大肠杆菌分离鉴定论文
大肠杆菌论文：大肠杆菌 血清型 耐药性 氨基糖苷类药物
大肠杆菌论文：济宁地区鸡源致病性大肠杆菌分离鉴定与耐药性分析【中文摘要】鸡大肠杆菌病虽然不是烈性传染病,但大肠杆菌病给养禽业造成了严重的经济损失,是禽病调查中最常报道的疾病及胴体废弃的主要原因。
大肠杆菌病对公共卫生也具有重要的影响,可能对人类的健康造成潜在的危害。
大肠杆菌极易产生耐药性,临床上的不规范用药进一步加剧了耐药性的发展。
很多试验表明,大肠杆菌耐药菌株越来越多,耐药谱越来越广,甚至有的菌株对尚未广泛用于兽医临床的新型抗生素也表现出很强的耐药性。
在临床治疗中大剂量、盲目使用抗生素不但给兽医临床治疗带来了困难,助长了耐药菌株的产生,同时加剧了治疗和用药的恶性循环,并且对人类健康构成了潜在威胁。
本研究对济宁地区鸡大肠杆菌病的流行情况和致病性大肠杆菌的耐药性状况进行了比较系统的研究,以期探明济宁地区鸡源性大肠杆菌病的流行情况和细菌的耐药现状,从而为有效控制济宁地区鸡大肠杆菌病的发生流行提供可靠的理论依据。
本研究主要分三部分进行:试验一2009～2010年自山东省济宁地区的12个县市区36个规模化鸡场采集的疑似鸡大肠杆菌病例的内脏病料进行大肠杆菌的分离鉴定,共分离鉴定出33株鸡源大肠杆菌,应用微量平板凝集试验鉴定分离菌株的O抗原血清型,分别属于O78、O35、O1、...【英文摘要】Avian Colibacillosis is a frequently reported disease in chiken and the main reasons of carcass throwing thatbring severe economic loss to poultry industry. Furthermore, Colibacillosis has a hidden danger to public health. Drug resistance is easily produced in Escherichia coli ,and not standard Medication make the condition more severely.In thepast few years, more and more Escherichia coli strians with drug resistance were reported, and the drug resistance spectrum in Escherichia coli were wider than befo...【关键词】大肠杆菌血清型耐药性氨基糖苷类药物【英文关键词】Escherichia coli serotype drug resistance aminoglycoside【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发【目录】济宁地区鸡源致病性大肠杆菌分离鉴定与耐药性分析中文摘要6-8Abstract8-9引言10-28试验一济宁地区鸡源致病性大肠杆菌的分离与鉴定28-33 1 材料与方法28-29 1.1 材料28-29 1.1.1 病料28 1.1.2 培养基28 1.1.3 主要仪器和设备28-29 1.2 方法29 1.2.1 营养琼脂平板和麦康凯琼脂平板的制备29 1.2.2 病原菌的分离培养29 1.2.3 病原菌的纯化29 1.2.4 生化试验29 1.2.5 血清型鉴定29 2 结果与分析29-31 2.1 革兰氏染色镜检29 2.2 病原菌的分离与纯化29 2.3 生化试验29-30 2.4 血清型鉴定30-31 3 讨论31-33试验二鸡源致病性大肠杆菌的耐药性测定33-41 1 材料与方法33-35 1.1 材料33-34 1.1.1 菌株33 1.1.2 培养基及试剂33 1.1.3 供试药敏纸片33-34 1.2 方法34-35 1.2.1 培养基制备34 1.2.2 琼脂纸片扩散法34 1.2.3 测试菌的制备34 1.2.4 平板接种及贴加药敏纸片34 1.2.5 药敏纸片敏感度判定标准34-35 2 结果35-39 2.1 33 株鸡源大肠杆菌药敏试验结果35-38 2.2 33 株鸡源大肠杆菌的多重耐药情况38-39 3 讨论39-41试验三鸡源致病性大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因的PCR 检测41-48 1 材料与方法41-43 1.1 材料41-42 1.1.1 菌株41 1.1.2 器材和试剂41-42 1.2 方法42-43 1.2.1 基因的PCR 扩增引物设计42 1.2.2 模板制备42 1.2.3 PCR 扩增体系42-43 2 结果43-47 2.1 ant(3’’)-Ia 基因的扩增结果43-44 2.2 aac(6’)-Ib 基因的扩增结果44-45 2.3 aph(3’)-IIa 基因的扩增结果45 2.4 FYUA 基因的扩增结果45-46 2.5 IRP2 基因的扩增结果46-47 3 讨论47-48结论48-49参考文献49-53致谢53。
1例种鹅大肠杆菌病病原的分离与鉴定
1例种鹅大肠杆菌病病原的分离与鉴定从江苏兴化市某种鹅场有疑似大肠杆菌病的病死鹅中，通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验、血清型鉴定，分离鉴定出鹅大肠杆菌，其血清型为O11；通过动物致病性试验，该菌株致病性中等毒力；药敏试验结果表明，所分离的大肠杆菌对氟甲喹、硫酸粘菌素、庆大霉素、阿米卡星高度敏感，这为临床防治鹅大肠杆菌病提供实验依据，并为制备鹅大肠杆菌自家苗奠定基础。
鹅大肠杆菌病为危害养鹅业的主要传染病之一，是由致病性埃希大肠杆菌所引起的，临床表现为心包炎、肝周炎、气囊炎、关节炎以及脑炎等，成年种鹅感染本病，可引起输卵管炎、卵黄性腹膜炎，俗称“蛋子瘟”，导致种鹅繁殖机能降低，甚至引发死亡，给种鹅养殖户带来较大的经济损失。
笔者在社会服务过程中，多次遇到本病，现介绍一例种鹅大肠杆菌病病原的分离与鉴定过程，为鹅大肠杆菌病防治提供参考。
1 材料1.1 病例介绍2018年3月，位于江苏省兴化市的某一种鹅养殖场饲养的约2000只种鹅反复发病。
据主诉，种鹅2～3岁，排稀软的水样粪便，逐渐消瘦，最后死亡；产蛋率下降，蛋的质量也下降，蛋壳粗糙，产软壳蛋，受精蛋率降低，出雏率降低；发病期间先后投喂過氟苯尼考、恩诺沙星、多西环素等抗菌药物，投药期间症状有所改善，但不能完全控制，仍有零星发病和死亡，造成很大的经济损失。
临床检查，发病母鹅表现精神差，羽毛乱，缩头闭眼，产蛋下降，产薄壳蛋、软壳蛋；食欲不振或者废绝，腹部膨大，且明显下垂甚至着地，运动缓慢，严重时如同企鹅姿势。
多数病鹅排白色或黄白色稀便，肛门周围有粪便污染，脱水明显。
发病公鹅症状主要表现在外生殖器上，如阴茎潮红、肿胀，严重者有坏死、溃疡和结节，影响交配。
病理变化，先后挑取病死鹅4只进行解剖，见病鹅消瘦，腹部膨大；切开腹部，可见腹腔内积聚大量淡黄色、浑浊的体液，混有破碎的卵黄。
肝脏肿大，表面有淡黄色凝固的纤维素性渗出物覆盖，掀去覆盖物，见肝表面有针尖大出血点及灰黄色坏死点。
一例孔雀大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验分析
一例孔雀大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验分析1. 引言1.1 背景介绍孔雀大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道菌，也是人类肠道中最主要的细菌。
虽然大多数的大肠杆菌对人类无害，但是某些毒性菌株也能引起人体感染和疾病。
一些毒性大肠杆菌可引起食物中毒，导致腹泻、呕吐和腹痛等症状。
对大肠杆菌的分离、鉴定和药敏试验分析显得极为重要。
随着抗生素的广泛使用，越来越多的细菌菌株对抗生素产生了耐药性。
对于孔雀大肠杆菌这样的致病菌株，其耐药性可能会导致治疗困难，甚至危及患者生命。
研究孔雀大肠杆菌的药敏性是非常必要的。
通过药敏试验分析，可以了解孔雀大肠杆菌对各种抗生素的敏感性，为临床治疗提供参考依据。
本研究旨在对孔雀大肠杆菌进行分离鉴定，并分析其药敏性，以期为临床治疗提供更准确的药物选择和指导。
通过本研究，我们希望能更深入地了解孔雀大肠杆菌的特性，为预防和治疗相关感染疾病提供科学依据。
1.2 研究目的研究目的是对孔雀大肠杆菌进行分离鉴定及药敏试验分析，以了解其对人体健康的潜在危害和抗生素耐药性情况。
通过实验材料与方法的详细操作，我们将成功地分离出孔雀大肠杆菌并进行对其的鉴定，进而对其药敏试验进行分析。
研究的目的在于为临床医学提供更加全面和准确的数据支持，帮助医生更好地选择治疗方法和抗生素，从而保障患者的健康和生命安全。
通过对孔雀大肠杆菌的药敏试验分析，我们也可以了解其对不同抗生素的耐药性情况，为抗菌药物的研究和开发提供参考依据，从而有效应对细菌耐药性的问题。
通过本研究，我们旨在深入探讨孔雀大肠杆菌在临床实践中的重要性，并为未来相关研究和临床工作提供宝贵的数据支持和指导。
2. 正文2.1 实验材料与方法- 孔雀大肠杆菌菌株（提供者：XX实验室）- 培养基：LB琼脂培养基、MacConkey琼脂培养基- 抗生素：青霉素、氨苄青霉素、氨甲苄青霉素、头孢菌素、氨苄青霉素、喹诺酮类抗生素- 孔雀大肠杆菌的分离鉴定：将孔雀大肠杆菌菌株接种于LB琼脂培养基中，培养过夜后，观察菌落形态和颜色，并进行革兰染色和生化试验，如氧化-发酵试验、蔗糖发酵试验等，以确定其为孔雀大肠杆菌。
大肠杆菌的分离鉴定
大肠杆菌的分离鉴定
大肠杆菌是一种重要的肠道细菌，对于科学家和医生来说具有重要的研究和治疗价值。
分离和鉴定大肠杆菌的方法有许多种，本篇文章将介绍几种比较常见的方法。
1. 感染部位样本的获得
首先需要获得感染部位的样本，可分为分泌物、血液、尿液、粪便等。
获得样本的方
法可以根据不同部位进行取样，比如粪便可以通过肛门插入取样器进行获取。
2. 抗生素筛选
将样本接种于相应的富营养基质，对其中加入多种抗生素。
根据对应的扩散系数，只
有大肠杆菌具有生长优势，因此只有大肠杆菌能够在抗生素的存在下继续生长。
3. 纯化
从上面的富营养基质中挑选具有脐带颜色和形态特征的菌落，将其在富营养基质上进
行纯化。
纯化后的大肠杆菌能在多种富营养基质上进行生长即可分离。
4. 经典分离法
包括肉汤琼脂平板法、 MacConkey琼脂平板法、格拉莫琼脂平板法、 EMB琼脂平板法等一系列基本细菌检测方法。
1. 化学特性法
常用方法有氧化氨酸特性试验、熏蒸酸特性试验、脱氧氮碱试验、醛类试验等。
通过
观察变化与发色的差异，以及其化学反应程度来判断是否为大肠杆菌。
通过观察菌落形态、革兰染色阳性反应、运动情况、气体代谢情况等特性判断是否为
大肠杆菌。
可采用比色相比法、蛋白溶液胶片法、氧测定法、etc。
3. 抗原性鉴定
通过采用血相似抗原、鞭毛抗原、菌体抗原等抗原进行抗血清试验，来确定是否为大
肠杆菌。
仔猪致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验
仔猪致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验彭贵青吴斌刘梦元(华中农业大学畜牧兽医学院武汉430070)摘要本试验从20多个猪场中采集腹泻仔猪粪便，进行大肠杆菌的分离培养，经生化鉴定和致病性检测，共获得276株致病性大肠杆菌；并从水肿病猪的水肿液中分离鉴定出4株水肿病致病性大肠杆菌。
对其中112株进行了药敏实验，发现对先锋V、呋喃妥因、痢特灵敏感性较高，对其他抗生素都有不同程度的耐药性；随机抽取10株分别进行了5种微量发酵管实验，发现全部都能发酵乳糖、甘露醇，不发酵肌醇和纤维二糖，部分利用半乳糖苷、酶；此外对广西某猪场分离出的致病性大肠杆菌进行了黏附素抗原鉴定，发现不含有K88、K99、987P黏附素抗原。
关键词：猪；致病性大肠杆菌；分离鉴定；药敏实验仔猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的不同类型的疾病的总称，在我国各地猪场均有发生。
按发病日龄可分为：仔猪黄痢，仔猪白痢，仔猪水肿病[1]。
仔猪黄痢，主要1~3日仔猪发病以排出黄色粪便和迅速死亡为特征，窝发病率高达90~95%，头发病率在30~60%之间，死亡率一般30%左右，有的高达80%以上乃至全窝死亡；仔猪白痢，10~30日龄发病，发病率可达80%，死亡率较低，影响仔猪场几乎无处不在，且有明显上升趋势；仔猪水肿病，断奶后发病，死亡率可达100%。
据统计，我国1997年1~6月猪大肠杆菌病发病数104511头，直接经济损失达5千万元。
[2] 仔猪黄、白痢是目前规模化猪场影响仔猪存活率的严重制约因素[3]。
大肠杆菌（Ecoli）在分类上属于肠杆菌科埃希氏属，通常认为该属只含大肠杆菌一个种，种以下一律为血清型[4]。
其抗原构造及血清型极为复杂，抗原主要有O、K、H抗原。
据最新报道O抗原有171种，引起仔猪发病的常见血清型为O101、O64、O138、O141、O147、O149、O157、O8、O9、O20；K抗原103种；H抗原53种[5]。
此外与仔猪水肿病有关的纤毛F抗原有K88、K99、987p、F107及F41[3]。
大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验
河南农业大学本科生毕业论文(设计)题目鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验学院牧医工程学院专业班级2011届动物医学专升本3班学生姓名王张凡指导教师许兰菊(教授)撰写日期：2011年5月10 日鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验王张凡（2011届动物医学专升本3班）摘要：为了对巩义某鸡场疑似鸡大肠杆菌病的鸡群进行确诊，并为有效防治提供依据，本研究利用细菌学检验方法对采集的典型病料进行细菌分离鉴定和细菌药敏试验。
通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验、动物试验和血清学试验。
结果表明：该鸡群中分离到的病原菌为鸡大肠杆菌。
动物攻毒试验结果表明：分离的鸡大肠杆菌具有明显的致病作用，雏鸡发病率为100%(5/5)，死亡率达60%(3/5)。
血清学鉴定结果显示，该分离菌血清型为O1。
药敏试验结果表明：该细菌对头孢曲松、头孢唑林、阿米卡星、复方新诺明（磺胺甲恶唑）、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、氨苄西林、米诺环素和庆大霉素均敏感，对阿莫西林和阿奇霉素为中度敏感;但对罗红霉素和四环素耐药。
本研究结果对准确诊断和有效防治该病提供了依据和条件。
关键词：鸡；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验Isolation, Identification and Antibiotic Sensitivity Testof Chicken Escherichia Coliwang zhangfan(Class 3 of Veterinary Medicine, Graduated in 2011)Abstract:In order to make a definite diagnosis for the suspend Chicken Escherichia Coli about chicken house from Gongyi and provide a reference for effective prevention and treatment. The bacteria was isolated and identified from typical samples and antibiotic sensitivity test was also adopted. By bacterial separate cultures, morphological observation, biochemical tests, animal experiment and serological tests, the pathogen of this chickens is pathogenic E.coli bacteria. The result of animal experiment showed: this Escherichia coli had obviously pathogenic; the morbidity of chicklings was 100%(5/5) and the mortality was 60%(3/5).Serological testing results indicated: the serotype of this strain was O1. The antibiotic sensitivity test results illuminated: the sensitivity of the strain to ceftriaxone、cefazolin and other 8 kinds of drug were sensitive; and the drug sensitivity to amoxicillin and azithromycin are intermediate;but the strain were drug resistant to roxithromycin and acheomycin. This research provided a scientific basis and qualification for exact diagnosis and effective prevention and treatment to Escherichia coli.Key word:Chicken,Escherichia Coli, Isolation and Identification, Antibiotic Sensitivity Test鸡大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(avian pathgenicity E．coli，APEC)引起的急性或慢性细菌性传染病，各种日龄的鸡均可发病，但雏鸡和产蛋鸡更易发病，其常与其他疾病混合感染加重病情，该病表现不同的病型，常见的病型有急性败血症、气囊炎、腹膜炎、卵巢炎、输卵管炎、脐炎、肉芽肿等[1, 2]。
一例孔雀大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验分析
一例孔雀大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验分析孔雀大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，在环境中也可能存在。
它属于革兰氏阴性菌，具有类似肠道大肠杆菌的形态特征。
本文将介绍一例孔雀大肠杆菌的分离、鉴定以及药敏试验的分析过程。
我们需要从样本中分离出孔雀大肠杆菌。
可以选择从病人的粪便样本中进行分离，也可以从不同环境中采集样本进行分离。
接下来，将样本进行预处理。
将样本接种到选择性培养基上，如MacConkey琼脂培养基。
然后，将培养基培养在37℃的恒温箱中，静置培养24小时。
在培养过程中，孔雀大肠杆菌会在MacConkey琼脂培养基上形成粉红色的菌落，这是由于它的产酸性导致的。
接下来，我们需要进行菌落的鉴定。
可以选择进行形态学观察、生化试验以及分子生物学鉴定等多种方法进行。
形态学观察是最常用的鉴定方法之一。
我们可以观察菌落的形状、颜色以及表面特征等。
孔雀大肠杆菌的菌落通常呈粉红色，呈圆形或略呈卵形。
生化试验也是常用的鉴定方法之一。
可以选择进行气体产生试验、酮酸产生试验等。
孔雀大肠杆菌通常会产生气体以及酮酸。
分子生物学鉴定可以进一步确定菌株的种属和亚种。
可以选择进行16S rRNA基因测序或者PCR扩增等方法进行。
我们需要进行药敏试验的分析。
可以选择将菌株分离培养在含有不同抗生素的琼脂培养基上，观察抑菌圈的形成情况。
孔雀大肠杆菌对不同抗生素的敏感性可能会有差异。
通过上述的分离、鉴定以及药敏试验的分析，我们可以确定孔雀大肠杆菌的存在以及对抗生素的敏感性。
这对于膀胱、肠胃感染等疾病的治疗和控制具有重要意义。
鸡源大肠杆菌的分离与鉴定
菏泽学院Heze University本科生毕业设计（论文）题目鸡源大肠杆菌的分离与鉴定姓名学号系别制药工程系专业动物医学指导教师职称菏泽学院教务处制目录摘要 (1)关键字 (1)Abstract (1)Key words (1)引言 (2)1 材料与方法 (3)1.1材料 (3)1.1.1培养基及配制 (3)1.1.2试验仪器 (3)1.1.3药敏纸片 (3)1.1.4生化发酵管 (3)1.1.5大肠杆菌O因子诊断血清 (4)1.1.6 试验动物 (4)1.2方法 (4)1.2.1病料采集 (4)1.2.2病原体分离 (4)1.2.3病原体的纯培养 (4)1.2.4革兰氏染色镜检 (4)1.2.5生化试验 (4)1.2.6 动物试验 (4)1.2.7 血清学鉴定 (5)1.2.8 药敏试验 (5)2 结果与分析 (5)2.1病菌的培养及镜检结果 (5)2.2 生化试验鉴定结果 (5)2.3 抗原测定结果 (5)2.4 动物试验结果 (5)2.5 药敏试验结果 (5)3 讨论 (6)参考文献 (7)致谢 (8)鸡源大肠杆菌的分离与鉴定动物医学专业学生指导教师摘要：山东青岛即墨某鸡场所养雏鸡发生一种以败血症、高死亡率为特征的急性传染病，病鸡的临床症状多表现为精神萎靡，食欲减退或废绝，排白绿色稀粪等，剖检发现肝脏纤维素性炎症，呈铜绿色，脾充血、肿胀，心外膜水肿等。
从病鸡中分离到一株致病菌，经细菌学检查和动物试验，确定该致病菌为大肠杆菌，抗原鉴定该菌的优势血清型为O78。
环丙沙星、丁胺卡那、卡那霉素、新霉素、链霉素对该菌高敏；庆大霉素、罗红霉素对该菌中敏；对强力霉素、恩诺沙星对该菌低敏；对林可霉素、四环素、阿莫西林对该菌耐药。
关键词：鸡；大肠杆菌；分离与鉴定；药敏试验Isolation and Identification of E.coli from ChickenStudent Majoring in Veterinary MedicineTutorAbstract:An acute infectious diseases characterized by high mortality rate and sepsis was occurrenced in Chicken farms of Jimi in Shandong province, most of the chickens showed clinical symptoms of listlessness,loss of appetite,evacuated white-green liquid manure,and pathological change was showed that liver was copper green with fibrinous inflammation,spleen was congestion and swelling,epicardium edema and so on.A strain was isolated from diseased chickens and was examined with bacteriology inspection and animal test,and the result shows that the strain is Escherichia coli,and the serotype of the bacterium is O78 by antigenic identification.The bacterium is high-sensitivity with Ciprofloxacin,kanamycin,neomycin and streptomycin,middle-sensitivity with Gentamicin and net-mycin,low-sensitivity with doxycycline and enrofloxacin,and drug resistance with lincomycin,tetracycline and amoxicillin.Key words:chicken;Escherichia coli;Isolation and Identification;susceptibility test引言鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的鸡的不同类型疾病的总称[1]，是一种急性或慢性的细菌性传染病。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
河南科技学院2010届本科毕业论文（设计）一起猪源性大肠杆菌病的诊治学生姓名：**所在院（系）：动物科学学院所学专业：动植物检疫导师姓名：王宪文完成时间：2014年5月一起猪源性大肠杆菌病的诊治摘要大肠杆菌病是由病原大肠埃希氏菌所引起的一种急性、多型性、肠道型传染病，严重影响仔猪的存活率。
主要临床表现有仔猪黄痢、仔猪白痢、猪水肿病。
为了弄清养猪场大肠杆菌病的主要血清型、抗药性等特点，以便采取合理的防治措施，采集病料60份，进行大肠杆菌病的分离培养鉴定、生化试验、耐药性试验等，大肠杆菌的分离鉴定包括病原菌的分离培养、生化试验、毒理试验，在伊红美蓝上挑出略带金属光泽、紫黑色的菌落接种在麦康凯上经过培养后，轻摇显云雾状的菌环，在营养琼脂上培养形成菌落，进行试验找出菌落的特性，以及致病力。
耐药性实验结果表明（），治疗试验中------，试验结论--。
（方法为培养基的制备、琼脂纸片扩散法，氟哌酸、磺胺、四环素对大肠杆菌不太有效，大肠杆菌对头孢类药物较为敏感，对卡那霉素、庆大霉素不敏感）（删除）关键词：仔猪、大肠杆菌、分离鉴定、药敏试验、中草药制剂AbstractEscherichia coli disease is an acute, polymorphism, intestinal infectious diseasescaused by pathogenic Escherichia coli, seriously affect the survival rate of piglets. The main clinical manifestations of yellow scour of newborn piglets, white scour of piglets, edema disease of swine. In order to understand the swinecolibacillosis serotype, drug resistance, in order to take reasonable measures of prevention and cure disease, collecting material is 60, separation of Escherichia coli culture identification, biochemical test, resistance test, isolation, isolation and identification of pathogenic bacteria Escherichia coli include biochemical test,toxicity test, in eosin methylene blue was inoculated with metallic luster, pick out the purple black at mark Kang Kai. After training, annulus rocked the explicitcloud like, culture form colonies on nutrient agar, find out the characteristics ofcolony, and pathogenicity. Methods drug sensitivity test for the preparation of culture medium, agar disk diffusion method, norfloxacin, tetracycline andsulfonamide, less effective against Escherichia coli, E. coli sensitive tocephalosporins, not sensitive to kanamycin, gentamicin,Key words: Piglet, Escherichia coli, isolation and identification, drug sensitive test, micro ecological preparation目录前言 (1)1 材料与方法 (2)1.1 材料 (2)1.1.1 病料 (2)1.1.2 培养基 (2)1.1.3 试验仪器 (2)1.1.4 试验动物 (2)1.1.4 其他材料 (2)1.2试验方法 (2)1.2.1 细菌分离培养 (2)1.2.2 染色镜检 (2)1.2.3 生化试验 (2)1.2.4 增菌纯培养 (2)1.2.5 动物攻毒试验 (2)1.2.6 血清学鉴定 (3)1.2.7 药敏试验 (3)1.2.8 治疗试验 (3)2结果与分析 (4)2.1细菌分离培养 (4)2.2染色镜检 (4)2.3生化试验 (4)2.4 增菌纯培养 (4)2.5 动物攻毒试验 (4)2.6 血清学鉴定 (5)2.7 药敏试验 (5)2.8治疗试验 (6)3 讨论 (7)4 结论 (9)参考文献 (9)前言大肠杆菌是革兰氏阴性菌，繁多的种类，大多数是非致病性的共生菌，是人和动物肠道的正常寄居菌，是构成肠道正常菌群的主要组成部分，一些特殊的血清型具有致病性，易使人和物产生疾病，致病性大肠杆菌分为五大群：肠毒素大肠杆菌、志贺毒素大肠杆菌、败血性大肠杆菌、肠道致病性大肠杆菌、尿道致病性大肠杆菌[1]。
比如腹泻、泌尿道的感染、肺炎新生儿脑膜炎、心内膜炎、以及家禽的卵黄性腹膜炎、猪黄白痢、水肿等疾病。
大肠杆菌是条件性病原微生物，动物体抵抗力下降，在应激条件下，细菌的致病性可表现出来，感染猪发病，造成猪大批死亡或发育不良，成为发展养猪业的重大障碍之一。
有大肠杆菌引起的猪大肠杆菌病由于猪生长期和发病的血清型不同由此引发的疾病分为:仔猪黄痢、仔猪白痢以及猪水肿三种。
自从青霉素被发现以来，抗菌药物的研究和使用得到了长足的发展。
因此有人断言：随着更多的抗生素的相继问世，困扰人类和动物的细菌感染将一去不复返。
现在社会中存在广谱抗菌药的滥用、耐药基因的转移和其他原因造成的耐药性，给人类产生了新的难题。
现在摆在我们面前的不是通过广谱抗菌药的滥用使细菌消失，而是各种耐药病菌的死灰复燃[2]。
研究细菌耐药性和新的抗菌手段这个话题是长期甚至是永恒的。
当今耐药性和严重传染病已经被放在同一位置被讨论。
仔猪黄痢又称早发性大肠杆菌病，1～7日龄仔猪易发，主要临床症状有剧烈腹泻，排黄水样稀便，死亡率高，剖检尸体常脱水严重，皮下常有水肿，肠道膨胀，肠粘膜呈急性卡他性炎症变化，以十二指肠最为严重[3]。
平顶山市新希望养猪场是一个中型养殖场，采用封闭式管理模式。
于2014年3月初饲养一批乳猪，3日龄时突发性腹泻，食欲减退，粪便稀薄且呈黄色，有死亡现象出现，7日龄时死亡率已经达到78%。
最近几年，伴随着养猪业的发展与进步，一部分大肠杆菌性疾病却日益严重比如猪白痢、黄痢，使整个养猪行业经济损失非常严重。
大肠杆菌是一种易产生耐药性的细菌，整个行业滥用抗生素现象严重，再用一般的方法对病猪治疗效果上会大打折扣。
因此通过用分离鉴定的方法找出致病菌，通过药敏试验使用特定的药物，对症治疗才能收到理想的效果。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 病料病料来源于平顶山市新希望养殖场，发病乳猪30头，死亡乳猪30只，无菌操作，剖检分别采集乳猪肠内容物、心、肝等病料，共采集60份病料，冷冻保存。
1.1.2 培养基肉汤培养基、营养琼脂培养基按常规方法配制[4]。
麦康凯培养基、伊红美蓝培养基由上海生物制品有限公司生产，按说明说使用。
1.1.3 试验仪器普通光学显微镜；葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、木糖、乳糖、甘露醇、肌醇、枸橼酸盐、蛋白栋、磷酸盐蛋白栋水、尿素酶、硫化氢细菌微量生化反应管1.1.4 试验动物30只小白鼠，10只为试验组，10只为肉汤对照组，10只为空白对照组。
30只小鼠均隔离饲养三天，观察小鼠活动情况正常。
40只2日龄健康乳猪，隔离饲养2天，观察乳猪活动情况正常。
1.1.4 其他材料23种大肠杆菌标准单因子血清；药敏纸片；头孢噻肟等药物1.2 试验方法1.2.1 细菌分离培养无菌操作台中操作，将60份样品分别进行划线接种，分别接种在普通琼脂培养基和伊红美蓝培养基上，在恒温箱中37℃培养24h。
然后从伊红美蓝培养基上挑取可疑菌落划线接种于麦康凯培养基上，在恒温箱中37℃培养24h。
1.2.2 染色镜检挑取麦康凯培养基上的可疑菌落，按革兰氏染色方法[5]，进行染色镜检。
1.2.3 生化试验通过常规方法用接种针挑出麦康凯培养基上的上的可疑菌落，分别接种在各种细菌喂料发酵管中，略微倾斜放置于恒温培养箱中，37℃培养24至48h.1.2.4 增菌纯培养对生化试验鉴定为大肠杆菌的菌种，无菌操作，接种于普通肉汤培养基中，于恒温培养箱中，培养24h，进行增菌培养。
1.2.5 动物攻毒试验取增菌培养得到的纯培养物，用生理盐水进行10倍稀释。
对10只试验组小鼠腹腔注射稀释后的纯培养物，每只1.5ml；肉汤对照组10只小鼠，每只腹腔注射1.5ml肉汤；空白对照组小鼠不做任何处理。
30只小鼠均隔离饲养72h，定期观察并记录小鼠发病和死亡情况。
取发病和死亡小鼠的心脏抹片，革兰氏染色镜检。
1.2.6 血清学鉴定把被检菌株分别接种在普通琼脂和肉汤试管内，恒温培养箱中，37℃培养24h。
培养期间震荡肉汤多次。
用0.5﹪石碳酸生理盐水2～3ml洗下普通琼脂培养物，放置在圆底试管中制成悬液，而后与肉汤培养物一起置于120℃高压2小时以便破坏“k”抗原，制备成高压抗原。
培养物用于玻片凝集，肉汤做试管凝集。
挑取圆底试管中的高压抗原与标准的大肠杆菌单因子血清进行各自的玻片凝集反应。
取0.02ml移液管把高压抗原和单因子血清各取0.02ml置于玻板上，用无菌牙签进行混匀，3～10min内出现凝集现象的为“阳性”，与此同时以标准的血清型菌种的抗原和单因子血清型作比较对照，把高压抗原和百分之零点五石碳酸生理盐水的混合物进行对比，观察是否出现自凝现象。
1.2.7 药敏试验本实验用美国临床实验室标准委员会Nccls的方法做药敏试验[6]。
用一般方法把营养琼脂制成平板，然后把其放在温度为四摄氏度的冰箱储存。
在无菌室中打开营养琼脂盖子，用棉签吸取菌液，对试管进行用力挤压，把无菌棉签中多余的的液体挤出。
在营养琼脂上用棉签进行划线，同样的操作进行两次，把平板旋转六十度，把平板表面均匀涂满。
把各个平板通过棉签反复吸收菌液，分为3个平板，一一作标记。
在无菌室内进行操作，镊子取药敏试纸片根据抗菌的不同按照一定的顺序排列分布在培养皿表面，药敏纸片需与琼脂面全部接触，每十五分钟把药敏纸片翻转过来进行培养，把其放在恒温室中进行培养，恒温培养箱中，37℃培养24h 后，观察记录结果。