总胆红素测定试剂盒(重氮法)
总胆红素(TBIL)测定试剂盒(重氮法)产品技术要求百奥泰康
总胆红素（TBIL）测定试剂盒（重氮法）适用范围：该试剂盒用于体外定量测定人血清中总胆红素的浓度。
1.1 产品规格1.2 组成成分该试剂盒由试剂1（R1）、试剂2（R2）和校准品（选配）组成。
1.2.1试剂组成试剂1: 对氨基苯磺酸≥10.0mmol/L 十六烷基三甲基溴化铵≥5.0mmol/L试剂2: 亚硝酸钠≥1.0mmol/L 1.2.2 校准品组成牛血清总胆红素目标浓度：200μmol/L该校准品为牛血清基质冻干品2.1 外观a) R1应为无色溶液，无混浊，无未溶解物。
b) R2应为无色溶液，无混浊，无未溶解物。
c) 校准品应为白色至淡黄色固体。
2.2 净含量液体组分不少于标示值。
2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度应不大于0.050。
2.4 分析灵敏度TBIL试剂盒测定浓度100.0μmol/L的被测物时，吸光度差值（ΔA）应不小于0.050。
2.5 准确度用纯品测定回收率，应在85%-115%之间。
2.6 精密度2.6.1重复性变异系数应不大于5%。
2.6.2批间差批间相对极差（R）应不大于10%。
2.6.3校准品批内瓶间差测试校准品，所得结果的批内瓶间差应不大于5%。
2.7 线性在（0,427.0]μmol/L范围内，TBIL试剂盒的线性相关系数r应不低于0.9900；在（0,50.0]范围内绝对偏差应不超过5.0μmol/L，在(50.0,427.0]范围内相对偏差应不超过±10%。
2.8校准品溯源性依据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供总胆红素校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容。
校准品溯源至国家参考物质GBW(E)090002。
2.9稳定性2.9.1校准品复溶稳定性校准品复溶后，在2℃～8℃密封保存24小时，测试试剂盒准确度，应符合2.5的要求。
2.9.2 试剂盒稳定性原包装的TBIL试剂盒在2℃～8℃避光保存，有效期为18个月。
总胆红素(TBIL)测定试剂盒(重氮盐法)产品技术要求lideman
总胆红素(TBIL)测定试剂盒(重氮盐法)适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中总胆红素的含量。
1.1规格试剂1(R1)：4×80mL，试剂2(R2)：1×16mL；试剂1(R1)：5×60mL，试剂2(R2)：1×16mL；试剂1(R1)：3×40mL，试剂2(R2)：1× 6mL；试剂1(R1): 4×80mL，试剂2(R2)：4×16mL；试剂1(R1)：5×60mL，试剂2(R2)：5×12mL；试剂1(R1)：4×80mL，试剂2(R2)：4×20mL；试剂1(R1)：4×60mL，试剂2(R2)：4×20mL；试剂1(R1)：5×60mL，试剂2(R2)：5×15mL；试剂1(R1)：1×20mL，试剂2(R2)：1×3mL。
1.2 组成表1 试剂组成2.1 外观液体双试剂：试剂1(R1)为无色澄清液体，试剂2（R2）为无色澄清液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 空白吸光度在37℃、（546 nm±10%范围内的）波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应<0.1 ABS。
2.4 分析灵敏度浓度为84.9μmol/L时，吸光度变化范围在(0.2-0.5)之间。
2.5 线性范围在[0 -340]μmol/L线性范围内，线性相关系数r2 ≥0.996。
在（100–340]μmol/L范围内的相对偏差≤10%；测定结果[0-100]μmol/L时绝对偏差≤10μmol/L。
2.6 精密度试剂盒测试项目精密度 CV< 6%。
2.7 批间差不同批号之间测定结果的相对极差应< 10%。
2.8 准确度相对偏差：用参考物质配制一定浓度的溶液作为样本进行检测，其测量结果在（100–340]μmol/L范围内的相对偏差≤10%,在[0-100]μmol/L范围内的绝对偏差≤10μmol/L。
总结总直接胆红素的检测方法
血清总胆红素和直接（结合）胆红素测定目前测定血清胆红素的方法主要有重氮试剂法（包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法和2，5二氯苯重氮四氟硼酸盐法等）、胆红素氧化酶法、钒酸盐氧化法、高效液相色谱法、导数分光光度法、经皮胆红素测定法以及直接分光光度法等。
改良咖啡因（J-G）法：一、实验原理血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成紫色的偶氮胆红素；在同样条件下，未结合胆红素须有加速剂破坏胆红素氢键后才能与重氮试剂反应。
咖啡因、苯甲酸钠作为加速剂，醋酸钠缓冲液可维持反应的PH值同时兼有加速作用。
叠氮钠破坏剩余重氮试剂，终止结合胆红素测定管的偶氮反应。
最后加入碱性酒石酸钠，在碱性条件下，紫色偶氮胆红素转变为蓝色偶氮胆红素，使最大吸光度由530nm转移到598nm，此时，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度可忽略不计，使测定的灵敏度和特异性增加。
最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
二、实验方法（一）器材试管，刻度吸管，分光光度计，37℃水浴箱。
（二）试剂1．咖啡因-苯甲酸钠试剂无水醋酸钠41g，苯甲酸钠37.5g，乙二胺四乙酸二钠EDTANa2 0.5g，溶于约500mL 的蒸馏水中，再加入咖啡因25g，搅拌至完全溶解(不可加热)，然后加蒸馏水稀释至1000mL，混匀，过滤后放置棕色试剂瓶中，室温保存可稳定6个月。
2. 5g/L 亚硝酸钠溶液：亚硝酸钠5.0g，加蒸馏水溶解并稀释至100mL，若发现溶液呈淡黄色时，应丢弃重配。
3. 5g/L 对氨基苯磺酸溶液：对氨基苯磺酸（NH2C6H4SO3H·H20）5.0g，加于约800mL 蒸馏水中，加浓盐酸15mL，待完全溶解后，加蒸馏水至1000mL。
4. 重氮试剂临用前，取5g/L 亚硝酸钠溶液（试剂2）0.5mL 与5g/L 对氨基苯磺酸溶液（试剂3）20mL 混合。
5. 5g/L 叠氮钠溶液：叠氮钠0.5g，用蒸馏水溶解并稀释至100mL。
总胆红素测定试剂盒(重氮盐法)产品技术要求lepu
总胆红素测定试剂盒(重氮盐法)适用范围：用于体外定量测定人血清中总胆红素的浓度。
1.1 规格试剂1:1×60 mL，试剂2:1×20 mL；试剂1:1×60 mL，试剂2:1×15 mL；试剂1:1×60 mL，试剂2:1×12 mL；试剂1:4×60 mL，试剂2:4×15 mL；试剂1:2×40 mL，试剂2:2×10 mL；试剂1:3×28 mL，试剂2:3×7 mL；试剂1:1×4L，试剂2:1×1L；试剂1:2×4L，试剂2:1×2L。
1.2主要组成成分试剂1主要组分：试剂2主要组分：2.1 净含量应不低于试剂瓶标示装量。
2.2 外观试剂1为无色或浅色澄清液体，试剂2为无色或浅色澄清液体。
外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。
2.3 试剂空白在546nm处测定试剂空白吸光度，应≤1.0。
4.4 分析灵敏度测试100umol/L的被测物时，吸光度变化（ΔA）应不低于0.01。
2.5 准确度在样品中加入一定体积的纯品，计算回收率，应介于90%-110%之间。
2.6 重复性批内变异系数（CV）应不超过7％。
2.7 线性2.7.1在[1，400]umol/L区间内，线性相关系数r应不低于0.990；2.7.2 [1，28）umol/L区间内绝对偏差不超过±1.96umol/L；[28，400]umol/L 区间内相对偏差不超过±7%。
2.8 批间差对同一份样品进行重复测定，相对极差不大于7％。
2.9 稳定性取在2℃～8℃条件下贮存达到12个月后的试剂进行检测，应符合本标准2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7之规定。
三种总胆红素常规检测方法的比较
基础医学B a s i c M e d i c i n e35正常人体胆红素主要来自血中衰老的红细胞。
红细胞平均寿命为120天，衰老的红细胞所释放的血红蛋白在体内经过一系列的代谢，最后变成胆红素，分为非结合胆红素与结合胆红素，分别从大、小便中排出。
正常时血液中只含有微量的胆红素。
胆红素的研究是临床医学中古老而又重要的课题。
血清胆红素测定是肝、胆功能检查中的一项重要检测项目。
重氮盐法检测胆红素被临床实验室广泛采用，但该法易受许多因素的干扰、试剂无法长期稳定，在疾病诊断中受到一定的影响。
随着全自动生化分析仪的普及和应用，要求不断推出新的胆红素测定方法[1]。
钒酸氧化法容易污染仪器，对别的测试产生影响[2]。
总胆红素的酶法测定早有报道，其方法学较为成熟，操作简便，快速准确，试剂可以长期稳定，特异性好，干扰少，但因为酶的来源、纯度、稳定性及一个波长测定不同胆红素成分等问题，应用具有局限性，在临床实际应用中未能得到推广。
提高酶法胆红素测定特异性的关键是选择BO D 对胆红素特异性氧化的反应条件，尽可能地加快B O D 对直接胆红素和间接胆红素的氧化。
复星长征公司研究出的产品跟重氮试剂的临床相关性较好。
1材料和方法1.1材料1.1.1重氮盐法检测试剂盒（罗氏公司）；钒酸氧化法检测试剂盒（北京利德曼生化技术有限公司）；酶法检测试剂盒（复星长征公司）。
1.1.2仪器A U 400全自动生化分析仪。
1.1.3标准与质控品标准品采用试剂配套校准品定值质控液（R A N D O X ）cl i nqa 定值血清。
1.2方法1.2.1测定方法几种总胆红素测定方法按试剂说明书进行操作。
1.2.2干扰液的制备脂肪乳干扰液：临床用50%的脂肪乳剂，以生理盐水10倍稀释到5%。
血红蛋白干扰液的制备：抽取4m l 新鲜血液置于生理盐水试管中，用生理盐水反复洗涤数次后，加入蒸馏水反复摇匀，使红细胞完全溶解（镜下瑞氏染色检查），离心沉淀后吸取上清液。
总胆红素测定试剂盒(重氮盐法)产品技术要求北检·新创源
总胆红素测定试剂盒（重氮盐法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中总胆红素的含量。
1.1规格具体产品规格见下表:1.2组成成分：试剂1：盐酸≥100mmol/L 表面活性剂适量试剂2：DPD ≥1mmol/L 2.1 外观2.1.1 外包装完整无破损；2.1.2 试剂1：无色澄清透明液体；2.1.3 试剂2：无色或黄色澄清透明液体。
2.2 净含量净含量不低于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在主波长546nm、副波长660nm、37℃条件下，试剂空白吸光度应不大于0.2。
2.4 线性2.4.1 线性范围［2.0，342.0］μmol/L，相关系数r≥0.990。
2.4.2 线性偏差（50.0，342.0］μmol/L线性范围内，相对偏差不超过±10%；［2.0，50.0］μmol/L线性范围内，绝对偏差不超过±5μmol/L。
2.5 分析灵敏度检测浓度为29.4μmol/L的样本时，吸光度变化应不小于0.0169。
2.6 重复性测试（10.0±3.0）μmol/L和（30.0±5.0）μmol/L的血清样本或质控样本，重复测试至少10次，CV≤10%。
2.7 批间差用三个不同批号的试剂测试（30.0±5.0）μmol/L的同一样本，重复测试3次,相对极差R≤10%。
2.8 准确度测定360033标准物质水平2，测定结果应不超过标示值的±10%。
2.9 稳定性原包装试剂2～8℃避光储存,有效期12个月。
取到效期后两个月内产品进行检测, 检测结果应符合2.3、2.4、2.5、2.6和2.8的要求。
总胆红素检测试剂盒
◆许可证号：浙食药监械生产许20090029号 ◆产品注册号： ◆产品标准号: -20093.4~21.7μmol/L（参照《全国临床检验操作规程》，建议各实验室建立自己的参考范围）检验结果的解释本法的检测范围为0~400μmol/L ，当样品测定值超过上限，应将样品用生理盐水进行稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。
检验结果的局限性1、当样品中抗坏血酸浓度≥1704μmol/L ，血红蛋白浓度≥4.0g/L ，甘油三酯浓度≥20mmol/L 时对测定结果又干扰。
2、血清中TBIL 的测定只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体症、病史以及其他诊断项目、诊断手段进行综合判断。
产品性能指标1、线性范围：0~400μmol/L （相关系数r ≥0.99）2、重复性：测量精密度CV ≤4%、批间差≤8%3、准确度：相对偏差＜10%注意事项1、试剂盒样品用量可因仪器要求不同，按比例增减，计算公式不变。
2、本试剂仅供体外诊断用，试剂产生的废液及使用后难以降解的包装材料应集中收集后交当地废物处理站处理。
3、试剂使用后立即盖紧瓶盖，避免污染。
4、不同方法学试剂的质量控制结果之间会存在差异，使用时请确保质控选择与试剂的方法学保持一致。
5、不同批号的试剂不建议混用，如混用应重新校准。
参考文献1、叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程[M],3版.南京:东南大学出版社.,2006:452-457.2、德田邦明，古本和仁：临床化学22（2），116-122（1993）。
总胆红素检测试剂盒说明书（氧化法）企业名称：温州市维日康生物科技有限公司 生产地址：温州市瓯海区娄桥工业园园一路邮政编码：325000 电话：0577- 86585999 86585666 传真：0577- 86581858 网址： 邮箱：weirikan@感谢您使用我们的产品，使用前请仔细阅读此说明书总胆红素检测试剂盒说明书（氧化法）产品名称1、中文名称：总胆红素检测试剂盒（氧化法）2、英文名称：Total Bilirubin Determine Reagent Kit(Oxidation method)3、英文缩写：TBIL或TB包装规格预期用途本试剂盒用于体外定量检测人血清中总胆红素（TBIL）的含量。
5种总胆红素测定试剂盒的比较分析
用 Ｏ ９ Ｎａ １ 释 到 ５ 。 ． Ｃ 稀
做线性对 比。
出 。本 实验 通过 比较 重 氮 法 （ 京 柏 定 、 波 赛 克 、 北 宁 山东 康 华 ） 、
钒 酸 氧 化 法 （ 海 科 华 ）改 良化 学 氧 化 法 （ 波 美 康 ） 性 能 指 上 、 宁 的 标 ， 择 一 种 适 于 本 实 验 室 使 用 的方 法 。 选
５６ ４
５
５０ ５
５
４０ ５
５
４０ ５
次波长 （ ｎ ｒ） ａ
一
７０ ０
—
５６ ４
表 １ ５种 总 胆 素 测 定 方 法 参 数
试验参数
方法
延迟 时间（ ｎ ｍｉ ）
柏定
赛克
康华
科 华
美康
终 点法 终点 法 终点 法
一 一 一
两点终 点法 两 点终点 法
５ ３
计 算 时间（ ｉ ａ ） ｒｎ
主波长 （ ） ｍ
１ ０
５６ ４
５
２ ００ １ ； 坊 市 康 华 生 物 技 术 有 限 公 司产 品 ， 用装 ； 波 美 ０８２９潍 试 宁 康 生 物 科 技 有 限 公 司 产 品 ， 产 批 号 ２ ００ １ ； 海 科 华 东 菱 生 ０７８６上
诊 断 用 品 有 限 公 司 产 品 ， 产批 号 ２ ０ ０ １ 。 生 ０ ７ ９ １
血清总胆红素重氮盐法和钒酸盐氧化法测定方法的比较
科学研究创新血清总胆红素重氮盐法和钒酸盐氧化法测定方法的比较郭晶晶孟超刘茜（江苏省医疗器械检验所江苏南京210019）摘要：胆红素是血红蛋白的代谢产物，主要涉及肝脏代谢，血清胆红素水平是肝胆疾病的重要诊断指标。
体内的胆红素包括直接胆红素、间接胆红素，二者之和称为总胆红素，临床对胆红素的生化检测有多种方法。
本文使用重氮盐法和钒酸盐法对血清总胆红素进行测定，比较两种方法检测结果的差异。
实验结果发现，两种方法的重复性和准确度均能满足临床要求，钒酸盐法的准确度高于重氮盐法。
关键词：胆红素代谢胆红素测定方法重氮盐法钒酸盐法方法比较中图分类号：R446.1文献标识码：A文章编号：1674-098X(2022)02(a)-0004-03肝脏是人体最大的实质性器官，具有复杂而重要的生理功能，参与代谢是肝脏最主要的功能。
肝脏参与三大营养物质的代谢过程：肝脏可以合成蛋白质，亦可以分解蛋白质。
人体有超过40%的蛋白质是在肝脏合成的，血浆白蛋白则完全由肝脏合成。
肝脏细胞含有蛋白质脱氨酶和转氨酶，从而分解蛋白质，氨进一步转变成尿素排泄。
人体摄入的糖类在肝脏转变为葡萄糖，当血糖浓度升高时，血糖可转变成葡萄糖聚合物以糖原的形式贮存于肝脏；当血糖浓度降低时，肝糖原可以迅速分解成葡萄糖，向人体供能，从而保持血糖的稳定。
当人体摄入的糖类物质较少时，肝脏可以将氨基酸、丙酮酸等非糖类物质转变成肝糖原，以满足机体对葡萄糖的消耗。
肝脏可以合成胆固醇，胆固醇转变成胆汁酸盐，胆汁酸盐使脂肪乳化成微粒，脂肪微粒可被身体吸收。
脂类物质可直接与肝脏中的蛋白质结合成脂蛋白。
肝脏参与维生素的代谢。
一些脂溶性维生素可长期大量储存于肝脏中，如维生素A、维生素D、维生素B12的储存量可满足几个月甚至是一两年的使用。
肝脏中可形成有多种凝血因子，如凝血因子I，同时，肝脏可形成抗凝血因子，如肝素。
由于肝脏的体积大，可以贮存的血量多，因此肝脏也是主要的贮血器官［1］。
总胆红素(T-Bil)试剂盒检验方法的讨论
【 编 号】 １ ７ － ２ ０ ２ ０ ）０ ｂ － ６ － ２ 文章 ６ ３ ７ １ （０ ８ １ （ ｝０ ４ ０
和２ ｍｏ Ｌ ； ０￣ ｌ ） 总胆 红 素标 准 液 （ 生 北 控 生 物 科 技股 份 有 ／ 中
限公 司 ， 号 ：７ ０ ２ 浓度 ： ８ ｍｏ／ ） 多项 液体 生 化质 控 批 ０ ０３ ， ２ ０ｂ ｌ ： ￣ Ｌ 血清 （ 四川 省迈 克科 技 责 任 有 限 公 司 ， 号 ：８ ７ ４ ， 批 ０ ０ ０ １ 浓度 ：
管易 堵塞 可 能影 响疗 效 。 每次 抽液 结 束时 导管 内注入 肝素 稀
８ 患者经 此途 径进行 ， 例 临床 经验也 可 以验 证这 一点 。② 引入 Ｊ 型导 丝 ， 柔韧 性好 ， 不会 对心 脏及 血管 造成损 伤 ， 但是 置入 深
清总胆 红素来 鉴别 黄疸 有 较大 意义 ， 它对肝 脏疾 病诊 断 、 疗 治
和愈后 判断 有重 要价值 。我 们对 总胆 红 素试剂 盒 中试 剂 的线
性 和准 确性 进行研 究 ． 仅可 以有效 的节约 原材 料 、 不 降低 生 产
２２１线 性 关 系 取 总 胆 红 素 ｆ — ｉ） 浓 度 样 本 ， ．． Ｔ Ｂ ｌ高 通过 采 用 样 品 量加 倍 模 式 （ 高值 血 清 低 于 线性 范 围上 限时 ） 用 生 理 或 盐 水稀 释 成一 系列 浓 度 ， 高浓 度 应 大于 或 等于 标 准规 定 线 最 性 范 围上 限值 （ 试 剂 盒 的加 样 量及 加 样 方 法 详 见 表 １ ５个 ～ ５， ） 每个 浓 度重 复 测 定 ２次 ， 其 吸光 度 平 均 值 与 对 应 的 理 取
准确性 在 １ １ ％波动 。结论 ： ％～ ０ 使用终 点法测定 总胆红素试 剂盒 ， 应使标准 规范化 。
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总胆红素测定试剂盒（重氮法）
一、胆红素的代谢
正常人血中胆红素来源有以下几种
（1）大部分来自于衰老RBC破坏后的Hb衍化而成
（2）小部分来自于非Hb的血红素蛋白质的血红素辅基分解，即分路胆红素
（3）极少部分来自于骨髓无效造血所产生的胆红素
胆红素与ALB结合后为肝细胞摄取并转变为水溶性的结合
胆红素，排至胆汁中，结合胆红素在肠道中被细菌作用还原成尿胆原，在肠道被吸收入门静脉，大部分肠肝循环，另一部分入体循环，经肾排泄入尿。
因此，在胆红素代谢的上述途径中有任一环节受阻，均可导致结合或非结合胆红素升高而产生黄疸。
二、胆红素测定的意义
测定胆红素有助于鉴别溶血性黄疸，肝细胞性黄疸及梗阻性黄疸
联合其它检测项目还可鉴别肝内淤胆和肝外梗阻性黄疸
溶血性黄疸肝细胞性黄疸梗阻性黄疸
血浆总胆红素（mg/dl）＜5 1-70 不完全梗阻10~15，完全梗阻20~30
未结合胆红素高度增加增加增加
结合胆红素正常增加高度增加
尿胆素定性阴性阳性强阳性
尿中胆素原增多不定或升高减少或消失
粪中胆素原增多减少减少或消失
三、测定原理
血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应产生偶氮胆红素，所以称为直胆，又称1min胆红素测定，非结合胆红素测定时要以咖啡因、苯甲酸钠为加速剂破坏胆红素氢键再与重氮试剂反应，抗坏血酸破坏剩余重氮试剂，加入碱性酒石酸钠使最大吸光度由530nm转到598nm，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度降至可忽略不计，使灵敏度和特异性升高，最后形成的绿色是由兰色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
试剂：（1）咖啡因（2）碱性酒石酸钠液（3）亚硝酸钠液
（4）对氨基苯磺酸溶液（5）重氮试剂（将3、4混合）
（6）5g/L NaN3 （7）胆红素标准液
操作：
总胆管结合管对照管
血清（ml） 0.2 0.2 0.2
咖啡因-苯甲酸钠试剂（ml） 1.6 1.6
对氨基苯磺酸溶液（ml） 0.4
重氮试剂（ml） 0.4 0.4
混匀后，总胆管置室温10min，结胆管置37℃1min
NaN3（ml） 0.05
咖啡因-苯甲酸钠试剂（ml） 1.55
碱性酒石酸钠溶液 1.2 1.2 1.2
以对照调零，测各管A600，查标准曲线
正常参考值：血总胆红素 5.1~19umol/L(0.3~1.1mg/dl)
血清结合胆红素 1.7~6.8umol/L(0.1~0.4mg/dl)
四、方法与评价
本法稳定性好、灵敏度高、轻度溶血无影响
胆红素对光敏感，标本与标准品应避光，血脂会干扰测定，因此应取空腹血。