水产品中氯霉素残留检测方法(一)
水产品中氯霉素残留的ELISA检测法
周
昱
（ 门出入境检验检疫 局 厦
３１ １） ６ ０ ２
摘
要
本 文研究建 立 了水 产 品 中的氯霉 素 （ Ａ ）残 留 的酶联 免 疫 （ Ｌ Ｓ Ｃ Ｐ Ｅ ＩＡ）检测 方 法 。氯霉 素标 准在 ０ ０ ．５
ｎ ／ －４．５ｎ ／ ｇｍＬ－ ０ ｇｍＬ范 围内具有 良好 的线性 。方法 的检测限 、定量检 测限 、精密度 和 回收率 等技术 指标 符合 国外
本 文应 用 ＥＬ Ｓ 方 法 ，选 择 虾 、蟹 肉 和 鱼 肉 ＩＡ
等样 品为 研究 对 象 ，建 立 稳定 可靠 的检 测方 法 ，可 以对水 产 品 中氯 霉 素残 留进行 定 量检 测 。
２ 实 验 部 分
２ １ 仪 器和 试 剂 ．
１０ Ｌ 异 辛 烷／ 氯 甲 烷 （ ：３ 混 合 溶 液 ， ．ｍ － ２ ） １０ ．ｍＬ酶联 反 应 缓 冲溶 液 ，充 分 振 荡 混 匀 ，转 移
对氯霉 素残 留的最 大允许限 量 （ Ｌ ＭＲ ）要求 。本方法 适合于虾 、蟹 肉和鱼 肉等样 品的检测 。 关键词 氯霉素 酶联 免疫 水产 品。
１ 前 言
动 物源 产 品 中氯霉 素 残 留的检 测方 法 ，主要见 有 液 相 色谱 法 （ Ｃ），气 相 色 谱 法 （ Ｃ） Ｌ Ｇ ，酶 联 免疫 方法 （ ＩＡ） ＥＬＳ 和放 射 免疫 方 法 （ Ａ）。近 ＲＩ
以氯 霉 素 标 准 值 浓 度 的对 数 值 为 Ｙ 轴 ，测 得
２ ２ １ 乙腈 一水 提取 方法 ．．
的吸光值除 以 ０标准吸光值 的百分 比为 Ｘ轴 ，绘 制标准曲线 ，得到一个线性 回归方程 。图 １ 为一次 测 定 的氯 霉 素标 准 校 正 曲线 ：
水产品中氯霉素残留检测方法
水产品中氯霉素残留检测方法氯霉素（Chloramphenicol，简称CAP）是一种广谱抗菌药物，在水产品中的残留对人体健康具有潜在风险。
因此，准确快速地检测水产品中的氯霉素残留是非常重要的。
目前，常用的氯霉素残留检测方法包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、酶联免疫吸附测定法等。
高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的氯霉素残留检测方法之一、它利用色谱柱进行分离，通过比色法或荧光法进行检测。
具体步骤如下：首先，将待测样品进行提取，常用的提取剂包括乙腈、甲醇等。
然后，将提取液通过色谱柱进行分离，同时通过流动相的携带进行样品的洗脱。
最后，通过比色法或荧光法对洗脱液进行检测和定量。
HPLC方法具有准确、灵敏、高效的优点，但是需要较昂贵的设备和试剂，并且操作复杂，对操作人员的技术要求较高。
液相色谱-质谱法（LC-MS）是一种结合了液相色谱和质谱的分析技术，可以实现对氯霉素残留的准确定量和结构鉴定。
与HPLC相比，LC-MS具有更高的灵敏度和特异性。
它可以通过质谱仪对分离出的化合物进行分析，从而实现对氯霉素残留的快速检测。
然而，LC-MS方法需要昂贵的设备和试剂，并且需要经验丰富的操作人员进行操作。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种基于免疫学原理的检测方法，可以实现对氯霉素残留的高效筛查。
ELISA方法的原理是将待检样品与特异性抗体结合，然后通过酶标记二抗进行检测。
具体步骤如下：首先，将待测样品和抗体溶液进行孵育，使得残留的氯霉素与抗体结合。
然后，通过酶标记的二抗与结合的复合物发生反应，产生可观测的信号。
最后，通过比色法或发光法对信号进行检测和定量。
ELISA方法具有灵敏度高、操作简便、成本低等优点，但是其结果可能受到其他因素的干扰，需要进一步的确认。
综上所述，水产品中氯霉素残留的检测方法有高效液相色谱法、液相色谱-质谱法和酶联免疫吸附测定法。
这些方法各有优缺点，选择适合的检测方法需要根据实际情况进行评估和决策。
不同前处理方法对鱼肉中氯霉素残留检测研究
不同前处理方法对鱼肉中氯霉素残留检测研究氯霉素是一种广谱抗生素，在兽医学和医药学领域被广泛使用。
然而，氯霉素的滥用和残留可能对人类健康造成潜在威胁，因此对鱼肉中氯霉素残留的检测显得尤为重要。
为了提高检测的可靠性和准确性，研究人员采用了不同的前处理方法。
第一种前处理方法是酸性水提取。
这种方法通过将鱼肉样品与酸性水溶液混合，并在一定温度下搅拌一段时间，实现了氯霉素的分离和提取。
然后，使用离心机将混合溶液分离成液体和固体。
液体中可能存在的氯霉素残留可以通过进一步的浓缩和过滤步骤得到提纯，以便后续的分析和测定。
第二种前处理方法是溶剂萃取。
这种方法使用有机溶剂来提取鱼肉样品中的氯霉素。
首先，将鱼肉样品与有机溶剂混合，并在一定温度下搅拌一段时间。
然后，使用离心机将鱼肉样品和有机溶剂分离。
有机溶剂中可能存在的氯霉素残留可以通过进一步的浓缩和洗涤步骤得到提纯，以便后续的分析和测定。
第三种前处理方法是固相萃取。
这种方法利用固相萃取柱或固相萃取薄片将鱼肉样品中的氯霉素残留分离和富集。
首先，将鱼肉样品与固相萃取柱或固相萃取薄片接触，并在一定压力和温度下进行一段时间。
然后，通过移除萃取柱或薄片上的杂质和洗涤步骤，将氯霉素残留提纯。
最后，使用适当的溶剂将固相萃取柱或薄片中的氯霉素溶解，以便后续的分析和测定。
这三种前处理方法各有优缺点。
酸性水提取方法简单易行，适用于大批鱼肉样品的处理，但提取效果相对较差。
溶剂萃取方法提取效果较好，但需要使用有机溶剂，可能对环境造成污染。
固相萃取方法需要使用专门的仪器设备和较长的操作时间，但提取效果较好，并且可以实现自动化操作。
综上所述，不同的前处理方法可以对鱼肉中氯霉素残留进行有效的提取和检测。
研究人员可以根据实际需求和资源条件选择合适的前处理方法，以提高检测的可靠性和准确性，并最大程度地保护消费者的安全和健康。
利用酶联免疫法检测水产品中氯霉素残留的结果分析
利用酶联免疫法检测水产品中氯霉素残留的结果分析作者：刘万学来源：《黑龙江水产》 2015年第5期刘万学（黑龙江省水产技术推广总站黑龙江哈尔滨 150018）随着水产养殖业的快速发展，人们对水产品质量安全日益关注。
滥用抗生素、激素等药物防治水产动物疾病，导致水产品的质量下降，使用禁用渔药而导致水产品药物残留超标。
国家投入大量的人力物力对食品安全进行监督抽查，确保餐桌上的安全。
氯霉素就是水产品质量安全监督抽查中的重要一项抗生素。
氯霉素最初是由委内瑞拉链丝菌（Streptomyces Venezuela）的培养液中提取制得，是一种常用的广谱抗生素，曾在畜牧业中广为应用，治疗畜禽肠道感染有特效，至今已有50年的使用历史。
但氯霉素有较强的副作用和毒性作用，如果氯霉素在食用动物中残留，可通过食物链传给人类。
长期微量摄入氯霉素会引起多种疾病，氯霉素抑制骨髓造血功能造成过敏反应，对人体的造血系统危害很大，容易引起再生障碍性贫血。
此外该药还可引起肠道菌群失调及抑制抗体的形成，还会引起视神经炎、皮疹等不良反应，对人类的健康造成危害。
氯霉素已在国外较多国家禁用，是禁用抗生素。
世界上许多国家禁止此药用于生产食品动物，并规定了在畜产品中氯霉素不得检出。
中国农业部已将氯霉素从2000年版《中国兽药典》中删除并将其列为禁药。
而欧盟的进口食品卫生标准规定氯霉素含量标准为不得检出。
目前的氯霉素的检测方法是依据《水产品中氯霉素残留量的测定气相色谱法》使用气相色谱仪进行检测，其检测结果可靠，但是分析速度较慢。
因此，大都先使用酶联免疫法进行筛选，筛选结果为阳性的样品再使用气相色谱法进行确定。
酶联免疫法具有灵敏度高、特异性强、高通量、成本低等优点，因而适合于水产品中氯霉素日常检测。
但是在使用过程中，由于使用不同厂家的试剂盒和其精密度和灵敏度不同，而检测出的阳性结果比率不同，阳性结果过多，这样需要经过气相色谱法进行确定，最终确定为假阳性。
LC-MS-MS测定水产品中氯霉素药物残留
CE=20 V ,
主 要特征碎片 离子包括m/z 257.0 和152.0， 与
文献报道11 2相符。采用 MRM模式采集数据， 选择驻
留时间为200ms,优化得到二对Q1/Q3 320.9/257.0,
320.9/152.0 的去簇电压(DP)为一 相应碰撞能量 ( 30V， 分别为一 和一 选择的离子对数符合欧盟对兽药 18 25。
2.3 实验方法
氯霉素残留的检测方法大致可分为三大类: 第一类是生物测定法， 第二类是化学分析法， 第三类 是兼有生物和化学的酶联免疫检测法。筛选测定方 法有很多， 包括免疫法、 微生物受体法、 平板色谱法、 液相色谱一 紫外检测法和气相色谱一 电子捕获检测法
2.3.1 校准曲线绘制 精密称取 10mg 氯霉素标准 品 (纯度>99%,Sigma 公司)， 用甲醇定容至 100.0 ml,， 配成标准贮备溶液， 浓度为 100mg/L。吸取上述
45
脂后， 下层溶液经0.45} t,m水相滤膜过滤后， 供液质
联用分析。
添加水平
0 .1
0 .3
1 .0
平均回收率(%)
10 5
10 0
10 7
P SD(n=7)
4 .0
2.3.3 色 语条件 色谱柱 SUPELCO Discovery(r)
C,。 15cmx2.1m 柱， m,5fL m(i.d.); 流动相: 甲醇:水(40: (
M M 和同位素内标法定量方式测定水产品中氯 S- S 霉素药物残留方法， 讨论了流动相以及二级质谱的
碰撞能对氯霉素药物的质谱行为的影响。
酸乙 定容至刻度。 醋 混匀后取 10mL 乙酸乙 醋,459 C
减压旋转浓缩至干， 残留物用 l .O mL水溶液溶解， 加 人 2.O 正 己烷 涡 动混合 1min,4000rpm 离心 mL
水产品中氯霉素药物残留检测技术研究进展
。 张 颖
检 测 技 术研 究进 展
氯霉素作为一 种高效广谱抗 生素 ，
广泛应用于水产动物疾病 的防治 ，但残 留的氯霉 素药 物会 对人体 健康 造成 威
般采用正 己烷进行脱脂 ，氯化钠 去除蛋 白质 。氯霉 素净化常用小柱有 Ｃ １ ８柱 、
Ｓ Ｐ Ｅ柱 、纳 米纤 维 固相 萃 取 柱 、氧 化 铝
一
２ ０ 一
案致富指南 ２ ０ １ ３ — ２ ４
Ｉ 口圜
ｕ ｍ ｌ ｅ ｉ ｏ ｇ ｎ ａ ｔ ｈ ｉ Ｙ Ｌ 。通 过பைடு நூலகம்控 制 菌 体 起 始 发
ｌ
在 ０ ． ６ ｔ ｘ ｇ ／ ｋ ｇ的 添 加 水 平 下 ， 回收率可达
光强度 、 菌液 与氯霉素作用时间 ， 该 发光
２ ． ３ 色 谱 分 析 法
免疫分析法是依 据抗原抗体特异性 结合为基础的分析方 法。该方法将氯霉 素＿ 的二氯酰胺醇和硝 基苯结构及大分子 蛋 白质就结合后 均可作 为安全抗原有效 制备相应的抗体 。主要包 括酶联免疫法 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ ） 、 放射 性免疫法 （ Ｒ Ｉ Ａ） 、 固相 免疫 传感器 、 免疫胶体金法 、 化学发光酶免疫 法（ Ｃ Ｌ Ｅ Ｉ Ａ） 等 。 目前广泛使用 的是前两
菌 株 对 氯 霉 素 的 检 测 灵 敏 度 可 以 到
９ ０ ％～ １ ０ ８ ％， 重 复性好 ， 回收率高 。该方 法易受干扰 、 假阳性高 ， 因此适合大批量
的定 性 及 现 场 监控 。 ２ ． ２ ． ２放 射 免 疫 法 （ Ｒ Ｉ Ａ） ： 放 射 免 疫
０ ． １ ｎ ｇ ／ ｍＬ ， 鱼肉中添加氯霉素浓度为 ０ ． １ — １ ． ０ ｎ ｇ ， ｇ时， 回收率在 ４ ０ ． ３ ４ ％一 １ １ ４ ． ２ ６ ％ 之
气相色谱法测定水产品中氯霉素类药物残留量
气相色谱法测定水产品中氯霉素类药物残留量作者：陈树鹏黎素菊陈晓衔洪捷娴李锦雯来源：《农家科技下旬刊》2017年第08期摘要：氯霉素被广泛应用于水产动物病害的预防和治疗，造成动物性食品中的残留，对人类产生了严重的副作用。
本文介绍了水产品中氯霉素类药物残留量的气相色谱法。
结果表明：该方法的线性系数在0.99以上，检出限可达到0.01mg/kg。
方法灵敏度高，回收率及精密度均达到分析要求。
关键词：气相色谱法；氯霉素；优化；精密度氯霉素是一种广谱、高效的抗生素类药物，由于其效高价廉，曾在水产养殖业中得到了较为广泛的应用，同时也不可避免地带来了残留问题。
残留在水产品中氯霉素会对人体的造血等功能产生不良影响，甚至引起粒状白细胞缺乏、不可逆的再生障碍性贫血、新生儿的灰婴综合症等疾病。
因此，氯霉素残留问题需要引起高度的重视，国内外对水产品中氯霉素残留监控特别严格，而且允许残留量都非常低，一般在1μg/kg以下。
目前一般常用的氯霉素残留量的检测标准有气相色谱法（GC-ECD）、液相色谱法（HPLC-UV）、酶联免疫吸附试验法（ELISA）及气-质联用法（GC/MS）等。
基于此，本文建立了分析水产品中氯霉素类药物残留的气相色谱法，方法准确可靠、灵敏度高。
一、材料与方法1.材料（1）试验原材料。
鱼肉组织，市场销售。
（2）主要试剂与材料。
乙酸乙酯、正己烷、甲醇、乙腈（色谱纯）；氯霉素标准、衍生化试剂BSTFA；C18固相萃取柱。
（3）主要仪器。
气质联用仪；均质机；固相萃取装置；分析天平；氮吹仪；旋转蒸发仪。
2.标准溶液配制氯霉素标准溶液：配制100mg/L的标准储备液，保存于1～4℃冰箱中冷藏，使用时用甲醇稀释至相应浓度做标准工作曲线。
3.样品前处理（1）分离提取。
准确称取鱼肉（鱼糜状）（5±0.01）g于具塞离心管中，加入20mL乙酸乙酯，在组织匀浆机均质1min后，用15mL乙酸乙酯清洗刀头倒入离心管中，高速离心机10000r/min离心3min，将上清液倒入浓缩品中，浓缩近干，用甲醇-水（V：V=1：1）溶液5mL定容，待净化。
水产品中氯霉素残留检测方法
FOOD INDUSTRY ·127水产品中氯霉素残留检测方法 李梓建 广东省汕头市食品检验检测中心 广东省汕头市质量计量监督检测所氯霉素是一种广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。
近年来，在水产品养殖和运输过程中违规使用氯霉素的现象屡见不鲜，问题日益突出，严重威胁到了人民群众的健康。
本文简述了水产品中氯霉素残留的多种检测方法，包括色谱分析法、微生物法、免疫分析法以及生物传感器、生物芯片等新型检测技术，并对其优缺点进行了比较分析，以期为水产品中氯霉素残留检测提供参考。
最后本文还对氯霉素残留检测方法的发展趋势进行了展望。
氯霉素（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ，ｃｈｌｏｒｏｍｙｃｅｔｉｎ）是白色或无色的针状或片状结晶，由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素。
大卫·戈特利布于１９４７年从南美洲委内瑞拉的土壤内的委内瑞拉链霉菌成功分离，并于１９４９年合成并引入临床试验。
它属于抑菌性广谱抗生素，也是世界上首种完全由合成方法大量制造的广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。
但是，由于它对造血系统有严重不良反应，需要慎重使用。
检测方法分析的必要性水产品营养丰富，品种繁多且风味各异，深受老百姓的喜爱，需求量也是与日俱增，这在很大程度上促进了我国水产品养殖业规模的发展。
然而，伴随着发展而来的是越来越多的抗生素类药物被应用其中，由于部分养殖户和商家不遵守国家有关规定及未合理使用药物，造成抗生素在水产品中残留居高不下。
其中，氯霉素药物的违规使用更是屡见不鲜，甚至让水产品成为食品安全的重灾区之一。
由于氯霉素药物存在严重的毒副作用，能够抑制骨髓造血功能、引发再生障碍贫血、粒状白细缺乏症和新生儿、早产儿灰色综合症等，美国、欧盟、日本等很多国家都禁止其在动物源性食品中检出。
依据中华人民共和国农业部公告第２３５号中《动物性食品中兽药最高残留限量》（发布日期：２００２年１２月２４日）的规定，氯霉素为禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出。
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水产品中氯霉素残留检测方法（一）
1 范围本标准规定了水产品中残留量测定的制样和发射受体分析
(Charm II)办法。
本标准适用于水产品中氯霉素残留量的筛选测定。
2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后全部的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓舞按照本标准达成协议的各方讨论是否可用法这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682分析试验室用水规格和实验办法 3试样制备和保存 3.1试样的制备从所有样品中取出不少于500 g有代表性试样，用高速组织捣碎机捣碎匀称，将捣碎的样品充分混匀。
装入清洁的容器内，加封并做标识。
在制样的过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变幻。
用于测定的样品细菌数不能超过106/g。
3.2 试样保存将试样于-18℃以下冷冻保存。
4 测定办法
4.1 原理
测定的基础是竞争性受体免疫反应。
样品中的氯霉素残留经提取后，与[3H]标志的竞争细菌细胞中的氯霉素特异性受体，样品中的氯霉素药物含量越高，竞争结合的位点越多，[3H]标志的氯霉素结合的位点则越少。
在一定温度反应后，离心分别，清除未结合的[3H]标志的氯霉素，加闪耀液后用液体闪耀计数仪测定样品中的[3H]含量cpm值(count per minute，即每分钟脉冲数)。
cpm值越低，则样品中的氯霉素残留越高。
4.2 试剂和材料 4.2.1 水 GB/T 6682规定的一级水。
4.2.2 组织中氯霉素检测CharmⅡ试剂盒每批新试剂盒用法前须举行性能监测。
4.2.2.1 竞争性结合试剂：应储藏在-15℃或以下，在室温(15℃～25℃)下最多放置6 h。
4.2.2.2 [3H]标志的氯霉素：应储藏在-15℃或以下，在室温(15℃～25℃)下最多放置6 h。
4.2.2.3 阴性对比浓缩溶液：干粉储藏于2℃～6℃，用法时取浓缩干粉按标签上标志配制成阴性对比浓缩溶液，配制好的溶液可在2℃～6℃冰箱或冰浴中保存48 h；于-15℃以下的冰箱中，则可保存2个月，用法时将其解冻，解冻后的溶液在2℃～6℃冰箱或冰浴中保存24 h。
4.2.2.4
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