基因敲除技术的原理、方法和应用
基因敲除原理
基因敲除原理
基因敲除是一种常用的遗传学技术，它通过特定方法使得目标基因在细胞或有机体中失去功能，从而揭示该基因在生物体内的功能。
基因敲除技术的发展为科学家们研究基因功能提供了重要的工具。
下面将介绍基因敲除的原理及其在生物学研究中的应用。
基因敲除的原理主要是通过DNA重组技术来实现的。
首先，需要设计一段与目标基因相对应的DNA序列，这段DNA序列中包含了一些特定的序列，如诱导剂可诱导的基因敲除系统中的诱导剂响应元件（inducible gene knockout system）。
然后，将设计好的DNA序列导入到目标细胞中，使其与目标基因进行重组。
通过这种方式，可以使目标基因发生突变，从而失去其正常的功能。
基因敲除技术在生物学研究中有着广泛的应用。
首先，它可以帮助科学家们研究基因在生物体内的功能。
通过敲除特定基因，科学家们可以观察到在该基因缺失的情况下生物体的表型变化，从而推断出该基因在生物体内的功能。
其次，基因敲除还可以用于研究疾病的发生机制。
通过敲除与某种疾病相关的基因，科学家们可以研究该基因对疾病的影响，为疾病的治疗提供重要的线索。
此外，基因敲除还可以用于研究药物的靶点。
通过敲除可能与某种药物靶点相关的基因，科学家们可以评估该靶点对药物的影响，为药物研发提供重要的参考。
总的来说，基因敲除是一种重要的遗传学技术，它通过DNA重组来使目标基因失去功能，为生物学研究提供了重要的工具。
基因敲除技术在研究基因功能、疾病发生机制以及药物靶点等方面有着广泛的应用前景。
随着技术的不断发展，相信基因敲除技术将会为生命科学领域的研究提供更多的可能性。
植物功能基因组研究中的基因敲除技术
植物功能基因组研究中的基因敲除技术植物基因敲除技术是近年来植物功能基因组研究中的一项重要技术。
通过该技术可以精准地删去植物基因组中的某个基因，从而研究该基因在植物生长、发育和代谢等方面的功能。
下面我们将详细介绍植物基因敲除技术的原理和应用。
一、植物基因敲除技术的原理植物基因敲除技术是通过基因编辑技术实现的。
目前主要有CRISPR/Cas9和TALEN两种技术用于植物基因编辑。
这两种技术都是利用人工合成的核酸序列，精准地识别和切割目标基因的DNA 序列，从而实现基因敲除。
先来介绍一下CRISPR/Cas9技术。
CRISPR是一种天然存在于细菌中的免疫系统。
通过CRISPR系统，细菌可以识别并摧毁侵入其体内的病毒DNA。
科学家们发现，CRISPR系统中有一种酶叫做Cas9，可以切割DNA序列。
利用人工合成的RNA序列，可以将Cas9定位到需要切割的基因上，并切割掉该基因。
这样就实现了精准的基因敲除。
TALEN技术原理类似于CRISPR/Cas9，也是通过人工合成的核酸序列，精准地识别和切割目标基因的DNA序列。
TALEN技术主要是利用一种叫做TALEN（转录激活样核酸酶）的酶来实现基因敲除。
二、植物基因敲除技术的应用植物基因敲除技术已经成为植物功能基因组研究中的一项重要技术。
它可以用于研究植物生长、发育和代谢等方面的功能。
以下是该技术的一些具体应用：1.研究基因功能植物基因敲除技术可以用于研究基因在植物生长、发育和代谢等方面的功能。
通过敲除某个基因，可以观察其对植物生长、发育和代谢等方面的影响。
这种方法可以帮助科学家们更好地了解植物基因的功能。
2.筛选基因植物基因敲除技术可以用于筛选植物基因。
在研究植物新陈代谢方面，需要筛选大量的植物基因，以了解这些基因在植物代谢中的作用。
植物基因敲除技术可以快速地筛选出与目标代谢过程相关的基因，从而加速研究进程。
3.改良植物品种植物基因敲除技术可以用于改良植物品种。
基因敲除与突变的原理和实践
基因敲除与突变的原理和实践自从我们开始理解和研究基因时，一直有一种技术可以让我们探究基因功能的机制：基因敲除。
基因敲除是一种对生物基因组进行彻底改变的方法，可以用来分析基因表达对生命过程的重要性。
在这篇文章中，我们将深入探讨基因敲除和突变的原理，以及它们在实践中的应用。
基因敲除的原理基因敲除是通过人工介入的方法将基因的表达沉默下来或停止表达，使其不再参与生物体发育或生理功能。
在基因敲除中，主要有几种方法可以实现：1. RNAi敲除：通过引入小分子RNA或其他小RNA分子来抑制基因的表达。
2. Crispr/Cas9敲除：通过引入双链脱氧核糖核酸（DNA）来干扰特定基因的序列，以阻止其表达。
3. 向后遗传：通过人工设计无功能DNA片段来取代基因的功能序列，以实现基因敲除。
这些方法在研究基因功能时，可以提供重要的帮助。
例如，使用基因敲除的方法可确定基因对信号转导和药物代谢等过程的影响。
基因突变的原理基因突变是指永久性破坏或改变基因的DNA序列的任何过程。
基因突变是生命进化中的基本过程之一，也是我们生活中常见的一种现象，如鼻子上的痣或特殊的眼颜色等。
这里我们将着重讨论基因突变的分类和原因。
基因突变分为两种主要类型：点突变和染色体突变。
点突变是指单个核苷酸的改变，这种改变会在蛋白质合成中引起细微的变化，但可能改变蛋白质的功能。
染色体突变是指涉及染色体的较大片段的改变，如整个染色体、某一段染色体缺失或重复等。
基因突变的原因可以是自然的或人为的。
自然突变可以是单一的，也可以是由较低水平的、长期的辐射和化学物质曝露致使的，这些物质可以改变DNA序列。
人为诱导的突变可以是由化学物质或其他环境因素，如紫外线或电离辐射等引起的。
基因敲除和突变的应用在生命科学领域，基因敲除和突变是非常重要的方法，用于解决生物信息学方面的重大问题。
基因敲除可以用于检测基因是否对生命过程必不可少，以及基因在生理和病理学过程中的作用。
在基因突变方面，可以在自然物种中发现耐药性的突变体，从而探寻一些新型的治疗策略。
基因敲除技术的原理与应用
基因敲除技术的原理与应用
基因敲除技术是基因工程领域常用的一种技术手段，它通过干扰特定
目标基因的表达，来研究该基因在生物体中的功能、调控及其对生物现象
的影响。
基因敲除技术的原理与应用十分广泛，对于生物学研究、疾病治
疗和农业改良有着重要的意义。
1.生物学研究：基因敲除技术被广泛用于研究基因在生物体中的功能
以及其对生物现象的影响。
常用的模式生物如小鼠、果蝇、斑马鱼等，通
过基因敲除技术产生基因敲除动物模型，可以帮助科学家研究基因的功能、调控机制和疾病机理。
2.疾病治疗：基因敲除技术可以用于治疗一些与单基因遗传病相关的
疾病。
通过针对致病基因的敲除，可以恢复或改变细胞的功能，从而治疗
疾病。
举例来说，基因敲除技术已经成功用于治疗部分遗传性免疫缺陷病、囊性纤维化、血友病等疾病。
3.肿瘤治疗：在癌症治疗中，基因敲除技术可以用于针对癌细胞中的
致瘤基因进行敲除，从而抑制肿瘤的生长和扩散。
此外，还可以对肿瘤的
信号通路进行调控，达到治疗肿瘤的目的。
4.农业改良：基因敲除技术可以应用于农业领域，通过有针对性地敲
除一些基因来改良植物的性状，提高农作物抗病性、抗旱性和耐盐性。
以
水稻为例，基因敲除技术已经成功应用于提高水稻对稻瘟病、稻瘟病菌和
稻瘟霉素的抗性。
总之，基因敲除技术具有广泛的应用前景。
它可以对生命科学研究、
疾病治疗和农业改良等领域做出重要贡献。
随着技术的不断发展和优化，
基因敲除技术的应用将会更加广泛，为人类的健康和农业产业发展带来更多的福利。
简述基因敲除技术
简述基因敲除技术基因敲除技术是一种常用的遗传学研究方法，旨在通过人为干预的方式，使特定基因在生物体内失去功能。
这一技术的发展为我们深入了解基因功能和生物体发育提供了重要工具。
本文将从基因敲除技术的原理、应用和局限性三个方面进行阐述。
基因敲除技术的原理是通过利用DNA重组技术，将目标基因的编码序列取代或删除，使其无法正常表达。
其基本步骤包括目标基因的筛选、构建敲除载体、载体的导入和基因敲除细胞系的筛选等。
首先，确定目标基因，并设计引物进行筛选，以确保选择的是目标基因的编码区域。
然后，将目标基因的编码区域与质粒进行连接，构建敲除载体。
接着，通过适当的方法将敲除载体导入到细胞中，并利用筛选标记（如抗生素抗性基因）进行筛选，获得敲除目标基因的细胞系。
基因敲除技术在生物学研究中具有广泛应用。
首先，通过敲除特定基因，可以揭示该基因在生物体发育和功能中的作用。
例如，通过敲除小鼠体内的特定基因，可以观察到其对小鼠胚胎发育的影响，从而了解该基因在胚胎发育过程中的功能。
其次，基因敲除技术还可以用于研究疾病的发生机制。
通过敲除与某种疾病相关的基因，可以模拟该疾病的发生过程，为研究疾病的发病机制和寻找治疗方法提供重要线索。
此外，基因敲除技术还可以用于筛选药物靶点。
通过敲除特定基因并观察其对细胞生存的影响，可以发现新的药物靶点，为药物研发提供新的思路。
然而，基因敲除技术也存在一些局限性。
首先，敲除基因可能会对生物体的正常生理过程产生不可预测的影响。
虽然敲除技术可以帮助我们了解基因的功能，但敲除某些基因可能会导致生物体的死亡或严重异常。
其次，敲除技术往往需要复杂的实验操作和长时间的培养，且成功率不高。
这对于一些研究人员来说是一个挑战。
此外，基因敲除技术只能研究单个基因的功能，无法模拟多基因相互作用和调控的复杂生物过程。
基因敲除技术是一种重要的遗传学研究方法，通过人为干预的方式使特定基因在生物体内失去功能。
它在生物学研究中具有广泛的应用，可以揭示基因的功能和生物体发育的机制，为疾病研究和药物开发提供线索。
基因敲除技术的原理和应用
基因敲除技术是一种基因编辑技术，通过这种技术，研究人员可以删除或改变特定的DNA 序列，以研究基因的功能和作用机制。
基因敲除技术的原理：
1. 基因敲除可以通过同源重组的方法实现。
具体来说，研究人员将一个含有同源序列的筛选标记基因插入到待编辑的基因的3'端，然后加入四环素抗性基因的启动子和终止序列，通过筛选标记基因的表达，选择含有同源序列的细胞，再通过同源序列的识别和同源重组将待编辑的基因删除。
2. 另一种基因敲除方法是随机突变。
研究人员将含有同源序列的筛选标记基因插入到待编辑的基因的3'端，然后加入四环素抗性基因的启动子和终止序列，通过筛选标记基因的表达，选择含有同源序列的细胞，再通过随机突变的方法产生突变体。
基因敲除技术的应用：
1. 研究基因的功能和作用机制。
通过基因敲除技术，研究人员可以删除或改变特定的DNA 序列，以研究该基因的作用和影响。
2. 疾病治疗。
基因敲除技术也可以用于治疗某些疾病，如遗传性疾病、癌症等。
3. 药物开发。
研究人员可以通过基因敲除技术来研究药物的作用机制和效果，以开发新的药物。
基因敲除技术路线
基因敲除技术路线基因敲除技术是一种常用的基因组编辑方法，通过破坏特定基因的功能，以研究该基因在生物体发育、生理和病理过程中的作用。
本文将介绍基因敲除技术的基本原理、常用的敲除方法和技术路线。
一、基因敲除技术的原理基因敲除是指通过人为手段使特定基因在生物体中失去功能。
在细胞层面上，基因敲除可以通过两种方式实现：直接破坏基因编码区域或间接影响基因表达。
直接破坏基因编码区域的方法包括插入缺失、替换和故障等，而间接影响基因表达的方法则通过RNA干扰或基因废弃等方式实现。
二、常用的基因敲除方法1. 全基因敲除方法：全基因敲除是将整个基因组中的某个特定基因进行敲除，即完全破坏该基因的编码区域。
常用的全基因敲除方法包括基因敲除小鼠模型、转基因植物敲除和CRISPR-Cas9等。
2. 特定基因敲除方法：特定基因敲除是指对某个特定基因进行有针对性的敲除，保留其他基因的功能不受影响。
常用的特定基因敲除方法包括siRNA靶向敲除、基因编辑酶的使用和肌肉纤维母细胞的敲除等。
三、基因敲除技术路线基因敲除技术的路线可以分为以下几个步骤：1. 确定目标基因：首先需要确定要敲除的目标基因。
通过文献研究和生物信息学分析，可以确定该基因在生物体发育、生理和病理过程中的作用，以及敲除后可能引起的变化。
2. 设计敲除载体：根据目标基因的序列信息，设计敲除载体。
敲除载体通常包括靶向序列、选择性标记基因和背景基因等。
靶向序列用于特异性识别目标基因，选择性标记基因用于筛选敲除细胞，背景基因用于确认敲除效果。
3. 转染敲除载体：将设计好的敲除载体导入到目标细胞中。
常用的转染方法有化学法、电穿孔法和病毒载体介导法等。
转染后，目标细胞中将存在敲除载体和非敲除细胞。
4. 筛选敲除细胞：通过添加相应的筛选剂或选择标记基因，筛选出成功敲除目标基因的细胞。
敲除细胞可以通过PCR、Western blot 或克隆等方法进行鉴定。
5. 验证敲除效果：通过对敲除细胞进行功能性实验，验证敲除效果。
基因敲除方法的原理应用
基因敲除方法的原理应用1. 概述基因敲除是一种常用的遗传学实验技术，通过将目标基因从细胞或生物体中删除，以研究基因在生物体中的功能和调控机制。
本文将介绍基因敲除方法的原理和常见应用。
2. 基因敲除方法的原理基因敲除方法主要包括两个步骤：构建敲除基因载体和敲除基因导入目标细胞或生物体。
2.1 构建敲除基因载体1.确定目标基因：首先需要确定要敲除的目标基因。
可以通过文献资料和数据库查询，分析基因序列和功能等信息，选择合适的目标基因。
2.设计敲除基因：设计针对目标基因的敲除基因，通常采用DNA重组技术构建。
敲除基因通常包括选择标记基因和目标基因序列特异性引物。
3.构建敲除基因载体：将设计好的敲除基因插入适当的载体中，如质粒或病毒载体。
2.2 敲除基因导入目标细胞或生物体1.选择合适的敲除基因导入方法：根据目标细胞或生物体的特性和要求，选择合适的基因导入方法，常见的方法包括细胞转染、病毒载体导入和转基因动物等。
2.导入敲除基因：将构建好的敲除基因载体导入目标细胞或生物体中，通过基因重组等技术使敲除基因与目标基因发生相应的重组事件。
3. 基因敲除方法的应用基因敲除方法被广泛应用于基因功能研究、药物研发、疾病模型构建等领域。
以下列举几个常见的应用案例：3.1 基因功能研究通过基因敲除方法，可以在细胞或生物体中敲除目标基因，观察其对生物体的影响，以揭示目标基因在生物体中的功能和调控机制。
例如，敲除特定的转录因子基因，可以研究其对基因表达和细胞分化的影响。
3.2 药物研发基因敲除方法可以用于筛选药物靶点和评估药物疗效。
通过敲除潜在的靶点基因，观察其对疾病模型动物的影响，以评价该靶点的重要性和药物的效果。
这对于药物研发和治疗策略的选择具有重要意义。
3.3 疾病模型构建利用基因敲除方法，可以构建基因敲除动物模型，模拟特定疾病的发生和发展过程。
通过敲除与疾病相关的基因，可以研究疾病的发病机制、病理过程和药物治疗的有效性。
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基因敲除技术的原理、方法和应用2010-01-24 17:03:43 来源：易生物实验浏览次数：6302 网友评论 0 条1．基因敲除概述2．实现基因敲除的多种原理和方法：2.1.利用基因同源重组进行基因敲除 2.2利用随机插入突变进行基因敲除。
2.3.RNAi引起的基因敲除。
3．基因敲除技术的应用及前景4．基因敲除技术的缺陷关键词：基因敲除1．基因敲除概述：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。
通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。
随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和iRNA，它们同样可以达到基因敲除的目的。
2．实现基因敲除的多种原理和方法：2．1．利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。
80年代初，胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。
1985 年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。
到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型 [1]。
直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。
2.1.1利用同源重组构建基因敲除动物模型的基本步骤(图1)：a．基因载体的构建：把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA 分子都重组到带有标记基因(如neo 基因，TK 基因等)的载体上，成为重组载体。
基因敲除是为了使某一基因失去其生理功能，所以一般设计为替换型载体。
b．ES 细胞的获得：现在基因敲除一般采用是胚胎干细胞，最常用的是鼠，而兔，猪，鸡等的胚胎干细胞也有使用。
常用的鼠的种系是１２９及其杂合体，因为这类小鼠具有自发突变形成畸胎瘤和畸胎肉瘤的倾向，是基因敲除的理想实验动物。
而其他遗传背景的胚胎干细胞系也逐渐被发展应用。
[2，3]ｃ．同源重组：将重组载体通过一定的方式(电穿孔法或显微注射)导入同源的胚胎干细胞(ES cell)中，使外源DNA与胚胎干细胞基因组中相应部分发生同源重组，将重组载体中的DNA序列整合到内源基因组中，从而得以表达。
一般地，显微注射命中率较高，但技术难度较大，电穿孔命中率比显微注射低，但便于使用。
[4,5]ｄ．选择筛选已击中的细胞：由于基因转移的同源重组自然发生率极低，动物的重组概率为10－2～10-5，植物的概率为10－4～10－5。
因此如何从众多细胞中筛出真正发生了同源重组的胚胎干细胞非常重要。
目前常用的方法是正负筛选法（PNS法），标记基因的特异位点表达法以及PCR法。
其中应用最多的是PNS 法。
[6]ｅ．表型研究：通过观察嵌和体小鼠的生物学形状的变化进而了解目的基因变化前后对小鼠的生物学形状的改变，达到研究目的基因的目的。
[2，3,7]f．得到纯合体：由于同源重组常常发生在一对染色体上中一条染色体中,所以如果要得到稳定遗传的纯合体基因敲除模型，需要进行至少两代遗传。
[8]（见图2）图1.基因同源重组法敲除靶基因的基本步骤图2. 由嵌合体得到基因敲除的纯合体小鼠2.1.2条件性基因敲除法条件性基因敲除法可定义为将某个基因的修饰限制于小鼠某些特定类型的细胞或发育的某一特定阶段的一种特殊的基因敲除方法[2]。
它实际上是在常规的基因敲除的基础上，利用重组酶Cre介导的位点特异性重组技术，在对小鼠基因修饰的时空范围上设置一个可调控的“按钮”，从而使对小鼠基因组的修饰的范围和时间处于一种可控状态。
条件性敲除的原理（图2，3）：利用Cre／LoxP 和来自酵母的FLP—frt 系统可以研究特定组织器官或特定细胞中靶基因灭活所导致的表型[7]。
通过常规基因打靶在基因组的靶位点上装上两个同向排列的1oxP，并以此两侧装接上loxP 的(“loxP floxed”)ES 细胞产生“loxPfloxed”小鼠,然后，通过将“loxP floxed”小鼠与Cre 转基因鼠杂交(也可以其他方式向小鼠中引入Cre 重组酶)，产生靶基因发生特定方式(如特定的组织特异性)修饰的条件性突变小鼠。
在“loxP floxed”小鼠，虽然靶基因的两侧已各装上了一个loxP，但靶基因并没有发生其他的变化，故“1oxP noxed”小鼠表型仍同野生型的一样。
但当它与Cre 转基因小鼠杂交时，产生的子代中将同时带有“loxP floxed”靶基因和Cre 基因。
Cre 基因表达产生的Cre 重组酶就会介导靶基因两侧的1oxP 间发生切除反应，结果将一个loxP 和靶基因切除。
这样，靶基因的修饰(切除)是以Cre 的表达为前提的。
Cre 的表达特性决定了靶基因的修饰(切除)持性：即Cre 在哪一种组织细胞中表达，靶基因的修饰(切除)就发生在哪种组织细胞；而Cre 的表达水平将影响靶基因在此种组织细胞中进行修饰的效率。
所以只要控制Cre 的表达特异性和表达水平就可实现对小鼠中靶基因修饰的特异性和程度[9,10]。
图3，利用Cre／LoxP实现靶基因的切除原理图4. 条件性基因敲除的基因重组及切除步骤2.1.2.2 诱导性基因敲除法诱导性基因敲除也是以Cre/loxp 系统为基础，但却是利用控制Cre 表达的启动子的活性或所表达的Cre 酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre 基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP 动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。
人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。
常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型(图4)；干扰素诱导型；激素诱导型；腺病毒介导型。
图5.四环素诱导的基因敲除过程示例图诱导性基因敲除优点：①诱导基因突变的时间可人为控制；②可避免因基因突变而致死胎的问题③在2 个loxP 位点之间的重组率较高；④如用病毒或配体／DNA 复合物等基因转移系统来介导Cre 的表达，则可省去建立携带Cre 的转基因动物的过程。
[10]2.2利用随机插入突变进行基因敲除。
2.2.1 原理：此法利用某些能随机插入基因序列的病毒，细菌或其他基因载体，在目标细胞基因组中进行随机插入突变，建立一个携带随机插入突变的细胞库，然后通过相应的标记进行筛选获得相应的基因敲除细胞（原理见图5）[11,12] 。
根据细胞的不同，插入载体的选择也有所不同。
逆转率病毒可用于动植物细胞的插入；对于植物细胞而言农杆菌介导的T-DNA转化和转座子比较常用；噬菌体可用于细菌基因敲除。
．需要敲除的靶基因转录翻译出活性蛋白插入了靶目标的基因转录翻译出无活性的目标蛋白随机插入内含子中．需要敲除的靶基因转录翻译出活性蛋白图6：基因捕获法的基本原理图2.2.2基因捕获法基因捕获法是最近发展起来的利用随机插入突变进行基因敲除的新型方法，其原理可见图6。
通常基因捕获载体还包括一个无启动子的报道基因，通常是neo 基因，neo 基因插入到ES 细胞染色体组中，并利用捕获基因的转录调控元件实现表达的ES 克隆可以很容易地在含G418 的选择培养基中筛选出来，从理论上讲，在选择培养基中存活的克隆应该100％地含有中靶基因。
中靶基因的信息可以通过筛选标记基因侧翼cDNA 或染色体组序列分析来获得[13]2.2.3基因捕获法的优缺点用常规方法进行基因敲除研究需耗费大量的时间和人力，研究者必须针对靶位点在染色体组文库中筛选相关的染色体组克隆，绘制相应的物理图谱，构建特异性的基因敲除载体以及筛选中靶ES 细胞等，通常一个基因剔除纯合子小鼠的获得需要一年或更长的时间。
面对人类基因组计划产生出来的巨大的功能未知的遗传信息，传统的基因敲除方法显得有些力不从心。
因此，基因捕获法应运而生，利用基因捕获可以建立一个携带随机插入突变的 ES 细胞库，节省大量筛选染色体组文库以及构建特异打靶载体的工作及费用，更有效和更迅速地进行小鼠染色体组的功能分析。
此方法的缺点是只能剔除在Es 细胞中表达的基因．单种的细胞类型中表达的基因数目约为I04，现在的基因捕获载体从理论上来讲应能剔除所有在ES 细胞表达的基因，因此，在ES 细胞中进行基因捕获还是大有可为的。
用基因捕获法进行基因剔除的另一个缺点是无法对基因进行精细的遗传修饰，2.3.RNAi 引起的基因敲除。
由于少量的双链RNA 就能阻断基因的表达，并且这种效应可以传递到子代细胞中,所以RNAi 的反应过程也可以用于基因敲除。
近年来，越来越多的基因敲除采用了RNAi 这种更为简单方便的方法。
[13-15]2.3.1 RNAi 阻断基因表达的机理双链RNA 进入细胞后，能够在Dicer 酶的作用下被裂解成siRNA ，而另一方面双链RNA 还能在RdRP （以RNA 为模板指导RNA 合成的聚合酶RNA-directed RNA polym 的双链解开变成单链，并和某些蛋白形成复合物，Argonaute2是目前唯一已知的参与复合物形成的蛋白。
此复合物同与siRNA 互补的mRNA 结合，一方面使mRNA 被RNA 酶裂解，另一方面以SiRNA 作为引物，以mRNA 为模板，在RdRP 作用下合成出mRNA 的互补链。
结果mRNA 也变成了双链RNA ，它在Dicer 酶的作用下也被裂解成siRNA 。
这些新生成的siRNA 也具有诱发RNAi 的作用，通过这个erase ，RdRP ）的作用下自身扩增后，再被Dicer 酶裂解成siRNA 。
SiRNA 聚合酶链式反应，细胞内的siRNA 大大增加，显著增加了对基因表达的抑制。
从21到23个核苷酸的siRNA 到几百个核苷酸的双链RNA 都能诱发RNAi ，但长的双链RNA 阻断基因表达的效果明显强于短的双链RNA[13]。
2.3.2 RNAi 基因敲除的优点及应用①.比用同源②.对于哺乳动物，如对于一些敲除后外培养的细胞中利用RNAi 技术研究它的功能。
③.由于RNAi 能高效特异的阻断基因的表达，它成为研究信号传导通路的良好工具。
④.RNAi 还被用来研究在发育过程中起作用的基因，如可用RNAi 来阻断某些基因的表达，2.4实现基因敲除的其他原理。
除上述几种已经比较成熟并且普遍使用了的基因敲除原理外，还有一些基于其他原理的敲除技术正处于研究和oligonucleotides ）引导的基因敲除术[16]以及反义技术在基因敲除技术中的运用等[17]。