遗传育种技术

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2. 花粉生活力试验：花粉发芽法和染色法 ① 染色法 I. 过氧化物酶测定法
原理： 具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利用过氧
化物使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知 花粉有无活力。
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2. 花粉生活力试验：花粉发芽法和染色法 ① 染色法 II. 碘-碘化钾染色法
2. 杂交技术 ① 亲本植株和授粉花枝的选择和处理
I. 树龄最好10～15年生，发育良好， II. 在生长期内新梢长度能达50～60厘米，叶片健康无病虫害 III. 最好选用长果枝上的花，其次是中果枝，多复芽而充实的
枝条座果好，着生在树冠中部和上部的花比在树冠内部和 下部的花可靠而又座果好，一般以在长果枝上杂交4～5朵 花能结2～3个果为原则，中果枝上杂交3～4朵花 IV. 杂交用花最好在枝条上有一定间隔，同一枝上不作杂交的 花应该除去。
从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到 品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的 发芽率都很低。因此不适宜做授粉品种。
本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的 方法。
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二．材料及用具 材料：桃或苹果树的花粉。 用具：显微镜、天百度文库、盖玻片、凹式载玻片、培养皿、
原理： 正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。据此，可
用化学物质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花 粉生活力的差别。通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良 畸形花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。
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2. 花粉生活力试验：花粉发芽法和染色法 ① 染色法 III.氯化三苯基四氮唑（TTC）法
III.套袋最好采用“袖筒式”套在整个果枝的中央，袖筒大小 为27.5厘米×9.0厘米，1张报纸做8个袋，也有单个花朵用 一个纸袋的。
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27.5cm 9cm
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2. 杂交技术 ③ 花粉的采集和保存
I. 采集父本花粉的花朵应在花蕾期，花将开放而花粉尚未从 花药撒出时摘去花朵，
干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼 脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。 三．实验内容及方法 1. 花粉贮藏： 2. 花粉生活力试验：
1. 花粉贮藏：
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① 管口塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。 ② 花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低
的条件下（一般0～40%）保存 ③ 为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗
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一．目的和要求 在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生
活力。花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期 不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长 时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力， 以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
验是通过品种间杂交的实际操作，掌握果树的有性杂交技术。 二．材料及用具
材料：桃。 用具：镊子、小剪刀、纸牌、透明纸袋、授粉器或毛笔、 细棉纱线或回形针、干燥器、指形管、棉花、酒精（70%）、 红漆。
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三．有性杂交技术——桃树的杂交
1. 桃的花器结构及开花习性 通常花萼5枚，花瓣5枚，雌蕊1
枚，雄蕊多数成三轮着生，花梗很 短，花托成杯状，花萼、花瓣及雄 蕊着生于花托上，雌蕊与雄蕊的长 短依品种而不同，桃花芽为纯花芽， 着生在一年生新梢上。
一般3月下旬至4月上开花，在一株树上开花初期到盛花期大 致经过5～7天，这是授粉的最适时期。
桃的绝大多数品种是自花能实，因此，在杂交前必须去雄。
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三．实验步骤 （一）多倍体植物诱导
1. 把玉米2n=20（或大麦2n=18、水稻2n=24）种子浸在0.1% 秋水仙素溶液24小时。
2. 用自来水冲洗2—3次。 3. 将萌发种子移到盛有0.025%秋水仙素溶液润湿了吸水纸
的培养皿里。 4. 置入20℃培养箱，培养发芽。 5. 48小时后取出幼苗。 6. 用自来水缓缓冲洗幼苗。 7. 把处理后的幼苗栽种在大田或盆钵内。 8. 同期播种未经处理的玉米种子作为对照。 9. 田间给以良好管理。
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三．实验步骤 (二)多倍体植物鉴定 1. 观察四倍体玉米、二倍体玉米表皮细胞气孔的大小 （1）在四倍体玉米叶的背面中部划一切口，用尖头镊子
夹住切口部分，撕下一薄层下表皮，放 载玻片的水滴里，铺 平，盖上盖玻片，制成表皮装片。
（2）按上述同样方法制作一张二倍体玉米的表皮装片， 作为对照。
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2. 杂交技术 ② 去雄与套袋
I. 去雄通常在开花前1～2天，即花苞达最大而花瓣尚未裂开 时进行。如花蕾内有虫或个别花药已裂，则应去除不用。
II. 为避免去雄后的花朵天然杂交，在去雄后应立即套袋隔离， 袋内要留有适当空隙，使花朵生长良好，袋自上而下套入， 袋口用曲别针或细麻线缝在结果枝上，并挂上纸牌。
的地方贮藏。
2. 花粉生活力试验：花粉发芽法和染色法 ① 花粉发芽法 I. 培养基的制作与接种
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A. 5～20%蔗糖（葡萄糖）、1～2%琼脂、蒸馏水。加热煮沸 B. 约40℃温度不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内 C. 接种针（解剖针）沾少量花粉。轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养
II. 授粉时，首先将套的袋解开，用授粉器沾花粉在柱头涂之， 授粉完毕立即套袋隔离，以免其它花粉落入。
⑤ 去袋 授粉后雌蕊柱头凋萎，花瓣谢落，子房开始膨大时（7～10天
后），除去纸袋，以使幼果充分发育。
2. 杂交后的记载和管理
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表1-1 有性杂交结果记载表
第一次检查
第二次检查
果实采收
（3）镜检比较四倍体与二倍体气孔和保卫细胞的大小， 用测微尺测量记载其大小。
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三．实验步骤 (二)多倍体植物鉴定 2. 观察比较四倍体玉米、二倍体玉米花粉粒的大小 （1）从四倍体、二倍体玉米植株上分别采集花粉。 （2）将采集到的花粉分别浸入45%冰醋酸。 （3）用滴管分另各取一滴花粉粒悬浮液，移到载玻片上。 （4）滴上碘化钾溶液，盖上盖片，制成花粉粒制片。 （5）镜检四倍体及二倍体玉米花粉粒大小。 （6）用测微尺测定并记载其大小。
基上，
D. 载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上， E. 贴上标签写明处理、种类、播种日期 F. 培养皿放于20℃的恒温箱中培养。
2. 花粉生活力试验：花粉发芽法和染色法
① 花粉发芽法 II. 观察记数
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在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小 时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上）若发现花粉已发芽 时，便按一定方向，就同一视野中用记数器记录花粉粒总数和发 芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，求其平均数，即得出 花粉发芽百分率。花粉发芽的标准，以花粉管伸长超出花粉直径 为准。
原理： 凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有氧化还原反
应，而无生活力的花粉则无此反应，因此当TTC渗入有生活力的 花粉时，花粉中的脱氢酶在催化去氢过程中与TTC结合，使无色 的TTC变成三苯基甲（TTF）而呈红色。
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一．目的和要求 果树有性杂交是创造果树新类型的主要方法之一，本实
编 号
组 合
去 雄 期
授 粉 期
授
粉
花
数
日期 幼果数 日期 果实数
结果数占授 粉花数（%）
日期
果数
结果数占授 粉花数（%）
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一．目的和要求 1. 了解人工诱发多倍体植物的原理、方法及其在植物育种
上的意义。 2. 观察多倍体植物，鉴别植物染色体数目的变化及引起植
物其它器官的变异。 二．材料材料 1. 玉米（2n=20）、水稻（2n=24）的种子。 2. 人工诱发的四倍体玉米和二倍体玉米的果穗、玉米粒、
II. 带入室内在光滑的纸上挑出花药，当气温升高花粉撒出时 采集在花粉瓶内，并写明品种及采集期。
III.花粉瓶放在干燥器内备用。为加速花药开裂，可将花药置 于培养皿内，直接放入干燥器。
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2. 杂交技术 ④ 授粉
I. 通常在去雄后1～2日雌蕊成熟期授粉，授粉最适宜时间在 上午9～11时进行。
花粉、叶片。 3. 洋葱或大蒜球茎。
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三．实验器具和药品 1. 用具：显微镜，载玻片，盖玻片，培养皿，镊子，刀片，
滴管，吸水纸，测微尺。 2. 药品：0.1%和0.025%秋水仙素溶液，1mol/L HCL溶液，改
良石碳酸品红溶液（配方：见实验指导材料电子版）。 四．实验说明
见实验指导材料电子版