亲和层析柱使用说明
纯泰镍离子金属螯合亲和层析介质(Ni-NTA)使用说明书(完全版)[1]
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mM Tris·Cl，用高浓度HCl调节pH至6.3。 z 缓冲液G： 8 M Urea，100 mM NaH2PO4，100
mM Tris·Cl，用高浓度HCl调节pH至4.5。 各种溶液配制完毕后，最好进行脱气处理，0.45 μm滤膜过滤备用。 注：也可按照可溶性蛋白的缓冲液配制与操作方式 进行，只需在缓冲液中加入8M脲或6M盐酸胍。
让介质自然沉降。
3) 从上端管口将另一垫片缓慢推至介质沉降平
面，使介质表面保持水平状态，注意避免垫片
与介质接触面滞留气泡（如对实验要求并非十
分严格，为提高流速，可不覆盖上垫片）。
4) 在使用一段时间后，如果层析柱流速减慢，可
先用小镊子沿边缘将垫片推翻，夹出垫片，倒
出介质，清洗或更换新的垫片后，按2）、3）所
层析柱中；静置30min，让介质自然沉降。
3) 从上端管口将转换杆出液端缓慢推至介质沉降
平面，使介质表面保持水平状态，注意避免转
换杆与介质接触面间滞留气泡。
4) 在使用一段时间后，如果流速减慢，可先卸下
上转换杆，将介质倒出，再取出下转换接头中
滤网，清洗或更换后重新装柱。
4. 过柱：
1) 用5~10倍介质体积的缓冲液A平衡亲和柱；
六、 实验实例
1. Ni-NTA Agarose 纯化 His-tag 蛋白 z 层析介质：纯泰®NTA 1ml；对照介质（国际领
先品牌）1ml z 样品：表达可溶性 His-tag 融合 thioredoxin 的
大肠杆菌 BL21 裂解液 z 结合缓冲液：10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4，
3. 操作步骤：
cytivagst亲和层析柱中文说明书
cytivagst亲和层析柱中文说明书CyTiva GST亲和层析柱是一种常用的色谱柱，用于蛋白质的纯化和分离。
亲和层析是一种基于蛋白质与特定配体之间的非共价相互作用而进行的纯化方法。
本文将详细介绍CyTiva GST亲和层析柱的原理、优点、使用方法和注意事项。
一、原理CyTiva GST亲和层析柱采用谷氨酸-S-转移酶(Glutathione-S-Transferase，GST)作为亲和配体。
GST是从谷胱甘肽(glutathione)中分离得到的一种蛋白质。
该配体与GST融合的蛋白质有很高的亲和力，可被其特异性地捕获。
在层析过程中，样品与柱填料表面的GST结合形成复合物。
通过洗脱缓冲液中pH、盐浓度或添加特定配体等的调节，使复合物分离并得到目标蛋白质。
二、优点1.高选择性：CyTiva GST亲和层析柱具有很高的选择性，可以高效地分离和纯化GST融合的目标蛋白质。
2.高纯度：层析过程中，非特异性结合蛋白质可被洗脱掉，从而得到高纯度的目标蛋白质。
三、使用方法1.准备工作：柱前洗脱，根据柱填料要求进行预处理。
2.样品处理：目标蛋白质表达并纯化后，与GST融合的载体进行融合。
此后，将样品溶液等体积注入已平衡的柱中。
3.洗脱条件的选择：根据样品的属性，选择适宜的洗脱缓冲液，进行洗脱。
可以按照pH、盐浓度、添加特定配体等来调节洗脱条件。
4.目标蛋白质洗脱：将目标蛋白质从柱中洗脱出来，收集洗脱液。
四、注意事项1.样品的处理：目标蛋白质应表达和纯化得到GST融合蛋白质。
2.柱前处理：根据柱填料的要求，进行柱前洗脱处理。
3.洗脱缓冲液的调节：根据样品的特性和所需的洗脱条件进行调节。
常用的洗脱条件包括调节pH、盐浓度、添加特定配体等。
4.洗脱收集：在洗脱过程中，及时收集洗脱液。
总结：CyTiva GST亲和层析柱是一种常用的蛋白质纯化和分离工具，基于GST与目标蛋白质的非共价相互作用。
它具有高选择性和高纯度的优点，可广泛应用于生物医药研究领域。
亲和层析原理和步骤
亲和层析原理和步骤亲和层析（affinity chromatography）是一种常用的分离和纯化靶标蛋白的方法。
它利用配体与目标蛋白的高亲和力来实现目标蛋白的选择性结合和纯化。
亲和层析的原理和步骤如下。
一、亲和层析的原理亲和层析的原理基于配体与目标蛋白之间的特异性结合。
配体是一种具有特异性反应性的化合物，可以和目标蛋白的结构域或位点发生特异性作用。
在亲和层析中，配体被固定在固定相上，也可以被连接到大分子载体上，形成亲和层析介质。
当样品通过亲和层析柱时，目标蛋白会与配体发生选择性结合，而其他非目标蛋白则不结合或弱结合，从而实现了目标蛋白的分离和纯化。
亲和层析的步骤通常包括以下几个方面：2.固定配体：将配体固定在固定相上是亲和层析的关键一步。
固定相可以是固定在柱子内壁的小分子配体，也可以是连接在大分子载体上的配体。
常用的固定剂包括琼脂糖、丙烯酰胺凝胶、硅胶等。
3.样品准备：在进行亲和层析之前，需要对样品进行准备。
通常包括细胞裂解、蛋白质提取、预处理等步骤。
样品中的废物和干扰物需要被去除，以便目标蛋白的有效分离和纯化。
4. 亲和层析操作：样品通过亲和层析柱时，目标蛋白与配体发生特异性结合。
通常需要选择适当的Buffer、pH值和盐浓度等条件来提高结合效率。
非目标蛋白会通过柱子流失，而目标蛋白则留在柱子中。
目标蛋白可以通过洗脱步骤从柱子中进行脱附。
5.洗脱与纯化：在洗脱过程中，目标蛋白从亲和层析柱中脱附。
洗脱条件需要根据结合强度和目标蛋白的特性来选择。
常用的洗脱方法包括pH值的调节、离子浓度的变化、配体浓度的变化等。
洗脱后的目标蛋白可以通过浓缩和纯化步骤得到纯品。
二、亲和层析的优缺点亲和层析作为一种分离和纯化方法，具有以下优点：1.特异性：亲和层析可以选择性地结合目标蛋白，从而实现与其他非目标蛋白的分离。
2.高纯度：亲和层析可以显著提高目标蛋白的纯度，使其达到实验或工业应用的要求。
3.选择性：亲和层析可以基于不同的配体，实现对不同蛋白的选择性结合和纯化。
亲和层析柱
亲和层析柱亲和层析柱是一种重要的分离分析器，广泛应用于药物分析、环境分析、生物分析、营养分析等领域。
目前，亲和层析技术已成为色谱分析中不可缺少的一部分。
亲和层析柱是一种特殊类型的色谱填料，采用高致密度填料，由类大分子有机物组成，能够吸附易溶物。
它主要由填料、结承元和活性室组成，填料称为亲和吸附层，结承元称为解吸层。
它是利用被分离物与填料之间的亲和力或电性复合作用，使其位移到活性室的方法，从而实现分离的一种柱色谱分析方法。
亲和层析柱有许多优点，它拥有较强的分离能力：由于它提供了强烈的亲和力，可以有效地把被分离物吸附在填料表面上，使分离更加高效。
其次，它有极高的选择性，可以实现精细的分离：由于它由各种类型的类大分子有机物组成，使它具有特异性，可以有效地把类似的物质分离开来，从而提高分离的准确度和效率。
此外，它的容量很大：由于它的色谱填料具有高致密度，因此能够吸附大量的溶解物，拥有更大的容量。
尽管亲和层析柱具有优点，但也有一些缺点，其中最大的缺点就是混合物的分离效率低：由于不同类型的溶解物之间的强烈亲和力，使得它们难以实现有效分离，因此分离效率较低。
此外，它的分析时间长：由于被分离物必须充分地附着到填料表面，因此分析时间长。
无论如何，亲和层析柱仍然是色谱分析中不可或缺的一个重要组成部分。
它仍然是药物分析、环境分析、生物分析和营养分析等领域的重要工具。
在未来，亲和层析柱将被用于更多的科学研究，以满足今天越来越高的分析要求。
总之，亲和层析柱是色谱分析中重要的一部分，它拥有较强的分离能力和极高的选择性，而且容量大，能够满足许多研究领域的分析要求。
此外，随着科学技术的不断发展，亲和层析柱将被用于更多的科学研究，以期取得更高的效率和更好的精确度。
亲和层析柱使用说明
亲和层析柱使用说明货号名称规格说明DS0101亲和层析柱1ml 含1个空管柱，上下盖和2个筛板（亲水性，孔径50um）DS0103亲和层析柱3ml DS0106亲和层析柱6ml DS0110亲和层析柱10ml DS0130亲和层析柱30ml DS0150亲和层析柱50ml一、产品说明亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。
它是利用生物分子间存在很多特异性的相互作用（如抗原和抗体、酶和底物或抑制剂、激素和受体等），通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。
本公司提供的亲和层析柱工具可应用于如下方面：①纯化重组蛋白；②纯化抗原和抗体；③纯化多肽；④纯化DNA；⑤糖蛋白的纯化；⑥纯化磷酸化蛋白和肽；⑦DNA 结合蛋白的纯化；⑧去除内毒素，等。
亲和层析柱空柱管的材质为医疗级的聚丙烯，这种工程材料通过大量的应用证明具有清洁无毒，不与生物分子结合和低溶解度的优点。
亲和层析柱空柱所用的筛板是选用纯净的UHWM-PE （超高分子量聚乙烯）为原料，经独特的工艺加工而成，具有亲水性。
筛板在装填时安置在填料基质的上下端，以阻挡昂贵的基质渗出。
亲水性筛板采用了领先的亲水性UHWM-PE 生产技术，该筛板能保证使用重力法时的流速为1-2ml/分钟或1-2滴/秒。
同时，该筛板和其它同类产品相比，不会由于亲水性基团的引入而对蛋白质产生吸附。
另外，该亲水性筛板在使用过程中不易形成气泡，气泡会使流速降低，液体通过基质不均匀。
二、产品应用1，抗体纯化纯化抗体一般用Protein A作为纯化的配体，也可以用Protein G或Protein L或异源性抗体作为配体。
2，小分子物质提取（以提取黄曲霉毒素M1为例）试样通过免疫亲和柱时,黄曲霉毒素M1被提取。
亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上,当样品通过亲和柱时,抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体一抗原复合体。
亲和柱层析操作(可溶性蛋白)
亲和柱层析操作规程（可溶性蛋白）1.装柱：1.1 取出层析柱，用去离子水冲洗干净，连接好管子后固定柱子；1.2用水冲洗层析柱3-5次，每次10ml去离子水；1.3取出填料，静止至室温后，根据需要用移液器取出3-5ml的填料进行装柱，1.4用去离子水冲洗填料5个柱体积；2.柱的平衡与上样：2.1用0.02M PB bufferA 缓冲液(PH8.0)平衡Ni柱，直至流出液的pH为8.0；2.2对处理的样品进行过滤后，缓慢上样让蛋白充分结合；3洗杂蛋白：3.1用0.02M PB bufferA 缓冲液(PH8.0)过柱，清洗没有结合到层析柱上的杂蛋白，至流出液与缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.2用含5mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含5mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.3用含10mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含10mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.4用含20mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含20mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.5用含40mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含40mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.6用含50mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含50mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.2用含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；（具体的洗脱梯度需根据实验自行调整）4解离目的蛋白：4.1用含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.2 用含200mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含200mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.3 用含500mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含500mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.4用含1000mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含1000mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul 做SDS-PAGE检测；（具体的洗脱梯度需根据实验自行调整）5.柱的清洗与保存：5.1用含500mM咪唑的缓冲液A（pH8.0）以冲洗层析柱，共冲洗30ml；5.2用浓度为1.5M的NaCl溶液冲洗层析柱，共冲洗30ml；5.3用过滤去离子水冲洗50ml；5.4用20%乙醇冲洗30ml后于4℃20%乙醇中保存。
His标签蛋白纯化亲和层析介质-纳微
His标签蛋白纯化亲和层析介质使用说明书Uni®IDA-80NiUni®NTA-80NiUni®IDA-80LUni®NTA-80L全国咨询热线：400-828-1622苏州纳微科技有限公司中文网站：English Website: /E-mail：info@公司总部地址：苏州工业园区百川街2号苏州中国通用缩略术语：280 nm：在指定波长的紫外吸收M：物质的量的浓度单位，mol/l的简写mM: 物质的量的浓度单位，mmol/l的简写BV：柱体积，bed volume的简写Mr：相对分子量MPa：兆帕斯卡Bar：压强单位，工程上“公斤力”的单位psi：压强单位，磅每平方英寸压强单位之间换算：1 MPa = 10 bar ≈ 145 psi索引目录1. 标签蛋白纯化亲和层析产品简介 (4)2. 层析纯化操作步骤 (4)2.1 层析柱装填 (4)2.2 柱效评价 (5)2.3 清洗 (5)2.4 平衡 (5)2.5 金属螯合 (5)2.6上样 (6)2.7洗脱 (6)2.8 再生 (6)2.9 在位清洗 (6)3. 储存 (7)4. 故障排除 (7)5. 订购信息 (8)1.标签蛋白纯化亲和层析产品简介重组蛋白的富集和纯化一般采用已知大小的标签，通过重组表达之后，利用标签和填料的特异性相互作用，达到分离纯化效果。
固定金属离子或金属螯合亲和层析（MAC）利用蛋白表面的某些氨基酸（如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等）和固定在层析介质上的过渡金属离子（Ni2+，Cu2+，Zn2+，Co2+，Fe3+等）以配位键结合，从而实现对不同标签蛋白质的分离。
影响蛋白质与金属离子鳌合作用大小的因素，主要是蛋白质表面可结合的氨基酸（种类、数目和分布）、金属离子的种类和密度、层析条件（pH、盐的种类和浓度、添加剂等）。
固定金属离子亲和层析介质具有吸附容量大、选择性好、分辨率高、易于再生、成本较低等优点，广泛用于生物制药和生物制品的下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化，尤其是组氨酸标记(His-Tag)蛋白质的分离纯化。
JNC Corporation Cellufine Sulfate V7_C微型柱操作说明说明书
JNC CORPORATION操作说明微型柱Cellufine Sulfate1. 简介微型柱Cellufine Sulfate 是一种用于Cellufine Sulfate 亲和层析的易用预装柱，Cellufine Sulfate 是一种亲和介质，用于病毒、病毒外壳、微生物抗原及特异性蛋白的浓缩、净化和除热原。
Cellufine Sulfate 微型柱以Cellufine Sulfate 凝胶填充。
这种凝胶基于球状纤维素珠体，使用低浓度硫酸酯进行处理。
低浓度 Sulfate 基团为凝胶提供了独特的色谱选择性，在某些情况下，这种色谱选择性类似于固定肝素。
由于Cellufine Sulfate 的排阻限较低（3 kD ），大分子主要通过填料外层吸收，缩短了吸收和解吸时间。
其优异的硬度表现提高了流速，进而缩短了处理时间。
由于热原对Cellufine Sulfate 没有亲和性，通常可以用几个柱体积的已除热纯净水对凝胶除热原。
层析柱Cellufine 微型柱由聚丙烯管和超高分子量聚乙烯筛板制成。
该类柱采用10-32UNF 螺纹连接1/16英寸外径管，可以与色谱系统连接。
表1. 微型柱Cellufine Sulfate 特征柱体积1毫升与5毫升柱规格（内径×长） 6.7 毫米×30毫米(1毫升) 14.6毫米×30毫米(5毫升) 配基 Sulfate饱和度 700微克/干 凝胶 结合载量 3毫克/毫升 粒径 约40-130微米 珠体基质 球形纤维素 压力范围0.4 MPa (4巴)建议流速 0.1 - 1.0毫升/分钟(1毫升) 0.1 - 5.0毫升/分钟(5毫升) pH 稳性 3-12存储20%乙醇，置于阴凉处2. 操作指南 常规操作（1）用吸附缓冲液平衡色谱柱（2）上样（样品应调整到吸附缓冲液的组成）（3）用数个床体积的吸附缓冲液洗涤，除去未结合物质。
（4）用解吸缓冲液洗脱结合物。
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亲和层析柱使用说明货号
名称规格说明DS0101
亲和层析柱1ml 含1个空管柱，上下盖和2个筛板（亲水性，孔径50um）
DS0103
亲和层析柱3ml DS0106
亲和层析柱6ml DS0110
亲和层析柱10ml DS0130
亲和层析柱30ml DS0150
亲和层析柱50ml 一、产品说明
亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。
它是利用生物分子间
存在很多特异性的相互作用（如抗原和抗体、酶
和底物或抑制剂、激素和受体等），通过将具有
亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质
上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另
一个分子进行分离纯化。
提供的亲和层析柱工具可应用于如下方面：
①纯化重组蛋白；②纯化抗原和抗体；③纯化多
肽；④纯化DNA；⑤糖蛋白的纯化；⑥纯化磷酸
化蛋白和肽；⑦DNA 结合蛋白的纯化；⑧去除内毒素，等。
亲和层析柱空柱管的材质为医疗级的聚丙烯，这种工程材料通过大量的应用证明具有清洁无毒，不与生物分子结合和低溶解度的优点。
亲和层析柱空柱所用的筛板是选用纯净的UHWM-PE（超高分子量聚乙烯）为原料，经独特的工艺加工而成，具有亲水性。
筛板在装填时安置在填料基质的上下端，以阻挡昂贵的基质渗出。
亲水性筛板采用了领先的亲水性UHWM-PE 生产技术，该筛板能保证使用重力法时的流速为1-2ml/分钟或1-2滴/秒。
同时，该筛板和其它同类产品相比，不会由于亲水性基团的引入而对蛋白质产生吸附。
另外，该亲水性筛板在使用过程中不易形成气泡，气泡会使流速降低，液体通过基质不均匀。
二、产品应用
1，抗体纯化
纯化抗体一般用Protein A作为纯化的配体，也可以用Protein G或Protein L或异源性抗体作为配体。
2，小分子物质提取（以提取黄曲霉毒素M1为例）
试样通过免疫亲和柱时,黄曲霉毒素M1被提取。
亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上,当样品通过亲和柱时,抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体一抗原复合体。
用水洗柱除去柱内杂质,然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1,收集洗脱液。
用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M1含量。
3，重组蛋白纯化
近年来，随着生物技术，特别是基因工程技术的迅猛发展，重组蛋白表达和纯化越来越容易。
常用的重组蛋白表达策略是把蛋白与亲和标签融合表达，利用亲和标签一步纯化出目标蛋白。
此方法无需了解蛋白质的生化特性或生理活性，就可通过带标签的重组融合蛋白选择性地与层析基质上的配体结合，从而得以纯化任何蛋白质。
此方法与常规的层析方法不同之处在于，无需针对不同的蛋白质开发特定的配体和方法。
采用保护蛋白质结构和功能完整性的温和条件，可一步亲和层析从粗提物中纯化出重组蛋白，纯度可达90％以上。
亲和标签已成为后基因组学时代纯化重组蛋白常用手段。
亲和标签系统一般具有以下特征：(a)一步的吸附纯化；(b)对三级结构和生物活性影响小；(c)可方便且专一的去除以产生天然蛋白质；(d)在纯化过程中重组蛋白的分析简便准确；(e)适用于大量的不同蛋白质。
但是没有哪个标签是完美的，只能根据实际需要去自己筛选，下表是分的标签以及纯化的方案。
三、装柱步骤：
1，装下筛板
把筛板浸泡于水中，用超声或振荡赶掉筛板空隙中的空气，备
用。
用装柱工具把筛板顶入柱体，再用装柱工具把筛板平推到柱体
底部。
2，加装填料
将填料和适量的缓冲液加入小烧杯中，制成混悬液。
盖上柱体
的下盖，用吸管取混悬液加入柱体中，当混悬液体积多于柱体体积时，取掉下盖放掉部分缓冲液，静置使填料沉到柱体底部。
3，装上筛板
保持柱体垂直，用装柱工具把筛板顶入柱体，再用装柱工具把筛板平推到填料上表面，盖上上盖。
注意：某些应用需要在填料上表面和上筛板之间留适当空隙。