抑菌圈实验知识点
实验七杀菌剂生物活性测定方法――抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法――抑菌圈法一、实验目的掌握抑菌圈法测定杀菌剂的生物活性的方法及步骤。
二、实验原理本实验主要采用抑菌圈法来测定杀菌剂的生物活性。
抑菌圈法是利用杀菌剂在琼脂平板上产生的抑菌效果来对其生物活性进行测定的一种方法。
通常，将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，使其均匀地分布在琼脂上。
然后，将含有细菌培养物的琼脂平板放入恒温箱中进行培养。
在培养一段时间后，观察平板上是否出现了抑菌圈，并测量抑菌圈的直径来评估杀菌剂的生物活性。
三、实验仪器和材料1.显微镜2.恒温箱3.滴定管或移液管4.琼脂平板5.细菌培养物6.杀菌剂溶液四、实验步骤1.准备琼脂平板。
将琼脂平板置于恒温箱中，加热至溶化状态后取出，待其稍微冷却后均匀地倒入培养皿中。
2.滴加杀菌剂溶液。
将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，并用移液管在平板上转动，使杀菌剂均匀地分布在琼脂上。
3.检验杀菌剂效果。
取一定量的细菌培养物，将其在琼脂平板上均匀涂布。
4.培养细菌。
将含有细菌培养物的琼脂平板放入预先恒温箱中，设置合适的温度和培养时间。
5.观察抑菌圈。
在培养一段时间后，取出琼脂平板，用显微镜观察平板上是否出现了抑菌圈。
6.测量抑菌圈直径。
使用直尺或量角器等工具测量抑菌圈的直径，并记录结果。
五、实验注意事项1.操作时要注意无菌技术，以避免细菌污染。
2.滴加杀菌剂溶液时要均匀并轻柔，以保证杀菌剂能充分分散在琼脂平板上。
3.培养细菌时要控制好温度和培养时间，以确保细菌能够充分生长。
4.观察抑菌圈时要注意使用合适的放大倍数，以免错过细小的抑菌圈。
5.测量抑菌圈直径时要使用准确的测量工具，以获得准确的结果。
六、实验结果处理根据实验所得的抑菌圈直径数据，可以通过计算其平均值、标准差等统计指标来评估杀菌剂的生物活性。
较大的抑菌圈直径通常表示杀菌剂具有较强的抑菌效果，反之则表示其抑菌效果较弱。
可以将实验结果与已有的标准值进行比较，以判断杀菌剂的生物活性。
七、实验结果分析根据测得的抑菌圈直径结果，可以对杀菌剂的生物活性进行分析。
如何使用牛津杯测定抗生素的抑菌圈
如何使用牛津杯测定抗生素的抑菌圈
目的：观察抗生素的抑菌效果，测定抗生素的抑菌圈大小，掌握牛津杯体外测定抗生素的抗菌性。
原理：抗生素从孔洞向琼脂培养基扩散渗透，通过对试验菌的抑杀作用而影响细菌生长繁殖，使菌落形成抑菌圈，依抑菌圈的大小确定抗生素抗菌能力的强弱。
材料
1.菌种：金黄色葡萄球菌，用营养肉汤培养16~18h得到的菌液。
2.药品：氨苄青霉素，肉汤培养基。
3.器材：牛津杯、涂布棒、生化培养箱、高压蒸汽灭菌锅、水浴锅、灭菌肉汤琼脂培养基、酒精灯、平皿、吸管、0.5cm纸片、镊子、记号笔、尺子等。
实验步骤
1.按照培养基的配制方法步骤配制好肉汤培养基，并在121℃，灭菌20min后，放在60℃水浴锅中保温，注意温度恒定，不要让培养基凝固。
2.将用于试验的防腐剂（抑菌物质）配制成2个所需的浓度（10ug/ml,30ug/ml）。
3.将已经培养好的菌制成一定浓度（106cfu/mL）的悬浮液，用移液管移取1mL该菌悬液至灭过菌的（121℃，20分钟）培养皿中，倒入15mL已灭菌的培养基（温度约45℃，用手摸瓶壁不感觉烫手即可），轻轻转动培养皿，使培养基与菌液混匀，静置凝成平板。
4.将凝固后的平板用灭菌后的打孔器在平板上打孔（4个孔洞），并挑出培养基。
（或将已灭菌的牛津杯依次轻轻放置在平板上）
5.按照顺时针方向依次在每个孔洞（或牛津杯）中加入抑菌剂，以无菌水做空白对照，每种抑菌剂的浓度做三个平行样。
6.在37℃下培养24h观察，用尺子测量抑菌圈的大小。
注意事项
1.应在无菌条件下操作，试验完毕后及时灭菌处理。
2.添加抑菌剂的时候注意滴到其他地方，以免影响观察。
植物真菌类病害组织病原菌的分离及抑菌圈实验
植物真菌类病害组织病原菌的分离及抑菌圈实验1、病原菌的分离培养及保存1.1材料：（1）病害组织（2）分离培养基（PDA培养基）：20%土豆煮汁，2%琼脂条，1%葡萄糖，蒸馏水，121℃高温灭菌（3）次氯酸钠（4）试管斜面培养基：成分为PDA培养基，121℃高温灭菌1.2方法：剪取作物病害部位，将病害部位用次氯酸钠表面消毒后，置于分离培养基上，然后放置于28℃恒温培养箱内培养。
7天后取出，通过菌落形态和孢子镜检挑选出所要分离的病原菌转接试管斜面，然后将斜面放置于28℃恒温培养箱内培养。
7天后取出，包好放于4℃冰箱内低温保存。
2、病原菌摇瓶菌丝体的培养及菌液的制备2.1材料：（1）试管斜面孢子（2）摇瓶培养基：20%土豆煮汁，1%葡萄糖，蒸馏水，121℃高温灭菌。
2.2方法：将试管斜面孢子转接到摇瓶培养基，然后将摇瓶放到220转/分的摇床上培养，2—3天后，摇瓶菌丝体长到一定的成熟状态（不同真菌菌丝体不同）后，取下摇瓶，放于4℃冰箱内低温保存，待需要做抑菌圈实验时，将摇瓶从冰箱内取出，用组织捣碎机将摇瓶菌丝体高速捣碎2分钟左右，至菌液状态。
3、供试药剂的抑菌圈实验3.1材料：（1）打碎的病原菌菌液（2）底层培养基：2%琼脂粉、蒸馏水，121℃高温灭菌。
（3）上层培养基：成分同PDA培养基，121℃高温灭菌。
（4）链霉素溶液：2400U/mL3.2方法：（1）融化底层培养基，待温度降至70℃，倒入测定木盘，放平至凝固。
（2）融化上层培养基，待温度降至54℃，用无菌移液管加入1mL链霉素溶液以防杂菌干扰；继续降温至48℃，用无菌移液管加入6—12mL的病原菌菌液后迅速晃匀后，倒入测定木盘，放平，待凝固后，即做成抑菌圈实验所用的测定盘。
（3）稀释供试药剂到制定浓度。
（4）在测定盘内摆放牛津杯。
（5）用P型移液器将稀释好的药剂滴入牛津杯内，滴液量为0.26mL/杯，然后盖上玻璃板，放置于28℃恒温培养箱内培养，培养时间为16—18小时。
抑菌圈实验实验报告
一、实验目的本实验旨在通过抑菌圈实验，观察不同抗生素对特定细菌的抑菌效果，了解抗生素的抗菌活性，并学习如何通过抑菌圈的大小判断细菌对抗生素的敏感性。
二、实验原理抑菌圈实验是微生物学中常用的方法之一，用于检测抗生素对细菌的抑制作用。
实验原理基于抗生素对细菌生长的抑制作用，当抗生素与细菌接触时，细菌的生长会受到抑制，从而在含有抗生素的培养基上形成一个无细菌生长的区域，即抑菌圈。
抑菌圈的大小可以反映抗生素的抗菌活性，通常抑菌圈越大，说明抗生素的抗菌活性越强。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 细菌菌株：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）- 抗生素：青霉素、红霉素、庆大霉素、链霉素- 琼脂培养基- 牛肉膏蛋白胨培养基- 水浴箱- 滴管- 铅笔- 玻璃板2. 仪器：- 培养箱- 电子天平- 灭菌器四、实验步骤1. 制备培养基：- 称取牛肉膏蛋白胨培养基，加入适量的蒸馏水，溶解后用电子天平称量，使培养基浓度为10g/L。
- 将溶解后的培养基分装至锥形瓶中，每瓶100mL，121℃高压灭菌15分钟。
- 待培养基冷却至50℃左右，加入琼脂粉，充分搅拌均匀。
- 将琼脂培养基倒入培养皿中，待其凝固。
2. 接种细菌：- 将金黄色葡萄球菌接种至牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃培养24小时。
3. 制备抗生素纸片：- 将抗生素粉末用生理盐水溶解，配制成一定浓度的溶液。
- 用滴管将溶液滴加到无菌滤纸上，使滤纸充分浸润。
- 将滤纸晾干，制成抗生素纸片。
4. 抑菌圈实验：- 将制备好的琼脂培养基上的细菌菌落刮去，并用无菌镊子将抗生素纸片贴在培养基表面。
- 将培养皿倒置放入培养箱中，37℃培养24小时。
5. 观察与记录：- 观察培养皿中抗生素纸片周围是否形成抑菌圈，并记录抑菌圈的大小。
五、实验结果与分析1. 实验结果：- 青霉素：抑菌圈直径为15mm- 红霉素：抑菌圈直径为10mm- 庆大霉素：抑菌圈直径为20mm- 链霉素：抑菌圈直径为8mm2. 结果分析：- 根据抑菌圈的大小，可以判断金黄色葡萄球菌对不同抗生素的敏感性。
抑菌圈实验
2.1.1制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2.1.2抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
抑菌圈实验报告
一、实验目的1. 了解抑菌圈实验的基本原理和操作步骤。
2. 通过抑菌圈实验，探究不同抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。
3. 掌握抑菌圈直径的测量方法，并分析抗生素的抑菌活性。
二、实验原理抑菌圈实验是微生物学中常用的一种实验方法，用于测定抗生素对细菌的抑菌效果。
实验原理是：将含有抗生素的纸片放置在已接种有细菌的琼脂平板上，抗生素会通过扩散作用渗透到琼脂中，抑制细菌的生长，形成透明圈，即抑菌圈。
抑菌圈的大小可以反映抗生素的抑菌活性。
三、实验材料与仪器1. 材料：金黄色葡萄球菌、青霉素、链霉素、头孢噻肟钠、肉汤培养基、琼脂、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌镊子、无菌培养皿、无菌滤纸、酒精灯、放大镜等。
2. 仪器：恒温培养箱、天平、电子显微镜、显微镜等。
四、实验方法1. 制备菌悬液：将金黄色葡萄球菌接种于肉汤培养基中，37℃恒温培养24小时，用无菌生理盐水调整菌悬液浓度为1×10^8 CFU/mL。
2. 准备平板：将熔化的琼脂倒入培养皿中，待凝固后，用无菌棉签将菌悬液均匀涂布于平板表面。
3. 制备抑菌圈：将含有不同抗生素的纸片分别放置于平板表面，用无菌镊子轻轻按压使其与琼脂表面紧密接触。
4. 培养平板：将平板倒置放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
5. 测量抑菌圈直径：用放大镜观察平板，用尺子测量抑菌圈的直径，取平均值。
五、实验结果与分析1. 实验结果：实验结果显示，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用，抑菌圈直径分别为15mm、12mm、10mm；而其他抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较差。
2. 结果分析：抑菌圈直径越大，说明抗生素的抑菌活性越强。
根据实验结果，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强，可作为治疗金黄色葡萄球菌感染的首选抗生素。
六、实验结论通过抑菌圈实验，我们成功探究了不同抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。
实验结果表明，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用，可作为治疗金黄色葡萄球菌感染的首选抗生素。
生物制药工艺实验,抑菌圈的大小
生物制药工艺实验,抑菌圈的大小
抑菌圈和抑菌物质浓度的对数是成正比的，也就是抑菌物质浓度越高，抑菌圈越大。
抑菌物质浓度一直稀释下去，则抑菌圈直径逐渐变小，直到没有抑菌圈出现，这个临界浓度就是MIC。
如果你的实验没有出现抑菌圈，说明抑菌物质浓度不高。
说明你做的抑菌物质浓度在临界浓度范围内，如果你做的是梯度抑制实验，则说明你的结果有意义，如果是固定浓度，那么久很难说明原因了。
抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式丰要用于测定杀菌
防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。
通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌
防霉剂品种。
实验十二 抑菌实验
2.细菌接种 2.细菌接种
0.1ml含菌量相当于麦氏比浊管第 含菌量相当于麦氏比浊管第1 1/2的 每管加入 0.1ml含菌量相当于麦氏比浊管第1管1/2的 金黄色葡萄球菌(相当于1.5亿/ml)，操作术式如下表。 金黄色葡萄球菌(相当于1.5亿/ml)，操作术式如下表。 1.5
思考题
1.圆纸片药敏试验操作时应注意什么事项？ 1.圆纸片药敏试验操作时应注意什么事项？ 圆纸片药敏试验操作时应注意什么事项 2.试述药敏试验的意义 试述药敏试验的意义。 2.试述药敏试验的意义。
操作程序 （以葡萄球菌对青霉素的敏感性为例） 以葡萄球菌对青霉素的敏感性为例） 1.青霉素稀释 1.青霉素稀释
将装有1ml肉汤的试管排成一列，编上1 将装有1ml肉汤的试管排成一列，编上1～9的管号， 1ml肉汤的试管排成一列 的管号， 在第1管内加入含64IU/ml 青霉素肉汤1ml 1ml， 在第1管内加入含64IU/ml 青霉素肉汤1ml，混匀后吸取 1ml到第 到第2 混匀，再取1ml至第3 1ml至第 依次类推到第8 1ml到第2管，混匀，再取1ml至第3管，依次类推到第8管。 管不含青霉素的肉汤作对照管。 第9管不含青霉素的肉汤作对照管。
实表1 实表1 细菌对不同抗菌药物敏感度标准
药物名称 抑菌圈直径（mm）
无抑菌圈 ＜10 11～26 ＞26 无抑菌圈 ＜10 11～15 ＞15 无抑菌圈 ＜10 11～25 ＞25
敏感度
不敏感 低度敏感 中度敏感 高度敏感 不敏感 低度敏感 中度敏感 高度敏感 不敏感 低度敏感 中度敏感 高度敏感
青霉素（50μg/ml）
链霉素（500μg/ml）
新霉素（300μg/ml）
（二）最低抑菌浓度试验
原理：将抗菌药物作倍比稀释， 原理：将抗菌药物作倍比稀释，在不同浓度的稀释 管内接种被检细菌，定量测定抗菌药物的最 管内接种被检细菌， 低浓度。 低浓度。本结论可作为其他药物敏感性试 验的标准方法。 验的标准方法。 实验材料： 实验材料： • • • • • 金黄色葡萄球菌肉汤培养物 普通肉汤 含青霉素64IU/ml 含青霉素64IU/ml 的普通肉汤各一管 麦氏比浊管 灭菌1ml 1ml刻度吸管 灭菌1ml刻度吸管
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
抑菌圈实验知识点
抑菌圈实验
简介
抑菌圈实验是一种常见的微生物学实验方法，用于评估抗菌物质
对细菌生长的抑制效果。
通过在寒天平板上涂布一定数量的细菌，然
后在不同的实验条件下施加待测物，观察生成的抑菌圈直径来判断其
抗菌活性强弱。
实验步骤
1.准备寒天平板：将寒天溶液煮沸，倒入培养皿中，等待冷却凝固。
2.预处理细菌：选取待测细菌培养液，进行适当稀释，利用吸管在
寒天平板上均匀涂布。
3.滴加待测物质：使用滴管将待测物质滴加到已涂布细菌的平板上。
4.孵育：将带有滴加待测物的平板倒置，放入恒温培养箱（通常在
37摄氏度）进行孵育。
5.观察抑菌圈：经过一定时间后，观察平板上的抑菌圈，通过测量
抑菌圈直径来评估待测物质的抗菌活性。
影响抑菌圈直径的因素
1.待测物质浓度：一般来说，随着待测物质浓度的增加，抑菌圈直
径也会增加，因为更高浓度的物质具有更强的抗菌活性。
2.细菌菌株的敏感性：不同的细菌对待测物质的敏感程度有所不同，
因此不同细菌菌株在相同浓度的待测物质下可能产生不同大小的
抑菌圈。
3.孵育时间：不同的细菌在不同时间内生长速度不同，所以孵育时
间对抑菌圈直径的大小有一定影响。
4.寒天平板的厚度：寒天平板的厚度越薄，细菌的扩散速度越快，
抑菌圈直径也可能相应增大。
实验应用
抑菌圈实验是一种常用的筛选抗菌物质的方法，常用于药物研发、食品安全检测和环境监测等领域。
通过观察抑菌圈的大小，可以初步
了解待测物质对细菌的抑制能力，并进一步筛选出具有较强抗菌活性
的物质进行深入研究。
结论
抑菌圈实验是一种简单有效的方法，用于评估抗菌物质的抑菌活性。
实验结果可以提供初步的信息，但需要进一步的实验和研究来验
证和确定物质的抗菌效果。
该实验在医学、食品和环境领域具有广泛
的应用价值，对于保障人们的健康和安全具有重要意义。