1000 ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、药勺、玻璃棒、电炉。
三、实验药品NH 4NO 3、KNO 3、CaCl 2·2H 2O 、MgSO 4·7H 2O 、KH 2PO 4、KI 、 H 3BO 3、 MnSO 4·4H 2O 、 ZnSO 4·7H 2O 、 Na 2MoO 4·2H 2O 、CuSO 4·5H 2O 、CoCl 2·6H 2O 、FeSO 4·7H 2O 、Na 2-EDTA·2H 2O 、肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B 6)、盐酸硫胺素(维生素B 1)、甘氨酸。
四、实验步骤每种母液均配制500ml ，各成分的质量如下： 1、大量元素母液的配制表1 MS 培养基大量元素母液制备序号 药品名称培养基浓度（mg/L ）扩大20称量(mg)备注1 NH 4NO 3 1650 16500 蒸馏水定容至500ml2 KNO3 1900 19000 3 CaCl 2·2H 2O 440 44004 MgSO 4·7H 2O 370 37005 KH 2PO 41701700各成分按照表1培养基浓度含量扩大20倍，用称量为0.01g 的电子天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到500ml 的容量瓶中，即为20倍的大量元素母液。
植物细胞工程实验过程
实验一：配置MS 培养基实验二：黄瓜种子的消毒与萌发每小组20粒种子→75%酒精30s →10%次氯酸钠20min →无菌水冲洗3～4次→接入黄瓜种子萌发培养基中实验三：烟草叶片的消毒和接种 流水冲洗→75%酒精30s →10%次氯酸钠5~20min →无菌水冲洗3～4次——————→切块（0.7cmx0.7cm ）3~5块/瓶→接种到8种配方的培养基（1）MS+2，4-D 0.5mg/L（2）MS+6-BA 0.5mg/L+2，4-D 0.5mg/L（3）MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L（4）MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L（5）21MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+0.2%AC （活性炭） （6）MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L（7）MS+6-BA 2.0mg/L+2，4-D 0.5mg/L（8）21MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L 发根农杆菌介导的黄瓜子叶转化发根农杆菌培养→测OD 值→加入黄瓜子叶切块浸泡10min （切两端，留中间） →吸干多余菌液→接入MS 培养基中→共培养2d （暗培养） →抑菌选择培养（含cef 的MS 培养基）实验四：黄瓜毛状根的筛选培养切下能在无激素培养基上自主生长的黄瓜毛状根 →不同浓度卡那霉素的MS+cef 培养基实验五：继代培养第一组：转到3,5,6,8号配方培养基中培养第二组：转到1,2,7号配方培养基培养第三组：转到1,2,3,5,7号配方培养基培养第四组：转到4,5,6号配方培养基第五组：转到4号配方培养基第六组：转到1,4,8号配方培养基第七组：转到1,2,6,7号配方培养基第八组：转到 吸水纸吸干。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
植物细胞工程综合大实验（一）
——培养基配制和无菌操作
一、实验目的与要求
熟练掌握器皿的洗涤
MS培养基的配制分装
培养基和物品的高压灭菌
实验室的消毒灭菌
植物材料的取材及流水冲洗
无菌操作
材料的培养观察
二、实验原理
植物细胞的全能性。
三、仪器设备与器具
电子天平、移液枪、冰箱、高压锅、超净工作台、
三角瓶、烧杯、容量瓶、培养皿、搪瓷缸、镊子、
解剖刀、酒精灯、试剂瓶、玻璃棒、线绳、pH试纸、封口膜、试管刷、洗涤剂、打火机等。
四、实验材料
彩云阁茎段（用于诱导愈伤组织）
茎节（用于诱导芽）
五、实验方法与步骤
（一）器皿的洗涤
一般器皿
有培养物但未污染的器皿
有培养物且污染的器皿
（二）MS培养基的配制分装
1、MS培养基母液的配制
母液A-F，每组配制A-E 100ml、F 50ml
0.1%升汞的配制
75%酒精的配制
6-BA
NAA
2、MS培养基的配制
按每人配制100ml，分5小瓶。
过程如下；每组按1L配制，先取容器内加70%的蒸馏水；
加入蔗糖30g/L；量取母液A-F；加入PGR（自己设计）；用容量瓶定容；用0.1-1N NAOH或HCl调整pH5.6-5.8；每人分100ml；加琼脂粉8g/L；分装到5个小三角瓶中、封口。
（三）培养基和物品的高压灭菌
培养基、无菌水（每组至少5瓶）、空瓶（每组至少2个）、烧杯（每组至少1个）、培养皿（每组至少一套）、接种工具（2套），包好或者分好以备高压灭菌。
高压锅的使用。
（四）实验室的消毒灭菌
75%的酒精擦拭超净工作台内表面，新洁尔灭水进行超净工作台外表面、培养架表面、墙壁及其他房间表面的擦拭。
（五）植物材料的取材及流水冲洗
选取适宜的彩云阁茎节及茎段，切割成适宜大小后放在流水下冲洗。
（六）无菌操作
演示。
（七）材料的培养观察
接种完的材料放在培养室的培养架上进行培养。
培养初期每天观察一次，持续1周。
之后每2-3天观察一次。
统计指标：
污染率（%）= （污染的外植体个数／接种外植体的总数）×100%。
愈伤组织诱导率（%）= （长愈伤外植体个数／接种外植体总数）×100%。
芽诱导率（%）= （长芽外植体个数／接种外植体的总数）×100%。
（八）结果与分析
植物细胞工程综合大实验（二）
——继代、最佳PGR种类和浓度配比
一、实验目的与要求
确定外植体最佳消毒时间、掌握初次继代方法、茎段诱导愈伤组织和茎节诱导芽阶段PGR种类与浓度配比的筛选
二、实验原理
植物细胞的全能性。
三、仪器设备与器具
电子天平、移液枪、冰箱、高压锅、超净工作台、三角瓶、烧杯、容量瓶、培养皿、搪瓷缸、镊子、解剖刀、酒精灯、试剂瓶、玻璃棒、线绳、pH试纸、封口膜、试管刷、洗涤剂、打火机等。
四、实验材料
彩云阁茎段（用于诱导愈伤组织）茎节（用于诱导芽）
五、实验方法与步骤
（一）器皿的洗涤
（二）MS培养基的配制分装
1、彩云阁茎段诱导愈伤组织的培养基
每人配制5瓶，PGR种类和浓度配比自己设计。
2、彩云阁茎节诱导芽的培养基
每人配制5瓶，PGR种类和浓度配比自己设计。
3、继代培养基
每人配制1瓶，PGR种类和浓度配比自己选择确定。
（三）培养基和物品的高压灭菌
请自己准备。
（四）实验室的消毒灭菌
（五）植物材料的取材及流水冲洗
（六）无菌操作
自己确定材料的消毒灭菌时间。
（七）材料的培养观察
每种处理，统计指标：
污染率（%）= （污染的种子个数／接种种子的总数）×100%。
愈伤组织诱导率（%）= （长愈伤组织个数／接种茎段外植体总数）×100%。
芽诱导率（%）= （长芽外植体个数／接种茎节外植体的总数）×100%。
（八）结果与分析。