食源性阪崎肠杆菌病诊断要点
食品微生物之检验方法-阪崎肠杆菌之检验
附件食品微生物之檢驗方法－阪崎腸桿菌之檢驗1 適用範圍〆本方法適用於一般食品及奶粉中阪崎腸桿菌之檢驗。
2 檢驗方法〆2.1 工作環境〆工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。
每15分鐘落菌數不得超過15 CFU／培養皿。
2.2 器具及材料〆2.2.1 乾熱滅菌器。
2.2.2 高壓滅菌釜。
2.2.3 攪拌均質器（Blender）或鐵胃（Stomacher）〆適用於無菌操作者。
2.2.4 天平〆可稱量到2000 g者，靈敏度為0.1 g々可稱量到120 g者，靈敏度為1 mg。
2.2.5 冰箱〆能維持5 ±3℃者。
2.2.6 吸管或吸管尖〆已滅菌，1 mL吸管應有0.01 mL之刻度々5 mL及10 mL吸管應有0.1 mL之刻度。
2.2.7 吸管輔助器（Pipette aid）或微量分注器。
2.2.8 稀釋瓶〆160 mL，玻璃、聚乙烯（polyethylene）、鐵弗龍（Teflon）或其他能耐121℃濕熱滅菌20分鐘以上之塑膠材質，附螺旋蓋。
2.2.9 培養皿〆已滅菌，內徑約9 cm，深度約15 mm，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮傷或其他缺點。
2.2.10 增菌用容器〆附螺旋蓋之125 mL、250 mL、2 L三角錐瓶或廣口瓶々玻璃、聚乙烯、鐵弗龍或其他能耐121℃濕熱滅菌20分鐘以上之塑膠材質。
2.2.11 pH測定儀。
2.2.12 培養箱〆能維持內部溫度在±1℃以內者。
2.2.13 溫度計〆量測溫度範圍1～55℃，最小刻度0.1℃。
2.2.14 水浴〆加蓋，具水流循環系統，能維持水溫溫差在±0.2℃以內者。
2.2.15 接種針及接種環（直徑約3 mm）〆鎳鉻合金、鉑銥或鉻線材質，或可拋棄式者。
2.2.16 曲玻棒〆可滅菌者，直徑3～4 mm，塗抹區域45～55 mm。
2.2.17 試管〆10 ×100 mm，13 ×100 mm，13 ×120 mm，15 ×150 mm，16 ×150 mm試管，或其他適用者。
阪崎肠杆菌检验技术
生态分类
一、阪崎肠杆菌概况
阪崎肠杆菌属肠杆菌科，是人和动物肠道中寄生的一种革 兰阴性无芽胞杆菌。是肠道正常菌群的一种，在一定条件 下可引起人和动物致病。1980年以前命名为黄色阴沟肠 杆菌，1980年更名为阪崎肠杆菌。
一、阪崎肠杆菌概况
生态分布 家庭、温泉、鼠、苍蝇、植物根围、沉积物，沼泽地、土壤、食品等均有检出阪 崎肠杆菌的报导。有报导推测，昆虫可能是阪崎肠杆菌的环境宿主。 婴儿配方粉的污染： 内在污染：--由加工环境中微生物的存在；加工装置内表面微生物的存在；热处理 后，与干燥基粉混合的加入成分中存在的微生物造成。 外源性污染：--受阪崎肠杆菌污染的配方粉或调制好的配方奶在较高温度下存放， 食用前不加热，或加热不彻底，喂食时间较长等都可导致阪崎肠杆菌有机会生长繁 殖，增加患病的危险性。
三、阪崎肠杆菌菌定量检测
1g(mL)×3
取样量 10g(mL)×3
100g(mL)×3
BPW 1：10 稀释
mLST-Vm
DFI、TSA
生化鉴定
报告 （MPN值）
操作规程
前增菌 选择性增菌 显色培养基 验证试验 结果报告
三、阪崎肠杆菌菌定量检测
各100ml（g)
各10ml（g)
各900ml（g) 各移1ml
900 ml BPW
样品
100mL（g） 溶解 预热
44℃
36±1℃ 18h±2h
选择性增菌 44±0.5℃
24h±2h
10mL mLST-Vm肉汤
挑取蓝绿色菌落
操作规程 API20E鉴定系统
二、阪崎肠杆菌菌定性检测
TSA平板上直接挑取黄色菌 落进行鉴定
结果鉴定
二、阪崎肠杆菌菌定性检测
婴幼儿健康的“敌人”食品中阪崎肠杆菌的检测方法
婴幼儿健康的“敌人”-食品中阪崎肠杆菌的检测方法阪崎肠杆菌阪崎肠杆菌是广泛存在于环境中的一种微生物，可以感染婴幼儿并对他们的健康造成严重威胁，阪崎肠杆菌耐热、耐干燥、对渗透压有较强的忍耐力，可长时间生存在干燥的环境中。
阪崎肠杆菌最喜欢袭击1岁以下的婴儿，如果你在冲调、存放奶粉时操作不当，它就可以趁虚而入，婴儿的胃酸PH值比成人高，可以存活在他们的肠道中，并且婴儿血脑屏障未发育完全，阪崎肠杆菌可以轻易进入他们的脑部引发脑膜炎，由阪崎肠杆菌引起的新生儿脑膜炎、菌血症等严重疾病，死亡率高达20-50％。
世界卫生组织建议，您应当使用不低于70℃的热水冲调婴儿配方奶粉，并在2小时内尽快喂哺，如果需要预先冲调，冲调后应快速冷却并且存放在不超过5℃的冰箱内，还要在冲调后24小时内饮用，喂哺前必须重新加热，那些早产、体重低或免疫力低的高风险婴儿，可以使用商业无菌的液态婴儿配方奶，你记住了吗？食品中阪崎肠杆菌的检测方法1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下：1.1 恒温培养箱：25℃±1℃，36℃±1℃，44℃±0.5℃1.2 冰箱：2℃-5℃1.3恒温水浴箱：44℃±0.5℃1.4天平：感量0.1g1.5 均质器1.6 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）1.7 无菌锥形瓶：容量100mL、250mL、2 000mL1.8 无菌培养皿：直径90mm1.9 pH计或精密pH试纸2 培养基和试剂2.1 缓冲蛋白胨水2.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素2.3 阪崎肠杆菌显色培养基2.4 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）2.5 API 20E生化鉴定试剂盒2.6 氧化酶试剂3 操作步骤3.1 前增菌和增菌取样前，应消毒检样包装的开启处。
以无菌操作，称取检样100g（mL）加至预热到44℃装有900mL灭菌缓冲蛋白胨水的2 000mL锥形瓶中，缓缓振摇使样品充分溶解，36℃±1℃培养18h±2h。
卫生部办公厅关于印发《婴幼儿阪崎肠杆菌感染诊疗指南》和《婴幼儿阪崎肠杆菌感染宣教要点》的通知
卫生部办公厅关于印发《婴幼儿阪崎肠杆菌感染诊疗指南》和《婴幼儿阪崎肠杆菌感染宣教要点》的通知文章属性•【制定机关】卫生部(已撤销)•【公布日期】2008.09.30•【文号】卫发明电[2008]130号•【施行日期】2008.09.30•【效力等级】部门规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】妇幼健康正文卫生部办公厅关于印发《婴幼儿阪崎肠杆菌感染诊疗指南》和《婴幼儿阪崎肠杆菌感染宣教要点》的通知（卫发明电[2008]130号）各省、自治区、直辖市卫生厅局，新疆生产建设兵团卫生局：为做好婴幼儿阪崎肠杆菌感染的诊疗工作，保证婴幼儿身体健康，我部会同中华医学会组织制定了《婴幼儿阪崎肠杆菌感染诊疗指南》和《婴幼儿阪崎肠杆菌感染宣教要点》。
现印发你们，供你们对医务人员进行相关培训和医疗机构参考使用。
附件：1.婴幼儿阪崎肠杆菌感染诊疗指南2.婴幼儿阪崎肠杆菌感染宣教要点卫生部办公厅二〇〇八年九月三十日附件1婴幼儿阪崎肠杆菌感染诊疗指南一、病原学和流行病学阪崎肠杆菌（Bntorobater sakazakii）属肠杆菌科肠杆菌属，革兰染色阴性杆菌。
阪崎肠杆菌在自然界分布广泛，繁殖迅速，但不耐热，可通过巴斯德消毒法杀灭。
阪崎肠杆菌属条件致病菌，在一般情况下，不对人体健康产生危害，但对于免疫力低下者和婴幼儿、新生儿，尤其是早产儿、低体重儿可以致病。
感染来源主要是受阪崎肠杆菌污染的奶粉，人与人之间无传染性。
二、临床表现多数患儿临床症状轻微且不典型，易被忽略。
严重者可引起坏死性小肠结肠炎、败血症、脑膜炎等。
（一）全身症状：发热，新生儿可表现为体温不升、精神萎靡、拒乳、黄疸加重，面色发灰、皮肤发花甚至出现休克。
（二）消化系统症状：可有呕吐、腹胀、腹泻、粘液血便，肠鸣音减弱甚至消失，严重时可发生肠穿孔和腹膜炎。
（三）神经系统症状：烦躁、哭声尖直、嗜睡甚至昏迷，可出现凝视、惊厥，查体可有头围增大、颅缝裂开、前囟张力增高、脑膜刺激征阳性。
阪崎肠杆菌检测标准
阪崎肠杆菌检测标准1. 引言阪崎肠杆菌（Hafnia alvei）是一种革兰氏阴性菌，属于肠杆菌科。
它在自然环境中广泛存在，也可以在人和动物的消化道内找到。
阪崎肠杆菌可以对人类和动物造成感染，引起各种疾病，如泌尿系统感染、呼吸道感染和胃肠道感染等。
为确保食品和饮用水的安全，阪崎肠杆菌的检测标准十分重要。
2. 检测方法2.1 阪崎肠杆菌的培养方法阪崎肠杆菌可以在一般细菌培养基上生长，常用的培养基包括MacConkey琼脂培养基和Eosin Methylene Blue（EMB）琼脂培养基。
培养时一般在37°C下孵育24-48小时。
2.2 阪崎肠杆菌的生化检测阪崎肠杆菌可以通过一系列的生化反应进行检测和鉴定。
常用的生化试验包括氧化/发酵葡萄糖试验（O/F试验）和酮糖酸盐（Voges-Proskauer）试验等。
2.3 阪崎肠杆菌的PCR检测PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学方法，可以快速、准确地检测阪崎肠杆菌。
通过特定的引物在PCR反应中扩增阪崎肠杆菌的DNA片段，然后通过凝胶电泳进行检测和鉴定。
3. 检测标准3.1 食品中阪崎肠杆菌的检测标准根据国家食品安全标准，食品中阪崎肠杆菌的检测标准如下： - 生肉制品：阪崎肠杆菌在每克样品中不得超过10 CFU； - 加工食品：阪崎肠杆菌在每克样品中不得超过100 CFU； - 饮用水：阪崎肠杆菌在每100毫升样品中不得检出。
3.2 环境中阪崎肠杆菌的检测标准根据环境保护标准，阪崎肠杆菌的检测标准如下： - 水质：阪崎肠杆菌在每升水样中不得超过100 CFU； - 空气：阪崎肠杆菌在每立方米空气中不得超过100 CFU； - 土壤：阪崎肠杆菌在每克土壤样品中不得超过1000 CFU。
4. 检测流程4.1 样品采集从食品、饮用水或环境样品中采集足够数量的样品。
使用无菌容器收集，并确保样品处于最佳的保存条件。
4.2 样品处理将采集的样品经过适当的处理，在无菌条件下进行前处理，如制备悬浮液或稀释样品。
7-阪崎肠杆菌检验
链中由于食品消费引起致病菌感染的可能性;确定
食物链环节中可以采取的能够降低疾病风险的各 种 管理措施,并对各种措施的效果进行评估
风险评估
联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO) 于2006 年 公布了婴儿配方粉( PIF) 阪崎肠杆菌定量风险评估 模型。
我国对阪崎肠杆菌的风险性评估滞后于国标的执行， 目前还没有相关的风险评估标准模型出台。
简 介
美国食品和药品管理局(FDA)的检测方法是国际检 测阪崎肠杆菌的标准生化方法。此外，还有依据 该菌生理生化特征的鉴定方法和PCR法检测及荧 光PCR等分子检测方法。
2008年11月国家标准出台前，我国只有行业标准。
简 介
2005-5-20中国检验检疫科学研究院和天津出入境 检验检疫局牵头完成《奶粉中阪崎肠杆菌检测方 法》行业标准。 该标准建立了阪崎肠杆菌改进的传统检测方法(经 典方法)、普通PCR方法和荧光PCR方法(快速筛选 方法)，其中改进的传统方法与FDA方法比较，检 测结果一致，但效率大大提高，时间缩短1/3～ 1/2。
无菌锥形瓶100ml\200ml\2000ml
90mm直径无菌培养皿 PH计或精密PH试纸 VITEK全自动微生物鉴定系统（可选用其 他等效设备代替)
培养基和试剂
缓冲蛋白胨水BPW（略）
改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素 mLST-Vm
成分和配制方法见附录A.2，加入万古霉 素目的是抑制革兰阳性细菌等杂菌的生长 注意：新鲜配制的mLST-Vm应该24h内使用， 万古霉素溶液可在4 ℃保存15d
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婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌的快速检测
婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌的快速检测李莉; 陈泽辉【期刊名称】《《中国卫生标准管理》》【年(卷),期】2019(010)018【总页数】4页(P4-7)【关键词】阪崎克罗诺杆菌; Lamp; 婴儿配方奶粉; 快速检测; 特异性; 灵敏度【作者】李莉; 陈泽辉【作者单位】厦门市疾病预防控制中心业务质量管理科福建厦门361021; 厦门市疾病预防控制中心检验科福建厦门361021【正文语种】中文【中图分类】R155阪崎克罗诺杆菌，又称阪崎肠杆菌，多寄生于人和动物的肠道中，为食源性致病菌，多来源于婴幼儿食品。
阪崎克罗诺杆菌有鞭毛，兼性厌氧，属于革兰氏阴性无芽孢杆菌[1]。
婴幼儿感染后容易造成新生儿脑膜炎、坏死性结肠炎和败血症等，对尚未发育完全的神经系统造成影响，严重者可导致死亡[2]。
近年来，阪崎克罗诺杆菌感染的发生率呈上升趋势，因而快速检测阪崎肠杆菌，并制定相应的防控方案在公共卫生领域十分重要[3]。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验用菌株本研究用到的菌株见表1。
1.1.2 样品与试剂本研究检测采用的样品婴幼儿奶粉，来源于厦门市各超市。
万古霉素试剂：北京陆桥技术股份有限公司。
阪崎肠杆菌核酸快速检测试剂盒：广东环凯微生物科技有限公司。
1.2 主要仪器设备BSC-1500IIA2-X型生物安全柜：济南鑫贝西生物技术有限公司；GNP-9160型、GNP-9080型隔水式恒温培养箱：上海精宏实验设备有限公司；HV-25型高压灭菌器：日本平山制作所株式会社；Pico7500 2415型台式高速离心机：厦门联仪通医疗设备有限公司；EPPENDDO-RF型恒温金属浴：厦门宝能科技有限公司；IKA MS3型漩涡混合仪：福州齐力特实验设备有限公司；BCD-218S DA型海尔冰箱：青岛海尔股份有限公司。
1.3 方法1.3.1 传统分离鉴定应用GB 4789.40-2010方法，取100 mg样品，加到高压灭菌过的，44℃的装有900 mL缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，混匀。
长春阪崎肠杆菌科鉴定流程
长春阪崎肠杆菌科鉴定流程
阪崎肠杆菌属于肠杆菌科中的一种常见细菌，其主要存在于人和动物的肠道中。
该细菌可引起多种疾病，如腹泻、肺炎、败血症等。
因此，在医学诊断和食品安全监管方面，对阪崎肠杆菌的鉴定十分重要。
下面是长春阪崎肠杆菌科鉴定的流程：
1.搜集样本
对于可能污染阪崎肠杆菌的样品，如肉类、蔬菜、水果、动物粪便等，进行采集，并妥善保存。
2.培养
将样品进行培养，常用的培养基为MacConkey培养基或兰伯特培养基。
在37摄氏度下，进行18-24小时的培养，以使菌落生长到足
够数量。
3.鉴定
（1）形态特征：观察菌落的形态，如颜色、形状、大小等，再
观察细菌的形态、大小和运动性等。
（2）生化特性：采用一系列生化试验，如氧化酶试验、卡氏试验、甲烷酸盐发酵试验等，以区分阪崎肠杆菌和其他肠杆菌。
（3）免疫学鉴定：采用免疫学方法，如酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光抗体法等，检测阪崎肠杆菌的抗原。
以上是长春阪崎肠杆菌科鉴定的流程。
在鉴定过程中，需要严格控制卫生条件，避免交叉污染。
鉴定结果的准确性将影响到后续的治
疗和防控措施。
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食源性阪崎肠杆菌病诊断要点
1 流行病学特点
1.1 发病季节：无季节性，全年均可发生。
1.2 发病原因：经口食入被阪崎肠杆菌污染的食物而导致的食源性疾病。
婴儿配方中极微量的阪崎肠杆菌污染就有可能导致感染的发生。
受阪崎肠杆菌污染的调制配方在较高温度下存放，食用前不加热，或加热不彻底，喂食时间较长等都可导致阪崎肠杆菌有机会生长繁殖，增加患病的危险性。
1.3 致病食品：主要为婴儿配方粉。
另外，配方粉冲调、放置和喂食过程中不卫生的调制器皿和环境、配方粉冲调过程中添加的其他成分（如淀粉或糖）或食用其他食物也可能成为一种其他类型的污染源。
1.4 易感人群：阪崎肠杆菌可引起各年龄段的感染，但高危人群主要是婴儿（0～12 月龄）和新生儿（0d～28 d），尤其是早产儿、低出生体重或免疫力低下的婴儿，发生严重感染的危险性最高。
2 临床表现
2.1 潜伏期：不明确。
2.2 主要症状：感染主要引起婴儿脑膜炎、败血症和坏死性小肠结肠炎。
2.2.1 脑膜炎：早期症状主要是吮奶无力或不吃奶，体温不稳（多数病儿有发热，少数全身发凉，体温不升），呼吸窘迫，黄疸，呼吸暂停，中枢神经系统体征［如嗜睡，惊厥（特别是局灶性），呕吐，激惹］更特异性地提示脑膜炎。
25%的病例有囟门的隆起或饱满，仅15%的病例有颈项强直，也可发现颅神经异常（特别是涉及第3，6，
7 对颅神经)。
该菌引起的脑膜炎常引起脑梗塞、脑脓肿、囊肿形成和脑室炎等并发症，并且可引起严重神经系统后遗症，包括脑水肿、四肢瘫痪和发育障碍等。
2.2.2 败血症：早期体征通常是非典型的和轻微的。
自发性活动减少，吸吮无力，呼吸暂停，心动过缓和体温不稳（过高或过低）最常见。
其他症状和体征包括呼吸窘迫，神经系统症状（如惊厥和烦躁不安），黄疸，呕吐，腹泻和腹胀。
2.2.3 坏死性小肠结肠炎：婴儿可表现为腹胀的肠梗阻，胃胆汁性残留(在喂养后)可逐渐发生呕吐胆汁，或肉眼或镜下血便，败血症可表现为嗜睡，体温不稳，呼吸暂停发作的增多和代谢性酸中毒。
3 实验室检验
3.1 从可疑食品中检出阪崎肠杆菌。
3.2 从患者呕吐物、粪便/肛拭、血液、脑脊液等生物标本中检出阪崎肠杆菌。
3.3 对从可疑中毒食品和患者生物标本的阪崎肠杆菌分离株进行分子分型，获得相同的指纹图谱。
3.4 按 GB 4789.40 进行检验。
4 诊断
4.1 符合流行病学特点与临床表现，由可疑食物中检出与患者生物标本相同指纹图谱的阪崎肠杆菌，可确诊。
4.2 符合流行病学特点与临床表现，如无可疑食物，但从 2 个或 2 个以上患者生物标本中分离到相同指纹图谱的阪崎肠杆菌，可确诊。
4.3 其他情况，按照 GB 14938.1 执行。