果蝇唾液腺染色体的观察
遗传实验报告-果蝇唾腺染色体观察
【实验目的】1.练习解剖果蝇幼虫的技术2.掌握果蝇唾腺染色体的制片方法3.了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点【实验原理】果蝇为双翅目完全变态的昆虫，幼虫期分三龄。
其幼虫期具有很大的唾腺细胞，其中的染色体是巨大的多线染色体。
双翅目昆虫的整个消化管细胞发育至一定阶段后就停止有丝分裂，终止在分裂间期。
但随着幼虫整体器官以及这些细胞本身体积的增大，唾液腺细胞核的染色体仍不断地进行自我复制而并不分开。
经多次复制后，形成约1000~4000拷贝的染色体丝，比普通中期相染色体大得多（约100~500倍），因此又称为多线染色体。
黑腹果蝇染色体数2n=8，存在体联会。
各染色体的着丝粒互相靠拢形成染色中心，由染色体中心向外伸出5条很长的染色体臂和一条极短的染色体。
（如右图）染色体Ⅰ为端着丝粒染色体，所以它的一端在染色中心上，另一端游离；Ⅱ、Ⅲ染色体为中着丝粒染色体，他们从染色中心呈V字形向外伸展，所以分别能看到2L、2R、3L和3R 4条长而宽的“带状物”；点状的第Ⅳ染色体很短小，为端着丝粒。
因此可以见到5条很长的和一条仅靠染色中心的短小的染色体。
在雄性幼虫中，唾腺染色体上不见Y染色体，他捕鱼X染色体联会，而且其着丝粒及其附近的异染色质参与染色中心的形成。
这可能是雄性幼虫唾腺染色体中的X染色体比其他几对染色体相对狭窄一些的缘故。
果蝇唾腺染色体特点：巨大，是多线染色体；有丝分裂停在间期，DNA不断复制，着丝点不分开；同源染色体紧密配对—体细胞联会，染色体呈单倍数。
整个唾腺染色体上分布着染色深浅不同、粗细各异的横纹，这意味着基因的排列。
这些横纹的宽窄、疏密程度以及排列顺序和数目都具有物种的特异性。
黑腹果蝇的多线染色体具有大约5000条横纹。
染色体各条臂的端部，即远离染色中心的游离端恒定的横纹特征，是准确识别各对染色体的重要依据。
在果蝇的特定发育时期，横纹会出现不连续的膨胀，称为疏松区（puff），目前认为这是该部分基因被激活的标志。
果蝇唾液腺染色体观察实验报告
果蝇唾液腺染色体观察实验报告果蝇（Drosophila melanogaster）是一种常见的模式生物，在遗传学研究中有着重要的应用价值。
果蝇唾液腺染色体观察实验是一种常用的实验方法，通过观察果蝇唾液腺细胞的染色体结构，可以了解染色体的形态和数量变化，为遗传学研究提供重要的数据支持。
本实验旨在通过对果蝇唾液腺细胞进行染色体观察，掌握染色体的基本结构和形态特征，为今后的遗传学研究奠定基础。
实验材料和方法。
1. 实验材料，成年果蝇、盐酸乙醇、醋酸乙酯、苏木精、酒精、冰醋酸、苏木素、甲醛、石蜡等。
2. 实验方法：（1）取一只成年果蝇，用镊子夹住果蝇的头部，将果蝇的身体用另一只镊子拔去。
（2）将果蝇头部置于盐酸乙醇中，浸泡5分钟，然后用镊子将头部转移到醋酸乙酯中，浸泡5分钟。
（3）将处理后的果蝇头部转移到苏木精中，浸泡5分钟，然后用酒精逐级脱水，最后转移到冰醋酸中浸泡5分钟。
（4）将果蝇头部转移到甲醛中，固定30分钟，然后用苏木素染色，再经过酒精逐级脱水，最后转移到石蜡中浸泡。
（5）将处理后的果蝇头部置于石蜡中，浸泡30分钟，然后取出制作切片，用显微镜观察果蝇唾液腺细胞的染色体结构。
实验结果和分析。
经过实验操作，观察果蝇唾液腺细胞的染色体结构，可以看到染色体呈现出条状的形态，其中可以清晰地看到染色体的着丝粒和染色单体。
染色体的数量在观察的过程中也得到了初步的统计，一般情况下，果蝇唾液腺细胞的染色体数量为8条。
结论。
通过本次实验，我们成功观察了果蝇唾液腺细胞的染色体结构，了解了染色体的基本形态特征和数量变化。
这为今后的遗传学研究提供了重要的数据支持，也为我们进一步深入了解果蝇的遗传特性奠定了基础。
总结。
果蝇唾液腺染色体观察实验是遗传学研究中常用的实验方法，通过观察果蝇唾液腺细胞的染色体结构，可以了解染色体的形态和数量变化。
本次实验的成功进行，为今后的遗传学研究提供了重要的数据支持，也为我们进一步深入了解果蝇的遗传特性奠定了基础。
实验八 果蝇唾腺染色体的观察
实验原理
实验用具药品
实验步骤
三、实验原理
果蝇唾腺染色体特点： 果蝇唾腺染色体特点：
巨大， 多线染色体； 巨大，是多线染色体；
正常：间期DNA DNA复制 正常：间期DNA复制 两条染色单体 着丝点裂开 子染色体 核分裂 胞质分裂 果蝇：有丝分裂停止在分裂间期，DNA不断自我复制 不断自我复制， 果蝇：有丝分裂停止在分裂间期，DNA不断自我复制，着丝点不 裂开
解剖针 解剖针 唾腺
脂肪体
实验目的
实验材料
实验原理
实验用具药品
实验步骤
实验目的
实验材料
实验原理
实验用具药品
实验步骤
实验目的
实验材料
实验原理
实验用具药品
实验步骤
3、腺体解离： 腺体解离：
剥离脂肪体及其他杂物， 剥离脂肪体及其他杂物，分离出纯净的唾腺 ，用 吸水纸小心吸去生理盐水( 吸水纸小心吸去生理盐水(吸水纸不要太靠近标 以免标本丢失) 本，以免标本丢失) 。 加1滴1N HCl，浸2—3分钟，使组织疏松，以便 HCl， 分钟，使组织疏松， 压片时细胞分散，染色体散开。 压片时细胞分散，染色体散开。
2R 3L 4 4 2R 2L 3R X 3L 3R 2L X
实验目的
实验材料
实验原理
实验用具药品
实验步骤
果蝇唾腺染色体图
实验目的
实验材料
实验原理
实验用具药品
实验步骤
四、实验用具药品
1．仪器用具：显微镜、双目解剖镜、培养 仪器用具：显微镜、双目解剖镜、 瓶 、 载玻片、 盖玻片、 镊子、 解剖针、 吸 载玻片 、 盖玻片 、 镊子 、 解剖针 、 水纸、酒精灯、火柴等。 水纸、酒精灯、火柴等。 2．药品试剂：无水酒精、冰醋酸、1%醋酸 ．药品试剂：无水酒精、冰醋酸、1%醋酸 洋红、改良品红、生理盐水、1N盐酸、蒸 洋红、改良品红、生理盐水、1N盐酸、蒸 馏水。 3．培养基：玉米琼脂培养基。
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果蝇唾腺染色体的观察
解剖
❖ 生理盐水于载波片 ❖ 选取三龄幼虫置于生理盐水上 ❖ 左手持解剖针固定幼虫（压住后端1/3处） ❖ 右手按住头部(小黑点) ❖ 用力向右拉，拉开幼虫身体 ❖ 分离得唾腺（棒状，且透明）
果蝇唾腺染色体的观察
果蝇唾腺剥离示意图
头部
果蝇唾腺染色体的观察
作业及思考题
❖ 什么是染色中心？ ❖ 根据你所学的知识，联会应出现在什么类型
果蝇唾腺
果蝇唾腺染色体的观察
实验步骤
❖ 解剖（生理盐水） ❖ 染色（15-20min） ❖ 压片 ❖ 镜检
注意事项
果蝇唾腺染色体的观察
1. 一定加生理盐水，否则唾腺易干。 2. 水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃。如水多了，请
再剥离唾腺前吸走些，唾腺剥离后请勿吸水，以防将唾 腺一起吸走。 3. 清除脂肪组织时要量力而行。 4. 染色液勿过多，否则压片时唾腺易随染色液漂走。如染 色时间到后，染色液已干，应再少加些染色液，再盖上 盖波片，避免气泡产生。 5. 压片时要均匀用力，轻敲盖片。
如邓铁涛教授以此理论指导慢性肝 炎的治疗，创制了“慢肝六味饮” （四君子汤加川萆薢、黄皮叶）。
邓老还在此方基础上化裁出“软肝煎” 治疗肝硬化（上方去黄皮叶，加楮实子、 菟丝子、丹参、地鳖虫、鳖甲）。并强 调若苔腻者，即去鳖甲，以防其腻滞阻 碍脾胃之运化。体现了“治肝实脾”的
思想。
➢关于“虚实异治的原则”： 仍以肝为例，指出了肝虚证（主要
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果蝇唾腺染色体的观察
主要内容
❖ 实验原理 ❖ 实验目的 ❖ 实验材料 ❖ 实验步骤 ❖ 作业及思考题
实验原理
果蝇唾腺染色体的观察
❖ 果蝇，双翅目，2n=8
果蝇唾液腺染色体观察
③控制幼虫的密度。一般情况下，半磅牛奶瓶中 10对成虫交配后在12h左右必须将成虫转移，一 般要求每cm2培养基外表20～40只幼虫左右。
果蝇种间或种内不同品系与近缘种之间的遗传差异 常表现为唾液腺染色体不联会，形成泡〔puff〕、缢痕 〔constrictions〕、间带区〔interband〕的伸缩性以及 顶体〔telomere〕的形态等多方面的变异，特别重要的 是可观察是否产生了倒位、染色体的断裂、融合或重排， 据此研究其基因序列的差异。因此，无论从细胞遗传学 的角度研究基因与突变性状之间的关系，还是从进化遗 传学方面研究染色体的系统发育，探讨近缘种间的遗传 差异和生殖隔离机制等，唾液腺染色体的分析研究都是 十分重要的。果蝇唾液腺染色体已广泛用于种内系统发 育和种间亲缘关系的研究中。
解剖针，载玻片，盖玻片，吸水纸等。 0.7％氯化钠〔NaCl〕，1mol/L HCl；改进
苯酚品红染色液；果蝇培养基等。
实验方法
1．培养果蝇三龄幼虫 将果蝇放在营养丰富的培养基 中，15℃～18℃下饲养，幼虫要生长肥大，才能获得 较大的唾腺。
培养要求：
①饲料松软，含水量较高，营养丰富，发酵良好 〔建议配方：玉米粉10g，红糖13g，琼脂1g，酵 母粉2g，丙酸3～4滴，加蒸馏水100～120ml〕。
1. 一定加生理盐水，否则唾腺易干。 2. 将脂肪组织去除干净。 3. 水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活泼。 4. 染色时间不可过长，否则背景也着色。 5. 压片时要揉，用力要均匀。 6. 染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液， 再压片。 7. 吸水时勿将唾腺一起吸走。
果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察
果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察一.实验目的通过实验掌握果蝇唾腺染色体的制片方法，了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点并练习解剖果蝇幼虫的技术。
二.实验原理唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫的幼虫唾液腺内的巨大染色体。
果蝇的唾腺染色体是典型的巨大染色体，它的巨大性的成因是核内有丝分裂造成的。
由于其染色体DNA经过多次复制（可达210～215次），但并未发生细胞核分裂，同时唾腺细胞中的染色体总是处在配对状态即体细胞联会，重复复制后的染色体聚集在一起，所以在显微镜下看到唾腺染色体要比一般的染色体大得多，又称多线染色体。
三.实验用品1.实验材料：普通果蝇的三龄幼虫、生理盐水2.实验器材和试剂：双筒解剖镜、显微镜、解剖针、改良苯酚品红溶液、HCI四.实验方法和步骤1. 幼虫的培养为了在解剖镜下便于操作，使用的幼虫应发育充分而且个体较大。
在实验中，人们通常采用两个措施控制幼虫的生长。
A.良好的培养基提供了果蝇生长发育的必需营养，因此在培养瓶内放置的亲本不易过多，否则将产生过多的卵而造成养分不足。
B.培养果蝇的环境温度应比正常培养时略低一些，一般可控制在16～20℃范围内，低温下生长的果蝇个体较大。
果蝇属于完全变态的昆虫，成虫交尾后将卵产在培养基内。
在适宜的温度下，卵发育为幼虫并经过一、二龄幼虫的发育后，三龄幼虫要爬到瓶壁上化蛹，为了能够在实验时获得较多的幼虫，可以分批将亲本放入培养瓶。
实验时从培养瓶的瓶壁上挑选那些发育良好的、个体较大的幼虫。
2. 剖取唾腺用解剖针从培养瓶内挑取1只三龄幼虫置于载片上，并滴加1滴生理盐水。
将载片放在载物台上，用解剖镜进行观察。
首先将幼虫的头尾分清，果蝇的头部有一黑点（口器），头部不断作伸缩状。
解剖时，双手各持一个解剖针，一支针先压在幼虫身体的前1/3处，另一支针压住果蝇头部并向前轻轻移动，即可将头部与身体拉开，仔细观察可看见一对透明做白的囊状体即为唾腺。
在唾腺前端各伸出一条细管在前面汇合成一总管。
果蝇唾液腺染色体制片与观察
同源染色体的两条臂紧密结合，自由伸展。因 此唾液腺细胞染色体数看不出2n的染色体数， 只能观察到从染色中心向空间伸展的染色体臂。 与其它细胞染色体相比的另一个特点是，唾液 腺染色体上有深浅不同、宽窄不一的带纹，这 些带纹的数目和位置是恒定的，代表着种的特 征和一些基因的位置。
由于这些带纹的存在，染色体上发生缺失、重 复、倒位、易位等很容易在唾液腺染色体上识 别出来。
三、实验材料
野生果蝇
四、实验步骤
1、剥离果蝇幼虫的唾液腺
取一洁净的载玻片，滴上1滴0.75%生理盐水。在瓶壁 上挑选肥大的充分发育的三龄幼虫放在的生理盐水中，唾 液腺位于幼虫食道的两侧，长度约占身体总长的1/3—— 1/4左右。
解剖时把载玻片放在解剖镜或放大镜下,一手用解剖针压住头部 (外型似一个黑色小点)，压住的地方越小越好，同时，用镊子夹住幼 虫身体1/2处， 轻轻地将幼虫的头部自身体拉开。唾液腺随同内脏一 起拉出。如果头部拉断,腺体没有拉出,可以用解剖针从镊子附近的腹 部缓缓地向头端挤压,也可压出唾液腺。然后在镜下细心分离，理出双 叉形半透明的囊状腺体即为唾液腺，在生理盐水中无论怎样触动它都 不会发生形状改变。
在显微镜下观察，由单层细胞构成，细胞形状不规则，细胞轮廓 清晰，细胞大，细胞核也大，甚至可以看清细胞核是由染色体卷缩在 一起形成的。唾液腺拉出后，剔除腺体周围乳白色的脂肪组织和身体 的残留部分，只留唾液腺在载玻片上。
2、解离 用滤纸条吸净唾液腺周围的其它物质，然后将唾 液腺放入1N HCl，解离2—3分钟，以松软组织利于 细胞破裂，使染色体散开。 3、水洗 解离后的唾液腺用蒸馏水洗3—4次（或0.4%的 生理盐水），水洗时要注意不要把唾液腺弄丢，水洗 要彻底，目的是洗去盐酸，以免影响染色效果。另外 水洗过程也是细胞低渗过程，使唾液腺细胞膨胀。
果蝇唾腺染色体的观察
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放大的唾腺组织
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（3）盖上盖玻片，用刀片支起盖玻片一角，按住盖玻片另 一边，用解剖针轻轻敲打盖玻片，去掉刀片，稍加热后覆 上滤纸垂直压片。
（4）观察，先在10倍镜下观察找到染色体后，再换高倍镜 下观察，比较各染色体的横向纹带、带宽大小、带纹排列 顺序，以及由着丝点纠集组成的染色体中心。
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三、仪器与材料
材料：果蝇的三龄幼虫 试剂： 1%醋酸洋红 器具：显微镜、镊子、解
剖针、载玻片、盖玻片、 滤纸、绘图纸
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四、实验程序
（1）取果蝇三龄幼虫置于载玻片上，由于果蝇的唾腺位于 幼虫体前1/3-1/4处，所以左手持镊子按压住虫体后端三 分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部 口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。
2、观察果蝇唾腺染色体的形态特征。
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二、实验原理
双翅目昆虫（果蝇等）幼虫期唾腺细胞 中具有相当于普通染色体100－150倍的巨大 染色体，由于存在于唾液腺细胞中，所以称为 唾腺染色体(salivary gland chromosome) 。 它是由于唾腺细胞发育到一定阶段后就不再进 行有丝分裂，永久停留在间期，唾腺染色体经 过多次复制而不分开，约有1000－4000根染 色体丝的拷贝，所以又叫多线染色体 （polytene chromosomes ）。
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果蝇三龄幼虫解剖图
Salivary gland：唾腺 Gonad: 性腺 Ganglion: 神经节 Trachea: 气管 Ovary：卵巢 Intestine：肠
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果蝇唾液腺染色体的观察
一、实验目的
1)练习剖取果蝇三龄幼虫唾液腺的方法。
2)掌握制作果蝇唾液腺染色体标本的技术
3)观察果蝇唾液腺染色体的形态特征。
二、实验原理
1）果蝇三龄幼虫的唾液腺细胞处于永久早期，染色体解旋呈伸展状态．在幼虫发育过程中细胞核中的DNA多次复制，但细胞、细胞核不分裂。
复制后的染色单体DNA不分开，这种现象叫做核内有丝分裂，从而形成了多线染色体。
加之唾液腺细胞中同源染色体互相靠拢在一起呈现一种联会状态，而使其比一般体细胞中的染色体粗1000—2000倍，长100－200倍。
2）唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，所以左手持解剖针按压住虫体前端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。
如图。
3）由于在唾液腺细胞中8条染色体之间以着丝粒互相连结在一起形成染色盘或异染中心和同源染色体之间的假联会，经碱性染料染色后，可以观察到一个染色较深的染色盘和以染色盘为中心向外辐射出的5条染色体臂。
在这些染色体臂上可以看到染色深浅不同，被称做明带、暗带的横纹，这些横纹的位置，宽窄、数目都具有物种的特异性。
不同物种，不同染色体的不同部位形态位置是固定的。
因此根据染色体各条臂带纹特征和各条臂端部带纹特征能准确识别各条染色体。
在染色体臂上还可看到某些带纹通过染色体的解旋、膨大形成的疏松区和巴尔比尼氏环，其富含转录出来的RNA，因此不着色，是基因活动的区域。
在个体发育的不同阶段，疏松区或巴尔比尼氏环在染色体上出现的部位不同，据此研究基因的表达，开展各种染色体变异的研究等等。
三、器具和生物
实验生物：果蝇的三龄幼虫；
器具：双筒解剖镜、显微镜、镊子、解剖针，载玻片、盖玻片
实验试剂：醋酸洋红染液、蒸馏水、lNHCI。
四、实验步骤
1）准备发育充足、肥大的三龄幼虫（选择在低温下（16°C-18°C培养下，充分发育但尚未化蛹但活动十分活跃的幼虫）；
2）剥离唾腺：在一干净的载玻片上滴一滴蒸馏水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，置于载玻片上。
每只手各持一个解剖针在解剖镜下进行操作。
由于果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，所以左手持解剖针按压住虫体前端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出；
3）解离：在唾腺组织上滴一滴1NHCl，解离1-2min ，以松软组织；
4）吸去HCl，用水冲洗2-3次，滴加醋酸洋红染液染色10min，染色时间不可过长，否则背景也着色。
之后盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。
将片子放在实验台上，用大拇指用力压住。
（注意不要使盖片移动）；
5）镜检：先用低倍镜进行观察，找到分散好的染色体再转用高倍镜进行观察；6）整理实验器材，处理废物；
五：实验现象
多线染色体六：实验问题
1：在实验过程中要注意什么？。
答：1)取果蝇幼虫时一定要取粗大的；
2）一定要加蒸馏水，否则唾液腺容易干，影响其正常形态，进而影响观察。
但水不可加太多，否则幼虫会漂浮而且活跃。
如水多了，请再剥离唾腺前吸走些，唾腺剥离后请勿吸水，以防将唾腺一起吸走。
3)清除脂肪组织时要量力而行；在实验中，我发现如果严格按照实验步骤
所写剥离唾液腺，撕裂后唾液腺将与脂肪分离，得到较干净的唾液腺，很少脂肪干扰。
4）尽可能的保留完整的唾液腺
5)染色液勿过多，否则压片时唾腺易随染色液漂走。
如染色时间到后，染
色液已干，应再少加些染色液，再盖上盖波片，避免气泡产生。
6)染色时间不要太长，否则背景会着色，影响观察效果。
7)用吸水纸吸取液体时，一定要注意不要将唾液腺吸走。
2：本次实验为什么没有成功？
答：1）没有找到足够大的果蝇；
2）剥离脂肪与唾液腺时老是会把果蝇的唾液腺给破坏；
3）剥离时间过长，唾液腺高温下渐渐分解了；
4）洗去盐酸时将唾液腺冲走了；
5）染色时间没有控制好；
如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！
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