水产品中氯霉素残留检测方法(二)
水产品中氯霉素残留的ELISA检测法
周
昱
（ 门出入境检验检疫 局 厦
３１ １） ６ ０ ２
摘
要
本 文研究建 立 了水 产 品 中的氯霉 素 （ Ａ ）残 留 的酶联 免 疫 （ Ｌ Ｓ Ｃ Ｐ Ｅ ＩＡ）检测 方 法 。氯霉 素标 准在 ０ ０ ．５
ｎ ／ －４．５ｎ ／ ｇｍＬ－ ０ ｇｍＬ范 围内具有 良好 的线性 。方法 的检测限 、定量检 测限 、精密度 和 回收率 等技术 指标 符合 国外
本 文应 用 ＥＬ Ｓ 方 法 ，选 择 虾 、蟹 肉 和 鱼 肉 ＩＡ
等样 品为 研究 对 象 ，建 立 稳定 可靠 的检 测方 法 ，可 以对水 产 品 中氯 霉 素残 留进行 定 量检 测 。
２ 实 验 部 分
２ １ 仪 器和 试 剂 ．
１０ Ｌ 异 辛 烷／ 氯 甲 烷 （ ：３ 混 合 溶 液 ， ．ｍ － ２ ） １０ ．ｍＬ酶联 反 应 缓 冲溶 液 ，充 分 振 荡 混 匀 ，转 移
对氯霉 素残 留的最 大允许限 量 （ Ｌ ＭＲ ）要求 。本方法 适合于虾 、蟹 肉和鱼 肉等样 品的检测 。 关键词 氯霉素 酶联 免疫 水产 品。
１ 前 言
动 物源 产 品 中氯霉 素 残 留的检 测方 法 ，主要见 有 液 相 色谱 法 （ Ｃ），气 相 色 谱 法 （ Ｃ） Ｌ Ｇ ，酶 联 免疫 方法 （ ＩＡ） ＥＬＳ 和放 射 免疫 方 法 （ Ａ）。近 ＲＩ
以氯 霉 素 标 准 值 浓 度 的对 数 值 为 Ｙ 轴 ，测 得
２ ２ １ 乙腈 一水 提取 方法 ．．
的吸光值除 以 ０标准吸光值 的百分 比为 Ｘ轴 ，绘 制标准曲线 ，得到一个线性 回归方程 。图 １ 为一次 测 定 的氯 霉 素标 准 校 正 曲线 ：
水产品中氯霉素残留检测方法
水产品中氯霉素残留检测方法氯霉素（Chloramphenicol，简称CAP）是一种广谱抗菌药物，在水产品中的残留对人体健康具有潜在风险。
因此，准确快速地检测水产品中的氯霉素残留是非常重要的。
目前，常用的氯霉素残留检测方法包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、酶联免疫吸附测定法等。
高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的氯霉素残留检测方法之一、它利用色谱柱进行分离，通过比色法或荧光法进行检测。
具体步骤如下：首先，将待测样品进行提取，常用的提取剂包括乙腈、甲醇等。
然后，将提取液通过色谱柱进行分离，同时通过流动相的携带进行样品的洗脱。
最后，通过比色法或荧光法对洗脱液进行检测和定量。
HPLC方法具有准确、灵敏、高效的优点，但是需要较昂贵的设备和试剂，并且操作复杂，对操作人员的技术要求较高。
液相色谱-质谱法（LC-MS）是一种结合了液相色谱和质谱的分析技术，可以实现对氯霉素残留的准确定量和结构鉴定。
与HPLC相比，LC-MS具有更高的灵敏度和特异性。
它可以通过质谱仪对分离出的化合物进行分析，从而实现对氯霉素残留的快速检测。
然而，LC-MS方法需要昂贵的设备和试剂，并且需要经验丰富的操作人员进行操作。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种基于免疫学原理的检测方法，可以实现对氯霉素残留的高效筛查。
ELISA方法的原理是将待检样品与特异性抗体结合，然后通过酶标记二抗进行检测。
具体步骤如下：首先，将待测样品和抗体溶液进行孵育，使得残留的氯霉素与抗体结合。
然后，通过酶标记的二抗与结合的复合物发生反应，产生可观测的信号。
最后，通过比色法或发光法对信号进行检测和定量。
ELISA方法具有灵敏度高、操作简便、成本低等优点，但是其结果可能受到其他因素的干扰，需要进一步的确认。
综上所述，水产品中氯霉素残留的检测方法有高效液相色谱法、液相色谱-质谱法和酶联免疫吸附测定法。
这些方法各有优缺点，选择适合的检测方法需要根据实际情况进行评估和决策。
水产品中氯霉素药物残留检测方法分析
疾病种类较多，需要因症制宜地采取治疗措施。
比如，在脑膜炎、败血症方面有显著表现者，可以给予地塞米松；而对于淋巴结脓肿类症状者，则宜采用成熟后的治疗，也可以通过简单的手术进行切破处理，然后进行排脓汁、冲洗（以1%高锰酸甲、3%双氧水皆可）、伤口处理（如碘酊涂抹）等，完成后可以选用对应药物治疗。
3结语农村猪养殖方面的疾病预防控制只有通过基层政府的宣传，防疫站的帮助与指导，以及农户对猪养殖相关知识与技术的积极了解、学习，才能从多个方面共同促进猪养殖水平的提升。
建议利用回乡就业指导部门、现阶段成立的新型合作社等组织，尤其是借助我国农村各地的“党员之家”发挥组织效用，为农村的猪养殖提供更好的养殖服务，包括品种的引入、猪养殖相关手册的发放、视频的集中传播，尤其是需要加强上门指导；同时，需要防疫站实施由上到下的下基层防疫，提高对猪类疫情的防控水平，为提高养殖效益提供技术支持。
参考文献［1］皮祖超.浅谈呼吸道疫病在猪养殖中的发病原因和防制措施［J］.畜禽业，2015（3）：8-9.［2］李果夫.繁殖障碍性疫病在猪养殖中的诊断和防治［J］.养殖与饲料，2015（3）：30-31.水产品中氯霉素药物残留检测方法分析卓二妹（中山市古镇镇农业服务中心，广东中山528421）［摘要］氯霉素为一种广谱抗生素，可以有效抑制多种病原菌，但是其也具有很强的毒副作用，所以被明确规定不得在动物源食品中检出，已经被我国列为禁用兽药。
为保证食品安全，需要加强对水产品内氯霉素药物残留检测研究，应用有效检测技术，确定其含量是否在规定范围内，以避免对人体健康造成不良影响。
本文就水产品氯霉素药物残留检测方法进行简要分析。
［关键词］水产品；氯霉素；药物残留［中图分类号］S948［文献标识码］A［文章编号］1674-7909（2017）08-63-2随着生活水平的提高，人们对食品安全要求更为严格，尤其是各种药物在动物中的应用，因为药品残留已成为威胁人体健康的重要因素。
气相色谱法测定水产品中氯霉素类药物残留量
气相色谱法测定水产品中氯霉素类药物残留量作者：陈树鹏黎素菊陈晓衔洪捷娴李锦雯来源：《农家科技下旬刊》2017年第08期摘要：氯霉素被广泛应用于水产动物病害的预防和治疗，造成动物性食品中的残留，对人类产生了严重的副作用。
本文介绍了水产品中氯霉素类药物残留量的气相色谱法。
结果表明：该方法的线性系数在0.99以上，检出限可达到0.01mg/kg。
方法灵敏度高，回收率及精密度均达到分析要求。
关键词：气相色谱法；氯霉素；优化；精密度氯霉素是一种广谱、高效的抗生素类药物，由于其效高价廉，曾在水产养殖业中得到了较为广泛的应用，同时也不可避免地带来了残留问题。
残留在水产品中氯霉素会对人体的造血等功能产生不良影响，甚至引起粒状白细胞缺乏、不可逆的再生障碍性贫血、新生儿的灰婴综合症等疾病。
因此，氯霉素残留问题需要引起高度的重视，国内外对水产品中氯霉素残留监控特别严格，而且允许残留量都非常低，一般在1μg/kg以下。
目前一般常用的氯霉素残留量的检测标准有气相色谱法（GC-ECD）、液相色谱法（HPLC-UV）、酶联免疫吸附试验法（ELISA）及气-质联用法（GC/MS）等。
基于此，本文建立了分析水产品中氯霉素类药物残留的气相色谱法，方法准确可靠、灵敏度高。
一、材料与方法1.材料（1）试验原材料。
鱼肉组织，市场销售。
（2）主要试剂与材料。
乙酸乙酯、正己烷、甲醇、乙腈（色谱纯）；氯霉素标准、衍生化试剂BSTFA；C18固相萃取柱。
（3）主要仪器。
气质联用仪；均质机；固相萃取装置；分析天平；氮吹仪；旋转蒸发仪。
2.标准溶液配制氯霉素标准溶液：配制100mg/L的标准储备液，保存于1～4℃冰箱中冷藏，使用时用甲醇稀释至相应浓度做标准工作曲线。
3.样品前处理（1）分离提取。
准确称取鱼肉（鱼糜状）（5±0.01）g于具塞离心管中，加入20mL乙酸乙酯，在组织匀浆机均质1min后，用15mL乙酸乙酯清洗刀头倒入离心管中，高速离心机10000r/min离心3min，将上清液倒入浓缩品中，浓缩近干，用甲醇-水（V：V=1：1）溶液5mL定容，待净化。
水产品中氯霉素残留检测方法
FOOD INDUSTRY ·127水产品中氯霉素残留检测方法 李梓建 广东省汕头市食品检验检测中心 广东省汕头市质量计量监督检测所氯霉素是一种广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。
近年来，在水产品养殖和运输过程中违规使用氯霉素的现象屡见不鲜，问题日益突出，严重威胁到了人民群众的健康。
本文简述了水产品中氯霉素残留的多种检测方法，包括色谱分析法、微生物法、免疫分析法以及生物传感器、生物芯片等新型检测技术，并对其优缺点进行了比较分析，以期为水产品中氯霉素残留检测提供参考。
最后本文还对氯霉素残留检测方法的发展趋势进行了展望。
氯霉素（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ，ｃｈｌｏｒｏｍｙｃｅｔｉｎ）是白色或无色的针状或片状结晶，由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素。
大卫·戈特利布于１９４７年从南美洲委内瑞拉的土壤内的委内瑞拉链霉菌成功分离，并于１９４９年合成并引入临床试验。
它属于抑菌性广谱抗生素，也是世界上首种完全由合成方法大量制造的广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。
但是，由于它对造血系统有严重不良反应，需要慎重使用。
检测方法分析的必要性水产品营养丰富，品种繁多且风味各异，深受老百姓的喜爱，需求量也是与日俱增，这在很大程度上促进了我国水产品养殖业规模的发展。
然而，伴随着发展而来的是越来越多的抗生素类药物被应用其中，由于部分养殖户和商家不遵守国家有关规定及未合理使用药物，造成抗生素在水产品中残留居高不下。
其中，氯霉素药物的违规使用更是屡见不鲜，甚至让水产品成为食品安全的重灾区之一。
由于氯霉素药物存在严重的毒副作用，能够抑制骨髓造血功能、引发再生障碍贫血、粒状白细缺乏症和新生儿、早产儿灰色综合症等，美国、欧盟、日本等很多国家都禁止其在动物源性食品中检出。
依据中华人民共和国农业部公告第２３５号中《动物性食品中兽药最高残留限量》（发布日期：２００２年１２月２４日）的规定，氯霉素为禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出。
氯霉素残留检验实验报告
一、实验目的本实验旨在通过胶体金免疫层析法对食品中的氯霉素残留进行快速、准确的检测，为食品安全监管提供技术支持。
二、实验原理氯霉素残留检验实验采用胶体金免疫层析法，该方法基于抗原抗体特异性结合的原理。
当氯霉素样品与标记有抗氯霉素单克隆抗体的胶体金颗粒混合时，如果样品中含有氯霉素，则氯霉素会与抗氯霉素单克隆抗体结合，形成抗原抗体复合物。
复合物在层析膜上通过毛细作用向前移动，与固定在层析膜上的抗氯霉素抗体结合，形成金标记的抗原抗体复合物，最终在层析膜上形成两条色带：控制线（C）和测试线（T）。
如果样品中氯霉素浓度超过检测限，则在测试线上形成明显的色带；如果样品中氯霉素浓度低于检测限，则测试线上无色带。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）氯霉素标准品（2）阴性对照样品（3）阳性对照样品（4）氯霉素残留样品（5）胶体金免疫层析试纸条（6）试剂：缓冲液、洗涤液、封闭液等2. 实验仪器：（1）电子天平（2）恒温培养箱（3）移液器（4）微量加样器（5）一次性无菌手套四、实验方法1. 样品处理（1）准确称取氯霉素残留样品0.1g，加入1ml缓冲液，涡旋混匀，室温下放置10min。
（2）取1ml样品溶液，加入1ml洗涤液，涡旋混匀，室温下放置5min。
（3）重复步骤（2）两次。
2. 检测（1）取一条胶体金免疫层析试纸条，将样品加样孔浸入样品溶液中，室温下放置5min。
（2）取出试纸条，观察结果。
五、实验结果与分析1. 阳性对照实验阳性对照样品在测试线上形成明显的色带，说明试纸条的性能良好。
2. 阴性对照实验阴性对照样品在测试线上无色带，说明试纸条对阴性样品具有良好的检测效果。
3. 样品检测根据实验结果，氯霉素残留样品在测试线上形成明显的色带，说明样品中氯霉素残留量超过检测限。
六、实验结论本实验采用胶体金免疫层析法对食品中的氯霉素残留进行检测，结果表明该方法具有快速、简便、准确的特点，适用于食品中氯霉素残留的现场快速检测。
水产品中氯霉素残留胶体金免疫层析法快速检测技术
性结果 ，表明不含氯霉素或者氯霉素残 留量低于检
出限 （ ４０ ． ３ ￣ ｔ ｇ ／ ｋ ｇ ） 。 ６ ． ３ 阳性结 果
（ ２ ） 用 塑 料 吸管 将无 气 泡 的待检 样 品垂直 滴 加 ３滴 （ 约 Ｉ Ｏ ０ ￣ Ｌ ） 于加样 孔 中 ， 具体 见 图 ｌ 。
０ ． ２ ｍＬ下 层溶 液 ， 为 待检样 品 。
５ ． ３ 测 定
待 检试 样 检 测 线 （ Ｔ线 ） 出现红 色 条 带 ， 且 颜 色 比控制 线 （ ｃ线 ） 深（ 如图 ４ ） 或一样 深 （ 如图 ５ ） ， 为 阴
（ １ ） 从包装袋中取出氯霉素胶体金免疫层析试
剂板 ， 置于平 整 的台面 上待测 。检 测试 剂板 取 出后 ，
试 样提 取液作 为 空 白对 照 ， 加 样方 法 同样 品 。 （ ４ ） 加样 后 开 始计 时 ， 结果应在 ３ ５ ｍｉ ｎ读 取 ， 其 他 时间判读 无效 。
４ 仪 器 设 备
氯霉素残留胶体金免疫层析法快速检测技术适
用的主要仪器设备为 ： 电子天平 （ 感量 ０ ． ０ １ ｇ ） 、 小型
２ ０ １ ６年 第 ６期 一
均质器 、 离心机 （ 最大转速 Ｉ ＞４ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ ） 、 氮 气 吹 干 仪 或空 气 吹干仪 。
待 检试 样 检 测 线 （ Ｔ线 ） 出现红 色 条 带 ， 但 颜 色 比控制 线 （ Ｃ线 ） 浅（ 如图 ６ ） ， 或 检测 线 （ Ｔ线 ） 未 出现 红 色 条带 （ 如图 ７ ） ， 为 阳性 结果 ， 表示 样 品 中氯霉 素
（ ３ ） 每批样品需做 １ 孑 Ｌ 空 白对照 ， 以复溶液代替
水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析
水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析引言：氯霉素是一种广谱抗生素，常用于水产养殖中的疾病治疗和预防。
然而，由于氯霉素在人体中可以引起苯甘氮类药物引起的无异位脂肪移植症，因此世界各国都对水产品中的氯霉素残留量有严格的限制。
针对水产品肌肉组织中氯霉素残留量的测试，现有许多不同的方法和技术。
本文将对其中一些常用的方法进行对比分析，并评估它们的优缺点。
方法一：高效液相色谱法（HPLC）检测氯霉素残留量HPLC是一种常用的分离和定量分析方法，可以快速准确地检测氯霉素残留量。
该方法通过将水产品肌肉组织样品提取液经过色谱分离，利用紫外或荧光探测器测量不同物质的峰值面积，从而定量检测氯霉素的含量。
该方法的优点是操作简便、准确性高，可以同时检测多种氯霉素类药物。
然而，HPLC方法的缺点是设备昂贵、操作复杂，对操作人员的技术要求较高。
方法二：酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测氯霉素残留量ELISA是一种常用的生物学分析方法，可以通过酶标记的抗体与目标物质结合来检测氯霉素残留量。
该方法操作简便，具有高通量性和准确性。
ELISA方法的优点是对样品处理较少，检测时间短，适用于大批量样品分析。
然而，ELISA方法的缺点是可能存在交叉反应和假阳性结果，对操作人员技术要求较高。
此外，ELISA方法只能定性或半定量检测氯霉素残留量，不能提供准确的定量结果。
方法三：气相色谱质谱联用法（GC-MS）检测氯霉素残留量GC-MS是一种常用的分析方法，可以通过将水产品肌肉组织样品提取液经过气相色谱分离，然后利用质谱检测器对不同物质进行鉴定和定量。
GC-MS方法准确性高，可以进行定量检测，具有良好的选择性和灵敏性。
然而，GC-MS方法的缺点是操作复杂，需要较长的分析时间，设备昂贵，对操作人员的技术要求较高。
综合对比分析：从操作简便性、准确性、成本和设备要求等方面考虑，HPLC方法适合进行氯霉素残留量的定量检测。
而ELISA方法适合进行大批量样品的快速筛查，但不能提供准确的定量结果。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
水产品中氯霉素残留检测方法（二）
4.4.3 测定 4.4.3.1 用压杆将竞争性结合试剂压入一洁净的硅硼酸
盐玻璃试管内，加入300 uL水，用涡旋振荡器振荡10 s，使试剂振碎彻低。
4.4.3.2 加5.0 mL样品提取液(4.4.2.3)，或阴性对比液
(4.4.1.1)或阳性对比液(4.4.1.2)到试管中，混匀15 s，使样品上下
混匀15次，置于恒温孵育器中于50℃±1℃孵化3 min，取出混匀15 s，再置于恒温孵育器中50℃±1℃孵化3 min。
4.4.3.3 用压杆将[3H]标志的压入试管中，用旋涡混合器振荡15 s，使样品上下混合15次，置于恒温孵育器中50℃±1℃孵化3 min。
4.4.3.4 取出试管，于
3300r/min离心10 min，立刻取出试管，倒掉上清液，用棉签将试管边缘的污渍擦去。
4.4.3.5 加300uL水到试管内，振荡并混合混匀，再加入3.0 mL闪耀液(4.2.2.7)至试管中，涡旋混匀至试管内没有不均的云状物。
4.4.3.6 将试管放入液体闪耀计数仪内，在[3H]频道举行60 s LSC计数，读cpm值。
4.5 控制点确实定控制点是推断样品阴性与初筛阳性的一个界定值，可按照筛选水平自行设定。
对于同一批号的试剂，正常状况下只需测定1次控制点。
控制点设定步骤如下：称取20.0g均质好的空白组织样品，加入0.6 mL 10 ug/L抗生素标准溶液，按4.4.2试样提取和4.4.3发射免疫测定；测定六个加标样品的cpm 值，求出cpm平均值乘上系数1.2，即为筛选水平0.3ug/kg的控制点。
注：空白样品应是不含抗生素残留的样品，即假如测得某个样品cpm 值在阴性对比液的cpm值±20％左右波动，可认为其不含氯霉素抗生素。
5 结果判定 5.1 将测得结果与控制点对比，当样品cpm值大于控制点50以上时，判定样品为“阴性”，即样品中氯霉素含量低于筛选水平。
5.2 将测得结果与控制点对比，当样品cpm值等于或小于控制点，视为“初筛疑惑阳性”，此时应重新测定样品、阴性对比液和阳性对比液的cpm值。
阴性对比液和阳性对比液的cpm值需在正常范围波动(见试剂盒性能监测)，当重新测定样品的cpm值大于控制点，判定为“阴性”；小于或等于控制点，则判定为“初筛阳性”。
5.3 将
第1页共2页。