高效液相色谱仪LC-100资料
高效液相色谱仪ppt课件
高压泵应具有以下性能
流量稳定，精度在1%左右 输出压力高，通常20~30MPa，最高50 MPa 流量范围宽，一般在0.01~10mL/min范围内 能抗溶剂腐蚀 压力波动小、更换溶剂方便、容易清洗、具梯度洗脱 操作方便、容易维修
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根据泵的操作原理不同，分为恒压泵和恒流泵
进样装置 （正面）
进样装置 （背面）
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图中a为进样阀处于“装样load”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱，
样品注入口与样品环连接，用微量进样针将一定体积的样品溶液从样品 注入口注入，装于样品管内。当将扳手扳至“进样inject”位时，进样阀的 流路发生了改变，流动相通过样品管，将注入的样品带入色谱柱进行分析。
的出峰顺序相反。
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2. 流动相类别
按流动相组成成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 正己烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇、 甲 醇、异丙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
氰基(CN)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基 团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即 极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱；正相色谱使用的流动相极性相 对比固定相低，如正已烷、氯仿 、二氯甲烷等。
反相柱：固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的
键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲 醇，乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被 冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填 料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
大学资料仪器分析实验讲义-新编
仪器分析实验讲义实验项目一、醇类混合物的气相色谱分析 (2)二、液相色谱仪的基本操作及对物质的分离、定性鉴定--对羟基苯甲酸酯类混合物的反相高效液相色谱分析... (5)三、酊剂中乙醇含量的气相色谱测定(已知浓度样品对照法) (7)四、乙酸的电位滴定分析及其解离常数的测定.............. . (9)五、氯离子选择性电极测定水中氯含量.............. (11)六、鉴定和识别有机化合物中的电子跃迁类型 (14)七、紫外-可见光谱法测定苯甲酸钠含量.............. .. (19)八、火焰原子吸收光谱法测定自来水中钙、镁的含量.............. . (21)醇类混合物的气相色谱分析一、实验目的（1）了解气相色谱仪的结构、各组成部分的作用及相互关系。
（2）熟悉仪器的一般使用方法，巩固色谱分析实验技术。
（3）了解定性鉴定的依据和方法的原理及方法；（4）熟练掌握微量进样器进样技术。
二、实验原理1、气相色谱仪流程（见下图）：图1 气相色谱仪流程图各种物质在一定的色谱条件(固定相与操作条件等)下有各自确定的保留值，因此保留值在色谱分析中可作为一种定性指标。
对于较简单的多组分混合物，若其中所有待测组分均为已知且它们的色谱峰均能分开，则可将混合物图谱中各个色谱峰的保留值与各相应的标准试样在同一条件下所得的保留值进行对照比较，就能确定各色谱峰所代表的物质，这就是纯物质对照法定性的原理。
该法是色谱分析中最常用的一种定性方法。
本实验即采用纯物质对照法对有机混合物中各组分进行定性鉴定。
三、仪器与试剂1.仪器天美GC-7900气相色谱仪（FID氢火焰离子化检测器）；氢气、空气发生器；氮气瓶，微量进样器(1µL)。
2.试剂甲醇、正丙醇均为分析纯；混和醇样四、仪器操作条件色谱柱：10%PEG-20M填充柱，3m(L)×4mm(OD)×3mm(ID)；进样量：1µL；柱温：140ºC；气化室温度：150ºC ；检测器：FID；检测器温度：200ºC；五、实验步骤1．启动计算机，打开色谱仪主机及空气、氮气发生器开关，打开载气输出压力为0.5Mpa，启动软件，根据分析要求设置柱箱、汽化室和检测器的工作温度。
LC-MS基础资料
〔3〕母离子扫描
母离子分析可用来鉴定和确认类型的化合物， 尽管它们的母离子的质量可以不同，但在分裂 过程中会生成共同的子离子，这种扫描功能在 药物代谢争论中特殊重要。
(4)中性丧失扫描
中性丧失扫描分析可用来鉴定和确认类型的化 合物，例如新生儿遗传疾病筛查中某些检测工 程。也可以帮助进展未知物构造推断，例如有 中性丧失18Da的意味着-H2O，28-CO，30HCOH，32-CH3OH，44-CO2等等。
Ionic
IonSpray
电喷雾电离源
APCI
大气压化学电离源
Analyte Polarity
GC/MS
Neutral
101
102
103
104
105
Molecular Weight
LC_MS接口的作用
将淋洗剂及样品气化 分别除去大量的淋洗剂分子适应MS的高真空 样品分子的电离
常用的离子源:
279.1591 m/z 316, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 384, 瓶的光稳定剂产生的离子 m/z391, 管路中邻苯二甲酸二辛酯, C24H38O4H+,
391.2843 m/z413, 邻苯二甲酸二辛酯+钠, C24H38O4Na+,
413.2668
分子量测定失败的缘由
子离子分析〔 MS/MS 〕 子离子，用于构造推断(得到化合物的二级谱图即碎
片离子)和选择离子对作多种反响监测〔MRM〕。
子离子谱图与锥体电压断裂谱图〔源内CID〕可能特殊 相像，所不同的是子离子质谱图只有一种质量通过MS1， 因此也全部碎片离子都是由我们所选定的母离子所产生 的，所以我们更信任由MS/MS产生的谱图的纯度。
高效液相色谱资料
高效液相色谱资料色谱法的分离原理：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
HPLC有以下特点：高压——压力可达150~300 Kg/cm2。
色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。
高速——HPLC流速一般为0.1~10.0 ml/min，制备型可达100 ml/min。
高效——可达5000塔板每米。
在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng，荧光检测器可达0.1pg，同时消耗样品少。
基本参数：色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。
基线(base line)——经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴。
噪音(noise)——基线信号的波动。
通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。
主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。
流出曲线上的突起部分。
正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。
不对称色谱峰有两种：前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。
前者少见。
拖尾因子(tailing factor，T)——T＝，用以衡量色谱峰的对称性。
《中国药典》规定T应为0.95~1.05。
T＜0.95为前延峰，T＞1.05为拖尾峰。
峰底——基线上峰的起点至终点的距离。
峰高(peak height，h)——峰的最高点至峰底的距离。
高效液相色谱（LC-MS）标准操作规程
上海伍丰LC-100标准操作规程1．目的规范LC-100型高效液相色谱系统的使用和维护。
2．范围本规程LC-100型高效液相色谱系统的使用和维护。
3．职责质检室仪器分析员负责LC-100型高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4．规程4.1 系统组成：本系统由1个LC-100溶剂输送泵，Rheodyne 7725i手动进样阀、LC-100紫外检测器、WS-100工作站和台式电脑等组成。
4.2 准备4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。
4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4.3 开机4.3.1接通电源，依次开启泵、检测器前面板右下角电源开关，待泵和检测器自检结束后（检测器自检需3-5分钟），打开电脑显示器、主机。
4.3.2启动工作站4.3.2.1确认仪器自检通过后，打开计算机电源，双击电脑桌面WS-100图标。
4.3.2.2 进入实时控制及采样画面：4.3.2.3 打开泵的排液阀（逆时针旋180度），排气泡1-2分钟。
再关闭排液阀，待基线平稳（大约需要30分钟左右）数据采集参数设置请单击工具条按钮，进入数据采集参数设置对话框，如图所示：请您输入采集的自动停止时间，各项屏显参数，数据采集的文件名称，采集文件自动保存路径。
文件名称的设置：用户可以自定义文件的命名规则，请鼠标单击名称设置按钮，系统弹出文件命名规则对话框，如图所示：系统会以“前缀+时间”或“前缀+序列号”方式自动命名采样文件。
您还可以在数据采样中更改自动生成的文件名称。
保存路径设置：用户可以自定义文件的保存路径，请鼠标单击保存路径设置按钮，系统弹出保存路径选择对话框，如图所示：开始进样分析：待基线在零点走平后和数据采集参数设置好后即可进样分析。
高效液相色谱法—高效液相色谱仪(仪器分析课件)
• 内梯度：利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定比例送入梯度混 合室，混合后进入色谱柱。
• 外梯度：一台高压泵，通过比例调节阀，将两种或多种不同极性的溶剂按一定 的比例抽入高压泵中混合。
柱子内径一般为1～6 mm。常用的标准柱型是内径为4.6或 3.9 mm ，长度为15～30 cm 的直形不锈钢柱。填料颗粒度5 ～10 μm ，柱效以理论塔板数计大约 7000～10000。
发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
（三）检测器 1. 紫外吸收检测器 紫外吸收检测器是目前HPLC中应用最广泛的检测器。 2. 光电二极管阵列检测器（PDAD） 3. 示差折光检测器（DRD） 4. 电导检测器 5. 荧光检测器 6. 蒸发激光散射检测器
HPLC
HPLC
高效液相色谱仪 一、高效液相色谱仪工作流程及组成
• 1.高效液相色谱仪的工作流程图
一、高效液相色谱仪工作流程及组成 流 动 相
高压泵
2.高效液相色谱仪组成
脱气装置
进 样 阀
色 谱 柱
检测器
检测器
二、仪器操作 （一）开机前 的准备
• 在开机前应详细阅读 仪器使用说明书，了 解仪器的参数、熟悉 仪器操作规程。
高压输液泵
3.. 梯度洗脱装置
高压梯度： 用于二元梯 度，用两个泵分别按设定 的比例输送A和B两溶液 至混合器
（二）进样装置 常见的 进样装置有： 1.隔膜进样 2.停留进样 3.六通进样 4.自动进样
（三）色谱分离系统
色谱柱是色谱仪最重要的部件（心脏）。通常用后壁玻璃 管或内壁抛光的不锈钢管制作的，对于一些有腐蚀性的样 品且要求耐高压时，可用铜管、铝管或聚四氟乙烯管。
LC-100Plus液相色谱仪 说明书
沪制 02290081号使用说明书安装使用产品前请仔细阅读LC-100Plus液相色谱仪上海伍丰科学仪器有限公司付印声明此说明书之内容，修改时将不经通告。
本企业对此说明书中所例材料用于其它目的的可营销性及适用性，不作任何保证，或者默许的保证。
对因此引起的由于使用本材料造成的意外或导致的损坏，本企业将概不负责。
未经本企业的事先书面许可，此说明书之部分或全部均不准复印、翻印或译成它种语言。
安全须知警告信息是提醒您注意可能招致您或他人受到伤害或损坏本仪器的环境和条件。
Array说明信息是提醒您值得关注的重要信息或留意可能会影响本仪器正常工作的环境和条件。
主要原材料供应商伍丰LC-100Plus智能液相色谱仪所用材料及其相关配件均来自世界上著名生产厂商，与其他国际知名液相色谱生产厂家一致，并采用世界先进的加工工艺和技术从而保证了伍丰仪器的产品具有卓越而可靠的品质。
主要的原材料供应商如下：说明LC-100Plus液相色谱仪的数据处理设备，推荐选配WS-100色谱工作站（上海伍丰科学仪器有限公司制造）CD P系列色谱数据处理机（上海伍丰科学仪器有限公司制造）。
这二种设备与LC-100Plus仪器之输出信号完全匹配，能最有效的保证数据采集及处理的准确性。
特别是WS-100色谱工作站采用数字化通信系统，信号动态范围达到106，改变了目前液相色谱需经多重的模数转换带来的信号畸变和干扰，并可在在个人电脑上就可控制液相色谱进行各项操作。
若选配其它型号的色谱数据处理设备，由此引起的信号不匹配而造成数据误差乃至系统故障。
请用户自负后果。
说明由上海伍丰科学仪器有限公司推荐的LC-100PLUS液相色谱仪相关的配件和附件都由本公司经严格测试后认可。
由于用户选择其它品牌或型号的配件和附件，因而引起的相关产品质量，并导致的系统故障。
请用户自负后果。
说明每台LC-100PLUS型液相色谱仪出厂时都必需并经过严格的检验，同机附有检验结果和原始谱图，检验结果符合国家计量检定规程JJG705-2002 《液相色谱仪》及企业标准Q/TOPG03-2004《LC-100PLUS液相色谱仪》。
【完整】高效液相色谱仪课件资料PPT
由于HPL C具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用, 流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医 药研究、环境分析、无机分析等各种领域。
色谱图示例
硅胶层析后活性样品的液相分离图谱
操作过程中应注意的事项
• 流动相 1、 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液 及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系 膜的使用范围； 2、 水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长 菌变质； 3、 使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中 有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置 含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含 盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶， 用于存放水相流动相。
高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非 挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
2、 水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质； 2、 用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大； 高效——塔板数可达5000/米。 色谱柱：
高效液相色谱仪的应用
• 高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性 的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可 以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各 种分子量范围的物质。
• 由于HPL C具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可 反复利用, 流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物 化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种 领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发 展方向。 液相色谱- 质谱连用技术受到普遍重视, 如分析氨基甲酸 酯农药和多核芳烃等; 液相色谱- 红外光谱连用也发展很快, 如在环境污染分析测定水中的烃类, 海水中的不挥发烃类, 使环境污染分析得到新的发展。
LC—9100系列高效液相色谱说明书2
LC—9100系列循环制备高效液相色谱仪说明/操作/服务手册1．简介首先，祝贺您购买由日本分析仪器株式会社生产的LC—9101型制备高效液相色谱仪LC—9101是一款广受欢迎的制备级液相色谱系统。
为了进一步迎合广大客户的不同需求，在保证系统高性能工作的前提下，我们推出了应用了梯度分析法的新型高容量液相色谱系统。
● LC—9101型制备级液相色谱是一台集合了HPLC分析功能和循环系统的液相色谱系统● LC—9102型和LC—9103型可以利用梯度法进行分离制备，同时具有循环和制备功能● LC—9104型是具有高容量循环和制备的液相色谱系统LC—9101型制备高效液相色谱仪的色谱柱具有适合分析和制备的型号。
它包括非水相GPC柱，极性溶剂GPC柱，聚合物填料反相柱，离子交换柱，硅胶柱以及ODS柱，可以用来制备广泛样品。
LC—9101型制备高效液相色谱仪可以装备紫外（UV）检测仪或示差折光检测仪。
这两种都是可以用来分析或制备的传感器。
这里有三种UV检测仪可供选择，分别是固定波长检测仪（波长固定为254nm），UV310型检测仪（波长范围在195nm到370nm之间），以及UV3702型检测仪（波长覆盖紫外线和可见光，范围为370nm到600nm之间）。
除了固定波长检测仪，供分析和制备的检测器的检测池何以利用“一触（one touch）”系统互换。
RI检测器可以用在分析和制备上。
UV检测仪可以选择性检测可以吸收紫外光的物质。
而RI检测器由于高灵敏性，即使是对那些不能吸收紫外光的物质都可检测，所以说它是万能的。
连用这两种检测器可以分析和制备更广泛的物质。
本使用手册包括使用，安装，和维护部分。
对于日常使用，使用部分最为有用。
希望您通过阅读本使用手册可以有效地使用本系统。
发于2001年六月2．使用时应防范的事项请认真阅读如下注意事项1）在给色谱中加入溶剂时请注意。
请不要在JAI GEL-H色谱柱中加入水，酒精，（正）己烷，乙腈等溶剂。
高效液相色谱仪介绍课件
谢谢
号
05
数据处理系统： 处理和分析色
谱数据
06
07
流动相储液瓶： 储存流动相
废液收集器： 收集废液
08
泵管路：连接 各部件，保证 流动相的流通
09
10
温度控制系统： 控制色谱柱和 检测器的温度
安全保护装置： 保护操作人员 和仪器的安全
高效液相色谱仪的工作原理
高效液相色谱仪是一种利用液体 作为流动相的色谱分析仪器。
安装
定期校准与保养
01
定期检查仪器的 各个部件，确保
其正常工作
02
定期更换易损部 件，如泵密封圈、 进样阀密封圈等
03
定期进行仪器校 准，确保分析结
果的准确性
04
定期清洁仪器， 保持仪器的清洁
和干燥
05
定期检查仪器的 电源和接地线，
确保安全使用
06
定期记录仪器的 使用情况和维护 保养情况，便于 日后查询和分析
农药分析
农药残留检测： 检测农产品中的 农药残留，保障
食品安全
农药质量控制： 监控农药生产过 程中的质量，确 保产品质量合格
农药环境污染监 测：监测环境中 的农药污染，评
估环境风险
农药研发：辅助 农药研发，提高 研发效率和质量
环境监测
01
水质监测：检测水中的污染物和化学物质
02
空气监测：检测空气中的污染物和化学物质
药物代谢：研 究药物在生物 体内的代谢过 程和机制
药物相互作用： 研究药物之间 的相互作用和 影响
3
高效液相色谱 仪的发展趋势
仪器自动化
仪器操作自动化：通过计算机控 制，实现仪器的自动化操作
数据处理自动化：自动采集、处 理和分析数据，提高分析效率
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高效液相色谱仪LC-100
P100高压恒流泵
产品主要参数
型号：P100输液单元
液体输送系统双柱塞往复式并联泵，配二元高压混合器
流量范围：0.001~9.999mL/min
最大输出压力：42MPa
流量准确度：≤±0.3%
流量精确度：RSD＜0.06%
定性重复性：RSD 6 ≤0.1%（萘/甲醇标样）
定量重复性：RSD 6 ≤0.3% （萘/甲醇标样）
脉动：0.1MPa
电源：220V/110V
二元高压系统主要参数
型号：LC100HP(二元高压)
混合原理：不同流速的双泵控制梯度比例
混合液体数：2种液体
混合准确度：±1%
混合精密度：±0.2%
定性重复性：RSD 6 ≤0.1%（萘/甲醇标样）
定量重复性：RSD 6 ≤0.3%（萘/甲醇标样）
型号：UV-100紫外检测器
流通池体积：8μL
光源：氘（D2）灯
波长设定范围：190~680nm
光谱带宽：8nm
波长准确度：±1nm
波长精密度：0.1nm以下
噪声：≤0.25×10 -5 AU(静态)/±1×10 -5 AU(动态，在指定条件下)
漂移：≤0.4×10 -4 AU/h(静态)/≤2×10 -4 AU/h(动态，在指定条件下) 最小检测浓度：3×10 -9 g/mL(萘／甲醇溶液)
ARCUS 5 自动进样器主要参数
型号：Arcus 5自动进样器
样品装载：基本托盘（1）2mL×54位（出厂标准配置）
扩展托盘（2）10mL×15位（3）4mL×35位
每一侧可任选一种类型的托盘，两可放置任意类型的托盘，
系统自动识别托盘规格，最多108位（2mL样品瓶）
样品瓶高度：H≤52mm（包括隔垫和瓶盖）
计量泵体积：200μL（精度0.1μL）
取样模式：全定量环取样方式/部分定量环取样方式/样品无损耗取样方式
取样体积：全定量环取样方式：0.1~120μL（根据定量环体积确定）、50μL（标配）部分定量环取样方式：0.1~100μL（可扩展到200μL）
样品无损耗取样方式：0.1~100μL（可扩展到200μL）
定量重复性：全定量环取样方式：RSD 6 ≤0.3%
部分定量环取样方式：RSD 6 ≤0.5%（进样量≥10μL）
样品无损耗取样方式：RSD 6 ≤1.0%（进样量≥10μL）
样品残留：≤0.005%（指定清洗程序）
最大压力：40MPa（常规）60MPa（超高效系统）
自动保护功能：缺瓶报警，顶针报警，管路阻塞报警，泄漏报警
电源：交流115~230V,50/60Hz。