S0024-总一氧化氮检测试剂盒
人一氧化氮NO酶联免疫分析试剂盒使用方法
人一氧化氮(NO)酶联免疫分析试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：48T6μmol/L -200μmol/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮(NO)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮(NO)水平。
用纯化的人一氧化氮(NO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO)，再与HRP 标记的一氧化氮(NO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的一氧化氮(NO)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人一氧化氮(NO)浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（400μmol/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
200μmol/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液100μmol/L 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液50μmol/L 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液25μmol/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液12.5μmol/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
一氧化氮(Nitric oxide ,NO)含量测定试剂盒说明书
货号：QS1804 规格：50管/24样一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量测定试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：NO（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中，特别是神经组织中较丰富。
它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。
测定原理：NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2—，在酸性条件下，NO2—与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。
为了排除样品色素等的影响，每个样品需做对照管。
自备实验用品及仪器：天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体12mL×1瓶，4℃避光保存。
样品处理：1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。
10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。
3.体液和培养液等其它液态样品：直接测定。
NO含量计算：标准曲线回归方程为：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 99861、组织样品：NO含量定义：25℃时，每克样品或每毫克蛋白15min生成1μmoL NO2—，相当于1μmoL NO。
Elabscience 一氧化氮（NO）比色法测试盒说明书
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®一氧化氮（NO）比色法测试盒Nitric Oxide (NO) Colorimetric Assay Kit产品货号：E-BC-K035-S产品规格：50 assays(48 samples)/100 assays(96 samples)检测仪器：紫外-可见光分光光度计（550 nm）使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
用途本试剂盒适用于检测血清、血浆、及动植物组织样本中的NO含量。
检测原理NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2-，与显色剂生成淡红色偶氮化合物（如下图），生成偶氮化合物的浓度与NO的浓度具有线性关系，通过比色可以间接计算NO的浓度。
试剂一和试剂二的作用，为除去样本有色物质的干扰。
本试剂盒检测组织样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用本公司BCA试剂盒(货号E-BC-K318-M)进行测定。
提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品仪器：紫外-可见光分光光度计（550nm）、涡旋混匀仪、磁力搅拌器、分析天平、微量移液器（1000 μL，200 μL，100 μL，10 μL）、离心机、烧杯（50 mL，25 mL）。
耗材：枪头（1000 μL，200 μL，10 μL）、EP管（5 mL，2 mL）、吸水纸、擦镜纸、磁力搅拌子。
试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl）或PBS（0.01 M，pH 7.4）。
试剂准备①试剂盒中的试剂平衡至室温。
②试剂四工作液：将试剂四加入37.5 mL双蒸水溶解，混匀即可，2-8℃避光保存2个月。
一氧化氮检测试剂盒(化学法)
一氧化氮检测试剂盒（化学法）说明书修订日期：2016.06.22 Cat number：KGT008Store at4℃for for6months,避光For Research Use Only（科研专用）一、实验原理一氧化氮NO(即血管内皮舒张因子)，在生物体内作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。
NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测知NO浓度。
NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。
二、试剂盒组份组份KGT008（100assays）保存条件Buffer A100mL4℃Buffer B50mL室温或4℃试剂C粉剂一支4℃避光试剂D粉剂一支4℃避光Buffer E12mL室温亚硝酸钠标准液（2mmol/L）1mL4℃注意事项1．试剂C工作液配制：用时加入双蒸水至30mL，4℃避光保存。
（难溶，可以60℃隔水加热至溶解）2．试剂D工作液配制：用时加入双蒸水至12mL，4℃避光保存。
3．显色剂配制：试剂C工作液︰试剂D工作液︰Buffer E＝2.5︰1︰1的体积比配制（现配现用），配好的显色剂放冰箱保存，如颜色变得很深则不可再用。
4.亚硝酸钠标准液（20umol/L）配制：将亚硝酸钠标准液（2mmol/L）用双蒸水100倍稀释待用，现用现配。
三、操作步骤1．操作方法：于一次性塑料试管中按下表加入试剂试剂空白管标准管测定管双蒸水（mL）a﹡20μmoL/L亚硝酸钠标准液（mL）a﹡样本（mL）a﹡Buffer A（mL）0.80.80.8Buffer B（mL）0.40.40.4混匀后室温放置10分钟，3500～4000转/分，离心10分钟，取澄清的上清液上清液（mL）0.80.80.8显色剂（mL）0.40.40.4混匀,15分钟后,550nm比色，0.5cm光径比色杯，水调零，测各管OD值注意事项a﹡为取样量=标准品量=蒸馏水量)/()/20()mol/gprot (L gprot L mol OD OD OD OD NO 待测样本蛋白浓度标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量÷⨯-=μμ样品测试前稀释倍数标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量⨯⨯-=)/20()mol/L (L mol OD OD OD OD NO μμ四、计算1．计算公式血清：组织：2．计算举例(1)兔血清测定管OD 值为0.018，空白管OD 值为0.004，标准管OD 值为0.024。
碧云天生物技术一氧化氮检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号一氧化氮检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0021S 一氧化氮检测试剂盒 500次 S0021M一氧化氮检测试剂盒2500次产品简介：碧云天生产的一氧化氮检测试剂盒采用了经典的Griess Reagent ，并对其测定的溶液体系进行了优化，使检测下限达到1µM ，在1-100µM 范围内有非常完美的线性关系。
检测速度极快，完成一条标准曲线或5-10个样品的测定只需3分钟。
样品范围广，可以检测细胞或组织及其培养液中的一氧化氮的含量，酚红和10%血清均对测定无明显干扰，也可以检测血清、血浆和尿液中一氧化氮的含量。
包装清单：产品编号 产品名称 包装 S0021S-1 1M NaNO 2 1ml S0021S-2 Griess Reagent I 25ml S0021S-3 Griess Reagent II25ml —说明书1份产品编号 产品名称 包装 S0021M-1 1M NaNO 2 1ml S0021M-2 Griess Reagent I 125ml S0021M-3Griess Reagent II125ml —说明书1份保存条件：-20ºC 避光保存，一年有效。
4ºC 避光保存，半年有效。
注意事项：本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
如保存不当导致溶液变色或沉淀，则说明该溶液已经失效，请购买新的试剂盒。
不建议使用RIPA 裂解液对细胞或者组织进行裂解，使用RIPA 裂解液可能在后续反应中产生沉淀，影响测试。
推荐使用碧云天的细胞与组织裂解液(一氧化氮检测用)(S3090)或Western 及IP 细胞裂解液(P0013)。
碧云天一氧化氮合成酶检测试剂盒
一氧化氮合成酶检测试剂盒产品编号产品名称包装S0025 一氧化氮合成酶检测试剂盒 100次产品简介：¾一氧化氮合成酶检测试剂盒(Nitric Oxide Synthase Assay Kit)可以检测活细胞内总的一氧化氮合成酶的活性。
如果和特异性的一氧化氮合成酶抑制剂配合使用，也可以检测不同类型的一氧化氮合成酶的活性。
¾本试剂盒提供了一种在生理条件下通过荧光检测活细胞内一氧化氮合成酶活性的方法，不需要使用传统方法所需的放射性同位素。
本试剂盒采用了可以穿透细胞膜的最新一代一氧化氮荧光检测探针DAF-FM DA (3-amino,4-aminomethyl-2’,7’-difluorescein, diacetate)，在提供充足的底物的条件下检测细胞内的一氧化氮合成酶可以催化产生的一氧化氮量，从而检测出一氧化氮合成酶的活性。
详细的检测原理参考图1。
采用一些一氧化氮合成酶的抑制剂则可以测定出特定类型的一氧化氮合成酶的活性。
例如，采用iNOS抑制剂，未加iNOS抑制剂测定出来的酶活力减去加了iNOS抑制剂测定出来的酶活力就是iNOS的酶活力。
图1. 一氧化氮合成酶检测试剂盒原理图¾本试剂盒是目前为止世界上最先进的一种一氧化氮合成酶检测试剂盒。
和Calbiochem等多年前就开始提供的一氧化氮合成酶检测试剂盒相比无需使用同位素，和Sigma等最近推出的基于荧光的一氧化氮合成酶检测试剂盒相比采用了最新一代的荧光探针，灵敏度更高，特异性更好。
本试剂盒的缺点是和其它荧光法一氧化氮合成酶检测试剂盒一样，仅能提供一氧化氮合成酶的相对活性。
¾本试剂盒和检测细胞内一氧化氮水平的不同之处在于提供了充足的底物L-Arginine和一些可以穿透细胞膜的反应辅助因子，确保一氧化氮合成酶的催化的一氧化氮合成不会受底物的量或辅助因子的量的限制，从而可以测定出细胞内一氧化氮合成酶活力。
¾本试剂盒最适合用于贴壁的细胞或组织的一氧化氮合成酶的检测，对悬浮细胞也可以进行检测。
人一氧化氮NOELISA试剂盒使用方法
人一氧化氮(NO)ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：48T6μmol/L -200μmol/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮(NO)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮(NO)水平。
用纯化的人一氧化氮(NO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO)，再与HRP 标记的一氧化氮(NO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的一氧化氮(NO)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人一氧化氮(NO)浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
碧云天-总一氧化氮检测试剂盒说明书
总一氧化氮检测试剂盒产品简介：总一氧化氮检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸盐还原酶(Nitrate reductase)还原硝酸盐(nitrate)为亚硝酸盐(nitrite)，然后通过经典的Griess reagent检测亚硝酸盐，从而测定出总一氧化氮。
一氧化氮本身极不稳定，在细胞内很快代谢为硝酸盐(Nitrate)和亚硝酸盐(Nitrite)，通过上述方法检测出硝酸盐和亚硝酸盐的总量，就可以推算出总的一氧化氮的量。
本试剂盒采用了NADPH依赖性硝酸盐还原酶(NADPH dependent nitrate reductase)。
高浓度的NADPH会干扰后续的检测，消除NADPH的一种常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。
本试剂盒采用了LDH清除NADPH的方法，使检测结果更加准确。
对亚硝酸盐的检测下限达到2微摩尔/升，在2-80微摩尔/升的范围内有很好的线性关系。
浓度过高的样品可以适当稀释后再进行检测。
样品范围广，可以检测细胞裂解液、组织裂解液、细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中一氧化氮的含量。
酚红和10%血清对测定无明显干扰。
样品需要量少。
根据样品中一氧化氮的浓度不同，仅需0-60微升样品。
检测速度快，仅需约80分钟即可完成检测。
本试剂盒采用了间接的一氧化氮检测方法，如需检测细胞内实际的一氧化氮水平，可以采用碧云天生产的DAF-FM DA (NO荧光探针)(S0019)。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
NADPH，Nitrate Reductase，NaNO2 (1M)，Griess Reagent I 和Griess Reagent II需避光保存。
NADPH配制成溶液后必须分装并-70℃保存。
注意事项：RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。
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总一氧化氮检测试剂盒
产品名称 总一氧化氮检测试剂盒
包装 200次
产品简介：
总一氧化氮检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸盐还原酶(Nitrate reductase)还原 硝酸盐(nitrate)为亚硝酸盐(nitrite)，然后通过经典的Griess reagent检测亚硝酸盐，从而测定出总一氧化氮。一氧化氮本身 极不稳定，在细胞内很快代谢为硝酸盐(Nitrate)和亚硝酸盐(Nitrite)，通过上述方法检测出所有的硝酸盐和亚硝酸盐的量， 就可以推算出总的一氧化氮的量。
50微升
50微升
50微升
混匀后，室温(20-30℃)孵育10分钟后测定A540
注意事项： a. 反应必须避光进行。如果使用96孔板进行检测，可以使用铝箔纸包裹96孔板进行避光。 b. 样品的用量上限为60微升，血清、血浆或组织匀浆液通常使用40微升就已经足够。样品不足60微升时，不同样品之
间的体积最好能保持一致，体积不足的部分用样品稀释液补足。标准品可以参考上表直接使用60微升。 c. 可以同时设置加入200微升水或PBS的2-3个孔为阴性对照，这2-3个孔仅仅加入水或PBS，不再加入任何其他试剂。 d. 第一部分37℃孵育15分钟，或室温(20-30℃)孵育40分钟后，直接参考上表依次加入LDH Buffer和LDH，并进行后续
(NO荧光探针)(S0019)。
包装清单：
产品编号 S0024-1 S0024-2 S0024-3 S0024-4 S0024-5 S0024-6 S0024-7 S0024-8 S0024-9
—
产品名称 样品稀释液
NADPH FAD
Nitrate Reductase LDH Buffer LDH
KNO2 (10mM) Griess Reagent I Griess Reagent II
对亚硝酸盐的检测下限达到2微摩尔/升，在2-50微摩尔/升的范围内有很好的线性关系。浓度过高的样品可以适当稀释后 再进行检测。
样品范围广，可以检测细胞、组织、细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中一氧化氮的含量。酚红和10%血清对 测定无明显干扰。
样品需要量少。根据样品中一氧化氮的浓度不同，仅需0-60微升样品。 检测速度快，仅需约45分钟即可完成检测。 本试剂盒采用了间接的一氧化氮检测方法，如需检测细胞内实际的一氧化氮水平，可以采用碧云天生产的DAF-FM DA
在使用RPMI 1640培养液时会发生这种情况。因为RPMI 1640培养液中含有高浓度的硝酸盐从而会使空白对照和样品检测 出来的吸光度都非常高。其他含有高浓度硝酸盐的试剂也会产生类似情况，影响氧化还原反应的试剂也可能产生类似干扰。使
用过程中避免使用RPMI 1640等可能导致干扰检测的试剂即可。
注意事项：
RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。必需使用RPMI 1640培养液 时，在检测一氧化氮前必需先换成其他适当培养液例如DMEM、MEM、F12等，或换成HBSS或PBS等。
检测反应必须避光进行。 由于检测过程中有还原反应，凡是影响还原反应的氧化或还原试剂要注意避免，例如常用的还原剂DTT和巯基乙醇。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
c. Nitrate reductase在临用前取出，试剂盒中的其余各种试剂在溶解后保存在冰浴上。Griess Reagent I和Griess Reagent II
在使用前需达到室温。
d. 首次使用时把Nitrate Reductase和LDH分别适当分装，暂时不使用的可以-20℃冻存，最好能-70℃冻存。反复冻融会导
是：(1) 加大样品和标准品的使用量至60微升，其余试剂用量不变。(2) 把整个检测体系每种试剂的用量加大50%，这样可以使 检测灵敏度增加约50%。如果上述方法还不能解决问题，可以考虑浓缩样品，即一方面在收集样品的时候尽量使一氧化氮的浓 度保持得较高(例如裂解细胞时采用较小体积的裂解液)，另一方面可以考虑用真空干燥或真空冷冻干燥的方法浓缩样品。对于 培养的细胞，通常上清液测定出来的吸光度相对较低，而细胞裂解液测定出来的吸光度会稍高一些。 2． 检测时发现空白对照和每个样品的吸光度都非常高。
孵育。 e. 第二部分37℃孵育5分钟，或室温(20-30℃)孵育20分钟后，直接参考上表依次加入Griess Reagent I和Griess Reagent
II。加入Griess Reagent I后需要轻轻混匀。 f. 每次混匀后，可以1000-3000g离心数秒，把液体沉淀到管底。 g. 检测时，如无540nm滤光片，520-560nm的滤光片也可以使用。如无酶标仪或合适的滤光片，也可以通过目测比色或
4. Ling Y, Ye X, Ji H, Zhang Y, Lai Y, Peng S, Tian J. Synthesis and evaluation of nitric oxide-releasing derivatives of farnesylthiosalicylic acid as anti-tumor agents. Bioorg Med Chem. 2010 ;18(10):3448-56. Epub 2010 Apr 3.
本试剂盒采用了NADPH依赖性硝酸盐还原酶(NADPH depedent nitrate reductase)。高浓度的NADPH会干扰后续的检测，消 除NADPH的一种常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。本试剂盒采用了LDH清除NADPH的方法， 使检测结果更加准确。
数码相机拍照后在适当图形软件中进行定量分析，并确定样品中一氧化氮的浓度。目测比色或拍照比色时标准品需 要更为精细的浓度梯度。 5. 根据标准品曲线计算出样品中一氧化氮的浓度。
常见问题：
1． 检测结果标准曲线良好，但样品的吸光度很低，和空白对照接近。 标准曲线良好说明检测方法和检测试剂盒基本上没有问题，样品吸光度低说明样品中一氧化氮含量很低。可以采取的办法
标准品。
3. 试剂的准备：
a. 加约1ml蒸馏水或MilliQ级纯水至5mg NADPH中，颠倒混匀溶解后，再用蒸馏水或MilliQ级纯水定容至3ml，配制成
2mM NADPH，除立即使用的部分外，其余NADPH溶液必须立即分装后-70℃冻存。
b. FAD已经配制在Nitrate Reductase检测缓冲液中。FAD可以适当分装后-20℃或-70℃保存。
使用本产品的文献：
1. Wang M, Zhao XR, Wang P, Li L, Dai Y, Huang H, Lei P, Zhu HF, Shen GX. Glucose regulated proteins 78 protects insulinoma cells (NIT-1) from death induced by streptozotocin, cytokines or cytotoxic T lymphocytes. Int J Biochem Cell Biol. 2007;39(11):2076-82. Epub 2007 Jun 8.
使用说明：
1. 样品处理： 含有高浓度蛋白的样品例如血清、含有高浓度血清的细胞培养液，在加入Griess Reagent I后可能会产生沉淀。可以取50微 升样品，加入50微升Greiss Reagent I进行测试，观察是否产生沉淀。如果产生沉淀，则可以把样品沸水浴加热5分钟，以 变性蛋白，然后12,000g离心5分钟，取上清用于后续的测定。对于细胞或组织样品可以用碧云天生产的RIPA裂解液
5. Zhang XP, Xiong JY, Jiao YX, Wang G, Zuo ZY. Involvement of mitochondrial ATP-sensitive potassium channels in etomidate preconditioning-induced protection in human myeloid HL-60 cells. Environmental Toxicology and Pharmacology. 29 (2010) 320–322.
说明书
包装 15ml 5mg 1.1ml X2 1ml 1.1ml X2 1ml X2 1ml 12ml 12ml 1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。NADPH，Nitrate Reductase，Griess Reagent I 和Griess Reagent II需避光保存。NADPH配制成溶液 后必须分装并-70℃保存。
5微升
5微升
5微升
混匀后，37℃孵育15分钟，或室温(20-30℃)孵育40分钟
LDH Buffer
10微升
10微升
10微升
LDH
10微升，37℃孵育5分钟，或室温(20-30℃)孵育20分钟
Griess Reagent I
50微升
50微升
50微升
Griess Reagent II
致Nitrate Reductase和LDH酶活力的逐渐下降。
4. 参考下表依次加入标准品、样品和检测试剂并进行相应检测：
空白对照
标准品
样品
标准品
－
60微升
－
样品
－
－
x微升
样品稀释液
60微升
－
(60-x) 微升
NADPH (2mM)
5微升
5微升
5微升
FAD
10微升
10微升
10微升
Nitrate Reductase
(弱)(P0013D)或Western及IP细胞裂解液(P0013)进行裂解。对于尿液样品，通常需要用水稀释10-50倍后检测。不宜使用肝