ABO血型鉴定与交叉配血
ABO血型鉴定及交叉配血
ABO血型鉴定12应用心理学(1) 余歌子2012326670018一、目的1.学习辨别血型的方法2.观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理二、原理ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。
存在A凝集原的称为A 血型，存在B凝集原的称为B血型。
而血清中还存在凝集素。
当A凝集原与抗A 凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。
一般A 型标准血清中含有抗B凝集素，B型标准血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者红细胞反应，以确定其血型。
三、材料和方法1.材料：标准A血清，标准B血清，载玻片，采血针，竹签，75%酒精棉球，干棉球，尖头滴管，显微镜。
2.方法：（1）在载玻片上分别滴上标准A血清和标准B血清。
（2）用75%酒精棉球消毒无名指端，用采血针刺破指端，滴少量血与标准A血清和标准B血清混合，放置1～2 min后，能肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。
（3）根据凝集现象的有无判断血型四、观察项目ABO血型鉴定五、实验结果（1）血液滴在标准A、B血清中都没有发生凝结，为O型血（2）血液滴在标准A、B血清中都发生凝结，为AB型血（3）血液滴在标准A血清发生凝结、B血清中都没有发生凝结，为A型血（4）血液滴在标准B血清发生凝结、A血清中都没有发生凝结，为B型血六、讨论及结论1.根据你自己的血型，说明你能接受何种血型的血液和输血给何种血型的人，为什么？答：O型血，可以接受O型血，可以输血给任何血型的人。
异性输血的原理：抗体稀释到一定程度时就不再凝聚抗原，就可以把有抗体血液经稀释输给有相映抗原的人。
2.在没有标准血清的条件下，如果只知1人为A型血，能否测知全班人血型，如何进行？答：可以，提取该同学的血液，制成红细胞悬液和血清，使其分别于其3.A型标准血清和B型标准血请中各自所含何种凝集素？答：标准A、B血清中分别含有抗A、B凝集素。
4.试根据父母的血型，写出后代的可能血型：。
血型鉴定及交叉配血 ppt课件
二、ABO血型鉴定：
正定型 判定结果：
试管法：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC浮起， 观察有无凝集或溶血，
如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为 凝集（＋）；
如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮 起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；
若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。
注意：若上层为清亮的樱红色，考虑是否溶血
二、ABO血型鉴定：
二、反定型： 原理：用标准红细胞检测被检血清（血浆）,在盐
水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检血 清（血浆）中有无与标准红细胞相对应的抗体， 进一步判定血型。
二、ABO血型鉴定：
二、反定型 方法： 1、试管法：
-A
-B
加待测血清2滴
加标准红细 胞悬液1滴
混匀，离心 1000r/min 观察结果（方法同正定型） 1min
二、ABO血型鉴定：
抗A
抗B
结果
结果判定：
＋
—
A
—
＋
B
正定型
＋
＋
AB
—
—
O
反定型
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
A(RBC) B(RBC) 结果
＋
—
B
—
＋
A
＋
＋
O
—
—
AB
二、ABO血型鉴定
凝集强度的判断见实验指导表格
室温条件下盐水介质中产生特异性反应，根据是否 出现凝集判断是否有D抗原的存在。
Rh（D）血型鉴定
加抗D血清1滴
加红细胞悬 液1滴（5%
）
轻轻摇动玻片混匀， 2min内判断结果， 有凝集（＋），无凝 集需按照说明书进一 步实验确认是否为阴 性
ABO血型鉴定和交叉配血实验
ABO血型鉴定和交叉配血实验[实验目的]观察红细胞凝集现象。
学习ABO血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。
[实验原理]ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。
存在A凝集原的称为A血型，存在B凝集原的称为B血型。
而血清中还存在凝集素。
当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B 凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。
一般A型标准血清中含有抗B凝集素，B型标准血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者红细胞反应，以确定其血型。
同种动物不同个体的红细胞凝集称为同族血细胞凝集作用。
不同动物的血液互相混合有时也可产生红细胞凝集，称为异族血细胞凝集作用。
对于动物的天然血型抗体了解不多，而且免疫效价也很低，所以同种动物第一次输血，一般不会引起严重后果。
但第二次输血就必须进行交配试验，才能决定是否能相互输血。
[实验对象]正常人。
[实验药品]A型B型标准血清。
[仪器器械]双凹玻片，采血针，竹签，75%酒精棉球，干棉球，玻璃蜡笔（记号笔），尖头滴管，显微镜。
[实验方法与步骤]1.ABO血型的鉴定：（1）取双凹玻片一块，在两端分别标上A和B，中央标记受试者的号码。
（2）在A端和B端的凹面中分别滴上相应标准血清少许。
图6.9-1 ABO血型鉴定示意图（3）75%酒精棉球消毒无名指端，用采血针刺破指端，用消毒后的尖头滴管吸取少量血（也可用红细胞悬浮液，见下述），分别与A端和B端凹面中的标准血清混合，放置1～2 min后，能肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。
（4）根据凝集现象的有无判断血型（图6.9-1）。
2.交叉配血实验：（1）分别对供血动物和受血动物消毒、静脉取血，制备成血清和红细胞悬浮液。
红细胞悬浮液是将受检者的血液一滴，加入装有生理盐水约1 ml的小试管中，即为2%的红细胞悬浮液。
加盖备用。
（2）取双凹玻片一块，在两端分别标上供血动物和受血动物的名称或代号，分别滴上它们的血清少许。
（3）将供血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴到受血者的血清中（称为主侧配血,图6.9-2）；将受血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴入供血者的血清中（称为次侧配血），混合。
血型鉴定与交叉配血
＋表示凝集，－表示无凝集
对抗血清的要求※
①高度特异，只能与相应的红细胞抗原发
生凝集，无非特异性凝集， ABO
血 抗B血清效价在1:64以上。 型 鉴 ③高亲和力，15秒内出现凝集，其强度 为3分钟时凝块>1mm2。 定
②高效价，抗A血清效价在1:128以上，
④无冷凝集素。
⑤无菌。分离血清后56℃，30min灭活。
型 （2）立即水平离心1000r/min, 10min. 鉴 定 （3）观察及判断血型结果①阳性：对照管细胞沉
淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中。 ②阴性：对照管和检测管细胞沉淀均在管底。 ③试验失败：对照管细胞在胶上或 胶中，应重新做试验。
（4）报告方式：同生理盐水法。
注意事项
ABO 血 型 鉴 定
【注意事项】
交 1.如果对患者的输血史或妊辰史不明， 叉 必须使用48h内的标本。 配 血 2.不能使用溶血标本。
（ 盐 水 凝 集 法 ）
3.配血后，受血者/供血者的全部标本 须于2～6℃冰箱保存7d以备复查。
交 叉 配 血
（ 盐 水 凝 集 法 ）
【方法学评价】
本法简易、经济、快速，缺点是
仅用于检查ABO血型系统的IgM 血型抗体是否相配，不能检出不 相配的IgG血型抗体。
（ 盐 水 凝 集 法 ）
查找原因。
②异型配血时，主侧无凝集无溶血，次侧
有凝集无溶血，可以输少量血；如主侧、
次侧均不凝集或主侧凝集，不能输血，
需查找原因
交 叉 （1）受血者xxx（X型）血清＋供血者xxx 配 （X型）红细胞 凝集与否及强弱程度 血 （ （2）供血者xxx（X型）血清＋受血者xxx
交叉配血试验的注意事项
ABO血型鉴定及交叉配血
血型基因位于第9对染色体上， 基因名为ABO，由A、B和O三个 等位基因控制遗传。
基因特性
ABO血 型系统
ABO血型系统中A和B基因是显性基 因，O基因是隐性基因。
各基因编码产物
O基因编码产物无酶活性
各基因编码产物
B基因编码半乳糖转移酶
各基因编码产物
A基因编码N-乙酰半乳糖胺 转移酶
根据红细胞膜上所具有的抗原，将血型分为四个血型
（一）排除人为因素或操作失误(第一步) 复检ABO血型:
1)重新采集血样:分抗凝血和不抗凝血的2管, 排除血样采错、静脉输液处采样和血样 不规范等因素。 2)核对试剂、器材：核对试剂效期, 仔细阅读试剂说明书, 特别是操作规程和注意事 项;核对离心机转速、时间、离心力, 以及其它器材有无污染, 排除试剂、器材, 特别是 离心力不标准的干扰。
受检者血清（浆）与标准红细 胞（反定型）
抗-A + +
抗-B + +
Ac
Bc
Oc
-
+
-
+
-
-
+
+
-
-
-
-
受检者血型
A B O AB
思考题？
ABO反定型鉴定
1.ABO反定型中试剂为什么会有O型细胞？
如果在反定型试验中，受检者的血清（血浆）与O型红细胞试剂产生阳性反应，则需要添加自 身对照试验。如果自身对照试验为阳性，表明是自身冷凝集素导致。如果自身对照试验为阴性， 则表明被检者血清（血浆）中可能存在ABO系统以外的其他系统的抗体干扰定型。 2.只做ABO反定型，结果出来后能否直接报告血型？
1 A型
红细胞膜上只具有A抗 原
血型鉴定和交叉配血技术的进展
血型鉴定和交叉配血技术的进展1. 背景血型是人类体内各种物质组成的一种表现形式。
血型鉴定是指通过检测人类的血液，确定其属于哪种血型群体。
血型主要分为ABO血型和Rh血型两类，其中ABO血型分为A、B、AB、O四种，Rh血型分为Rh阳性和Rh阴性两种。
目前，血型鉴定在多个领域中得到了广泛应用。
医学领域方面，血型鉴定是用于临床输血、器官移植、产前妊娠检测以及疾病诊断等方面的一项重要技术。
在犯罪侦查领域，血型鉴定也是重要的鉴定手段之一。
在这些应用领域中，交叉配血技术也是必不可少的。
交叉配血是指在输血前进行的一项检测，旨在避免不同血型之间的抗原-抗体反应而引起的输血反应。
2. 血型鉴定技术的进展随着科技的进步，血型鉴定技术不断得到改进。
以下是一些血型鉴定技术的进展。
2.1 DNA血型鉴定技术传统的血型鉴定是通过红细胞凝集试验和抗体荧光染色法进行的。
不过，这些方法的准确性和可靠性还有待提高。
随着分子遗传学的发展，利用DNA进行血型鉴定的方法被开发出来。
通过PCR扩增样本中特定基因的DNA片段，以及DNA 序列比对等分子生物学方法，可以对血型进行更精准、更快速地检测。
2.2 微流控技术传统的红细胞凝集试验和抗体荧光染色法是半定量的方法，无法精确测量凝集度。
现在，微流控技术被应用于血型鉴定，通过对血液样本进行微型芯片操作，可以更加准确地测量血型凝集度。
2.3 免疫层析技术免疫层析技术是一种分析技术，可以用来检测血型抗原和抗体。
这种技术通过把抗原或抗体定位在纸质层析板上，并利用反应物加速碘的移动，从而以条形码形式显示结果。
这种技术可以在这些领域以外得到广泛应用，如食品检测、环境检测和生物体内分子检测。
3. 交叉配血技术的进展与血型鉴定技术一样，交叉配血技术也得到了不断的发展和改进。
以下是一些交叉配血技术的进展。
3.1 电脑模拟最初，交叉配血技术是通过实验室实际交叉配血之前的红细胞凝集结果来预测可能的问题。
但是，这种方法既费时又不一定能准确预测结果。
实验7ABO血型鉴定及交叉配血实验_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物 生命科学)
实验七ABO血型鉴定及交叉配血实验一、实验目的通过鉴定实验和配血实验来学习、掌握人类ABO血型的原理和方法。
二、实验原理血型是特指血细胞膜表面抗原的类型。
ABO血型系统是一类常用的血液分型体系。
在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。
A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象。
血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A 或/和B抗原。
在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型(表7-1)。
统不同，人群中Rh血型的不匹配非常罕见，尤其在黄种人中，Rh(+)型占到99.7%,而Rh(-)型还不到0.3%。
所以在医疗输血中，通常只考虑献血者和输血者之间ABO血型是否匹配。
ABO血型在人群中的分布，存在着地理环境及民族、种族的差异，在我国汉族人群中，各血型的比例由多到少依次是O(34.11%)﹥ B(28.98%)﹥A(28.29%)﹥AB(8.69%)。
交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合，观察有无凝集现象。
输血时，主要考虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集，其次才考虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。
前者叫交叉配血的主侧，后者称为交叉配血的次侧。
只有主侧和次侧均无凝集，称为“配血相合”。
如果主侧凝集，称为“配血不合”或“配血禁忌”，绝对不能输血；如果主侧不凝集，而次侧凝集，可以认为“基本相合”，但输血要特别谨慎，不宜过快过多，密切注视有无输血反应。
三、实验材料人外周血四、实验器材与试剂(一)器材采血针、尖头滴管、载玻片、1.5ml Eppendorf管、75%酒精棉球、消毒干棉球和记号笔。
(二)仪器显微镜、离心机。
(三)试剂标准A血清、标准B血清、生理盐水、碘酒。
五、实验操作（一）ABO血型鉴定1．用记号笔在载玻片两端分别作好标记A、B。
血型鉴定与交叉配血
结果
-
-+
+
-
O
+
--
+
-
A
-
++
-
-
B
+
+-
-
-
AB
Rh血型鉴定
一、试剂 1、IgM抗-D试剂血清 2、待检红细胞悬液
二、操作 1、取12×75mm干净小试管1支 2、滴入IgM抗-D试剂血清1~2滴 3、滴入红细胞悬液 4、混匀后3400转/分离心15秒 5、轻轻摇动试管，观察结果 6、凝集为阳性，不凝集为阴性
抗原抗体反应——在ABO血型系统中，红 细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗 体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗 体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象→ 从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B 抗原→判断血型。
实验原理
血型不相容的两人血液 混合,则红细胞可凝集成簇
含某种凝 集原的红 细胞
含相应凝
IgG structure
2、 IgM抗体
分子最大的一种Ig，多以五聚体形式存 在。在盐水介质中能直接连接相应的红细胞， 使之发生肉眼可见的凝集反应，因此又称为 完全抗体。
IgM structure
血型血清学检测的基本原理
Reaction of antibodies
（一）盐水介质法
ABO血型鉴定实验原理
+ 集素的血 清
红细胞凝集反应 (agglutination)
试剂
抗A、抗B试剂血清 5%的A型、B型红细胞悬液 受检者血清 5%的受检者红细胞悬液 取血一滴，加
入含1ml生理盐水的小试管内，混匀， 即得约5％红细胞悬液。
实验步骤
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ABO血型鉴定与交叉配血
ABO血型鉴定与交叉配血
血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。
在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A 和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。
A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象。
血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。
在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。
（见表4-3-1-1）
交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合，观察有无凝集现象（见图4-3-1-1）。
输血时，一般主要考虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集；其次才考虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。
前者叫交叉配血试验的主侧（也叫直接配血），后者叫交叉配血的次侧（也叫间接配血）。
只有主侧和次侧均无凝集，称为“配血相合”，才能进行输血；如果主侧凝集，称为“配血不合”或“配血禁忌”，绝对不能输血；如果主侧不凝集，而次侧凝集，可以认为“基本相合”，但输血要特别谨慎，不宜过快过多，密切注视有无输血反应。
本实验的目的是学习ABO血型鉴定的原理、方法以及交
叉配血方法。
1．仪器显微镜，离心机。
2．器械采血针，消毒注射器，双凹玻片，小试管，竹签，棉球，腊笔。
3．药品标准A血清，标准B血清，生理盐水，75％酒精，碘酒。
（一） ABO血型鉴定
1. 玻片法
（1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别
各滴入A及B标准血清一滴。
（2）细胞悬液制备从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。
采血时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。
（3）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相
接触。
（4）竹签两头分别混合，搅匀。
（5） 10～30min后观察结果。
如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。
先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细
胞聚集成团。
（6）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。
2. 试管法
（1）取试管2只，分别标明A，B字样，分别加入相应标准血清2滴，各管加入受试者的红
细胞悬液1~2滴摇匀。
（2）将上述二试管用1000转/分离心1min。
（3）取出小试管，轻弹底部，如沉淀物呈团块状浮起为凝集，呈散在烟雾状上浮进而恢复
原混悬状为无凝集。
（二）交叉配血
1. 玻片法
（1）用碘酒，75%酒精棉球消毒皮肤后，用消毒干燥注射器抽取受血者及供血者静脉血各2ml，各用一滴制备红细胞悬液，分别标明供血者与受血者。
余下血分别注入干净小试管，也标明供血者与受血者，待其凝固后析出血清备用。
（2）左两凹玻片左侧标上“主”（即主侧）；右侧标上“次”（即次侧）。
主侧滴入供血者红细胞悬液一滴和受血者血清一滴；次则滴入受血者红细胞悬液一滴和供血者血清一滴。
分别用竹签混匀。
（3） 15～30min后，观察结果。
如两侧均无凝集现象，可多量输血；如主侧无凝集而次侧有凝集只可考虑少量输血；如主侧凝集则不能输血。
2.试管法
取二试管，分别注明“主”、“次”字样，管内所加内容物同玻片法，混匀后1000rpm离心
1min，取出观察结果。
【注意事项】
1.所用双凹玻片的试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。
2.A及B标准血清绝对不能相混，所用滴管上贴橡皮膏标明A及B、红细胞悬液滴管头不能
接触标准血清液面，竹签一端去混匀一侧就不能去接触另一侧。