生化检验项目校准
生化检验项目校准—盐城市第一人民医院左月媛
可将校准品作为控制品分析，每日测量2次，共10日，绘制
控制图；如需要我室可以做，但有的项目每天都校准怎么做？ 质控靶值变化大于1.0的SD，可认为有统计显著差异，并必
须对校准品值是否真正正确做出决定。？
校准过程需要讨论的其他问题
试剂因素 应该维持在日常工作状态这样才 能与患者样本同步
贮存稳定性„有效期标准， --10% ？ ‟ 开瓶稳定性„标准， K值cv±2% ？ ！ ‟ 新旧混合使用 不同批号使用
系统，有助于开放系统对测试结果进行追
溯，保证测试结果的准确和可靠。
校准品的浓度 ——校准需哪几个浓度水平？
ISO 11095:1996标准——3个（对于初次校准应该增加校准水平的数量） EURACHEM “分析方法的目标适用性”指南——包括空白至少6个浓度水平 Commission Decision 2002/657/EC规定：包括零浓度至少5个浓度水平 ISO 15302:2007标准规定了4个校准水平 LGC/VAM “校准曲线的制备” 指南规定7个校准水平（包括空白） ISO 8466-1:1990甚至要求10个浓度水平
115(89U/L)
总
4942.04
4983.12
17
354
ALP不同批号校准品
校准品批号 111(109U/L) 112(206U/L) 113(205U/L) 114(216U/L) 115(212U/L) 总 均值 5446.9 5477.8 5398.1 5836.0 5631.2 5545.7 次数 171 89 55 102 17 434 CV 5.13 4.05 2.89 3.97 4.21 3.21
生化检验项目校准
盐城市第一人民医院
2012.12
生化项目校准记录表模板
以下是一个简单的生化项目校准记录表模板。
请注意，这只是一个示例，实际使用时可
说明：
•序号：校准项目的序号。
•校准项目：具体的校准项目名称。
•校准标准值：该项目应有的标准值。
•实际测量值：实际测量得到的结果。
•相对误差：实际测量值与标准值之间的误差，计算方式为(实际测量值 - 标准值) / 标准值 * 100%。
•判定结果：根据相对误差判定校准结果是否合格，例如"合格"、"不合格"、"需复检" 等。
使用时，根据具体的校准项目，填写相应的标准值、实际测量值和判定结果。
如有需要，还可以增加其他相关字段，如校准日期、校准人员、设备型号等。
生化分析仪校准的标准操作程序
SOP_03-3 生化分析仪校准的标准操作程序一、目的：确保仪器正常运转与结果的准确性，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：生化检验项目的校准。
三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：一个实验室测定结果的可靠性是由其精密度、准确性及可比性所决定的，一般必需从下面几方面着手：(1)选好测定方法；(2)质量过硬的试剂盒；(3)质优的测试仪器；(4)进行正确的校准；(5)规范化操作；(6)室内质量控制；(7)室间质评活动；(8)一支素质高的队伍。
1 校准：1.1 生化分析仪不论如何先进，它还是一个比较器，它测试出来的标本结果是随着标准限的设置不同而变化的。
所以，在卫生部临床检验中心拟定的“临床实验室(定量测定)室内质控工作指南”中明确指出“对测定标本的仪器一定要求进行校准，校准时要选择合适的(配套的)标准品／校准品；如有可能，校准品应能溯源到参考方法或／和参考物质；对不同的分析项目要根据其特性确立各自的校准频率。
”这说明校准仪器是室内质控的重要部分，强调了校准工作的必要性和重要性，同时指出了校准的方法和要求。
1.2 对于一个临床检测项目，如果所用方法的测定原理、试剂、仪器、校准品中任何一个不同，都可能得到不同的测定结果。
因此，想要得到准确可靠的测定结果，而该结果又具有与国际、国内其他实验室的可比性，应该建立一个标准测定系统。
在全自动生化分析仪上使用配套的试剂和标准品。
各仪器厂家均有自己的标准测定系统。
对于校准品不能乱用，如绝对不能用贝克曼的校准品校准日立生化仪，同样也不能用宝灵曼的校准品去校准贝克曼生化仪。
2 校准品(Calibration materials)：校准品含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法及试剂、仪器是相关联的。
校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差。
因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差。
3 质控品(Control materials)：质控品只用于和待测标本同时测定的，为了控制标本的测定误差，因此要求保存时间十分稳定。
生化检验项目校准知识分享
冰冻产品的处理步骤：从-70℃或-20℃冰箱中取出 样本，置室温（18-25）℃下平衡，使之完全融化 ，温和混匀。
冻干产品的复溶步骤： 从冰箱中取出样本，置室 温（18-25）℃下平衡，并放置在水平桌面上，轻 拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部，小 心拔开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确 加入规定体积的去离子水，压胶塞到原位后置室温 下使之完全溶解，温和混匀。
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logit-log4p对数函数法中的一种，适用于浓度升 高而吸光度表现为收束的工作曲线。
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样条函数法（spline）：是将每一标准液测定的 吸光度连接起来（点对点），形成一个完整曲线 ，即为曲线拟合。该曲线拟合优于折线法校准。
，出现“校准失败”的报警。 试剂参数为：Primary wavelength：340nm；
Secondary wavelength：700nm； Main read time：31-33； Blank read time：26-28； Sample volume：10ul； R1 reagent volume：185ul； R2 reagent volume：50ul； Calibration method：Spline； 校准品个数设置：3；
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三、处理： 1. 分别对10umol/L、33umol/L的校准品进行对倍
稀释，得到5umol/L、16.5umol/L浓度的校准； 2. 把参数中校准品个数修改为：5； 3. 浓度设置修改为0、5、10、16.5、33umol/L。 4. 仍采用Spline定标模式重新进行校准，后校准
生化校准程序
一、仪器校准序1.1 仪器光路系统经过大型保养或仪器更换重要部件。
1.2 挪动仪器的安装地点。
1.3 更换不同品牌的试剂。
1.4 更换试剂批号。
1.5 室内质控失控。
二、校准物的准备2.1 尽量购买仪器和试剂配套的校准物。
若厂家无配套校准物，可以购买一种质量好、有效期长的冻质控品，通过比对实验确定质控品的靶值来作为仪器校准品的浓度值。
校准物要按厂家的要求进行保存。
使用校准物见后表。
2.2 在进行校准前，按厂家要求复溶冻干品。
如果一次用不完，可以分装成小瓶，放-20℃冻存，以后每次复溶一瓶。
分装冷冻保存的校准品尽量在两周类使用。
三、校准参数设置3.1 在编辑各项目的参数是，已经在Utilitv-Application-Calib 菜单中定义好了定标类型和几点定标。
因此在对个项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。
3.2进入Calibration-Status菜单，用鼠标选择P1或P2模块上需要定标的项目，根据需要点单点定标（BLANK键）或（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），在选择其他项目进行相应选择，最后点SAEVE，将定标品放入在Calibration-Calibrator中定义好的位置（定义位置见后表），点Start,再点Start，仪器开始定标。
3.3在Calibration-Status菜单中看定标结果，点Calibration-Result键看定标结果点Reaction Monitor键看每个定标品的反应曲线。
点Reaction Information查看定标信息。
四、校准的有效性检查通过测定室内质控来判断和分析校准结果是否有效。
如果室内结果在控（要求在2SD）内，说明校准成功。
否则，必需分析原因。
五、校准失败的处理首先分析、确认并记录校准失败原因，按下列步骤排除异常情况后，再校准。
a)检查试剂：试剂状态（颜色、沉淀物等）、批号、有效期、保存条件等；b)室内质控物：复溶状态、保存时间、保存条件及有效期等；c)校准品：复溶状态、保存时间、保存条件及有效期等；d)仪器原因：光路（灯泡寿命）比色杯、水浴池以及保养情况，必要时联系厂家进行仪器维护保养。
浅析全自动生化分析仪校准的意义
浅析全自动生化分析仪校准的意义摘要：JJF1720-2018《全自动生化分析仪校准规范》解决了全自动生化分析仪在使用过程中的量值溯源问题，对全自动生化分析仪进行校准，是其本身结构原理决定了吸光度会有存在差异，对其这种差异进行校准并赋予测量结果不确定度，有助于全自动生化分析仪量值的准确。
1 校准的重要性和必要性首先必须明确生化分析仪不论如何先进，它还是一个仪器，它测试出来的标本结果是随着标准限的设置不同而变化的。
对于一个临床检测项目，如果所用方法的测定原理、试剂、仪器、校准品中任何一个不同，都可能得到不同的测定结果。
全自动生化分析仪测定系统包括测定原理、试剂、仪器、校准品四要素。
如果我们想要得到准确可靠的测定结果，就必须对生化分析仪的计量性能进行校准，国家市场监管总局颁布实施的JJF1720-2018《全自动生化分析仪校准规范》就是为了解决全自动生化分析仪在使用过程中的量值溯源问题。
2 全自动生化分析仪概述全自动生化分析仪是根据光电比色原理来测量体液中某种特定化学成分的仪器。
由于其测量速度快、准确性高、消耗试剂量小，现已在各级医院、防疫站、计划生育服务站得到广泛使用。
配合使用可大大提高常规生化检验的效率及收益。
3全自动生化分析仪原理3.1全自动生化分析仪的光学原理光学系统：是ACA的关键部分。
老式的ACA系统采用卤钨灯、透镜、滤色片、光电池组件。
新式ACA系统光学部分有很大的改进，ACA的分光系统因其光位置不同有前分光和后分光之分，先进的光学组件在光源与比色杯之间使用了一组透镜，将原始光源灯投射出的光通过比色杯将光束变成光速（这与传统的契型光束不同），这样，即使比色杯再小，点光束也能通过。
与传统方法相比，能节约试剂消耗40-60%。
点光束通过比色杯后，在经这一组还原透镜（广差纠正系统），将点光束还原成原始光束，在经光栅分成固定的若干种波长（约10种以上波长）。
采用光/数码信号直接转换技术即将光路中的光信号直接变成数码信号。
生化检验项目校准
0 umol/L
umol/L 33 umol/L
• 如果测量方法的反应信号与被测量浓度不成线性反应（如免 疫分析方法），则应选用非线性校准模式，需涉及3至6个校 准品，采用曲线拟合、多项式、对数等方式建立非线性函数。
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K因子法（+ -）： 理论k值：根据理论摩尔消光系数来计算。通常试剂生产厂家给出的 k值都属于。 实测K值：是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置K值 校准k值：是根据仪器当前的实际状态，试剂的稳定性等通过校准品 校准后得到的K值。
冰冻产品的处理步骤：从-70℃或-20℃冰箱中取出样本，置室温 （18-25）℃下平衡，使之完全融化，温和混匀。
冻干产品的复溶步骤： 从冰箱中取出样本，置室温（18-25）℃下 平衡，并放置在水平桌面上，轻拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该 小瓶底部，小心拔开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确加入 规定体积的去离子水，压胶塞到原位后置室温下使之完全溶解，温和 混匀。 应按厂家提供说明书操作。
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校准品浓度水平及个数选择 • 校准至少包含你需要报告结果的内容/范围。 • 校准范围也定义为分析方法的工作范围。 • 个数要与仪器要求相匹配
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案例分析
一、现象： 某品牌HCY试剂（仪器：雅培 C8000），校准无法通过，出现“校准失败”
K因数法适用的分析方法有一点终点法，两点终点法，两点速率 法，多点速率法。
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线性校准（Linear）：其反应为线性（直线），一般只需一个 校准品进行校准。
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小心生化项目“单点定标”作校准有误区
目前我国县级以上包括县医院均配置有全自动生化分析仪，甚至沿海县区的中心卫生院也配备了，绝大部分为自建检测系统。
问及校准他们会拿出来的是K值记录，问及K值怎么得来的？都说用一个校准品的标示值来定标，K值自动显示。
把一点定标作为校准对待，这样做对吗？另一方面，使用校准品也有问题，这些都值得深思。
一、校准与定标有无区别？校准与定标均来自英文“Calibrate”一词，似乎没有什么区别。
让我们首先复习一下校准的定义和内涵。
我们查阅和温习了《临床实验室质量控制（QC）》的要求，上面对“校准”是这样描述的：“在一定条件下的一系列操作来确定检测仪器和检测系统所指示的量值，或者某一物质，或者参考物质代表的值，与相应标准所认识量之间的关系。
”接下来必需做“校准验证”，“就是要求按标本方式对校准品进步分析，以检查并证实仪器、试剂盒或检验系统的检验结果在规定的报告范围内保持稳定。
”这才是规范化的校准过程。
同时文件指出自己建立的检测系统必须建立校准方法：①选择合适的校（标）准品，包括校（标）准品的数目、类型和浓度；②如有可能，校（标）准品应溯源到参考方法和或参考物质；③确定校准的频度。
同时建立校准验证方法：①如有可能，方法应追溯到参考方法或己知值的参考品；②确定校（标）准品的数目类型和浓度，校准验证的接受限，以及校准验证的频度；③确定检验诘的报告范围，确定时必须包括一个最小值，中间值和此范围的上限的最大值。
同时还规定六个月以及有下列情况发生时，进行一次校验，如仪器或检测系统进行过一次大的预防性维护或者更换了重要部件；质控反映出异常趋势或偏移，或者超出了实验室规定的接受限，采取一般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时。
最后特别强调所有进行过的校准和校准验证工作时必须记录并写成文件。
冯仁丰教授在《CLIA’88更新规则介绍》报告中也论及校准和校准验证(确认)：“要求校准的项目，你必须继续按照厂商要求，进行校准和校准确认(验证)。
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冰冻产品的处理步骤：从-70℃或-20℃冰箱中取出 样本，置室温（18-25）℃下平衡，使之完全融化 ，温和混匀。 冻干产品的复溶步骤： 从冰箱中取出样本，置室 温（18-25）℃下平衡，并放置在水平桌面上，轻 拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部，小 心拔开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确 加入规定体积的去离子水，压胶塞到原位后置室温 下使之完全溶解，温和混匀。 应按厂家提供说明书操作。
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校准后的验证
•校准后用校准品当样本进行测试，看其值与定值 之间的差异 •测定室内质控，看结果是否在控。 •参加室间质评或返测已知浓度的室间质评样本。
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•记录每次校准结果，与之前的校正结果进行比较。
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校准：在规定条件下，为确定测量仪器(或 测量系统)所指示的量值，或实物量具(或参考 物质)所代表的值，与对应的由标准所复现的量 值之间关系的一组操作。
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仪器的性能验证：
• • • • • • • • • 零点漂移 波长准确度及重复性 杂散光 吸光度正确度 吸光度重复性 吸光度线性误差 交叉污染率 温度正确度 比色杯间差距
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三、处理： 1. 分别对10umol/L、33umol/L的校准品进行对倍 稀释，得到5umol/L、16.5umol/L浓度的校准； 2. 把参数中校准品个数修改为：5； 3. 浓度设置修改为0、5、10、16.5、33umol/L。 4. 仍采用Spline定标模式重新进行校准，后校准 顺利通过，结果如下：
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线性校准（Linear）：其反应为线性（直线） ，一般只需一个校准品进行校准。
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非线性法：又称非直线性校准法 非线性法包 括logit-log法、指数函数法、样条函数法等 方法 Logit-log3p对数函数法中的一种，适用于浓 度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。P表 示参数之意，由3个参数（S1Abs、k、a）参与 计算。S1Abs表示试剂空白，K表示校准所得斜 率，a表示近似常数。
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5.不同的仪器，在做非线性校准时所要求的校准品 个数是不同的。 例如： ① 日立、奥林巴斯等仪器，要求至少带三个浓度的 校准品即可进行非线性拟合； ② 贝克曼、东芝等仪器，则要求至少带四个浓度的 校准品才进行非线性拟合。 五、总结： 我们在进行新项目实验前，除了选择正确的校 准模式外，还要根据该仪器的性能特点，选择符合 要求的校准品个数，以保证实验的顺利进行。
校准品：含有已知量的欲测物，用以校准该测定 方法的数值，它与该方法、试剂、仪器是相关联 的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂 等造成的系统性误差。
最好为人血清基质，减少基质效应 仪器、试剂、校准品的配套性 如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质 要有明确的不确定度
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• 问题讨论
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校准方法的选择
线性 非线 性
• 线性校准方法需选用1个或多个已知浓度的标准物 质或校准品，1点线性校准通常被定义为K因子校 准，仅空白溶液用于校准；在生化分析仪上最常 用的2点线性校准等同于分析化学中的外标2点法， 需使用空白溶液和1个已知浓度的校准品。
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二、了解情况： 查看校准结果，发现其每个浓度的吸光度实 际在该仪器上已做出测定，分别为：0：-0.0027 10：-0.0344 33：-0.0738，但参与最终结果 计算的Cal Factor（校准因数）却显示为0，说 明该仪器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合 ，故出现“校准失败”报警。
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•logit-logXp与样条函数法
•抛物线型(左下图)，则多考虑用logic方法拟合。 •曲线类型不确定时，或校准曲线类型如图12-37所示 的S型非线性校准类型，则多考虑Splain方法拟合。
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校准品的选择及准备
问题讨论
• 定值质控品是否可以替代校准品？ • 空白校准的选择？ • K值究竟该选择理论、实测、校准K值？ • 零度水平是否均可以用水来代替？（LPa） • 校准品的保存与使用？ • 室内质控失控是否都应进行校准纠正？ • 不同批号的校准品使用和对k值的影响？ • 校准品是否可以通用于各仪器和方法，测量次 数？
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校准频率的选择
理想状况下进行每批次检测前都应进行 试剂改变了种类或更换了批号 仪器进行了大的维护维修或更换了重要的配件， 如光源灯、滤光片等 室内质控出现了趋势性变化或飘移（系统性误 差）；或者超出了实验室规定接受限，采取了一 般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时 厂家试剂有明确校准时限规定的
检测项目校准
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校准目的是准确度的传递
一级标准品 决定性方法
参考方法
溯 源 二级标准品 厂家方法 校 准 品
校 准
常规分析
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项目校准主要涉及内容
• 校准方法的选择
• 校准品的选择及准备
• 校准频率的选择
• 校准后的验证
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logit-log4p对数函数法中的一种，适用于浓度升 高而吸光度表现为收束的工作曲线。
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样条函数法（spline）：是将每一标准液测定的 吸光度连接起来（点对点），形成一个完整曲线 ，即为曲线拟合。该曲线拟合优于折线法校准。
• 如果测量方法的反应信号与被测量浓度不成线性反 应（如免疫分析方法），则应选用非线性校准模式， 需涉及3至6个校准品，采用曲线拟合、多项式、对 数等方式建立非HOSPITAL
K因子法（+ -）： 理论k值：根据理论摩尔消光系数来计算。通常试 剂生产厂家给出的k值都属于。 实测K值：是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置K 值 校准k值：是根据仪器当前的实际状态，试剂的稳 定性等通过校准品校准后得到的K值。 K因数法适用的分析方法有一点终点法，两点 终点法，两点速率法，多点速率法。
0 umol/L 5 umol/L 10 umol/L
Cal Factor 吸光度
-87.2
-0.0032 -0.0195
-213.5
-0.0366
16.5 umol/L -279.6 -0.0558
33 umol/L
-365.3
-0.0744
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5、之后校准显示通过，质控在控，证明校准成功 四、分析： 1. 全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或 非线性的选择。当我们对其进行设置时，会根据 试剂盒的反应原理选择合适的校准模式。 2. 通常情况下，常规的生化项目我们会选择线性模 式校准，而免疫比浊项目我们会选择非线性模式 校准。 3. 若选择线性校准，往往我们只需带一个校准品进 行两点校准即可。 4. 若选择非线性校准时，我们会带多个浓度校准品 进行多点校准。
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校准品浓度水平及个数选择 • 校准至少包含你需要报告结果的内容/范围。 • 校准范围也定义为分析方法的工作范围。 • 个数要与仪器要求相匹配
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案例分析
一、现象： 某品牌HCY试剂（仪器：雅培 C8000），校准无法通过 ，出现“校准失败”的报警。 试剂参数为：Primary wavelength：340nm； Secondary wavelength：700nm； Main read time：31-33； Blank read time：26-28； Sample volume：10ul； R1 reagent volume：185ul； R2 reagent volume：50ul； Calibration method：Spline； 校准品个数设置：3； 浓度分别设置为：0、10、33umol/L。
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