HPLC分析烟草化学成分及香精指纹谱图基础研究

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云南烤烟HPLC指纹图谱数据库的建立和规程研究

ＴｂｃｏＨｕｅｄｓｒａ．ＬｄＷｕａ３０１Ｃｈｎ）ｏａｃｂｉｎｕｔｉＣｏ，ｔ，ｈｎ４０５，ｉａＩｌ
ＡｂｔａｔＣｈｏｉｇａｐｒｐａｅｍｅｈｄｔｌｓｉｙｔｂｃｏｑａｉｆｓｇｉｃｎｅｆｒｍｐｏｉｇｔｅｑａｉｆｏａｃｒｕｔｓｒｃ：ｏｓｎａｐｏｒｔｔｏｃａｓｆａｃｕｌｙｉｏｎｆａｃｏｒｖｎｕｔｏｂｃｏｐｏｃ．ｎｉｏｏｔｓｉｉｉｈｌｙｔｄ
３湖北中烟工业股份有限公司，武汉４０５）．３０１摘要：选择合适的方法对烟叶质量进行科学合理的分类对于提高卷烟质量和生产技术水平具有重要意义。对云南省典型烤
烟的ＨＬ指纹图谱分析规程进行了研究。规程包括样品取样和处理、特征提取剂的选择、仪器条件和分析及数据库的建ＰＣ立等４个关键过程。首次提出了烤烟指纹图谱分时数据库的概念和建立方法。所建立的指纹图谱技术规程可；分时数据库；品质；分类中图分类号：５２Ｔ３１￥７；Ｐ１文章编号：１０．１９２１０ —０１６０７５１（０２）２００ — ０Ｄ：０３６０ｉｓ．０．１９２１．２０ＯＩ１．９９．ｎ１７５１．２０．１ｓ０００
中国烟草科学
ＣｉｅｅｏａｃｃｅｃｈｎｓｂｃｏｉｎｅＴＳ
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唐徐红，矣跃平，涂书新，袁仕信，何云燕２磊，尹晓东２，刘，何结望，李琳

烟草挥发性成分的谱图检索结合保留指数和准确质量定性

烟草挥发性成分的谱图检索结合保留指数和准确质量定性芦楠;聂聪;谢剑平;郭寅龙【摘要】为更准确地给烟草中挥发性成分定性,采用同时蒸馏萃取和GC/MS,GC/TOFMS对烟草中的挥发性成分进行了分离,并采用谱库检索,结合保留指数和准确质量进行定性.结果显示:GC/MS谱库检索,结合保留指数和由GC/TOFMS得到的准确分子质量定性,可以明显提高烟草中挥发性成分定性分析的准确性和可靠性,尤其是同分异构体.【期刊名称】《烟草科技》【年(卷),期】2010(000)003【总页数】7页(P26-31,50)【关键词】保留指数;准确质量;烟草;挥发性成分【作者】芦楠;聂聪;谢剑平;郭寅龙【作者单位】中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号,450001;中国科学院上海有机化学研究所,上海市徐汇区零陵路345号,200032;中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号,450001;中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号,450001;中国科学院上海有机化学研究所,上海市徐汇区零陵路345号,200032【正文语种】中文【中图分类】TS411.1Keywords:Retention index;Accurate mass;Tobacco;Volatile compound Abstract:For improving the accuracy in identification,the volatile compounds in tobacco were extracted with simultaneous distillation and extraction(SDE),separated by GC/MS and GC/TOFMS,and identified via standard spectra retrieval combined with retention index and accurate mass.The results showed that the accuracy and reliability in qualitative analysis of volatile compounds in tobacco were significantlyimproved,especially for isomers.目前,通常采用水蒸气蒸馏[1]、超临界流体萃取[2]、同时蒸馏萃取[3-6]、固相微萃取[7-8]、加速溶剂萃取[9]和顶空分析[10]等分离技术来提取烟草中的挥发性成分,然后采用 GC/MS和谱库检索进行定性。

卷烟烟气中性香味成分的半制备HPLC分离与GC-MS测定

卷烟烟气中性香味成分的半制备HPLC分离与GC-MS测定贾春晓;张月丽;陈芝飞;蔡莉莉;孙志涛;马宇平;毛多斌【摘要】将半制备HPLC分离与GC-MS测定相结合,对某卷烟样品烟气中性香味成分进行分析:先将半制备HPLC分离条件中的馏分收集时间优化为3个时间段,以保证待测化合物在各馏分中不存在交叉.选择离子流色谱图显示,3个馏分中各待测化合物可完全分离,满足定量分析要求.通过建立GC-MS内标标准曲线进行定量分析,结果表明,各组分线性方程相关系数均大于0.999 0,检出限为0.55 ～13.06μg/kg,定量限为1.85 ～43.55 μg/kg,说明该方法灵敏度较高.样品测定与回收率实验结果显示,卷烟样品烟气中性香味成分测定平均回收率为64.39％～93.57％,相对标准偏差均小于10％,说明该方法能满足痕量成分定量分析要求,重现性较好.%A method for determination of the content of neutral aromatic components from cigarette mainstream smoke by semi-preparative high performance liquid chromatography (semi-preparative HPLC) coupled with gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) was developed:the fraction collection time was determined to three time periods by optimizing the conditions of semi-preparative HPLC in order to ensure that the compounds to be measured don’t cross in the fractions.The selected ion chromatogram showed that all target compounds could be separated completely in three fractions and the method could satisfy the demands of quantitative analysis.Quantitative analysis was performed by establishing a GC-MS internal standard curve.The analysis results showed that the correlation coefficients were greater than 0.999 0,the limits of detection (LOD) were 0.55 ～13.06 μg/kg and the limits of quanti tation (LOQ) were1.85 ～43.55 μg/kg.It showed that the method has high sensitivity.The results of sample determination and recovery experiment showed that the average added standard recovery of the neutral aromatic components from cigarette mainstream smoke was in the range of 64.39％～93.57％and the relative standard deviations were less than 10％.It showed that the method could satisfy the requirement of quantitative analysis of trace compounds,with good reproducibility.【期刊名称】《郑州轻工业学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(032)006【总页数】10页(P63-72)【关键词】半制备高效液相色谱分离;气相色谱-质谱联用;卷烟烟气;中性香味成分【作者】贾春晓;张月丽;陈芝飞;蔡莉莉;孙志涛;马宇平;毛多斌【作者单位】郑州轻工业学院材料与化学工程学院,河南郑州450001;郑州轻工业学院烟草科学与工程学院,河南郑州450001;河南中烟工业有限责任公司技术中心,河南郑州450000;河南中烟工业有限责任公司技术中心,河南郑州450000;河南中烟工业有限责任公司技术中心,河南郑州450000;河南中烟工业有限责任公司技术中心,河南郑州450000;郑州轻工业学院烟草科学与工程学院,河南郑州450001【正文语种】中文【中图分类】TS41+1在卷烟降焦减害过程中,烟气中的香气会相应减少，损失的香气需要通过加香加料来弥补[1]，而补香的重要前提是对烟气中香味成分的含量有充分的了解，同时结合感官评吸结果和各香味成分代表的香韵得出成品烟的风格特征，以此作为补香和加香的依据即技术支撑[2].在烟气的诸多香味成分中，中性香味成分对卷烟的香气和吃味有着重要影响，因此，分析和测定烟气中的中性香味成分的含量具有十分重要的意义.目前，对卷烟主流烟气化学成分分析和含量测定的方法主要有：超声萃取、固相萃取或串联冷阱捕集结合GC-MS法[3-5]；水蒸气蒸馏或同时蒸馏萃取结合GC-MS 法[6-8]；蒸馏萃取、溶剂萃取或顶空固相萃取结合全二维气相色谱-飞行时间质谱(GC×GC-TOF MS)法[9-12].其中GC×GC-TOF MS法虽然分离能力强，但存在定量分析结果欠准确、操作繁琐等问题[13]，所以主要用于分离和定性分析.卷烟烟气成分复杂，大部分成分含量较低，且中性香味成分各成分间没有很好的分离度，直接采用GC法或GC-MS 法许多痕量成分无法进行定性分析和定量测定.相比而言，半制备型HPLC法可以将复杂成分按极性强弱进行分离制备，所得馏分组成相对简单并且各成分含量较高，有利于结合GC-MS 法对各馏分中的痕量香味成分进行分离与分析，且GC-MS 法对混合物中各成分的分离效率和定量分析的灵敏度均较高[14]，两种方法相结合测定烟气中性香味成分含量的研究尚未见文献报道.本文拟在前期研究[15]基础上，建立基于半制备HPLC分离的GC-MS内标标准曲线，定量分析卷烟样品烟气中性香味成分，以期为复杂体系的成分分析测定、卷烟烟气中香味成分的准确定量分析提供参考.材料：某品牌成品卷烟(烟支长度为84 mm)，由河南中烟工业有限责任公司提供；进口剑桥滤片(Φ=92 mm).试剂：二氯甲烷，天津市凯通公司产；正己烷，山东禹王公司产；异丙醚，东京化成株式会社产；异丙醇，德国默克公司产.以上试剂均为色谱纯.标准品和内标：苯甲醛(1#)、乙酸糠酯(2#)、D-柠檬烯(3#)、4-甲基苯甲醛(4#)、苯甲酸甲酯(5#)、异戊酸异戊酯(6#)、乙酸-2-乙基己基酯(7#)、乙酸对甲基苯基酯(8#)、4-乙基苯甲醛(9#)、β-环化柠檬醛(10#)、枯茗醛(11#)、苯乙酸乙酯(12#)、紫苏醛(13#)、百草香酚(14#)、2,4-二甲基苯乙酮(15#)、二氢大马酮(16#)、2-十三烷酮(17#)、苯甲酸苄酯(18#)、黄葵内酯(19#)、糠酸甲酯(20#)、6-甲基-5-庚烯-2-酮(21#)、苯乙醛(22#)、苯乙酮(23#)、2-壬酮(24#)、二氢肉桂醛(25#)、苯乙酸甲酯(26#)、4-甲基苯乙酮(27#)、桂醛(28#)、2-十一酮(29#)、香叶基丙酮(30#)、β-紫罗兰酮(31#)、金合欢基丙酮(32#)、5-甲基糠醛(33#)、2-乙基己基醇(34#)、苯甲醇(35#)、苯乙醇(36#)、异佛尔酮(37#)、氧代异佛尔酮(38#)、薄荷醇(39#)、香茅醇(40#)、香叶醇(41#)、二氢紫罗兰酮(42#)、二氢猕猴桃内酯(43#)、6-甲基香豆素(44#)、金合欢基醇(45#)，内标2,6-二氯甲苯，纯度均大于97%.以上均为百灵威科技有限公司产.仪器：RM20H转盘式自动吸烟机，德国Borgwaldtkc公司产；Milli-Q 超纯水仪，美国Millipore 公司产；Waters 600 半制备型高效液相色谱仪，Waters 科技上海公司产；GC 7890-MS 5977 B型气相色谱-质谱联用仪，美国Agilent公司产；电子天平(感量0.000 01 g)，瑞士梅特勒-托利多公司产.1.2.1 标准溶液的配制混标溶液Ⅰ：分别准确称取1.1中1#—19#的标准品化合物 29.88 mg，28.49 mg，21.57 mg，25.46 mg，29.01 mg，21.49 mg，21.54 mg，25.89 mg，24.70 mg，30.32 mg，26.17 mg，25.69 mg，24.78 mg，32.54 mg，28.27 mg，23.11 mg，27.55 mg，30.11 mg 和25.43 mg，用二氯甲烷稀释并定容至100 mL.混标溶液Ⅱ：分别准确称取1.1中20#—32#的标准品化合物28.43 mg，21.26 mg，22.79 mg，22.24 mg，22.79 mg，24.49 mg，20.14 mg，24.18 mg，25.52 mg，25.14 mg，21.22 mg，29.14 mg 和24.13 mg，用二氯甲烷稀释并定容至100 mL.混标溶液Ⅲ：分别准确称取1.1中33#—45#的标准品化合物29.70 mg，29.66mg，26.39 mg，25.40 mg，26.54 mg，41.07 mg，25.93 mg，29.37 mg，24.66 mg，25.78 mg，27.82 mg，24.26 mg 和20.04 mg，用二氯甲烷稀释并定容至100 mL.内标溶液：准确称取75.21 mg 内标物2,6-二氯甲苯，用二氯甲烷溶解并定容至100 mL，内标物2,6-二氯甲苯浓度为0.752 1 mg/mL.混标标准系列Ⅰ—Ⅲ：分别用移液管准确量取混标溶液Ⅰ—Ⅲ 0.01 m L，0.05 mL，0.10 mL，0.50 mL，1.00 mL，3.00 mL，5.00 mL，7.00 mL和9.00 mL于9个10 mL容量瓶中，再各加入1.00 mL内标溶液，用二氯甲烷定容至10 mL，得到3个混标标准溶液系列.1.2.2 样品前处理按照国标GB/T 19609—2004条件，使用RM20H盘式自动吸烟机，用剑桥滤片捕集某品牌成品卷烟主流烟气总粒相物(TPM)，每个滤片捕集20支卷烟的TPM.然后按文献[15]方法萃取并分离，得到中性成分萃取液.1.2.3 半制备HPLC分离操作半制备HPLC分离条件与文献[15]相同，馏分收集条件为：将中性成分浓缩液进样0.2 mL，收集0～160 min的馏分.鉴于定量分析时某些香味成分同时存在于多个馏分中，计算含量需将其加和，可能有较大误差，因此，本研究对收集馏分的时间段进行选择.在各时间段收集的馏分中分别加入内标溶液0.05 mL，然后浓缩至 0.5 mL，得到待测液，其中内标物浓度与混标标准系列中内标物浓度相同，然后进行GC-MS分析.1.2.4 GC-MS 分析条件确定色谱条件如下.Agilent HP-5MS色谱柱(30 m × 250 μm × 0.25 μm)；进样口温度280 ℃；载气为高纯氦气(99.999%)，流速1.0mL/min；馏分Ⅰ待测液升温程序：初始温度为50 ℃，保持 4 min，以2 ℃/min 升至98 ℃保持 2 min，以3 ℃/min 升至170 ℃保持10 min，以4 ℃/min升至240 ℃；馏分Ⅱ和Ⅲ待测液升温程序：初始温度为50 ℃，保持4 min，以3 ℃/min 升至70 ℃保持5 min，以2 ℃/min 升至100 ℃保持 10 min，以2 ℃/min升至140 ℃，以3 ℃/min升至170 ℃，再以4 ℃/min升至240 ℃，结束；3个待测液均为不分流进样，进样量为1.0 μL.质谱条件如下：传输线温度280 ℃,离子源温度280 ℃,四极杆温度150 ℃；电子倍增器电压2.28 kV；电离方式为电子轰击(EI)，电子能量70 eV；溶剂延迟8 min；扫描质量范围(m/z)35～500，定量分析时采用选择离子监测(SIM)工作方式. 按1.2.3方法共收集到12个馏分，馏分5—馏分9的总离子流色谱图(TIC)的局部图如图1所示，其中峰号(化合物编号)与1.1节中编号相同.从图1可以看出，在选定的45种香味成分中，苯甲醛(1#)、苯乙醛(22#)和香叶基丙酮(30#)等存在交叉现象：苯甲醛(保留时间为 10.71 min)存在于馏分5 中，馏分6中未检出；苯乙醛(保留时间为15.45 min)从馏分6 开始流出，直到馏分8，馏分9中未检出；香叶基丙酮(保留时间为50.95 min)从馏分6 开始流出，直到馏分7，馏分8中未检出.由此可知，如果把馏分6—馏分8合并则苯乙醛和香叶基丙酮将不再交叉，根据同样的分析方法可得，馏分1—馏分5和馏分9—馏分12合并后其他有交叉的待测成分也将分开，这就意味着，把收集馏分时间调整为3个时间段，分别收集3个馏分，将不存在交叉现象.因此，经过多次实验最终确定了收集馏分时间段：收集0～55 min的馏分为馏分Ⅰ；收集55～64 min的馏分为馏分Ⅱ；收集64～160 min的馏分为馏分Ⅲ.在此条件下接收的3个馏分的待测液按1.2.4节的GC-MS分析条件进行分析.按1.2.4节的GC-MS分析条件对3个馏分进行GC-MS分析.由各自的总离子流色谱图可知，待测定的45种化合物在3个馏分中不存在交叉现象，可采用与标准品质谱图和保留时间对照并参考库检索的方法对各成分进行定性鉴定.由定性分析结果确定各馏分中待测香味成分，再由3个馏分中各自含有的待测成分分别配制3个混标溶液(方法同1.2.1节所述)，在与馏分相同的GC-MS分析条件下，混标溶液Ⅰ和馏分Ⅰ待测液的TIC如图2所示(馏分Ⅱ和馏分Ⅲ的TIC分析同馏分Ⅰ，故未给出)，其中化合物编号与1.1节中编号相同.由图2b)可知，馏分Ⅰ中确定了苯甲醛(1#)等19种待测成分.其中苯甲醛(1#)、苯乙酸乙酯(12#)和苯甲酸苄酯(18#)等是由烟叶自身所含的香气成分转移而来，它们分别具有杏仁香、甜香和膏香；二氢大马酮(16#)和β-环化柠檬醛(10#)等香味成分可能是由烟叶中的类胡萝卜素降解产生，具有典型的清甜香气，这些化合物都是烟气中的关键致香成分[16].由图2还可以看出，由于馏分Ⅰ中所含中性香味成分较多，尽管对GC-MS分析条件进行了优化，待测定的19种化合物仍然不能完全达到基线分离(另外两个馏分也存在该现象)，所以定量分析时采用SIM模式.SIM模式通过适当选择离子，跳跃式扫描所选离子质量，可消除其他成分对待测成分的干扰，提高待测成分的分离度[17].选择离子列于表1，所得馏分Ⅰ中香味成分的选择离子流色谱图如图3所示.由图3可知，待测定的化合物完全分离，可满足定量分析的要求.馏分Ⅱ和馏分Ⅲ的选择离子流色谱图分析同馏分Ⅰ,故未给出，馏分Ⅱ和馏分Ⅲ中各待测成分均能达到基线分离.按照1.2.4节的条件对混标标准系列Ⅰ—Ⅲ进行分析，分别以相应化合物色谱峰面积与内标的色谱峰面积之比(Y)为纵坐标，以浓度(X)为横坐标拟合标准曲线，再分别按3倍信噪比(S/N)和10倍信噪比计算各成分的检出限和定量限.各组分的线性方程、相关系数、检出限、定量限、线性范围和选择离子见表1，化合物编号同1.1节.由表1可知，各组分线性方程的相关系数均大于0.999 0，这45种化合物的测定线性关系良好且线性范围较宽.从线性方程式中常数项可以看出，该方法系统误差小、准确度较高.该方法的检出限为0.55～13.06 μg/kg，定量限为1.85～43.55 μg/kg，检出限和定量限远远低于各成分的含量(见表2)，说明该方法的灵敏度较高.2.4.1 样品测定结果按照1.2.2节的方法处理卷烟样品，并按1.2.3节的半制备HPLC分离条件得到3个馏分的萃取液，再按1.2.4节中的GC-MS分析条件对3个馏分进行分析.测定样品中45种关键香味成分的含量，平行测定5次，通过内标标准曲线法计算样品中各目标化合物的平均含量和相对标准偏差RSD1,结果见表2,化合物编号同1.1节.2.4.2 回收率实验结果在实际样品中添加一定量的标样来测定回收率.在截留主流烟气总粒相物的剑桥滤片上加入待测成分的标准品，加入量见表2，按1.2.2节的方法处理，然后再按1.2.3和1.2.4节条件进行分析.重复5次，根据样品中各目标化合物的平均含量、加标量和加标后平均含量计算平均回收率和RSD2，结果见表2.由表2可以看出，在所测定的某品牌成品卷烟烟气中，含量较高的成分分别是D-柠檬烯(3#) (果香)、苯乙酮(23#)(橙花香)、5-甲基糠醛(33#)(烤甜香)、苯甲醇(35#) (花香)和苯乙醇(36#)(花香)[16]，这些香气成分对该品牌卷烟烟气的风格特征有重要贡献.所测卷烟烟气中，各目标化合物的平均回收率在 64.39%～93.57%之间，相对标准偏差均小于10%，说明该方法是一种痕量分析方法(即样品中待测组分含量低于百万分之一的分析方法)，重现性好.由于烟气中各致香成分含量低且干扰成分较多，在分离除杂过程中含量有所损失，故某些成分的回收率较低，但是都在 64.39% 以上，能满足痕量成分定量分析要求.与烟气中性香味成分定量分析文献[7-8]方法相比，本文方法在测定的中性香味成分数量(采用内标标准曲线法)与方法的灵敏度和准确度等方面均有较大提高.本文对卷烟样品主流烟气中性香味成分的半制备 HPLC与GC-MS分析进行了研究.通过对半制备HPLC分离馏分收集条件的优化，根据馏分收集时间段的选择，制备出3个馏分.各馏分中的目标化合物能得到很好的分离，且待测45种化合物在3个馏分中不存在交叉现象.馏分中各香味成分含量相对较高且各待测物只存在于1个馏分中，有利于分离与含量测定，待测目标化合物完全分离，可满足定量分析要求.GC-MS内标标准曲线分析结果表明，各组分线性方程相关系数均大于0.999 0；该方法的检出限为0.55 ～13.06 μg/kg，定量限为1.85～43.55 μg/kg，远低于各成分含量，说明该方法灵敏度较高.所测定的某品牌成品卷烟烟气中，各目标化合物的平均回收率为64.39%～93.57%，相对标准偏差均小于10%，说明该方法能满足痕量成分定量分析要求，重现性较好.【相关文献】[1] 谢剑平，王元英，郑新章，等.烟草科学与技术发展现状与趋势[C]∥2009—2010烟草科学与技术学科发展报告.北京：中国烟草学会，2010: 45.[2] 李莉，张毅，王秀娟，等.烟草制品中香精香料分析方法进展[J].中国卫生检验杂志，2013 (2): 525.[3] 鲁喜梅，谢复炜，刘晖，等.卷烟主流烟气总粒相物中挥发性和半挥发性有机酸的分析[J].烟草科技，2006(6):24.[4] 郑阳，许秀丽，纪顺利，等.固相萃取结合气相色谱-串联质谱法测定烟草制品中23种酯类香料[J].色谱，2016(5): 512.[5] 孙玉利，王晓瑜，刘绍锋，等.串联冷阱捕集-气相色谱/质谱法分析卷烟主流烟气气相成分[J].烟草科技，2016(3): 52.[6] 洪华俏，郭紫明，易克，等.卷烟主流烟气的中性和碱性香气成分分析[J].湖南农业科学，2008 (3): 140.[7] 洪华俏，郭紫明，易克，等.卷烟主流烟气的中性香气成分分析[J].湖南农业大学学报(自然科学版)，2008(2): 164.[8] 蔡君兰，赵明月，陈勇，等.卷烟主流烟气和侧流烟气中半挥发性成分的分析研究[J].中国烟草学报，2003(4): 3.[9] 鹿洪亮，赵明月，刘惠民，等.全二维气相色谱飞行时间质谱分析烤烟半挥发性中性化学成分[J].中国烟草学报，2007(1): 20.[10] DING Y,ZHU L J,LIU S M,et al.Analytical method of free and conjugated neutral aroma components in tobacco by solvent extraction coupled with comprehensive two-dimensional gas chromatography-time-of-flight mass spectrometry[J].Journal of Chromatography 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云南烤烟多酚物质HPLC-DAD指纹图谱的建立

云南烤烟多酚物质HPLC-DAD指纹图谱的建立李军营;方敦煌;宋春满;刘彦红;邓建华;邓云龙;宋利民【期刊名称】《南京农业大学学报》【年(卷),期】2009(32)2【摘要】采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法,测定了云南省18个县(区)4个主栽烤烟品种(云烟85、云烟87、K326和红花大金元)的多酚物质,建立了云南烤烟多酚物质的HPLC指纹图谱。

指纹图谱检测的色谱条件是:Beckman Coulter USPHODS(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇和0.05 mol.L-1KH2PO4混合液,梯度洗脱,检测波长345 nm,流速0.5 mL.min-1,柱温为室温。

应用相似度、相对误差等参数对所得指纹图谱进行了评价。

结果表明:所建立的烤烟多酚物质指纹图谱检测方法操作简单,重复性好,响应值高,分离度好;不同产地来源、不同品种和不同叶位的指纹图谱相似度极高,但峰面积存在明显差异。

因此所构建的指纹图谱可在对云南烤烟产地、品种和叶位的识别及质量控制方面发挥一定的作用。

【总页数】6页(P141-146)【关键词】烤烟;指纹图谱;高效液相色谱;多酚【作者】李军营;方敦煌;宋春满;刘彦红;邓建华;邓云龙;宋利民【作者单位】云南省烟草农业科学研究院【正文语种】中文【中图分类】S572;Q946.82【相关文献】1.HPLC-DAD法测定冠脉宁片中葛根素和丹酚酸B的量及其指纹图谱研究 [J], 丁宁;何轶;何玉梅;王栋;王瑞忠;鲁静;戴忠;马双成2.云南烤烟HPLC指纹图谱数据库的建立和规程研究 [J], 唐徐红;矣跃平;涂书新;袁仕信;何云燕;刘磊;尹晓东;何结望;李琳3.不同产地菜籽油的HPLC-DAD指纹图谱建立 [J], 华姝雯; 王磊; 饶桂维4.蔓性千斤拔HPLC-DAD指纹图谱建立 [J], 严雪梅; 彭倩; 许泽恭; 周园; 赵钟祥; 廖琼峰; 陈丰连; 张蕾5.HPLC-DAD法建立加味滋膵胶囊指纹图谱研究 [J], 冉亚东;原欢欢;禹奇男;彭世陆;蒋燕霞;刘世琪;彭涛;秦少容;董自亮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

UPLC指纹图谱在烟用香精质量控制中的应用研究

UPLC指纹图谱在烟用香精质量控制中的应用研究李源栋;刘秀明;段焰青;张翼鹏;王文元;者为;王家俊;夏建军【摘要】为快速有效地控制不同批次烟用香精的质量,采用超高效液相色谱法(UPLC)法对同种香精9个不同批次样品的成分进行分析,通过计算色谱峰的相对保留值(a)和相对峰面积(Sr)建立香精样品的指纹图谱,并通过指纹图谱的聚类分析和主成分分析对样品进行模式识别.结果表明:聚类分析和主成分分析能够区分稀释及掺兑的香精样品,验证该方法的准确、可行性,可以作为香精质量稳定性控制的一种有效手段.【期刊名称】《中国测试》【年(卷),期】2015(041)005【总页数】4页(P50-53)【关键词】香精;超高效液相色谱;指纹图谱;聚类分析;主成分分析【作者】李源栋;刘秀明;段焰青;张翼鹏;王文元;者为;王家俊;夏建军【作者单位】云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明650202;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明650202;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明650202;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明650202;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明650202;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明650202;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明650202;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明650202【正文语种】中文在卷烟的生产过程中，为了提高卷烟的燃吸品质，改善卷烟口感，突出烟草风格，需要使用各种烟用香精[1]。

烟用香精是由多种香料和适量溶剂调和制成的混合物，受原料产地、加工工艺等多种因素影响，产品质量存在一定的波动性。

因此，烟用香精质量的稳定性倍受香精生产企业和卷烟企业的关注。

以往大多卷烟生产企业主要通过香精的酸度、溶混度、折光指数、挥发性总量以及旋光度等物性指标和人工品吸来对香精质量进行控制，但这些方法很难反映出香精内在化学成分变化，给质量控制带来困难[2-4]。

烟用香精香料品质鉴定技术研究进展

烟用香精香料品质鉴定技术研究进展蒋名鹏2011313546（云南农业大学，云南昆明650000）摘要：烟用香精香料是卷烟生产中必不可少的物质,其配方更是卷烟行业的核心技术,对改善卷烟的口感、突出烟草风格具有重要的作用。

随着低焦油卷烟的不断发展，为弥补因降焦而引起的香味不足，加香加料技术显得尤为重要，因此香精香料的质量稳定性倍受香精香料生产企业和卷烟企业的关注。

单纯地通过酸度、折光指数、溶混度、挥发物总量等常规指标及调香师的经验难以准确了解香精香料质量的变化[1-4]。

因此,建立一种科学合理、而非人为主观判定的质量评价方法就显得非常重要。

本文主要通过介绍电子鼻技术、指纹图谱分析技术来阐述烟用香精香料品质鉴定技术的研究进展。

关键词：香精香料品质鉴定电子鼻指纹图谱1 引言烟用香精香料是卷烟产品的“灵魂”,是卷烟制品形成风格特色的奥秘所在,是卷烟行业的秘密武器。

烟用香精香料多取材于天然香精香料,受原料产地,生产工艺等诸多因素影响,其质量具有一定的波动性,目前烟草行业对香精香料的质量控制和识别主要依据品香师的经验和简单的理化指标分析,由于品香师的感官检验(香气、香味和外观检验)存在人为的不确定因素和理化指标(相对密度、折射率、醇值、醋值等)的允许范围相对较大,致使检验结果的重复性和可比性较差。

另外，用嗅觉鉴别是一种吸入的过程，人工鉴别的时间不能太长，否则嗅觉敏感度易减退，长期工作在不良气味环境下对人体健康有很大影响。

电子鼻可以检测各种不同种类的试样，不需要复杂的前处理过程，并且能避免人为误差，重复性好，还能检测评价一些人鼻不能够评价的气体[5]。

有研究表明[6]烟用香精香料的主体香是其内含的多种化学成分的一种综合性的表现,香精香料的化学成分复杂,对其一种或几种化学成分进行定性定量的分析,难以对香精香料的质量进行有效地控制,而指纹图谱恰好是一种从整体上表征香精香料特性的一种方式[7]，因此,指纹图谱技术就是一种有效的香精香料质量控制手段。

烟草致香物质的研究进展

烟草致香物质的研究进展一、本文概述烟草作为一种全球广泛种植的作物，其产业链涉及众多领域，包括农业生产、工业加工、以及消费市场等。

然而，烟草的使用同时也伴随着一系列的健康问题和社会挑战。

因此，对烟草致香物质的研究，不仅有助于提升烟草产品的品质，也有助于推动烟草产业的可持续发展。

本文将对烟草致香物质的研究进展进行综述，以期为读者提供全面、深入的了解。

我们将简要介绍烟草致香物质的基本概念，包括其定义、分类和重要作用。

接着，我们将从生物化学、分子生物学、以及农业科学等多个角度，对烟草致香物质的形成机制进行深入探讨。

在此基础上，我们将概述近年来烟草致香物质研究的主要进展，包括新发现的致香物质、致香物质合成的调控机制、以及致香物质与烟草品质的关系等。

我们还将对烟草致香物质的应用前景进行展望，包括在烟草育种、烟草加工、以及烟草产品创新等方面的潜在应用。

我们将总结烟草致香物质研究的现状和未来发展趋势，以期为推动烟草产业的科技进步和可持续发展提供有益的参考。

二、烟草致香物质的基本概念烟草致香物质是指那些存在于烟草中，或在烟草加工过程中形成的，对烟草制品香气、口感和品质具有显著影响的化合物。

这些物质在烟草的香气形成、保持和传递过程中起着关键作用，是烟草科学研究领域的重要研究对象。

烟草致香物质种类繁多，包括生物碱、酚类、酯类、酮类、醇类、酸类等多种化合物。

其中，生物碱如尼古丁等是烟草特有的成分，对烟草的刺激性和成瘾性有重要影响；酚类和酯类化合物则主要贡献于烟草的香气和口感；酮类、醇类和酸类化合物在烟草加工过程中起着重要作用，能够影响烟草的香气品质。

烟草致香物质的形成是一个复杂的生物化学过程，涉及到烟草生长、发育、成熟、调制和加工等多个环节。

在烟草生长过程中，致香物质的形成受到遗传、环境、气候等多种因素的影响。

在烟草加工过程中，调制、发酵、陈化等工艺条件也会对致香物质的形成和转化产生重要影响。

研究烟草致香物质，不仅有助于深入了解烟草的香气形成机制和品质调控原理，还有助于开发新型烟草制品，提高烟草产品的品质和竞争力。

HPLC分析烟草化学成分

2.2 多酚的测定分析烟草中有很多的酚类化合物，这些物质的存在与烟草的色泽和香气息息相关。

而且烟草里面的酚类化合物一般都不稳定，容易发生化学反应。

在这个过程中会生成有色的物质，从而影响烟草的颜色。

在点燃烟草的时候，这些物质很容易挥发出来，分解后进入到烟气中，从而影响烟气的香味，让烟草的香味增加。

目前主要运用以下几种方法对烟草中的多酚类物质进行分析。

科学家们利用酚类物质还原性强的这特点，发明了容量法来进行多酚类物质的分析。

在实验中采用多种氧化剂对样品进行滴定处理，然后通过反应判断样品中的多酚类物质含量及组成。

这个方法操作简单，对设备等要求较低，但是烟草中还有很多其他具有还原性的物质，会对测定的结果产生影响。

所以无法对各种酚类物质进行准确测定。

在1977年，一位科学家开始使用高效液相色谱仪(HPLC)进行烟草中酚类物质的分析研究。

首先他运用色谱柱然后采用了梯度洗脱，得到了19个化合物的色谱峰，之后用紫外光谱的方法鉴定出了其中的7个多酚类化合物。

之后的Nisseror 等人再次使用HPLC 进行烟草中多酚类物质的研究，发现在20 cm ×4.6 cm 内填入5 nm 的Nucleosil 的C18色谱柱上，采用甲醇作为流动相进行梯度洗脱，在用紫外光进行测定的时候，可以对烟草中的酚类等物质进行分析检测[3]。

HPLC 法是将各种物质分开进行测定，采用不同的洗脱系统进行化合物的分析，这样的操作可以得到更加准确的结果，不会被其他的物质干扰，但是因为它需要进行多次的进样然后洗脱分析，操作比较复杂而且十分耗费时间。

因此现在很多的科学家开始进行梯度洗脱这方面的研究，希望可以节约实验的时间，提高效率。

目前应用高效液相色谱仪进行这类物质的分析已经开始取缔其他的方法，因此我们也应该大力发展这个技术。

2.3 糖类的测定分析在烟草中糖类与烟草的品质有很大的关系，烟草燃烧的时候它们可以产生大量的酸性物质和一些香气，降低烟草气味的刺激性，产生令人感到愉悦的气味。

顶空-气相色谱-质谱指纹图谱应用于烟用香精中主成分测定

顶空-气相色谱-质谱指纹图谱应用于烟用香精中主成分测定惠非琼;姬厚伟;刘剑;黄淼;阮艺斌;王芳【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2018(054)010【摘要】在平衡温度为80℃,平衡时间为30 min下,采用顶空分离进样,气相色谱-质谱法对9个不同批次的烟用香精的成分进行分离和鉴定.根据方法的精密度试验结果,建立了烟用香精的指纹图谱.对上述9个样品所得18个共有峰以及所建立的标准指纹图谱的数据进行比较,并利用相关系数法、夹角余弦法和欧式距离比值法计算不同样品之间的相似度.3种方法计算出的相似度变化趋势一致,均能判断出样品是否合格.【总页数】4页(P1138-1141)【作者】惠非琼;姬厚伟;刘剑;黄淼;阮艺斌;王芳【作者单位】贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵阳 550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵阳 550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵阳550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵阳 550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵阳 550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵阳 550009【正文语种】中文【中图分类】O657.63【相关文献】1.气相色谱-质谱指纹图谱应用于香精的质量控制 [J], 廖惠云;李朝建;庄亚东;熊晓敏;刘英杰;朱龙杰;曹毅2.超声辅助液液萃取-气相色谱-质谱指纹图谱应用于烟用香精香料的检测 [J], 杨君;蒋健;王军淋;王晓晴;郑晓;潘再法;王丽丽3.用热解吸处理样品-气相色谱与质谱联用法建立烟用香精指纹图谱及其在烟用香精质量控制中的应用 [J], 赵瑜;杨华武;钟科军;李燕春;朱卓越;陈雄;黎艳玲;苏利霞4.气相色谱仪-质谱指纹图谱应用与烟用香精香料品质控制 [J], 张富强;柳秋林;董全江;韦绪伦;李学刚5.固相微萃取-气相色谱/质谱法建立烟用香精指纹图谱 [J], 曲国福;陆舍铭;詹家芬;孟昭宇;丁中涛;缪明明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

烟用香精的GC-MS指纹图谱

烟用香精的GC-MS指纹图谱
杨虹;苏国岁
【期刊名称】《分析测试学报》
【年(卷),期】2004(023)0z1
【摘要】在卷烟生产中,烟用香精对卷烟的风格起着决定作用[1],所以稳定的烟用香精质量对卷烟内在品质的控制非常重要.目前,烟用香精的质量控制以物理指标[2]方法为主,对质量的变化反映不显著,给质量控制带来困难.……
【总页数】3页(P278-279,281)
【作者】杨虹;苏国岁
【作者单位】石家庄卷烟厂技术中心,河北,石家庄,050051;石家庄卷烟厂技术中心,河北,石家庄,050051
【正文语种】中文
【中图分类】O657-55
【相关文献】
1.用热解吸处理样品-气相色谱与质谱联用法建立烟用香精指纹图谱及其在烟用香精质量控制中的应用 [J], 赵瑜;杨华武;钟科军;李燕春;朱卓越;陈雄;黎艳玲;苏利霞
2.GC-MS指纹图谱结合多元统计方法用于香精质量差异分析 [J], 刘秀明;王艳芳;李超;马明;王家俊;段焰青
3.GC-MS法分析烟用香精中10种有机酸 [J], 汤晓东;苏燕;张丽娜;陈晓水;蒋佳磊;朱书秀;杨君
4.GC-MS法用于烟用爆珠香精的质量稳定性判定 [J], 程书瑾;姜波;韩宜廷;马晓龙;
赵晖
5.GC-MS及主成分分析法用于咖啡香精的指纹图谱分析和微差样品的识别 [J], 钟科军;魏万之;郭方遒;黄兰芳;梁逸曾
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南京理工大学
硕士学位论文
HPLC分析烟草化学成分及香精指纹谱图基础研究
姓名：周鹏
申请学位级别：硕士
专业：应用化学
指导教师：王瑛;周申范
20080626
１绪论硕Ｌ论义
烟草中化合物的种类繁多，含量差异非常大，大多数以痕量存在，部分组成成分与烟草组织结合紧密、分子量大，它们分离分析方法一直是研究的难点，国内外的科研工作者做了大量的研究工作，其中色谱分析法是近年来发展最快、研究最多的分析方法。

烟草中存在大量的挥发、半挥发性物质，这些化合物对烟草香味及品质有着重要作用，气相色谱法对于这类物质的分析有着得天独厚的优势，从上世纪五十年代气相色谱发展的初期就被应用于烟草组成的研究。

气相色谱／质谱法分析烟草中的烃类【硒】、亚硝胺类【７－ａｌ、挥发酸ｆ９１、咖啡因【１０１、多环芳烃【１１】、芳香胺【１２】等。

除挥发性成分外，烟草中还有许多非挥发性成分，这些成分对烟草品质也是非常重要的。

虽然有些非挥发性成分可以通过衍生化气相色谱法分析，但是大部分非挥发性成分还是要用液相色谱方法进行分析。

应用液相色谱法分析烟草中的亚硝胺类【１３】、多环芳烃【１４１、有机酸【１５】、生物碱【１６１、可溶性糖【１７】、酚类化合物【１８１、游离氨基酸【１９】、芳香胺【冽等。

近年来液相色谱／质谱联用技术发展迅速，也已成功用于烟草化学研究，例如应用液相色谱／质谱分析烟草中羧酸【２１】、亚硝胺【２２】、糖肽【２３１、茄尼醇【２４１、烟碱及其代谢物【２５１、酚类及多酚类【２６】等。

由于烟草组分种类众多，组成十分复杂，通常的一维色谱技术很难满足烟草组分的全组分分析，将分离机理不同的色谱分理模式联用，构建多维分析技术平台，能够大大提高分离能力，多维色谱联用技术已逐渐应用到烟草化学分析中。

Ｄａｌｌｕｇｅ等【２７】是最早应用全二维气相色谱一飞行时间质谱研究分析烟气组分的，路鑫等【２８ｌ应用全二维气相色谱．飞行时间质谱分析了烟气中的酸性、碱性、及烃类化合物，朱书奎等【２９】应用全二维气相色谱分析了烟草精油，李海峰等【如３１】应用全二维气相色谱分析了烟叶中的酸性和碱性成分。

１．２样品的预处理
对于烟草及烟用香精香料这类复杂样品的分离分析，样品的预处理是关键，它在很大程度上直接影响到测定的成败及测定结果的准确性。

选择合适的样品预处理方法包括了分析样品的采集和制备，其中涉及到样品中欲测组分的分离及富集，对于色谱分析它常常影响到选择性和灵敏度。

样品预处理是一个既耗时又极易引入误差的步骤，是色谱分析技术发展的重要领域，它一直是我们关注的重点问题。

根据文献报道，用于烟草及烟用香精香料的预处理方法主要有：水蒸气蒸馏法、溶剂萃取法、同时蒸馏萃取法、项空分离、顶空共蒸馏等、固相萃取、固相微萃取和超临界流体萃取等。

２
硕ｆｊ论文ＨＰＬＣ分析烟草化学成分及香精指纹图谱基础研究
在然吸时产生优美的香气和舒适吃味的一类烟草制品添加剂。

从本质上看，加料香精实际是在改善吃味方面作用比较突出的香料，如鲜、干果浓缩液、中草药提取物、辛香料提取物、豆香料、某些植物的叶子与根茎的抽取物、棕化反应物、合成香料等。

香料是指在叶片上施加的一种水溶性添加剂加剂与丙二醇、乙醇和水调配混合而成的液体。

通常是用两种以上的烟用添按作用划分为调味料、增香料、保润料、助燃料、防霉料；按加料对象划分为烤烟香料、混合型香料（旱料、表料）、雪茄型香料、梗丝香料及其它。

指纹图谱是指复杂物质经过适当处理，如同时蒸馏萃取、液液萃取、固相微萃取等，然后运用色谱或其它分析方法分析其中的复杂成分，借以化学计量学、统计学、应用数学等其它数学方法，来鉴别物质的真伪与质量的稳定性的一种模式。

常用分离、分析手段有光谱、色谱、电泳等等。

１．５．２烟用香精香料的质量控制现状
国内对烟用香精质量进行控制的产品标准最早为１９９２年上海香精香料研究所起草，由原轻工业部颁布的“ＱＢｌ５０６．１９９２烟用香精”；１９９８年国家烟草专卖局发布实施了ＹＣ厂ｒ１４５系列标准，ＹＣ／Ｔ１４５共包含９个方面的内容。

这９个方面的内容是控制香精质量所必需的，优点是不需要贵重复杂的仪器设备，便于在卷烟企业、烟用香精生产企业和各级烟草质量监督检验机构使用。

总的来说卷烟企业、烟用香精香料生产企业和各级烟草质量监督检验机构目前对烟用香精的质量主要通过折光指数、相对密度、酸值、挥发成分总量等一些物性指标及人工嗅香这两个环节来控制。

这些物性指标只能从总体上反映香精的某些特性，而人工嗅香是以鼻感作为识别工具的。

由于人工嗅香受着主观意识、环境和个体差异等因素影响而不能准确客观的判定香气质量。

同时这些物性指标也不能从化学组成的角度对嗅香的差异做出定性、定量的解释，因此依靠这些指标不能有效地监控香精的质量波动情况。

上述各项检验方法基本上是对香料、精油、合成和单离香料与烟用香精的共性的物理化学指标进行测定，但是对于烟用香精来说，由于溶剂是烟用香精中含量最大的成分，所占比例达６０％以上其余１０，－－－－４０％是致香成分，影响烟用香精上述物性指标的主要是溶剂．依靠这些物理化学指标不能有效地监控香精的质量波动情况。

对于烟用香精、香料这一类复杂样品的品质，很难用几个指标或几种物质的含量进行表征，也很难采用一些固定的物理或化学的指标进行控制，与此类似的还有中药及中药制剂的品质控制。

目前采用指纹图谱控制中药品质已被广泛地研究与应用，取得了良好的效果，对于烟用香精、香料的品质控制可以借鉴中药中的指纹谱图控制法，亦可以取得不错的效果。

１．５．３烟用香精香料的指纹图谱分析方法研究进展
９
１绪论硕Ｉ：论文
根据检测时采用的分析手段不同，可将指纹图谱分为生物技术指纹图谱和化学成分指纹图谱。

生物技术指纹图谱又可分为电泳指纹图谱、ＤＮＡ指纹图谱等；化学成分指纹图谱又可分为光谱指纹图谱、色谱指纹图谱等。

通常所说的指纹图谱是指狭义的表达植物约物代谢产物化学特征的指纹图。

化学成分指纹图谱是借助于光谱、色谱或波谱技术获得待测物次生代谢化学成分的光谱图、色谱图，来鉴定其真伪、优劣，是一种综合的、可量化的鉴别手段【６５】。

该方法已广泛应用于中药的质量控制中，是目前符合中药特色的评价药材、中间产品和成品质量一致性、稳定性的质量控制模式，而在烟用香精香料的质量控制中的应用也已被广泛关注。

光谱指纹图谱可以用红外、紫外和Ｘ．射线衍射等多种方法建立。

不同产品所含物质基础不同，所测光谱的性质就会有所差异，采用合适的技术手段，使得同种产之间的光谱有着良好的重现性和特征性，便可以鉴别其真伪、优劣。

光谱中的紫外可见光谱主要反映化学物质的电子共轭体系特征，红外光谱反映化学物质不同基团振动吸收征，但光谱很难象色谱指纹图谱那样，可表达出中药材等这样复杂混合体系中各种不同的化学成分浓度分布的整体情况。

因此对其应用研究较少。

例如王家俊等【吲在傅旱叶变换衰减全反射红外光谱（ＦＴＩＲ．ＡＴＲ：Ｆｏｕｒｉｅｒｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｆｒａｒｅｄ－ａｔｔｅｎｕａｔｅｄｔｏｔａｌｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ）指纹图谱应用于烟用香精质量控制的研究中取得了～些有用的信息。

色谱指纹图谱是指采用色谱方法以及其它联用技术建立的同种产品所共有的组分群体的特征图谱或图像。

可以对产品进行定性和定量的研究，来评价和控制其质量。

目前，普遍意义上的指纹图谱指的就是色谱指纹图谱。

应用于烟用香精香料的色谱指纹图谱主要是气相色谱指纹图谱与液相色谱指纹图谱。

ＧＣ具有高效、高灵敏度、进样量小及分析速度快等优点。

但要求样品必须具有一定的挥发性和热稳定性，因而限制了其应用范围。

该法主要用于香精香料中各种易挥发性成分分析测定。

王钧等【６７】采用ＧＣ．ＦＩＤ系统对１０个批次的烟用香精香料的分析过程中与传统的检测方法相比得到了较为一致的结果。

曲国福等【６８】采用ＧＣ．ＭＳ系统建立起ＨＭＴ－２香精的气相色谱指纹图谱并通过掺兑试验对其用于香精质量控制的可行性进行了考察，结果表明该方法能准确地反映烟用香精地质量状况。

但是在进行气相色谱法分析前都需要对样品进行适当的萃取等前处理措旌，以提取挥发和半挥发成分，香精料液中还还有大量的难挥发成分，造成检测的结果很难全面反映其成分变化。

ＨＰＬＣ指纹图谱具有高效、快速、准确性和重现性好、适用面广等优点，且检测器不断更新发展，更适于中药指纹图谱的建立。

如运用二极管阵列检测器（ＤＡＤ）可得到三维图谱，适用于成分复杂、多种成分在紫外光区都有吸收的药物的分析。

对成分差别较细微或成分较复杂的产品，其分离与鉴定能力大大优于分离原理相同的薄层色１０。