04实验四邻二氮菲分光光度法测定铁的含量-教案
《分光光度分析》实验四 邻二氮菲分光光度法测定铁
(7) 盐酸溶液(6 mol· -1) L
(8) 铁标准溶液(20 g· -1，200 g· -1配成250mL，见后面) mL mL 说明： (1) - (7) 由实验室教师配制，(8) 每组配制一份
四、实验内容
条件试验
铁含量的测定 摩尔比法测定配合物的组成比、摩尔吸光系 数及反应的平衡常数
亚铁的含量?试拟出一简单步骤。
4. 制作工作曲线和进行其它条件试验时，加入
试剂的顺序能否任意改变?为什么?
50 mL 容量瓶
1 mL盐酸羟胺溶液 摇匀
用水稀释至刻度，摇匀 放置l0 min
X mL 1 mol· -1 NaOH L
l cm比色皿 绘制A与pH关系 的酸度影响曲线
以蒸馏水为参比 在所选择的波长下，测量各溶液的吸光度 (用pH计测量溶液pH值) A
pH
X mL NaOH: 0.00 mL，0.20 mL， 0.50 mL，1.00 mL 1.50 mL，2.00 mL ， 2.50 mL, 3.00 mL
2+
Fe2+ + 3 N N N Fe N
3
lg 3=21.3
Fe3+与邻二氮菲生成1:3的淡蓝色配合物，其lg 3＝14.1
盐酸羟胺还原
2 Fe3++2NH2OH· HCl=2 Fe2++N2+4H++2H2O+2Cl-
为了尽量减少其他离子的影响，通常在微酸性(pH约5)溶液中
显色。
本法的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、
实验四
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验 邻二氮菲分光光度法测定铁
实验邻二氮菲分光光度法测定铁一、实验目的1、通过分光光度法测定铁的条件实验，学会如何选择分光光度分析的条件及分光光度测定铁的方法。
2、了解分光光度计的性能、结构及其使用方法3、学会使用TU-1810紫外可见分光光度计二、实验原理邻二氮菲(phen)和Fe2+在pH3～9的溶液中，生成一种稳定的橙红色络合物Fe(phen) 32+，其lgK=21.3，κ508=1.1 ×104L·mol-1·cm-1，铁含量在0.1～6μg·mL-1范围内遵守比尔定律。
其吸收曲线如图1-1所示。
显色前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。
有关反应如下：2Fe3++2NH2OH·HC1＝2Fe2++N2↑+2H2O+4H++2C1－图1-1 邻二氮菲一铁(Ⅱ)的吸收曲线用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度(A)，以溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度值，即可计算试样中被测物质的质量浓度。
三、仪器和试剂1．仪器TU-1810紫外可见分光光度计，pH酸度计等2．试剂(1)100ug·mL-1铁标准储备液准确称取0.702 0 g NH4Fe(S04)2·6H20置于烧杯中，加少量水和20 mL 1:1H2S04溶液，溶解后，定量转移到1L容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
(2)10 ug·mL-铁标准溶液用吸量管移取25mL 100ug·mL-1铁标液于250mL容量瓶中，加入4mL6mol·L-1HCl溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
（学生自配）(3)100 g·L-1盐酸羟胺水溶液用时现配。
实验四_邻二氮菲分光光度法测定铁
实验四邻二氮菲分光光度法测定铁一、实验目的1. 学习721型分光光度计的使用方法；2. 学习测绘吸收曲线的方法；3. 掌握利用标准曲线进行微量成分分光光度测定的基本方法和有关计算。
二、实验原理邻二氮菲(phen)和Fe2+在pH3～9的溶液中，生成一种稳定的橙红色络合物Fe(phen) 32+，铁含量在0.1-6μg/mL范围内遵守比尔定律。
其吸收曲线如图1所示。
显色前需用盐酸羟胺（或抗坏血酸）将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。
有关反应如下：2Fe3+ + 2NH2OH·HC1＝2Fe2+ + N2↑+ 2H2O + 4H+ + 2C1-图1 邻二氮菲一铁(Ⅱ)的吸收曲线用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度(A)，以溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度值，即可计算试样中被测物质的质量浓度。
三、仪器和试剂1. 仪器721或722型分光光度计。
2. 试剂(1) 标准铁溶液I – 10-3mol/L准确称取0.4822g的NH4Fe(SO4)2·12H2O置于烧杯中，加入80 mL的1:1HCl 及少量去离子水溶解，定量转移到1L容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
(2) 标准铁溶液II-含Fe100微克/毫升准确称取0.8634g的NH4Fe(SO4)2·12H2O置于烧杯中，加入20 mL的1:1HCl 及少量去离子水溶解后，定量转移到1L容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
(3)盐酸羟胺10%水溶液称取10g盐酸羟胺容于100mL水中，用时现配。
(4)邻二氮菲0.15%水溶液称取0.15g的1,10-邻二氮菲于100mL水中，若不溶可稍加热。
避光保存，溶液颜色变暗时即不能使用。
邻二氮菲吸光光度法测定铁实验操作方法.doc
邻二氮菲吸光光度法测定铁实验操作方法.doc一、实验目的：通过邻二氮菲吸光光度法，测定水样中的铁含量。
二、实验原理：邻二氮菲吸光光度法又称为费-利反应，它是一种测定铁含量的重要方法。
当邻二氮菲的溶液与铁离子溶液混合时，铁离子能够与邻二氮菲形成深色络合物，且该络合物的红外吸收峰较强，因此可以利用紫外可见分光光度计测定吸收强度，从而测定铁离子的浓度。
三、实验步骤：1.样品制备将水样加热至90℃，用去离子水将样品稀释至100mL。
2.制备标准铁溶液取一定质量的氯化铁，精密称量，用去离子水将其稀释至100mL，即得1mg/L的标准铁离子溶液。
3.制备邻二氮菲溶液将下列试剂按照指定比例配制成邻二氮菲溶液。
4.进行反应分别取25mL水样，1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L的标准铁溶液，加入滴定管中。
在每个样品管和标准管中加入2mL邻二氮菲溶液和3mL试剂3，加去离子水至刻度线，并用橡胶塞塞紧。
混匀之后，放置于水浴锅中，将水浴锅加热至70℃。
于90℃取出样品管，冷却后，用去离子水洗净吸光度比色皿，用去离子水将样品注入其中，测量吸光度。
在吸光度增加速率最快时，确定所测吸光度。
5.建立标准曲线将标准铁溶液的吸光度测量值用磷酸根校正。
用吸光度与浓度制作标准曲线。
6.测定样品中的铁含量测量待测水样的吸光度，并用标准曲线求得单位体积内铁的含量。
四、实验注意事项：1.实验过程中要避免水样和标准溶液的误差。
2.吸光度比色皿和滴定管等玻璃器皿要清洁干净。
使用前用去离子水洗净并烘干。
在取样时需反复用去离子水进行漂洗，避免残留物影响结果。
3.加入液体试剂时，使用滴管要慢慢滴加，避免气泡产生。
4.实验时应避免阳光直射，室内温度要适宜。
5.对于测量结果不准确的情况，可以重复实验，取多次测量结果的平均值。
6.实验结束后，用去离子水将仪器和器皿彻底洗净，并干燥。
五、实验设备：1.紫外可见分光光度计2.恒温水浴3.取样瓶、铁离子标准溶液、邻氮二菲、试剂3等实验器材和试剂六、实验结果及分析：在标准曲线中，吸光度与铁离子的浓度呈直线关系，从而得出待测水样中铁的含量。
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
实验二邻二氮菲分光光度法测定铁的含量一、实验目的1．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的方法;2．了解分光光度计的构造、性能及使用方法。
二、实验原理邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的较好试剂，在pH=2～9 的条件下，二价铁离子与试剂生成极稳定的橙红色配合物。
配合物的lgK稳＝21.3，摩-1 -1尔吸光系数510＝11000 L m·ol-1·cm-1。
在显色前，用盐酸羟胺把三价铁离子还原为二价铁离子。
4Fe3+＋2NH2OH→4Fe2+＋N2O ＋4H＋＋H2O测定时，控制溶液pH＝ 3 较为适宜，酸度高时，反应进行较慢，酸度太低，则二价铁离子水解，影响显色。
用邻二氮菲测定时，有很多元素干扰测定，须预先进行掩蔽或分离，如钴、镍、铜、铅与试剂形成有色配合物；钨、铂、镉、汞与试剂生成沉淀，还有些金属离子如锡、铅、铋则在邻二氮菲铁配合物形成的pH 范围内发生水解；因此当这些离子共存时，应注意消除它们的干扰作用。
三、仪器与试剂-11．醋酸钠：l mol L·-1；2．氢氧化钠：0.4 mol L·-1；3．盐酸： 2 mol ·L-1；、4．盐酸羟胺：10％（临时配制）；5．邻二氮菲（0.1%）：0.lg 邻二氮菲溶解在100mL1:1 乙醇溶液中。
6．铁标准溶液（1）10-4mol·L-1铁标准溶液：准确称取0.1961g（NH4）2 Fe（SO4）2·6H20 于烧杯中，用 2 mol ·L-1盐酸15 mL溶解，移至500 mL容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀；再准确稀释10倍成为含铁10 - 4mol·L-l 标准溶液。
（2）10 μg·mL-1（即0.01 mg·mL -1）铁标准溶液：准确称取0.3511g （NH4）2 Fe （SO4）2·6H20于烧杯中，用 2 mol L·-l盐酸15 mL溶解，移入500 mL容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。
邻二氮菲分光光度法测定铁含量
实验报告
五、实验数据记录与处理1吸收曲线的绘制
2显色剂用量的确定
3标准曲线的绘制
吸光度A （510）
C （Fe ）/ g/L
由图像得
Y =0.0891x - 0.0931 R 2 = 0.9944
4判断络合物的稳定性
吸光度A （510）
放置时间（min）
5未知溶液浓度的测定
思考题：
1. 邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为何要加入盐酸羟胺溶液？
答：工业盐酸中含有Fe2+和Fe3+，其中Fe2+与邻二氮菲(phen)能生成稳定的桔红色配合物[Fe(phen)3]2+此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510 =1.1×104L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。
所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，然后，进行铁的总量的测定。
2、.为什么在测绘标准曲线的时候选择空白试剂为参比？
答：为了减少其他试剂对吸光度测定的干扰，使结果更准确。
邻二氮菲分光光度法测定铁
二、实验原理
3、条件试验(略)
（1）入射光波长：一般情况下，应选择被测物质的最大吸收波长的光 为入射光。 （2）显色剂用量：显色剂的合适用量可通过实验确定。 （3）溶液酸度：选择适合的酸度，可以在不同pH缓冲溶液中加入等量 的被测离子和显色剂，测其吸光度，作A-pH曲线，由曲线上选择合适 的pH范围。 （4）有色配合物的稳定性：有色配合物的颜色应当稳定足够的时间。 （5）干扰的排除：当被测试液中有其他干扰组分共存时，必须采取一 定的措施排除干扰。吸光光度法的实验条件，如测量波长、溶液酸度、 显色剂用量等，都是通过实验来确定的。本实验在测定试样中铁含量 之前，先做部分条件试验，以便初学者掌握确定实验条件的方法。
邻二氮菲分光光度法测定铁
（条件试验和试样中铁含量的测定）
一、实验目的 1.掌握用吸光光度法测定铁的原理及 方法。 2.了解吸光光度分析实验条件的选择。
二、实验原理
1.方法原理
邻二氮菲(phen)是光度法测定微量铁的较好试剂。该法灵敏度高， 稳定性好，干扰易消除，故应用广泛。 在pH为2~9（一般维持在pH=5-6）的溶液中，Fe2+与邻二氮菲 （phen）生成稳定的桔红色Fe(phen)32+: Fe2+ + 3(phen) = Fe(phen)3 其lgk=21.3，摩尔吸光系数ع508 =1.1×104 L· mol-1· cm-1。在还原剂 存在下，Fe(phen)3桔红色可保持几个月不变。 与邻二氮菲作用形成淡蓝色配合物稳定性较差，实际应用中加 +3 Fe ，再与显色剂邻二氮菲作用显色。 +2还原为Fe+3入还原剂盐酸羟胺使Fe
四、实验步骤
2、样品铁含量的测定 移取适量铁样品液(5.00mL)于50mL比色管中，加入 1mL盐酸羟胺，摇匀，再加入2mL邻二氮菲（phen）， 5mLNaAc ，加水至刻度，摇匀放置10min，用1cm比色 皿，以试剂空白为参比，在510nm波长下，测定样品溶液 吸光度。从标准曲线上查出或由回归方程计算样品液中铁 的含量（mg/L）。 3、光度计与比色皿使用 4、结束工作 测量完毕,关闭电源,取出吸收池, 清洗晾干保存.清理工 作台,罩上
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量邻二氮菲分光光度法测定铁的含量一. 实验目的1．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理及方法。
2．学习标准曲线的制作方法。
3．了解721型分光光度计的构造及使用方法。
二．实验原理在测定微量铁时，通常以盐酸羟胺还原Fe3+为Fe2+，在PH为2—9的范围内，Fe2+与邻二氮菲反应生成稳定的橙红色配合物，其lgK fθ=21.3。
该配合物的最大吸收波长为510nm。
本方法不仅灵敏度高（摩尔吸光系数ε=1.1×104），而且选择性好。
相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO2-3，20倍的Cr3+、Mn2+、V(V)、PO3-4，5倍的Co2+、Cu2+等均不干扰测定。
Fe2+与邻二氮菲在PH=2—9范围内均能显色，但酸度高时，反应较慢，酸度太低时Fe2+易水解，所以一般在PH=5—6的微酸性溶液中显色较为适宜。
邻二氮菲与Fe3+能生成3:1的淡蓝色配合物（lgK fθ=14.1），因此在显色前应先用还原剂盐酸羟胺将Fe3+全部还原为Fe2+（2Fe3++2NH2OH·HCl=2Fe2++N2↑+2H2O+4H++2Cl-）。
三．仪器与试剂1. 仪器：(1) 721型分光光度计。
(2) 50mL容量瓶7只/组。
(3) 10mL、5mL、2mL、1mL移液管。
2. 试剂：(1)100µg·mL-1的铁标准溶液：准确称取0.8634gNH4Fe(SO4)2·12H2O于烧杯中，加入20mL1:1的HCl和少量水溶解后，定量转移至1升容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
所得溶液含Fe3+100µg·mL-1。
(2) 10µg·ml-1的铁标准溶液：准确移取25.0mL 100µg·mL-1的铁标准溶液于250mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
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课程名称：分析化学实验B
教学内容：邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
实验类型：验证
教学对象：化工、环境工程、药学、生物科学、应用化学、医学检验、制药、复合材料、生物工程、生物技术
授课地点：中南大学南校区化学实验楼401
授课学时：4学时
一、教学目的与要求
1、练习巩固吸量管、比色管（容量瓶）、比色皿的正确使用；
2、了解分光光度法的基本原理，学会吸收曲线测绘及选择测定波长和标准曲线的绘制；
3、掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理、方法和计算；
4、学习掌握722S型分光光度计的正确使用，了解其工作原理；
5、掌握利用标准曲线法进行定量分析的操作与数据处理方法。
二、知识点
分光光度法、朗伯—比耳定律、配位反应、显色反应、标准溶液、吸收曲线、最大吸收波长、标准曲线、吸量管、比色管、比色皿、实验报告的撰写（数据处理三线表表格化）、有效数字
ρFe=cx/5
(5)数据记录与处理及结论
(a)吸收曲线的绘制
表1不同波长下的吸光度
波长/nm
430
450
470
490
500
505
510
515
520
530
550
570
590
吸光度A
以吸光度A为纵坐标，以相应波长λ为横坐标，在坐标纸上绘制吸收曲线。
(b)标准曲线的绘制与铁含量的测定
表2不同浓度长下的吸光度
(d)测定样品的吸光度A。
[讲解注意事项]
1、试剂的加入必须按顺序进行；
2、定容后必须充分摇匀后进行测量；
3、分光光度计必须预热30min，稳定后才能进行测量；
4、比色皿必须配套，装上待测液后透光面必须擦拭干净；切勿用手接触透光面；
5、在进行条件试验时，每改变一次试液浓度，比色皿都要洗干净；
6、同一组溶液必须在同一台仪器上测量；
(4)标准曲线（获得线性范围）及测定分析样品的吸光度A
用1cm比色皿，以试剂空白（1号）为参比溶液，在选定波长下，测定各溶液的吸光度。在坐标纸上，以铁含量（浓度单位是××μg/25ml）为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。依据试液的A值，从标准曲线上即可查得其浓度，计算出原含铁分析试液中含铁含量(以mg·L-1表示)。(按下式计算)
3、分析误差产生原因：取液不当；溶液没有摇匀；显色时间不足；改动了仪器的工作条件等因素。
[布置作业]：根据你的测定，我们本地区的水中铁的浓度在什么范围？(写出测定实验操作步骤、实验数据和测定结果)
测定溶液中的微量铁，一般采用邻二氮菲分光光度法。即在pH=3～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲(phen)生成稳定的桔红色配合物Fe(phen)32+，反应如下：
2Fe3+ + 2NH2OH·HC1＝2Fe2+ +N2↑+2H2O+4H++2C1－
根据朗伯—比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。采用标准曲线分析方法，测定被测物质中微量铁的含量。
(1)分光光度法测定对象是什么？(有色溶液物质)
(2)在用分光光度法测定微量铁中，以什么试剂作显色剂？(邻二氮菲)
(3)测定波长如何选择？(吸收曲线)
[引入]分光光度法的应用：邻二氮菲分光光度法测定微量铁-标准曲线法
[引言]铁是最重要的基本结构材料，铁合金用途很广，国防和战争更是钢铁的较量，钢铁的年产量代表一个国家的现代化水平，因而，对各种样品中所含的铁进行测定，有助于对产品的生产进行监督。
(2)722s型分光度计操作步骤
(a)开机
(b)定波长入=510nm
(c)打开盖子调零T=0。
(d)关上盖子，调满刻度至T=100(A=0)。
(e)参比溶液比色皿放入其中，均合T=100调满(A=0)。
(f)第一格不动，二，三，四格换上标液（共计六个点）调换标液时先用蒸馏水清洗后，再用待测液（标液）清洗，再测其分光度
测定铁的方法很多，选择不同方法主要是看不同样品中铁的含量，含量高的含铁试样采用滴定分析法测定，含量低的含铁试样采用仪器分析方法测定。常用的仪器分析方法有分光光度法、原子吸收分光光度法、原子发射光谱法等，其中邻二氮菲分光光度法测定微量铁的含量是国际国内规定的标准分析方法，因而生产和实验室中广泛采用标准曲线法邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法测定样品中微量铁的含量。
[新授]课题：邻二氮菲分光光度法测定铁的含量-标准曲线法
[提出任务]教师提出本课题的学习任务：
1、邻二氮菲分光光度法测定铁的基本原理是什么？
2、邻二氮菲吸光光度法测定微量铁的实验中，吸收曲线与标准曲线有何区别?
3、邻二氮菲分光光度法测定铁的操作方法。
[任务探索]
1、邻二氮菲分光光度法测定铁的基本原理是什么？
[学生回答]
(1)邻二氮菲分光光度法测定铁中的铁主要是由什么价态形式存在？如何保障溶液中的铁离子是以邻二氮菲络合铁的价态形式存在？
邻二氮菲分光光度法测定铁中的铁主要是以Fe2+离子形式存在的。通常在酸性条件下，加入盐酸羟胺或抗坏血酸来保障溶液中的铁离子是Fe2+离子形式存在。
(2)邻二氮菲络合铁时，溶液pH值最好控制在多少？用什么缓冲溶液调节溶液pH？
(c)原含铁分析试液中含铁含量
序号
ρ（Fe）/ mg•L-1
平均值
s
RSD
7
8
9
结论：铁未知液中铁的含量ρFe=
95%置信度下平均值的置信区间ρFe=
[小结]用邻二氮菲分光光度法测定铁是国际国内规定的标准分析方法。在酸性条件下，加入盐酸羟胺，保障溶液中的铁离子是Fe2+离子形式存在，在pH=5的醋酸缓冲溶液中，以邻二氮菲为显示剂，与Fe2+生成一种稳定的桔红色络合物Fe(phen) 32+，用分光光度法测定物质的含量。定量测定方法一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度(A)，以溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度值，即可计算试样中被测物质的质量浓度。
(3)吸收曲线（获得最佳工作波长）
选用1cm比色皿，以试剂空白（1号）为参比溶液，取4号比色管试液，在440～560nm波长范围内，每隔10nm测一次吸光度，其中500～520nm之间，每隔5nm测定一次吸光度(每改变一次波长，都要在参比溶液下调整T=0、T=100、A=0)。以所得吸光度A为纵坐标，以相应波长λ为横坐标，在坐标纸上绘制A与λ的吸收曲线。从吸收曲线上选择最大吸收波长λmax作为测定波长。
7、标准曲线的质量是测定准确与否的关键，标准系列溶液配制时，必须严格按规范进行操作
待测溶液一定要在工作曲线线形范围内，如果浓度超出直线的线性范围，则有可能偏离朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律，就不能使用吸光光度法测定。
[学生分组]以每两个同学一组分为12～16个小组
[学生实训]测定样品中的铁含量并完成实验报告。教师巡回指导
2、邻二氮菲吸光光度法测定微量铁的实验中，吸收曲线与标准曲线有何区别?
[讲解]吸收曲线和标准曲线是两个完全不同用途的曲线，吸收曲线一般是指做全波段扫描时候的信号曲线，为吸光度-波长曲线，用于确定测定样品所用的最佳波长;标准曲线一般是在定波长测定时，用不同浓度的标准样品作为不同的样品点，测定绘制而成的吸光度-浓度曲线，根据样品测得的吸光度值，可从曲线上查找或计算出样品的浓度。
[交流讨论]引导学生说出自己完成任务的情况(成功或失误之处)
[试验小结]教师小结本课题实验完成情况。
1、吸量管的规范操作：克服多加或少加的现象；
2、分光光度计使用时的注意事项：（1）为了防止光电管疲劳，不测定时必须将试样室盖打开，使光路切断，以延长光电管的使用寿命。（2）取拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光学表面。（3）比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤，也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干，不要擦拭，以免损伤它的光学表面。
比色管号
标准溶液
未知液
1
2
3
4
5
6
7
8
9
移取含铁液的体积/ml
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
5.0
5.0
5.0
含铁总量/[μg·(25mL)-1]
吸光度A
以铁含量（浓度单位是××μg/25ml）为横坐标，吸光度A为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。依据未知液的A值，从标准曲线上即可查得其对应浓度。
3、邻二氮菲分光光度法测定铁的操作方法。
[阅读]指导学生阅读实验报告中的实验步骤。
[讨论]四个学生一组，归纳测定操作要点。
[提问]学生代表小组发言：邻二氮菲分光光度法测定铁的测定步骤
(1)系列标准溶液及分析试液的配制
取6只25mL比色管，用5ml吸量管分别加入铁标准工作溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL，另取3只25mL比色管，分别加入含铁分析试液5.00mL，然后加入1mL盐酸羟胺，2.00mL邻二氮菲，5mLNaAc溶液，每加入一种试剂都应混匀。用去离子水定容至刻度，充分摇匀，放置10min，待测。
三、技能点
玻璃器皿的洗涤、吸量管的使用、标准系列溶液的配制、比色皿的使用、分光光度计的使用
四、教学重点及难点
重点：邻二氮菲分光光度法测定微量铁的基本原理和操作方法
难点：722s型分光度计的操作
五、教学方法
任务驱动法、分组讨论法、阅读指导法、现场讲解指导等
六、复习引入
1、复习分光光度法有关知识，提问学生: