琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书
胶回收QC操作标准

琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(离心柱型)QC标准操作流程1. 实验试剂和耗材1.2 实验试剂1.3 耗材2. 实验操作流程胶回收试剂盒的检测须进行两个实验验证,第一个实验为GelRed染色法,第二个实验为EB染色法。
2.1 GelRed染色法2.1.1 1.5%琼脂糖凝胶的制备(1)准确称取1.5g琼脂糖置于250ml三角锥形瓶中,添加125ml 1×TAE溶液。
(2)轻微混匀后将其置于微波炉中,高火加热6min至溶液沸腾,取出锥形瓶放置室温2min。
(3)添加1×TAE溶液至110ml,再次于微波炉中高火加热3min至溶液沸腾。
(4)室温放置10min后将溶液倒入插有梳子的胶槽内,待胶块凝固后使用。
2.1.2 胶回收实验(1)取6个2ml离心管,依次编号为1-6号,使用分析天平准确称取空离心管的重量。
(2)用干净锋利的手术刀片切下不含核酸染料的1.5%琼脂糖凝胶胶块,放入已称重的2ml离心管中,称取胶块与离心管总重,计算凝胶块的重量。
要求胶块重量不超过200mg 为宜。
(3)添加溶胶液Binding Solution B,要求1、2号管中每100mg琼脂糖凝胶加入200ul Binding Solution B,3、4号管中每100mg琼脂糖凝胶加入300ul Binding Solution B,5、6号管中每100mg琼脂糖凝胶加入400ul Binding Solution B.(4)每管中添加50ul DL2502,混匀后置于60℃水浴5min,期间间断混合,直至凝胶块完全融化。
【注意事项】观察各管内溶胶液溶解胶块的快慢程度。
(5)将上述混合液转移至套放于2ml收集管的GenClean柱中,室温放置2min,10000rpm 室温离心1min,取出GenClean 柱,并倒掉收集管中废液。
(6)将GenClean 柱重新放回收集管中,加入500ul Wash Solution,于12000rpm,室温离心1min,倒掉收集管中废液。
爱思进胶回收说明书

爱思进胶回收说明书
爱思进胶回收试剂盒的使用说明书如下:
1. 制备琼脂糖凝胶电泳:将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,根据Marker 判断PCR产物的大小是否符合要求。
2. 切胶:切下包含目的片段的凝胶,尽量切去上下两端的凝胶,以减少非特异性产物的影响。
3. 胶的融化:将切下的凝胶放入一个离心管中,加入适量的胶融化液,使凝胶完全溶解。
4. 洗涤:将凝胶溶液加入一个离心柱中,离心柱的管底会有一个膜,可以吸附凝胶中的DNA片段。
然后加入洗涤液,将离心柱离心,去除残留的胶融化液。
5. 洗脱:加入适量的洗脱液,离心柱离心,将DNA从膜上洗脱下来。
6. 检测:取洗脱液进行电泳检测,观察电泳结果是否包含目的片段。
以上是爱思进胶回收试剂盒的使用说明书的大致步骤,由于不同版本的产品可能存在差异,因此建议在使用前仔细阅读说明书或咨询专业人士。
DNA凝胶回收试剂盒产品说明书

北京四正柏生物科技有限公司网站: 客服热线:400-7060-959技术支持:DNA 凝胶回收试剂盒产品编号规格MDN3066-5050次MDN3066-100100次保存条件及效期:常温运输和保存,保质期一年。
产品描述:本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA 反应体系中(如PCR 反应)回收DNA 片段。
试剂盒采用可以高效、专一结合DNA 的硅胶膜和独特的溶胶体系,或DNA 反应体系中回收的单链、双链及环状DNA ,回收效率可达50-90%(跟片段大小相关)。
得到的DNA 可直接用于连接、转化、酶切、测序、杂交等分子生物学实验。
产品组分:使用方法:1.凝胶回收:切取含DNA 片段的琼脂糖凝胶(100mg 左右,尽可能多地把多余的胶切除,否则会影响回收效率),放入一干净的1.5ml 塑料离心管(自备)中,用移液枪头捣碎,按重量比为1:3到1:5的比例加入通用溶胶液(100mg 琼脂糖凝胶需要加入300μl-500μl 通用溶胶液)。
PCR 产物回收:直接在PCR 反应管中加3-5倍体积的通用溶胶液,混匀,然后跳过第2步、直接从第3步做起。
如果PCR 反应中使用了石蜡,需要预先去除。
2.50℃保温使胶完全溶化(一般需要5分钟),其间可以振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。
如果片段长度在300bp 成份50次包装100次包装通用溶胶液25ml 50ml 吸附柱活化液25ml 50ml 通用洗柱液50ml 100ml 离心吸附柱50套100套DNA 洗脱液10ml 10ml 说明书1份1份以下,建议不要加热,以免DNA变性,影响回收率。
3.在等待期间,活化离心吸附柱。
在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液,套上收集管后室温放置2分钟,然后12,000rpm离心2分钟,倒弃穿透液,再将吸附柱套上收集管后待用。
活化后的离心吸附柱必须在当天使用。
4.在上柱前,在溶化的胶中加入相当于胶块体积1/2的异丙醇(对100mg胶块,加50uL),快速振荡10秒混匀。
PCR 或酶切产物凝胶回收试剂盒说明书

PCR或酶切产物凝胶回收试剂盒说明书
【试剂盒简介】
本试剂盒将可以特异结合DNA的高性能磁性复合微球与独特的溶液系统有机结合在一起,适合从各种电泳凝胶(TAE或TBE)中提取线性DNA(70 bp-10 Kb),回收率在60-90%以上,本试剂盒还可从凝胶中回收质粒。
纯化后的线性DNA保持完整的生物活性,适用于多种用途,如:连接、体外转录、PCR、测序、Southern 杂交、微注射等分子生物学研究。
本试剂盒结合自动化设备,可以实现DNA琼脂糖凝胶回收的高通量、自动化提取。
【试剂盒组成】
Cat. No. YR03009-01YR03009-02YR03009-03
制备次数 50次100次200次
Lysis-Binding Buffer 20mL40mL120mL
Wash Buffer W1 70mL140mL400mL
Magnetic beads 1mL2mL4mL
Elution Buffer 2.5mL5mL10mL
使用说明书1份1份1份
【贮藏与有效期】
所有试剂室温保存,有效期为一年。
【操作步骤】请与我公司联系。
【经销商】深圳市易瑞生物技术有限公司
Shenzhen Bioeasy Biotechnologies Co., Ltd.
地址:深圳市宝安区西乡街道桃花源科技创新园11号研发中心邮编:518102
电话:**************************传真:*************
电子邮件:********************公司主页:。
Gel Extraction Spin Protocol(中文)

琼脂糖凝胶回收操作步骤(离心柱型)●快速- - 用<10分钟从琼脂糖凝胶中回收DNA●可靠- - 优化的缓冲液保证了DNA纯度●优质- - 纯化DNA适于任何下游应用●安全- - 无需有机溶剂2.储存条件及稳定性◆自购买之日起,所有BNT胶回收试剂盒组分在22-25C下都能保质至少24个月。
请确保未使用时结合缓冲液瓶盖紧盖。
★如缓冲液中出现沉淀,于37℃温育即可溶解。
3.结合能力■每个HiBind DNA离心柱能结合多至~ 20 μg DNA■纯化次数基于琼脂糖凝胶浓度及DNA片段大小。
一般来说,<100bp的DNA片段或从>2%的琼脂糖凝胶中回收DNA需要附加的结合缓冲液以达到试剂盒预期的使用次数。
(结合缓冲液能单独购买,货号为Binding-200)。
4.开始回收前强烈建议在开始本操作之前熟悉整个操作步骤。
如果所有步骤都严格遵守,BNT胶回收试剂盒是简单、快捷、可靠的回收方法。
5.BNT胶回收操作步骤(离心柱型)使用者自备材料:▼50 - 55C水浴▼至少耐转速10,000g的微量离心管▼无核酸酶的1.5ml离心管▼无菌去离子水(或TE缓冲液)▼无水乙醇(96%-100%乙醇)▼保护性眼罩▼5M醋酸钠pH5.2⑴进行琼脂糖胶/ EB电泳分离不同DNA片段。
可使用所有类型或级别的琼脂糖。
强烈推荐使用新制TAE或TBE缓冲液作为电泳缓冲液。
不要重复使用电泳缓冲液,其pH会升高,降低回收得率。
⑵各条带分离到恰当位置时,用宽的干净锋利手术刀片仔细切下含有目的片段的琼脂糖胶,尽量切除DNA片段周围多余的琼脂糖胶以使凝胶体积最小。
⑶估计凝胶块体积,将其置于1.5ml微量离心管中称重。
假设凝胶密度为1g/ml,凝胶体积如下推算:质量为0.3g的凝胶块体积为0.3ml。
加入与凝胶等体积的结合缓冲液。
将混合物置于50-65℃7min,或直到凝胶完全溶解。
在溶解过程中每2-3min摇振以促进混合。
Geneaid GenepHlowTM Gel PCR 通用型DNA 纯化回收试剂盒说明书

完整说明书(英文)下载如果您是第一次使用本产品或对本产品的操作步骤不熟悉,请您经由扫描QR code 下载并详阅完整说明书一、从琼脂糖凝胶中回收DNA 片段1. 凝胶融解将单一的目的DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分,凝胶重量不超過300 mg )放入干净的离心管中. 向胶块中加入500 μl 溶液Gel/PCR, 55-60ºC 水浴放置10-15分钟,其间不断温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解.注意:凝胶完全融解后应呈现黄色,即可进行后续操作。
如果胶完全融解后溶液的颜色为紫色,请使用10 μl 3M 乙酸钠(pH 5.0)将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作.(溶液Gel/PCR 中含有pH 指示剂,当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色,此时DNA 才能够有效的与膜结合,当pH 值偏高时溶液的颜色变为紫色,需要进行调整.)2. 吸附将吸附柱DFH 放入2 ml 收集管中. 待溶液温度降至室温后,将所得溶液加入吸附柱DFH中,以14-16,000 ×g 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放入收集管中.3. 漂洗向吸附柱DFH 中加入400 μl 漂洗液W1,以14-16,000 ×g 离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放入收集管中. 向吸附柱DFH 中加入600 μl 漂洗液Wash (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),静置1分钟后以14-16,000 ×g 离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱DFH 放入收集管中. 以14-16,000 ×g 离心3分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除.注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切,PCR 等)实验.4. 洗脱将吸附柱DFH 放入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl 洗脱缓冲液EB ,(如果回收的目的片段>5 kb ,则洗脱缓冲液EB 应置于60ºC 水浴预热),室温放置2分钟. 以14-16,000 ×g 离心2分钟收集DNA 溶液.注意:1. 为了增加DNA 回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2分钟,以14-16,000×g 离心2 分钟,将DNA 溶液收集到离心管中. 2. 如果使用ddH 2O 做洗脱液,需保证其pH 值≥8.0,pH 值低于8.0会降低洗脱效率.Instruction Manual Download完整说明书(英文)下载如果您是第一次使用本产品或对本产品的操作步骤不熟悉,请您经由扫描QR code 下载并详阅完整说明书二、从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 (回收DNA进行测序实验)1. 凝胶融解 将单一的目的DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分,凝胶重量不超過300 mg )放入干净的离心管中. 向胶块中加入500 μl 溶液Gel/PCR, 55-60ºC 水浴放置10-15分钟,其间不断温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解.注意:凝胶完全融解后应呈现黄色,即可进行后续操作.如果胶完全融解后溶液的颜色为紫色,请使用10 μl 3M 乙酸钠(pH 5.0)将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作.(溶液Gel/PCR 中含有pH 指示剂,当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色,此时DNA 才能够有效的与膜结合,当pH 值偏高时溶液的颜色变为紫色,需要进行调整.)2. 吸附将吸附柱DFH 放入2 ml 收集管中. 待溶液温度降至室温后,将所得溶液加入吸附柱DFH 中,以14-16,000 ×g 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放入收集管中.3. 漂洗向吸附柱DFH 中加入600 μl 漂洗液Wash (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),静置1分钟后以14-16,000 ×g 离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱DFH 放入收集管中. 重复向吸附柱DFH 中加入600 μl 漂洗液Wash (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),以14-16,000 ×g 离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱DFH 放入收集管中,以14-16,000 ×g 离心3分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除.注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验.4. 洗脱将吸附柱DFH 放入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl 洗脱缓冲液EB ,(如果回收的目的片段>5 kb ,则洗脱缓冲液EB 应置于60ºC 水浴预热),室温放置2分钟. 以14-16,000 ×g 离心2分钟收集DNA 溶液.注意:1. 为了增加DNA 回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2分钟,以14-16,000×g 离心2 分钟,将DNA 溶液收集到离心管中. 2. 如果使用ddH 2O 做洗脱液,需保证其pH 值≥8.0,pH 值低于8.0会降低洗脱效率.Instruction Manual Download完整说明书(英文)下载如果您是第一次使用本产品或对本产品的操作步骤不熟悉,请您经由扫描QR code 下载并详阅完整说明书三、从PCR 反应液或酶切反应液中回收DNA 1. 样品前处理取20-100 μl PCR 反应液或酶切反应液加入1.5 ml 离心管中,向其中加入五倍体积溶液Gel/PCR ,充分混匀(无需去除石蜡油或矿物油). 注意: 如PCR 反应体系为50 μl (不包括石蜡油体积),则加入250 μl 溶液Gel/PCR . 樣品混匀后溶液应呈现黄色,即可进行后续操作. 如果溶液的颜色为紫色,请加入10 μl 3M 乙酸钠(pH 5.0)将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作. 2. 吸附将吸附柱DFH 放入2 ml 收集管中. 将上一步所得溶液加入吸附柱DFH 中,以14-16,000 ×g 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放入收集管中. 注意:吸附柱容积为750 μl ,若样品体积大于750 μl 可分批加入.3. 漂洗向吸附柱DFH 中加入600 μl 漂洗液Wash (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),静置1分钟后以14-16,000×g 离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱DFH 放入收集管中. 以14-16,000×g 离心3分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除. 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切,PCR 等)实验.4. 洗脱将吸附柱DFH 放入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl 洗脱缓冲液EB ,(如果回收的目的片段>5 kb ,则洗脱缓冲液EB 应置于60ºC 水浴预热),室温放置2分钟. 以14-16,000 ×g 离心2分钟收集DNA 溶液.注意:1. 为了增加DNA 回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2分钟,以14-16,000×g 离心2 分钟,将DNA 溶液收集到离心管中. 2. 如果使用ddH 2O 做洗脱液,需保证其pH 值≥8.0,pH 值低于8.0会降低洗脱效率.Instruction Manual Download。
DNA纯化回收试剂盒

DNA纯化回收试剂盒一、试剂盒内容溶液PC 25ml 100ml平衡液BL 30ml 120ml漂洗液PW 15ml 50ml洗脱缓冲液EB 15ml 30ml吸附柱CB2 50个200个收集管(2ml)50个200个说明书1份1份二、操作步骤(一)、从琼脂糖凝胶中回收DNA片段1、柱平衡步骤:向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管)加入500ul 平衡液BL,12000rpm(~13400×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
(请使用当天处理过的柱子)2、将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入赶紧的离心管中,称取重量。
3、向胶块中加入等倍体积溶液PC(如果凝胶重为0.1g,其体积可视为100ul,则加入100ulPC溶液),50℃水浴放置10分钟左右,其间不断温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解。
(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎块)4、将上一步所得溶液加入到一个吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(~13400×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CB2放回收集管中。
5、向吸附柱CB2中加入600ul漂洗液PW,12000rpm(~13400×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CB2放回收集管中。
6、重复步骤5.7、将吸附柱放入收集管中,12000rpm(~13400×g)离心2分钟,尽量出去漂洗液。
将吸附柱置于室温放置数分钟,彻底晾干。
8、将吸附柱CB2放入一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟。
12000rpm(~13400×g)离心2分钟,收集DNA溶液。
(二)、从PCR反应液或酶切反应液中回收DNA1、柱平衡步骤:向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管)加入500ul 平衡液BL,12000rpm(~13400×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
凝胶DNA回收试剂盒说明书

凝胶DNA 回收试剂盒说明书产品组成凝胶DNA回收试剂盒Cat. No. 5次样品200100550次制备2001050250次制备2001250核酸纯化柱2 ml离心管1.5 ml离心管Buffer GBuffer WSBuffer WG(浓缩液)Buffer TE说明书5个5个5个3 ml3 ml2.4 ml0.5 ml1份50个50个50个30 ml30 ml24 ml5 ml1份50个×550个×550个×5150 ml150 ml72 ml ×225 ml1份产品储存与有效期产品如果储存于室温(15~25℃),可在两年内保持使用性能无明显变化;如果将产品储存于2~8℃,可延长产品的有效期至两年以上。
技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部:e-mail: *******************,电话:400-0099-857。
产品介绍本试剂盒采用了柱纯化的原理,适合从多至400mg琼脂糖凝胶中回收DNA (70bp-10kb),回收率为70~85%。
溶胶试剂为不含碘化钠的温和溶解液,确保回收的DNA 保持片断完整性和高生物学活性,回收的DNA可直接用于连接、体外转录、PCR扩增、测序、微注射等分子生物学实验。
用户需自备的试剂与物品1.无水乙醇2.1.5ml离心管、移液器及吸头3.一次性手套、纸巾及防护用品4.台式小量离心机(可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子)使用前准备1)如果离心机有制冷功能,请将温度设置到25℃。
2)根据试剂瓶标签上的指示在Buffer WG中加入无水乙醇,并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。
3)将水浴锅的温度设置为50°C。
4)可能需要使用3 M 醋酸钠(pH 5.0)及异丙醇。
操作步骤1)在紫外灯下将含有DNA片段的琼脂糖凝胶切下,转移到一个自备的1.5 ml 离心管中。
* 尽量减少多余的凝胶体积,可缩短溶胶时间。
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在高离序盐存在的情况下,DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅 基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将引 物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲 液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点:
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附 膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试 剂盒膜质量不稳定的弊端。
荡一次帮助加速溶解。
5. 可选,一般不需要:每100mg最初的凝胶重量加入150μl的异丙 醇,震荡混匀。
有时候加入异丙醇可以提高回收率,加入后不要离心。回收大于 4Kb的片段时,不加入异丙醇,加入有时反而可能降低回收效 率。
平衡液预处理吸附柱: 使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤,具体方法参见前文“关 于平衡液的使用”
3. 回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间,过长、过短片段 的回收效率迅速降低。
4. 回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有 关。一般1-15μg, 100bp-5kb的DNA片段,回收率可高达85%。
5. 切胶回收时,紫外灯观察对DNA片段有损坏作用,应该尽可能 使用能量低的长波紫外线,并且尽可能的缩短紫外线下处理的 时间。
1. 在长波紫外灯下,用干净刀片将所需回收的DNA条带切下,尽 量切除不含DNA的凝胶,得到凝胶体积越小越好。
2. 将切下的含有DNA条带凝胶放入1.5ml离心管,称重。 先称一个空1.5ml离心管重量,然后放入凝胶块后再称一次,两次 重量相减,得到凝胶的重量。
3. 加3倍体积溶胶液DD。 如果凝胶重为100mg,其体积可视为100μl,则加入300μl溶胶液。 如果凝胶浓度大于2%,应加入6倍体积溶胶液。 4. 56℃水浴放置10分钟(或直至胶完全溶解)。每2-3分钟涡旋震
◆ 目录号 RP02
◆ 使用手册
◆ 实验室使用,仅 用于体外
◆ TRIpure Reagent 抽提指南
◆ 目录号 RP02
◆ 使用手册
◆ 实验室使用,仅 用于体外
试剂 盒组 成
平衡液
保 50次
100次
200次
存 (DR0101) (DR0102) (DR0103)
室 5ml
温
10ml
20ml
溶胶液 室
7. 加入600μl漂洗液WB (请先检查是否已加入无水乙醇!), 12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
8. 加入600μl漂洗液WB,12,000rpm离心30秒,弃掉废液。 9. 将吸附柱EC放回空收集管中,12,000rpm离心2分钟,尽量除去
漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
2. 使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐,不 抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3. 溶胶液加酚红调制成为了黄颜色,便于观察溶胶效果和监测pH 值变化从而达到最佳结合效果,大大提高回收效率。
4. 改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性,即使样品变 化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。
AidQuick Gel Extraction Kit 琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒
目录号:DR01 适用范围:
适用于琼脂糖凝胶DNA回收
试剂盒组成、储存、稳定性:
◆ TRIpure Reagent 抽提指南
◆ 目录号 RP02
◆ 使用手册
◆ 实验室使用,仅 用于体外
◆ TRIpure Reagent 抽提指南
储存事项:
1. 所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉 淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢 复澄清。使用前应该恢复到室温。
2. 储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效 果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。
3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各 溶液使用后应及时盖紧盖子。
6. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA, 不影响下游酶切、连接等反 应。也可以使用水洗脱, 但应该确保pH大于7.5, pH过低影响 洗脱效率。用水洗脱,DNA片段应该保存在-20℃。DNA片段 如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl, 1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使 用时可以适当稀释。
DD
温 50 ml
50ml×2
200 ml
漂洗液 室 15 ml
25 ml 50 ml
WB
温 第一次使用前按说明加指定量乙醇
洗脱缓 室 10 ml
冲液EB 温
15 ml
15 ml
吸附柱 室
50个
EC
温
100个
200个
收集管 室 50个
(2ml) 温
100个
200个
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
关于平衡液的使用
1. 介绍:核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/ 尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处 理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团,提高核酸的结合能 力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶 液,若不小心碰到,请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶 盖,以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生 成,请加热至37℃使沉淀完全消失。
2. 使用方法:取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中,吸取 100μl的平衡液至柱子中。13000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中 废液,将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完 毕。接后续的操作步骤。
操作步骤
提示:第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,加 入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
6. 将上一步所得溶液加入吸附柱EC中(吸附柱放入收集管中), 室温放置1分钟,12,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废 液。
如果总体积超过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱EC 中。 过滤下的溶胶液和收集管内残存的强碱性平衡液混合后,溶胶液 可能会从黄色变成橘红甚至紫色,此为酚红PH指示剂碱性条件下 的正常颜色变化。
10. 取出吸附柱EC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部 位加50μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中加热 效果更好),室温放置2分钟,12,000rpm 离心1分钟。如果需要 较多量DNA,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适 当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于25μl,体积过小降低 DNA洗脱效率,减少产量。
5. 快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要 乙醇沉淀。
注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的 传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 溶胶液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染 皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水 或者生理盐水冲洗。