实验三 细菌的芽孢染色
3实验三细菌革兰氏染色
实验三细菌革兰氏染色及特殊结构观察一、实验目的：1、了解革兰氏染色法的原理，并熟练掌握其操作步。
2、了解革兰氏染色法在细菌分类鉴定中的重要性。
3、通过革兰氏染色进一步理解细菌细胞壁的结构特点。
4、巩固在油镜下观察微生物的个体形态。
5、学习并掌握芽孢染色法。
6、学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。
二、主要仪器设备及材料：1、菌种：大肠杆菌，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），金黄色葡萄球菌斜面2、试剂：草酸铵结晶紫染色液，路哥氏（Lugol）碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液，香柏油，二甲苯，生理盐水，5%孔雀绿3、仪器与材料：生物显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，火柴，小试管（75mm×10mm），烧杯（300mL），滴管，接种环，擦镜纸，镊子，电炉三、原理：微生物的细胞小且透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。
因此，微生物染色技术是观察微生物形态结构的重要手段。
革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。
它是1884年由丹麦医师Gram创立的。
革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。
细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
细菌芽孢染色实验报告2页
细菌芽孢染色实验报告2页实验名称：细菌芽孢染色实验目的：1.掌握细菌芽孢染色的基本原理和步骤；2.学习观察细菌芽孢染色的结果和注意事项；3.通过实验认识芽孢的特殊结构和功能。
实验原理：细菌芽孢染色是一种利用染料对细菌芽孢进行染色的方法。
由于细菌芽孢具有特殊的结构和功能，能够抵抗不利环境，因此在染色过程中需要使用一些特殊的染料和处理方法。
其中，最常用的染料是孔雀绿和甲基蓝，最常用的处理方法是加热和干燥。
通过细菌芽孢染色，可以观察到芽孢的形态、大小、着色情况等特征，进而推断出芽孢的种类和分布情况。
实验步骤：1.样品采集：采集含有芽孢的样品，并进行预处理，如离心、过滤等；2.芽孢分离：将样品中的芽孢分离出来，可以使用物理、化学等方法；3.加热和干燥：将分离出来的芽孢进行加热和干燥处理，以促进染色效果；4.染色处理：将加热和干燥后的芽孢与染料混合，用玻璃棒搅拌均匀；5.观察和分析：将染色后的样品放在显微镜下观察，记录芽孢的形态、大小、着色情况等特征，并进行分析和判断。
实验结果：通过本次实验，我们观察到了不同种类的芽孢，如枯草芽孢杆菌、肉毒梭菌等。
这些芽孢在染色过程中表现出不同的着色情况和形态特征。
例如，枯草芽孢杆菌的芽孢呈绿色，肉毒梭菌的芽孢呈蓝色。
通过观察和分析，我们发现这些芽孢在样品中的分布情况也不同，有的呈单个存在，有的呈链状存在。
实验结论：通过本次细菌芽孢染色实验，我们掌握了细菌芽孢染色的基本原理和步骤，学习观察了细菌芽孢染色的结果和注意事项。
同时，通过实验认识芽孢的特殊结构和功能。
这些知识和技能对于我们进一步了解和研究细菌及其芽孢具有重要意义。
注意事项和思考题：1.在样品采集和预处理过程中，应该注意避免污染和交叉感染。
对于含有芽孢的样品，应该进行灭菌处理，以避免对实验结果造成影响。
2.在进行芽孢分离时，应该根据不同样品的特点选择合适的分离方法。
对于一些难以分离的芽孢，可以尝试采用其他方法进行分离和纯化。
实验三、细菌芽孢及荚膜染色观察
三、实验材料；
菌 种：苏云金芽孢杆菌、钾细菌 苏云金芽孢杆菌、
染色剂：5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液； 染色剂：5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液； 孔雀绿水溶液 番红水溶液 石炭酸复红， 石炭酸复红，黑色素等
四、实验方法：
一)、芽孢染色 、 1、制片（涂片-干燥-固定） 制片（涂片-干燥-固定） 2、染色 加数滴孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片一端， 加数滴孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片一端， 在微火上加热至染料冒蒸气并开始计时，维持5min 5min（ 在微火上加热至染料冒蒸气并开始计时，维持5min（其间补 充染液防蒸干）。 充染液防蒸干）。 3、缓流水洗 4、复染 用番红染液复染2分钟。 用番红染液复染2分钟。 5、缓流水洗、干燥 缓流水洗、 6、镜检：用油镜观察（芽孢呈亮绿色，菌体呈红色） 镜检：用油镜观察（芽孢呈亮绿色，菌体呈红色）
荚膜 钾细菌菌体
五、实验结果； 实验结果；
1、绘图表示芽孢杆菌的形态特征。 绘图表示芽孢杆菌的形态特征。 2、绘图说明你所观察到的细菌的菌体和荚膜的形态。 绘图说明你所观察到的细菌的菌体和荚膜的形态。
思考题： 思考题：
1、为什么芽孢染色要加热？为什么芽孢及营养体能染成不 为什么芽孢染色要加热？ 同的颜色？ 同的颜色？ 2、组成荚膜的成分是什么？涂片一般用什么方法固定，为 组成荚膜的成分是什么？涂片一般用什么方法固定， 什么？ 什么？
芽孢 菌体
二）、荚膜染色 ）、荚膜染色 1、制片：取一滴无菌水于载玻片上，用接种环取钾细菌在 制片：取一滴无菌水于载玻片上， 水滴中，制成涂片，晾干。 水滴中，制成涂片，晾干。 2、染色：用石碳酸复红染色液染色3-4分钟，用水轻轻冲洗， 染色：用石碳酸复红染色液染色3 分钟，用水轻轻冲洗， 晾干。 晾干。 3、刮片：在玻片一端加一滴黑色素，另外取一块干净的载 刮片：在玻片一端加一滴黑色素， 玻片与黑色素接触，将黑色素在涂片上轻轻刮过， 玻片与黑色素接触，将黑色素在涂片上轻轻刮过，形成一薄 层，自然干燥。 自然干燥。 4、镜检：菌体呈红色，荚膜无色，背景灰色。 镜检：菌体呈红色，荚膜无色，背景灰色。
细菌芽孢染色实验报告
1. 了解芽孢的形态和结构特点；2. 掌握芽孢染色原理和操作方法；3. 观察芽孢的染色效果，加深对芽孢形态结构的认识。
二、实验原理芽孢是细菌在生长发育过程中形成的一种特殊细胞形态，具有厚而致密的壁，透性低，对各种不利因素如高温、冷冻、射线、干燥、化学药品和染料等具有很强的抵抗力。
芽孢染色法是一种特殊染色方法，通过使用特定染料对芽孢进行染色，使芽孢和菌体呈现不同的颜色，便于观察和鉴别。
三、实验材料1. 菌种：巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）2. 染料：7.6%饱和孔雀绿液、0.5%蕃红液（或石炭酸复红液和吕氏美蓝液）3. 仪器：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、滴管等四、实验步骤1. 菌种培养：将巨大芽孢杆菌接种于营养琼脂斜面，37℃培养24小时。
2. 涂片：取一洁净无脂的载玻片，中央滴一小滴无菌水，用无菌操作的方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂片面积约为1-1.5cm²，涂片于室温中自然干燥。
3. 固定：将菌面朝上，通过火焰2-3次固定（温度以不烫手为宜）。
4. 初染：在制片上滴加7.6%饱和孔雀绿液，染色5-10分钟。
5. 水洗：用自来水冲洗掉多余的染料。
6. 复染：在制片上滴加0.5%蕃红液，染色1-2分钟。
7. 水洗：用自来水冲洗掉多余的染料。
8. 吸干：用吸水纸吸干制片上的水分。
9. 观察显微镜：将制片置于显微镜下观察，观察芽孢的染色效果。
在显微镜下观察到，巨大芽孢杆菌的菌体呈红色，芽孢呈绿色，两者颜色对比明显。
芽孢位于菌体中央或次极端，使菌体膨大呈梭状。
六、实验讨论1. 芽孢染色法是一种特殊染色方法，可以观察到芽孢的形态和结构特点。
通过染色，芽孢和菌体呈现不同的颜色，便于观察和鉴别。
2. 在实验过程中，应注意控制染色时间，避免染色过度或不足。
染色时间过长，芽孢和菌体颜色过深，影响观察；染色时间过短，芽孢和菌体颜色过浅，难以观察。
3. 在实验操作过程中，应严格无菌操作，避免污染制片。
实验报告2-细菌的荚膜染色、芽孢染色及其运动性观察实验报告
细菌的荚膜染色、芽孢染色及其运动性观察实验报告马子午生命科学学院食品科学与工程专业 14101班 02号1.引言1.1实验目的学习荚膜染色技术，观察和分辨细菌的荚膜形态，进一步理解细菌细胞的特殊结构；了解细菌芽孢染色的原理意义，掌握芽孢染色的方法。
学习水浸片的制作方法，观察细菌的运动。
1.2实验原理芽孢染色法：芽孢具有厚而致密的壁，通透性低，对各种不利因素如高温、冷冻、射线、干燥、化学药品和染料等具有很强的抵抗力。
因此，当用一般染色方法染色时，只能使菌体着色，芽孢不易着色（芽孢呈透明）或仅显很淡的颜色。
威力使芽孢着色便于观察，需采用特殊染色法——芽孢染色法。
先用一弱碱性染料，如孔雀绿或碱性品红在加热条件在进行长时间染色，此染料不仅可以进入菌体，也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经睡洗脱掉，而进入芽孢的染料则难以透出。
若再用复染液（如番红染液）或衬托染液（如黑色素液）处理，芽孢和菌体就呈现不同的颜色，借此将芽孢与菌体区别开。
荚膜染色法：荚膜的主要成分是多糖，多糖与染料亲和力差，不易着色，但荚膜通透性较好，某些染料可通过荚膜使菌体着色，正因如此，染色后呈浅色或无色的菌体就形成了一个明显的色差，荚膜染色常采用负染法，即将背景染成淡蓝色，此法使菌体和背景显色以衬托无色的荚膜。
细菌的运动性观察：细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的主要特征之一，因鞭毛较细，在普通光学显微镜下不易观察，但有鞭毛的细菌在液体中能借助鞭毛的旋转和摆动使菌体能定向的运动，可以借此判断细菌是否有鞭毛。
2.材料与方法2.1材料与试剂枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），孔雀绿，番红染液，无菌水，6%的葡萄糖，胶质芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus），黑色素液，甲醇，甲基紫染液，香柏油，二甲苯。
2.2仪器与设备显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，接种环，镊子，试管，凹玻片，擦镜纸，吸水纸。
2.3方法与步骤2.3.1细菌的芽孢染色法取一支试管，滴一滴无菌水，用接种环取2~3环枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）充分混合成菌悬液，再滴加两滴孔雀绿，沸水浴15~20分钟后用接种环取3~5环菌悬液涂抹在载玻片上，自然干燥，固定，冷却后水洗至水流无色，用吸水纸吸干后滴加番红染液复染5分钟，用吸水纸吸干多余染料，在显微镜下镜检。
实验三 细菌的芽孢染色
细菌的芽孢染色一、目的要求掌握芽孢染色的原理和方法二、实验材料1.菌种：枯草芽孢杆菌，肉汁斜面培养24h；2.染料：5%孔雀绿水溶液、0.5%蕃红水溶液3.其他：显微镜、载玻片、接种环、香柏油、二甲苯等。
三、实验原理1 芽孢又叫内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。
细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、位置，芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的依据。
2 芽孢染色法是根据细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行染色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。
芽孢壁厚，透性低，着色、脱色均较困难，当用弱碱性染料孔雀绿在加热的情况下进行染色时，此染料可以进入菌体及芽孢使其着色，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。
若再用番红复染，则菌体呈红色而芽孢呈绿色。
四、操作步骤1.制备菌悬液加1~2滴水于小试管中，用接种环挑取2~3环菌苔于试管中，搅拌均匀，制成浓的菌悬液。
2.染色加2~3滴孔雀绿于小试管中，并使其与菌液混合均匀，然后将试管置于沸水浴的烧杯中，加热染色15~20min。
3.涂片固定用接种环取试管底部菌液数环于干净载玻片上，涂成薄膜，然后将涂片通过火焰3次温热固定。
4.脱色水洗，直至流出的水无绿色为止。
5.复染用蕃红染液染色2~3min，倾去染液并用滤纸吸干残液。
6.镜检干燥后用油镜观察，芽孢呈绿色，芽孢囊和营养细胞为红色。
五、注意事项1所用菌种应掌握菌龄，以大部分细菌已形成芽孢为宜；2 注意控制水浴加热时间。
3 取菌不宜太少。
六、实验记录绘图（芽孢囊的形态；芽孢的形态；着生位置），并注明所观察菌名、各结构颜色及显微镜放大倍数。
芽孢染色实验报告
芽孢染色实验报告微生实验报告姓名：王晶晖级：2011级生物技术学号：************实验三细菌的芽孢染色一、实验目的学习细菌芽孢的染色方法原理及操作步骤。
二、实验原理芽孢是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈球形或椭圆形。
细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低不易着色，若用一般的染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。
芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色但一旦染上色后有难以脱色这一特点而设计的。
所有的芽孢染色法都基于同一个原则，除了用着色力强的染料外，还需加热，以促进芽孢染色。
当染芽孢时，菌体也会着色，然后水洗，芽孢染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，容易辨认。
三、实验器材1、菌种：培养24~36h的苏云金芽孢杆菌或者枯草芽孢杆菌。
2、染色剂和试剂：5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液。
3、器材：小试管，滴管，玻片搁架，接种环，擦镜纸，镊子，显微镜等。
四、实验方法1、涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。
2、晾干固定：待涂片晾干后在酒精灯火上通过2~3次。
3、染色：（1）加染色液：加5%孔雀绿水溶液于涂片处（染料一铺满涂片为度），然后将涂片用试管夹夹住，用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽时开始计时，维持15~20min。
加热过程中要随时交替添加染色液和蒸馏水，切勿让标本沸腾或干涸（加热时温度不能太高）。
（2）水洗：待玻片冷却后，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。
（3）复染：用0.5%番红水溶液染色3min。
（4）水洗、晾干或吸干。
（5）镜检：先用低倍物镜，再用高倍物镜，最后在油镜下观察芽孢和菌体的形态。
4、结果：芽孢呈绿色，菌体呈红色。
五、实验报告六、实验分析最后的形态观察还可以，只是由于第一次接触孔雀绿溶液，前几次的染色都不算成功。
七、思考题1、为什么在孔雀绿染色液加热中，要等玻片冷却后才能用水洗？答：因为热的玻片如果突然用水冲洗，那么很容易造成玻片的破损或破裂。
微生物学实验3 细菌革兰氏染色和芽孢染色
2022/9/12
Hale Waihona Puke 32022/9/12
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革兰氏染色视频（单击播放）
2022/9/12
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实验三 细菌的革兰氏染色与芽孢染色
一． 实验目的
1. 学习并初步掌握细菌的革兰氏染色法。
2. 学习细菌芽孢染色的原理和方法。
二． 实验材料
1. 菌种：大肠杆菌
Escherichia coli、
金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus
枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis
2. 染色液：草酸铵结晶紫染液、路哥氏碘液、 95%乙醇脱色液、番红染液、孔雀绿染液
➢ 芽孢染色：加1~2滴无菌水于小离心管中→ 用接种环挑 取2~3环菌苔于小离心管中，混匀，制成浓的菌悬液→ 加2~3滴孔雀绿小于离心管中，混匀→置于沸水浴中加 热染色15~20min→取底部菌液数环涂片→干燥→固定 →水洗脱色至流出的水无绿色为止→用蕃红染液染色 2~3min →水洗→干燥
➢ 镜检：
3. 其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、 无菌水、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等
2022/9/12
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三． 实验原理：革兰氏染色的原理？芽孢染色原理？
四． 实验步骤
➢ 革兰氏染色：涂片→干燥→固定→结晶紫染液初染 1min →水洗→碘-碘化钾溶液媒染1min →水洗→ 95% 乙醇溶液脱色至流下的乙醇溶液无明显的紫色→立即 水洗→藩红染液复染1～2min →水洗→干燥
➢ 油镜维护：
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五. 实验内容
1. 对所给的两种菌进行混合涂片进行革兰氏染色和油镜 观察（上交一张自己满意的染色片）；
2. 对已进行芽孢染色的枯草芽孢杆菌进行涂片、脱色和 复染，并镜检。
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实验原理---放线菌形态的观察
实验器材
1、材料 枯草芽孢杆菌；吸水链孢霉；紫色直丝链孢霉 2、试剂 孔雀绿染液（5%），复红染液 3、其他 接种环、木夹、刀片等
Hale Waihona Puke 实验步骤---芽孢染色（1）制片 （2）孔雀石绿染色 ：加孔雀绿染液覆盖涂片区,再用木 夹夹住载玻片，在微火上加热，致蒸汽徐徐冒出，保 持1min （3） 冷却 、水洗、吸干 （4） 复红复染1~2min （5） 水洗、吸干
1．试比较两种观察放线菌方法的优缺点。 2．镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和 气生菌丝？
（6） 镜检
实验步骤---印片染色法观察吸水链孢霉
印片→微热固定→石炭酸复红染色 1min→水洗→晾干→镜检
印片：用解剖刀取放线菌培养体一块，将菌面朝 上放在一载玻片上，另取一洁净载玻片置于火焰 上微热后，盖在菌苔上，轻轻按压，使培养物 （气丝、孢子丝或孢子）粘附（“印”）在后一 块载玻片的中央，有印迹的一面朝上，通过火焰 2-3次固定；
实验目的
掌握芽孢染色法及芽孢形态 掌握印片染色法及插片观察放线菌的形态
实验原理---芽孢染色
芽孢壁比营养细胞的细胞壁结构复杂而且 致密，透性低，着色和脱色较营养细胞难。采 用碱性染料并在微火上加热，或延长染色时间， 使菌体和芽孢同时染色后，用蒸馏水冲洗，脱 去菌体颜色，保留芽孢的颜色。并用另一种对 比鲜明的染料使菌体着色。
实验步骤---插片法观察紫色直丝链孢霉
用镊子轻轻取出紫色直丝链孢霉平皿中的盖玻片。
将盖玻片直接放在一块干净的载玻片上镜检。 效果如果不理想,可以用印片法观察紫色直丝链孢霉, 方法同吸水链孢霉的观察.
实验作业
绘出芽孢杆菌芽孢及菌体形态图;绘出吸水链孢 霉及紫色直丝链孢霉孢子及菌丝的形态。
实验思考题