血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤
血型鉴定与交叉配血
根据红细胞膜上有无A抗原或B抗原， 将血型分为A型、B型、AB型及O型四 种。通常利用红细胞凝集试验，通过 正定型和反定型鉴定ABO血型。
正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测 定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原； 反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血 清中有无相应的抗A或抗B。
血型抗原
抗B A型RBC B型RBC O型RBC
-
-+
+
-
结果 O
+
--
+
-
A
-
++
--B来自++-
-
-
AB
Rh血型鉴定
一、试剂 1、IgM抗-D试剂血清 2、待检红细胞悬液
二、操作 1、取12×75mm干净小试管1支 2、滴入IgM抗-D试剂血清1~2滴 3、滴入红细胞悬液 4、混匀后3400转/分离心15秒 5、轻轻摇动试管，观察结果 6、凝集为阳性，不凝集为阴性
红细胞血型抗原： 已确定的有29个系统、200多种抗原
其中必查血型抗原： ABO抗原和RhD抗原
血型抗体
常见的血型抗体分子大多属于IgM或IgG两类
*五类免疫球蛋白具有相似的单体结构 *两条轻链(L链)和两条重链(H链)组成的四肽 链 (H2L2)---单体结构
1、 IgG 抗体
分子较小，通常以单体形式存在。多经妊娠 或输血后免疫产生。在盐水介质中只能致敏相应 抗原的红细胞，而不能使之凝集，所以又称为不 完全抗体。必须通过特定的方法（如抗人球蛋白） 使致敏红细胞发生凝集。
2. 各加LIM溶液0.7m1 ，混合均匀后，再各加 Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟。
3．普通离心机1000g离心15秒，然后把上清液 倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
稀有血型、不规则抗体阳性、及配血不相合等及时报告程序
稀有血型、不规则抗体阳性、及配血不相
合等及时报告程序
为确保临床用血的安全和合理性，本文制定了稀有血型、不规则抗体阳性及配血不相符等情况的报告程序。
在进行交叉配血实验时，输血科人员应按照操作规程认真完成实验，并由另一人进行复核后签字发出血液。
如果发现稀有血型的输血需求，输血科应立即通知用血临床科室，并在血液储备不足的情况下暂停手术。
同时，输血科人员应上报输血科主任，与市中心血站联系，确保血液的供应。
对于紧急的稀有血型输血，输血科人员应立即上报输血科主任，输血科主任应与血站联系，确保急症抢救用血并上报医务科。
对于不规则抗体阳性及配血不相合等情况，输血科人员应重新做不规则抗体及交叉配合实验并复查血型，必要时更换试剂，重做试验。
如果仍然不相符，应上报输血科主任，输血科主任应上报医务科和主管院长。
临床血型复查、不规则抗体筛查、交叉配血实验等红细胞输注前检验要点
临床血型复查、不规则抗体筛查、交叉配血实验等红细胞输注前检验要点临床治疗当中，输血治疗属于移植细胞治疗，红细胞作为运输氧气的重要载体，是治疗或者辅助治疗的重要手段，但不适当的血液制品的输注将造成不良后果，严重者可以危及生命，因此应该按照相关程序对受血者和供血者的血液进行准确的输血前血型血清学检查才能保证受血者的输血安全。
血型复查红细胞上的抗原纷繁复杂，但是具有重大临床意义的，也是现在临床上运用的是ABO 血型系统和Rh 血型系统，通常所有住院患者在一开始会常规查一个血型定性，就包括ABO 系统和Rh 系统。
大型医院一般微柱凝胶法，而在输血前也需要再进行血型复查，包括正定型（用抗-A 及抗-B 的试剂与被检测血细胞反应，检测红细胞表面是否存在A 抗原B 抗原），和反定型（用标准A 细胞和B 细胞与被检血清反应，检测血清中是否含有抗体），此时复查多采用试管法或者玻璃法，由于ABO 系统的天然抗体多属于IgM 型抗体，属于温抗体，盐水介质下就可以看见凝集，一般不需要离心即可看出结果，当受血者的抗体较弱时可以离心观察，临床上反定型防止假阴性均采用盐水介质法离心后观察。
不规则抗体筛查受血者有输血史、妊娠史或者短期内需要大量输血时应按规定进行不规则抗体的筛查和鉴定，以便及时发现有临床意义的不规则抗体从而避免输血反应的发生，不规则抗体指除了抗-A 和抗-B 抗体以外的抗体，分为自身抗体和同种异体抗体。
自身抗体是指受血者体内产生的抗体，针对自身红细胞的抗原，这种抗体不仅可以和自身红细胞反应还可以和大多数红细胞反应，而同种异体抗体是指多次输血或者妊娠刺激机体产生的针对同种异基因的红细胞的抗体。
不规则抗体按照抗体的类型可以分为IgM 和IgG 类，根据次分类可以选择不同的筛选方法，主要有盐水介质法、聚凝胺法、抗球蛋白实验，以及微柱凝胶法等。
交叉配血实验在完成前个试验后，复查收到的受血者血样的ABO、Rh 血型以及不规则抗体筛查实验，进行最后一步，交叉配血实验，主要是检查受血者血清中有无破坏供者的红细胞的抗体，使受血者和供血者的血液间没有可测的不相配合的抗原、抗体成分，实验包括以下几项：1、主侧配血：受血者的血清和供血者的血细胞反应，检测受血者体内是否存在针对供者红细胞的抗体。
血型及交叉合血操作规程
血型及交叉合血操作规程一、引言作为医疗机构中常见的操作流程之一，血型及交叉合血是确保输血安全的重要环节。
本文将介绍血型和交叉配血的基本概念、操作步骤以及注意事项，以提供规范的操作指南。
二、血型的基本概念血型是指个体红细胞膜上存在的抗原和抗体的组合情况，分为A、B、AB和O四种类型。
在血型鉴定中，需要使用抗A和抗B两种血清对被测血液进行试验，从而确定其血型类型。
此外，还需要测试被测血液中是否存在抗D抗体，以判断其Rh阴性或Rh阳性。
三、交叉配血的基本概念交叉配血是在输血前进行的一项重要试验，旨在检测受血者的血清中是否存在与供血者红细胞的抗体相对应的抗原，以避免输血反应的发生。
具体操作如下：1. 取受血者的血清和供血者的红细胞，将它们分别置于两个试管中。
2. 依次加入适量混合胶体试验红细胞悬液和抗人球蛋白试剂，轻轻振荡混合。
3. 观察反应是否出现凝集、增浊或溶解等现象。
4. 凝集或增浊反应表示交叉配血不合格，需停止输血操作；溶解反应则表示血型和抗体基本匹配，可以进行输血。
四、血型及交叉合血操作规程以下为血型及交叉合血操作的具体步骤，操作人员应根据实际情况进行：1. 准备工作a. 确认受血者的基本信息，包括姓名、住院号、血型等。
b. 根据受血者血型，选择相应的供血者。
c. 根据病情和输血需求，估计所需输血量。
d. 消毒操作台面和操作器具。
2. 操作步骤a. 将受血者的血液样本采集到干燥无菌试管中，标明受血者信息。
b. 将受血者的样本送至血库，进行血型鉴定。
c. 根据受血者的血型和抗体情况，在血库选择适当的供血者。
d. 从血库获取供血者的血液样本。
e. 将供血者样本标记并送至血型试验室进行交叉试验。
f. 根据交叉试验结果判断是否合适进行输血操作。
g. 如满足输血条件，按照医嘱进行输血操作。
五、注意事项1. 操作人员应进行严格的洗手和穿戴手套等防护措施，以防交叉感染。
2. 每一步操作都需要仔细核对患者信息，确保输血操作正确。
实验7ABO血型鉴定及交叉配血实验_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物 生命科学)
实验七ABO血型鉴定及交叉配血实验一、实验目的通过鉴定实验和配血实验来学习、掌握人类ABO血型的原理和方法。
二、实验原理血型是特指血细胞膜表面抗原的类型。
ABO血型系统是一类常用的血液分型体系。
在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。
A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象。
血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A 或/和B抗原。
在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型(表7-1)。
统不同，人群中Rh血型的不匹配非常罕见，尤其在黄种人中，Rh(+)型占到99.7%,而Rh(-)型还不到0.3%。
所以在医疗输血中，通常只考虑献血者和输血者之间ABO血型是否匹配。
ABO血型在人群中的分布，存在着地理环境及民族、种族的差异，在我国汉族人群中，各血型的比例由多到少依次是O(34.11%)﹥ B(28.98%)﹥A(28.29%)﹥AB(8.69%)。
交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合，观察有无凝集现象。
输血时，主要考虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集，其次才考虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。
前者叫交叉配血的主侧，后者称为交叉配血的次侧。
只有主侧和次侧均无凝集，称为“配血相合”。
如果主侧凝集，称为“配血不合”或“配血禁忌”，绝对不能输血；如果主侧不凝集，而次侧凝集，可以认为“基本相合”，但输血要特别谨慎，不宜过快过多，密切注视有无输血反应。
三、实验材料人外周血四、实验器材与试剂(一)器材采血针、尖头滴管、载玻片、1.5ml Eppendorf管、75%酒精棉球、消毒干棉球和记号笔。
(二)仪器显微镜、离心机。
(三)试剂标准A血清、标准B血清、生理盐水、碘酒。
五、实验操作（一）ABO血型鉴定1．用记号笔在载玻片两端分别作好标记A、B。
血型鉴定、交叉配血、不规则抗体筛查标本的采集
血型鉴定、交叉配血、不规则抗体筛查标本的采集1患者准备及原始标本识别1.1患者血液采集前，应避免跑步、骑自行车、爬楼梯等剧烈的运动，要求患者休息 15 分钟后进行采血。
冬季采血时应保持血液循环通畅；1.2.静脉血标本由临床医护人员采集，遵照医嘱准备好标本采集前所用的容器以及消毒器材、一次性注射器、标本条形码、检验申请单或输血申请单等备用。
首先确认患者姓名、住院号和血型，并将带有姓名、住院号、床位、检测项目的标本条形码贴于标本采血真空试管上；1.3.采血前应向患者作适当解释，以消除疑虑和恐惧。
如遇患者采血后发生晕厥，可让患者平卧，通常休息片刻即可恢复。
必要时可嗅芳香氨酊，针刺或指掐人中、合谷等穴位； 1.4.认真核对医嘱及患者信息，严格执行查对制度，询问患者姓名而不是询问你是 XX;. 采血前必须询问病人或病人家属，核对腕带，对受检者的身份信息进行确认，采血完成后必须再次核对病人与标本的条码信息是否一致。
1.5.标本条形码上的条形码是原始标本惟一标识。
1.6 非急诊输血时，ABO、RHD 血型鉴定和交叉配血标本不允许同一时间采集完成。
2 临床医生的指导2.1.临床医生必须对患者讲清楚血型鉴定、交叉配血检测的目的、采血时间(住院患者应在早晨卧床时取血；其他人员应最好在空腹时采血，急诊除外)及相关注意事项；2.2.临床医生应向患者讲清楚采集血液标本前，使用青霉素、非那西丁、氨基比林、磺胺、甲基多巴、肝素、右旋糖苷等药物可能会影响检验结果；临床医生确认患者近期使用上述药物，应在申请单中注明或直接通知检验科工作人员，以利于实验结果的正确判断。
3申请单的填写、处理及保存3.1.临床医生在开具输血申请单时，应采用计算机程序进行申请，填写完整，包括患者姓名、性别、年龄、申请科室、病人住院号、申请日期、标本类型、申请目的等。
输血申请单还需要填写患者输血前检测项目结果，包括 ABO 及RhD 血型、血红蛋白含量、白细胞计数、血小板计数、凝血酶原时间、凝血酶时间、部分活化凝血酶原时间、ALT、HBsAg 抗-HCV、抗HIV、梅毒实验结果；急诊申请输血时可写待定。
不规则抗体检测操作规程14-22
红细胞不规则抗体检测操作规程1．0 目的规范红细胞血型抗体筛选、鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。
2．0 适用范围适用于输血科（血库）抗体筛选血标本、疑难血型标本及疑难配血标本。
3．0 材料抗球蛋白试剂、筛选细胞、患者血标本、生理盐水、小试管、滴管。
4．0 设备普通离心机、血型血清专用离心机、电热恒温水浴箱、显微镜。
5．0 抗体筛选操作步骤5．1 取试管3支，分别标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，各加入患者血清2滴，再分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞2滴。
5．2 混匀，37℃孵育1h。
5．3 1300g离心15s。
5．4 轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。
若肉眼不见凝集，以显微镜检查。
5．5 对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤3次。
5．6 最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。
5．7 按试剂说明书加最适释度抗球蛋白试剂1滴，充分混合。
5．8 1300g离心15s。
轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。
6．0 抗体鉴定步骤6．1 抗体筛选阳性，应作抗体鉴定试验以确定其特异性。
6．2 依据谱细胞数量的多少（一般由8～16个单人份的已知血型表型的O型红细胞组成）取相应数目的试管，分别标记序号，各加入患者血清2滴，再分别加入谱细胞2滴。
6．3 混匀，37℃孵育1h。
6．4 1300g离心15s。
6．5 轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。
若肉眼不见凝集，以显微镜检查。
6．6 对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤3次。
6．7 最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。
6．8 按试剂说明书加最适稀释度抗球蛋白试剂1滴，充分混合。
6．9 1300g离心15s。
轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。
7．0 注意事项7．1 按《临床输血技术规范》第十七条要求，必须对交叉配血不合时，对有输血史、妊娠史或短期内接受多次输血者进行抗体筛选试验。
7．2 抗体筛选有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，并可在配血前有足够的时间来选择缺乏相应抗原的相配合的血液，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者不能及时输血。
血型鉴定、交叉配血操作规程
⾎型鉴定、交叉配⾎操作规程ABO、Rh-D⾎型鉴定操作规程1.⽬的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集：静脉采⾎2ml抗凝⾎,避免溶⾎试剂3. 试剂：长春博讯⽣物技术有限责任公司4.⽅法原理【原理】:标准⾎清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表⾯相应的抗原在盐⽔介质中发⽣特异性的凝集反应。
根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。
5. 操作:⼀、玻⽚法(⼀般只能做正定型)【正定型】:1、取⼀张玻⽚,⽤蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每⼀等份左上⾓标明A、B、D,2、对应加⼊抗A和抗B抗D标准⾎清⼀滴;3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);4、⽤洁净⽵签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2⼤⼩;5、轻轻地连续倾斜转动玻⽚2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型⾎;B端凝集为B型⾎;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,⽆凝集则为RH阴性。
备注:玻⽚法可作为ABO⾎型初筛或复检;不适⽤于抗体鉴定和交叉配⾎;不适合检测ABO亚型。
⼆、试管法(盐⽔介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者⾎清(⾎浆)中相应的抗体发⽣特异性结合,形成⾁眼可见的凝集反应,从⽽可推断出受检者的⾎型。
【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可⾃⾏新鲜配制);2、受试者⾎清或⾎清;3、洁净康⽒试管。
【正定型】:1、取⼆⽀洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加⼊抗A和抗B⾎清1滴;3、分别加⼊病⼈红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型⾎;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型⾎;抗A管凝集则为A型⾎;抗B管凝集则为B型⾎。
【反定型】:1、取⼆⽀试管分别记上AC和BC;2、分别加⼊病⼈⾎清;3、对应加⼊A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果;【解释】:⾸先检查上清液有⽆溶⾎,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型⾎;A、B管均不凝集则为AB型⾎;A管凝集则为B型⾎;B管凝集则为A型⾎。
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血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤
一.血型鉴定
1.排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型
试管、患者RhD定型试管。
2.标本准备分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者2%-5%红细胞悬
液。
3.加样
ABO正定型：1滴（50ul）抗A、抗B试剂加1滴（50ul）患者红细胞悬液。
ABO反定型：1滴（50ul）患者血清加1滴（50ul）反定型试剂红细胞。
RhD定型：1滴（50ul）抗D血清加1滴（50ul）患者红细胞悬液。
4. 结果判断
离心（2档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。
二.不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法）
1.排管标记01、02、03及自身对照管
2.加样各试管分别加入相应的患者血清2滴（100ul）及筛选细胞1滴（50ul）。
3.结果观察
离心（2档），观察结果
先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。
各试管分别加入低离子介质0.65ml，轻轻混匀（参照试剂说明书）
各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心
先观察上清液有无溶血
弃去上清液，留约0.1ml，轻轻混匀
肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）
各试管分别加入重悬液2滴（100ul），轻轻混匀
肉眼观察凝集是否在1min内消失
显微镜检查
三.交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法）
1.标本准备
分离供血者血浆与红细胞
三次洗涤，制备供血者2%-5%红细胞悬液
2.排管标记
排管，主侧、次侧及自身对照管
3.加样
各试管分别加入相应的备检血清2滴（100ul）及2%-5%备检红细胞悬液1滴（50ul）4. 结果观察
离心（2档），观察结果
先看上清液有无溶血
轻轻混匀，肉眼观察有无凝集
结果判断并记录
各试管分别加入低离子介质0.65ml，轻轻混匀（参照试剂说明书）
各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心
先观察上清液有无溶血
弃去上清液，留0.1ml，轻轻混匀
肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）
各试管分别加入重悬液2滴（100ul），轻轻混匀
肉眼观察凝集是否在1min内消失
肉眼观察阴性者，显微镜检查
记录交叉配血结果
A、B、O试验红细胞悬液的制备
1. 分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压紧红细胞配成不同浓度的红细胞悬液（见表格）
红细胞悬液的配置
悬液浓度（%）压实红细胞（滴）盐水（滴）
2 1 2.0ml（40）
5 1 0.8ml（16）
10 1 0.4ml（8）
20 1 0.2ml（4）
2. 为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个以上健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。